Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências Médicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2015. / A Síndrome de Robinow se caracteriza por dismorfias faciais associadas a encurtamento mesomélico e genitália hipoplásica. Defeitos de segmentação costovertebral que incluem fusões de costelas também podem ser observados e permitem distinguir os pacientes com a forma autossômica recessiva da síndrome daqueles com a forma autossômica dominante. A forma recessiva é causada por mutações no gene ROR2 (related orphan receptor 2), sendo que apenas dezenove diferentes mutações foram descritas em pacientes com a síndrome. O objetivo desse trabalho foi identificar novas mutações no gene ROR2 em pacientes com a Síndrome de Robinow autossômica recessiva. Foram selecionados onze pacientes originários do Brasil, Estados Unidos, Índia e Turquia com características clínicas da forma recessiva da síndrome. O sequenciamento foi realizado a partir de amostras de sangue e saliva por sequenciamento Sanger, ou por sequenciamento de nova geração na plataforma Ion PGM. Em um paciente a mutação foi detectada por MLPA. Identificamos 13 diferentes mutações sendo que 10 ainda não haviam sido descritas na literatura. A comparação dos dados clínicos dos pacientes estudados com as frequências dos sinais clínicos proposta por Mazzeu e cols. (2007) revelou frequência semelhante para a maioria dos sinais clínicos com exceção da fusão de costelas, ausente no paciente 5, a língua bífida presente em todos os 11 pacientes, o lábio superior fino que teve uma frequência de 72% e anteriormente era de 26% e a má-oclusão dentária que teve uma frequência de 60% enquanto que a frequência descrita anteriormente era de 93%. Assim, a descrição clínica detalhada de pacientes com diagnóstico confirmado molecularmente contribuiu para a definição das frequências dos principais sinais clínicos nessa forma da síndrome. Observamos também uma maior gravidade das manifestações esqueléticas nos pacientes com mutações que alteram o quadro de leitura mostrando assim que pode haver correlação entre o tipo de mutação e o fenótipo dos afetados. O conjunto de novas mutações detectadas no trabalho colaboram para um melhor entendimento da fisiopatologia da síndrome. / Robinow syndrome is characterized by facial dysmorphisms, mesomelic limb shortening and hypoplastic genitalia. Costovertebral segmentation defects including rib fusions may be present and allow the distinction between the autosomal recessive and the autosomal dominant forms. Recessive form is caused by mutations in ROR2 gene (related orphan receptor 2) and only 19 different mutations have been described in the literature in patients with the syndrome. The main goal of this work was to identify new mutations in ROR2 in patients with RRS. Eleven patients with clinical signs of RRS from Brazil, United States, India and Turkey have been selected. Sequencing was performed from either blood or saliva samples by Sanger sequencing or Next generation sequencing using Ion PGM platform. In one patient the mutation was detected by MLPA. We identified 13 different mutations, 10 not previously described in the literature. Comparison of clinical data from our patients and the frequencies of clinical signs proposed by Mazzeu e cols., (2007) revealed similar frequencies for most clinical signs except for rib fusions, absent in patient 5; bifid tongue, present in all 11 patients; thin upper lip that had a frequency of 72% compared to 26% in the previous report and dental malocclusion that showed a frequency of 60% and the previous frequency was 93%. Therefore, a detailed clinical description of patients with a molecularly confirmed diagnosis contributed to the definition of frequencies of the main clinical signs of the syndrome. We also observed a more severe skeletal phenotype in patients with frameshift mutations showing that genotype and phenotype may correlate. The group of new mutations detected in the present work contribute to a better understanding of the physiopathology of the syndrome.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2017. / Texto parcialmente liberado pelo autor. Conteúdo restrito: Anexo III. Fotografias de pacientes. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2018-04-17T16:47:52Z No. of bitstreams: 1 2017_BárbaraMerfortFerreira_PARCIAL.pdf: 1692315 bytes, checksum: 5280e8d67e4d68cb26cb0e19f276dfc4 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-05-09T14:10:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_BárbaraMerfortFerreira_PARCIAL.pdf: 1692315 bytes, checksum: 5280e8d67e4d68cb26cb0e19f276dfc4 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-09T14:10:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_BárbaraMerfortFerreira_PARCIAL.pdf: 1692315 bytes, checksum: 5280e8d67e4d68cb26cb0e19f276dfc4 (MD5) Previous issue date: 2018-05-09 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES). / A síndrome de Robinow é um distúrbio esquelético raro em que as variantes patogênicas conhecidas estão associadas a genes participantes da via de sinalização Wnt, não-canônica, incluindo ROR2, WNT5A, DVL1 e DVL3. No entanto, grande parte dos casos clinicamente diagnosticados com esta síndrome permanecem sem uma solução molecular. No presente estudos realizamos um screaning para mutações nos exons 14 e 15 dos genes DVL1 e DVL3, por sequenciamento Sanger, em 11 pacientes diagnosticados com síndrome de Robinow autossômica dominate (DRS), dentre os quais um paciente apresentou mutação em DVL3 e outros 4 apresentaram mutação em DVL1. Nos 6 pacientes em que não foram observadas mutações em DVL1 ou DVL3 foi realizado sequenciamento completo de exoma (WES), no intuito de revelar novas variantes envolvidas. Foram então identificadas duas mutações em heterozigose no gene WNT5A em outros dois pacientes do nosso estudo. O sequenciamento completo de exoma (WES) também revelou uma variante patogênica no gene FZD2 em dois membros afetados da mesma família. O gene FZD2 não havia sido previamente relacionado a síndrome de Robinow na literatura, entretanto já havia sido indicado a estar envolvido em fenótipos Robinow-like. Dois casos permanecem sem uma etiologia molecular definida. Esses dados revelam que parálogos específicos de genes podem sugerir importantes dominios protéicos que estão envolvidos no desenvolvimento embrionário e ainda apoiam a hipótese de que a síndrome de Robinow resulta da perturbação da via Wnt/PCP. Nossos achados demonstram a utilidade de estudos genômicos de doenças raras para esclarecer os eventos envolvidos no desenvolvimento humano complexo e contribuem para a melhor caracterização da síndrome de Robinow. / Robinow syndrome is a rare skeletal disorder in which known pathogenic variants reside in genes for noncanonical Wnt signaling including ROR2, WNT5A, DVL1 and DVL3. However, a large part of clinically diagnosed cases remain molecularly unsolved. In the present study we performed a screening for mutations in DVL1 and DVL3, by Sanger sequencing, in 11 patients diagnosed with autosomal dominant Robinow syndrome. Of this cohort, one patient presented mutation in DVL3 gene and another 4 patients presented mutation in DVL1. In patients in whom no mutations in DVL1 or DVL3 were observed, we performed complete exome sequencing (WES) that revealed heterozygous mutations in the WNT5A gene in two patients and one pathogenic variant in the FZD2 gene in two affected members of the same family. FZD2 had not been previously related to Robinow's syndrome, however it had already been indicated to be involved in Robinow-like phenotypes. These data reveal specific gene paralogs, suggest relevant protein domains involved, and further support the hypothesis that Robinow syndrome results from perturbation of the Wnt/PCP pathway. Our findings demonstrate the utility of rare disease genomic studies to illuminate complex human developmental pathways and contribute to a better characterization of the Robinow syndrome.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2016. / Submitted by Camila Duarte (camiladias@bce.unb.br) on 2017-02-03T12:25:52Z No. of bitstreams: 1 2016_PedroGuilhermeAlvesRodrigues.pdf: 1521287 bytes, checksum: 52ba5cd1ca7103138ee9cdd279360dc3 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-02-16T19:30:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_PedroGuilhermeAlvesRodrigues.pdf: 1521287 bytes, checksum: 52ba5cd1ca7103138ee9cdd279360dc3 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-16T19:30:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_PedroGuilhermeAlvesRodrigues.pdf: 1521287 bytes, checksum: 52ba5cd1ca7103138ee9cdd279360dc3 (MD5) / A Síndrome de Robinow se caracteriza por dismorfias faciais associadas a encurtamento mesomélico e genitália hipoplásica. Defeitos de segmentação costovertebral que incluem fusões de costelas também podem ser observados e permitem distinguir os pacientes com a forma autossômica recessiva da síndrome daqueles com a forma autossômica dominante. A forma autossômica recessiva é causada por mutações no gene ROR2. Já foram descritos três genes causativos para a forma autossômica dominante da síndrome: WNT5A, DVL1 e DVL3, apesar de muitos pacientes não apresentarem mutações nesses genes. As frequências de mutação em cada um dos genes bem como possíveis correlações genótipo/fenótipo ainda não foram estabelecidas. O objetivo desse trabalho foi identificar novas mutações no gene DVL1 em pacientes com a Síndrome de Robinow autossômica dominante. Foram selecionados onze pacientes originários dos Estados Unidos, Argentina e Inglaterra com características clínicas da forma dominante da síndrome. O sequenciamento foi realizado a partir de amostras de sangue por sequenciamento Sanger. Identificamos quatro pacientes com mutações em DVL1, sendo três não descritas na literatura e uma ainda não confirmada pela clonagem dos fragmentos de PCR. Comparamos a frequência dos sinais clínicos no grupo de pacientes estudados com aquelas descritas por Mazzeu e cols. (2007) e com as frequências apenas no grupo com mutação em DVL1. As frequências foram semelhantes para a maioria dos sinais clínicos com exceção do hipertelorismo com frequência de 100%, a língua bífida presente em 7 dos 11 pacientes, hipoplasia do terço médio da face que teve uma frequência de 100% e anteriormente era de 80%, e a hiperplasia gengival que teve uma frequência de 90% enquanto que a frequência descrita anteriormente era de 35%. Assim, a descrição clínica detalhada de pacientes com diagnóstico confirmado molecularmente contribui para a definição das frequências dos principais sinais clínicos da forma autossômica dominante da síndrome. No grupo com mutação em DVL1 todos apresentam macrocefalia e nenhum dos pacientes apresenta baixa estatura como já sugerido por White e cols., 2015. O conjunto de novas mutações detectadas no trabalho colabora para um melhor entendimento da etiologia da síndrome e para a caracterização clinica das diferentes formas da síndrome de Robinow. / Robinow syndrome is characterized by facial dysmophisms associated to mesomelic limb shortening and hypoplastic genitalia. Costovertebral segmentation defects including rib fusions may be present and allow the distinction of the recessive and dominant forms of the syndrome. Autosomal recessive form is caused by mutations in ROR2 gene. Three causative genes have been described for the autosomal dominant form of the syndrome: WNT5A, DVL1, DVL3, lthough several patients do not present mutations in any of these genes. The frequencies of mutations in each of these genes as well as possible genotype/phenotype correlation have not been stablished. The aim of this study was to identify new mutations in DVL1 gene in patients with autosomal dominant Robinow syndrome. We have included eleven patients from the United States, Argentina and England with clinical signs of the dominant form of the syndrome. Sanger sequencing was performed from blood samples. We identified four patients with mutations in DVL1, three novel and one not yet confirmed by cloning of the PCR fragments. We compared the frequencies of clinical signs of the patients here described and the requencies previously described by Mazzeu e cols., (2007) and the frequencies only in the group with DVL1 mutations. The frequencies were similar for most clinical signs except for hypertelorism with a 100% frequency, bifid tongue in 7/11 patients, midface hypoplasia with a 100% frequency in our group and 80% in the literature, and gingival hyperplasia with a 90% frequency in our group and 35% in the literature. Therefore, a detailed clinical description of patients with a molecularly confirmed diagnosis contributes to a better definition of the frequencies of the main clinical signs of the autosomal dominant form of the syndrome. In the group with mutation in DVL1 all of them have macrocephaly and none of the patients have short stature as previously suggested by White & cols., 2015. The group of novel mutations detected in our work collaborates to a better understanding of the etiology of the syndrome and the clinical characterization of the different forms of Robinow syndrome.