Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-11-22T17:37:26Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2065563 bytes, checksum: fc1fc9fd3c992a3711487aee63eaff9d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-22T17:37:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2065563 bytes, checksum: fc1fc9fd3c992a3711487aee63eaff9d (MD5) Previous issue date: 2017-07-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O Brasil está entre os países com biomas mais diversos e biologicamente mais ricos. A Mata Atlântica é um hotspot global de biodiversidade e o segundo maior bioma brasileiro em diversidade de espécies de mamíferos, no qual 30% deles são endêmicos. A presença de roedores na mata é de extrema importância, uma vez que influenciam a dinâmica das florestas atuando como dispersores de sementes e plântulas. Os roedores sul-americanos da subfamília Sigmodontinae formam um conjunto altamente diverso de mais de 382 espécies, dentre elas os roedores das espécies Calomys tener, Necromys lasiurus e Akodon cursor. Poucos trabalhos sobre os parâmetros reprodutivos dessas espécies foram encontrados e não existem estudos que descrevem o epidídimo dos mesmos. Assim, o objetivo desse trabalho foi descrever e comparar a morfologia, morfometria e proteínas do epidídimo de C. tener e N. lasiurus. Além disso, foi feita a descrição dos mesmos parâmetros da espécie A. cursor, bem como a avaliação da sua produção diária de espermatozoides. Desta forma, fragmentos dos epidídimos de C. tener e N. lasiurus e epidídimos inteiros de A. cursor foram processados para análise morfológica e morfométrica. Da mesma, fragmentos dos epidídimos de C. tener e N. lasiurus e epidídimos inteiros de A. cursor foram utilizados para análise de proteínas presente no fluido. Além disso, epidídimos e testículos de A. cursor foram utilizados para análise do tempo de trânsito epididimário. A comparação entre C. tener e N. lasiurus mostrou que a região da cauda teve os diâmetros, tubular e luminal, maiores quando comparados às outras regiões em C. tener. O epidídimo de N. lasiurus mostrou diferenças estatísticas entre as suas 3 regiões para os diâmetros tubular e luminal. A altura epitelial não mostrou diferenças entre regiões em cada espécie. O epitélio epididimário de C. tener e N. lasiurus foi composto de 3 tipos celulares (principal, basal e clara) que foram distribuídas igualmente entre as duas espécies. Na abordagem proteômica, 58 proteínas foram identificadas em C. tener e 64 em N. lasiurus. A. cursor teve o epidídimo morfológica e morfometricamente dividido em 5 regiões (segmento inicial, cabeça, corpo, cauda proximal e cauda distal), no qual o diâmetro tubular da cauda distal, assim como o seu diâmetro luminal, foram maiores em relação às demais regiões. A comparação em relação à altura epitelial mostrou que o segmento inicial, a cabeça e a cauda proximal obtiveram maior altura epitelial do que o corpo e a cauda distal, sendo que da cabeça foi o maior e da cauda distal o menor. Células principal, basal, estreita e clara foram detectadas no epidídimo de A. cursor, sendo a célula estreita presente somente no segmento inicial e a clara nas demais regiões. As células principais foram as mais abundantes em todas as regiões do epidídimo de A. cursor, seguido da basal. A média da produção diária de espermatozoides de A. cursor foi de 4,07 dias e na abordagem proteômica, foram identificadas 22 proteínas. Pode-se concluir com esse trabalho que o estudo da biologia reprodutiva dessas espécies é importante para estudos futuros, bem como suas diferenças podem servir como parâmetro para estudos taxonômicos. / Brazil is among the countries with the most diverse and biologically richest biomes. The Atlantic Forest is a global hotspot of biodiversity and the second largest Brazilian biome in diversity of mammal species, in which 30% of them are endemic. The presence of rodents in the forest is extremely important, since they influence the dynamics of forests acting as seed dispersers and seedlings. South American rodents of the subfamily Sigmodontinae form a highly diverse set of more than 382 species, among them the small wild rodent Calomys tener, Necromys lasiurus and Akodon cursor. Few studies on the reproductive parameters of these species have been found and there are no papers describing the epididymis of these species. Thus, the objective of this work was to describe and compare the morphology, morphometry and proteins of the epididymis of C. tener and N. lasiurus. In addition, a description was made of the same parameters of the A. cursor species, as well as the evaluation of their daily production of spermatozoa. For such, fragments of C. tener epididymis and N. lasiurus and whole epididymis A. cursor were processed for morphological and morphometric analysis. Similarly, fragments of C. tener and N. lasiurus epididymis and whole epididymis A. cursor were used for analysis of proteins present in the fluid. In addition, epididymis and testes of A. cursor were used for analysis of epididymal transit time. The comparison between C. tener and N. lasiurus showed that the cauda region had the tubular and luminal diameters, higher when compared to the other regions in C. tener. The epididymis of N. lasiurus showed statistical differences between its 3 regions for tubular and luminal diameters. Epithelial height did not show differences between regions in each species. The epididymal epithelium of C. tener and N. lasiurus was composed of 3 cell types (principal, basal and clear) that were distributed equally between the two species. In the proteomic approach, 58 proteins were identified in C. tener and 64 in N. lasiurus. A. cursor had the morphological and morphometrically divided epididymis in 5 regions (initial segment, caput, corpus, proximal and distal cauda), in which the tubular diameter of the distal cauda, as well as its luminal diameter, were larger in relation to the others regions. The comparison with respect to epithelial height showed that the initial segment, the caput and the proximal cauda obtained greater epithelial height than the corpus and the distal cauda, with the caput being the largest and the distal cauda the smallest. Principal, basal, narrow and clear cells were detected in the epididymis of A. cursor, being the narrow cell present only in the initial segment and the clear cell in the other regions. The principal cells were the most abundant in all regions of the epididymis of A. cursor, followed by basal. The mean daily sperm production of was 4.07 days and in the proteomic approach, 22 proteins were identified. It can be concluded with this work that the study of the reproductive biology of these species is important for future studies, as well as their differences can serve as parameter for taxonomic studies.

Orientador: Lucia Helena O'Dwyer de Oliveira / Resumo: Espécies do gênero Hepatozoon incluem um grupo diverso de parasitas com mais de 340 espécies descritas em anfíbios, répteis, aves e mamíferos. A hepatozoonose canina é uma hemoparasitose transmitida por carrapatos relatada em diversas regiões do mundo e pode estar relacionada às espécies Hepatozoon canis e Hepatozoon americanum. Em nosso país, diferentes estudos demonstraram que H. canis é a espécie envolvida na infecção dos cães e os relatos são comuns, principalmente, em áreas rurais. Trabalhos previamente conduzidos mostram que o vetor de H. canis em áreas rurais do Brasil permanece desconhecido, o que pode sugerir a existência de outros mecanismos de transmissão, como a predação de hospedeiros paratênicos. Assim, este trabalho teve como objetivo investigar a presença de Hepatozoon spp. em pequenos roedores silvestres capturados em fragmentos florestais nos arredores de propriedades rurais do município de Botucatu, São Paulo, Brasil, onde o parasita foi também estudado em cães domésticos. Foram analisadas 158 amostras sanguíneas de cães, pela reação em cadeia da polimerase (PCR) e pela técnica de extensão de sangue periférico. Amostras de sangue e tecidos de 67 roedores foram coletadas para pesquisa do parasita pela técnica de extensão sanguínea, histopatologia e também por diagnóstico molecular. Os resultados do presente estudo mostraram uma prevalência elevada de H. canis em cães de áreas rurais do município de Botucatu (66,45%). Além disso, as espécies de roedores silve... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Hepatozoon spp. belong to a diverse group of parasites with more than 340 species described in amphibians, reptiles, birds and mammals. Canine hepatozoonosis is a tick-borne disease reported throughout the world and can be related to Hepatozoon canis and Hepatozoon americanum. In our country, previously studies have shown that H. canis is the species involved in the infection of dogs and reports are common, especially in rural areas. Hepatozoon canis vectors in rural areas of Brazil remain unknown, which might suggest the existence of other transmission mechanisms, such as predation of paratenic hosts. Thus, this study aimed to investigate the presence of Hepatozoon spp. in wild rodents trapped in forest fragments surrounding rural areas of Botucatu, São Paulo, Brazil, where the prevalence of the parasite was also studied in domestic dogs. In dogs, the study was conducted in 158 blood samples using polymerase chain reaction (PCR) and peripheral blood extension technique. Blood samples and tissues from 67 rodents were collected for parasite blood extension technique, histopathology and for molecular diagnosis. The results showed a high prevalence of H. canis in dogs from rural areas of Botucatu (66.45%). In addition, species of Brazilian wild rodents are infected with Hepatozoon spp., other than H. canis. Additionally, the finding of monozoics cysts in the examined rodents may indicate that, in addition to intermediate hosts, small wild rodents may also act as paratenic hosts ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Para a metabolização de hormônios esteroides sexuais é essencial a participação de enzimas esteroidogênicas. A enzima citocromo P450c17 é responsável pela produção de andrógenos e a enzima citocromo P450 aromatase é responsável pela produção de estrógenos, sendo que, ambas as enzimas necessitam formar um complexo com uma enzima parceira, denominada NADPH citocromo P450 redutase, para realizar a metabolização destes hormônios essenciais para a diferenciação sexual. Objetivou-se imunolocalisar as três enzimas acima citadas no tecido vaginal de fêmeas de roedores Galea spixii. Para tanto, o experimento foi desenvolvido utilizando técnicas de citologia esfoliativa vaginal para definição das fases do ciclo estral, técnicas de microscopia de Luz, Eletrônica de Varredura e testes de imunohistoquímica para detecção das enzimas: citocromo P450c17, citocromo P450 aromatase, e NADPH citocromo P450 redutase. Constatou-se no presente estudo que o ciclo estral das fêmeas de preás silvestres do semiárido apresenta ciclo estral com duração de 15,85 ± 1,4 dias, com a formação e ruptura da membrana de oclusão vaginal durante cada ciclo estral. A vagina apresenta um clitóris hipertrofiado com o óstio uretral que se abre no topo do mesmo, e ausência de um vestíbulo vaginal. O epitélio da mucosa vaginal sofre modificações proliferativas, se espessando e se adelgando de acordo com a respectiva fase do ciclo estral. As enzimas citocromo P450 aromatase e NADPH redutase estão imunolocalizadas durante todo o ciclo estral no epitélio e tecido conjuntivo da vagina de Galea spixii. Por outro lado, a enzima P450c17 está imunolocalizada no epitélio vaginal durante todas as fases do ciclo estral, porém não está presente no estro. Com estes dados pode-se sugerir que ocorre uma metabolização local de hormônios estrógenos e andrógenos no tecido vaginal o que podem estar relacionado com a proliferação celular, variação na vascularização e inervação e ruptura da membrana de oclusão vaginal. / To the metabolism of sex steroid hormones is essential the participation of esteroidogenic enzymes. The enzyme cytochrome P450c17 is responsible for androgen production; and the enzyme aromatase cytochrome P450 is responsible for estrogen production, however, both enzymes require forming a complex with an enzyme partner called NADPH cytochrome P450 reductase to perform the metabolism of these hormones, which are essential for sexual differentiation. This study aimed to immunolocalization of the three enzymes above mentioned in the vaginal tissue from female rodents Galea spixii. Therefore, the experiment was carried out using vaginal cytology techniques for definition of the estrous cycle phases, techniques for light microscopy, scanning electron and immunohistochemical tests for the detection of enzymes: cytochrome P450c17, cytochrome P450 aromatase, and NADPH cytochrome P450 reductase. It was found that the estrus cycle of Galea spixii female lasts 15.85 ± 1.4 days, with the formation and rupture of vaginal closure membrane during each oestrous cycle. The vagina has a hypertrophied clitoris with the urethral orifice that opens on top of it, and it is observed the absence of a vaginal vestibule. The vaginal mucosal epithelium undergoes proliferative changes, with thickening and thinning according to the respective estrous cycle phase. The enzymes cytochrome P450 aromatase and NADPH reductase are immunolocated throughout the oestrous cycle in the epithelium and connective tissue of the vagina from Galea spixii. On the other hand, the enzyme cytochrome P450c17 is immune located in the vaginal epithelium during all stages of the estrous cycle, except at estrous. With these data may be suggested that there is a local estrogens and androgens metabolism in vaginal tissue which may be associated with cell proliferation, vascularization and innervation variation besides the formation and rupture of the vaginal closure membrane.

Para a metabolização de hormônios esteroides sexuais é essencial a participação de enzimas esteroidogênicas. A enzima citocromo P450c17 é responsável pela produção de andrógenos e a enzima citocromo P450 aromatase é responsável pela produção de estrógenos, sendo que, ambas as enzimas necessitam formar um complexo com uma enzima parceira, denominada NADPH citocromo P450 redutase, para realizar a metabolização destes hormônios essenciais para a diferenciação sexual. Objetivou-se imunolocalisar as três enzimas acima citadas no tecido vaginal de fêmeas de roedores Galea spixii. Para tanto, o experimento foi desenvolvido utilizando técnicas de citologia esfoliativa vaginal para definição das fases do ciclo estral, técnicas de microscopia de Luz, Eletrônica de Varredura e testes de imunohistoquímica para detecção das enzimas: citocromo P450c17, citocromo P450 aromatase, e NADPH citocromo P450 redutase. Constatou-se no presente estudo que o ciclo estral das fêmeas de preás silvestres do semiárido apresenta ciclo estral com duração de 15,85 ± 1,4 dias, com a formação e ruptura da membrana de oclusão vaginal durante cada ciclo estral. A vagina apresenta um clitóris hipertrofiado com o óstio uretral que se abre no topo do mesmo, e ausência de um vestíbulo vaginal. O epitélio da mucosa vaginal sofre modificações proliferativas, se espessando e se adelgando de acordo com a respectiva fase do ciclo estral. As enzimas citocromo P450 aromatase e NADPH redutase estão imunolocalizadas durante todo o ciclo estral no epitélio e tecido conjuntivo da vagina de Galea spixii. Por outro lado, a enzima P450c17 está imunolocalizada no epitélio vaginal durante todas as fases do ciclo estral, porém não está presente no estro. Com estes dados pode-se sugerir que ocorre uma metabolização local de hormônios estrógenos e andrógenos no tecido vaginal o que podem estar relacionado com a proliferação celular, variação na vascularização e inervação e ruptura da membrana de oclusão vaginal. / To the metabolism of sex steroid hormones is essential the participation of esteroidogenic enzymes. The enzyme cytochrome P450c17 is responsible for androgen production; and the enzyme aromatase cytochrome P450 is responsible for estrogen production, however, both enzymes require forming a complex with an enzyme partner called NADPH cytochrome P450 reductase to perform the metabolism of these hormones, which are essential for sexual differentiation. This study aimed to immunolocalization of the three enzymes above mentioned in the vaginal tissue from female rodents Galea spixii. Therefore, the experiment was carried out using vaginal cytology techniques for definition of the estrous cycle phases, techniques for light microscopy, scanning electron and immunohistochemical tests for the detection of enzymes: cytochrome P450c17, cytochrome P450 aromatase, and NADPH cytochrome P450 reductase. It was found that the estrus cycle of Galea spixii female lasts 15.85 ± 1.4 days, with the formation and rupture of vaginal closure membrane during each oestrous cycle. The vagina has a hypertrophied clitoris with the urethral orifice that opens on top of it, and it is observed the absence of a vaginal vestibule. The vaginal mucosal epithelium undergoes proliferative changes, with thickening and thinning according to the respective estrous cycle phase. The enzymes cytochrome P450 aromatase and NADPH reductase are immunolocated throughout the oestrous cycle in the epithelium and connective tissue of the vagina from Galea spixii. On the other hand, the enzyme cytochrome P450c17 is immune located in the vaginal epithelium during all stages of the estrous cycle, except at estrous. With these data may be suggested that there is a local estrogens and androgens metabolism in vaginal tissue which may be associated with cell proliferation, vascularization and innervation variation besides the formation and rupture of the vaginal closure membrane.