Thesis (PhD(Agric) (Horticulture))--University of Stellenbosch, 2011. / Includes bibliography. / ENGLISH ABSTRACT: Plums with good taste, aroma and eating quality lead to repeat purchases and sustained demand. Taste includes non-volatile compounds, e.g. sugars and acids, and has been well researched to meet the consumers’ preferences. Plum aroma, however, has not enjoyed the same attention. Limited literature is available on the aroma of Japanese plums and none could be found on the effects of relatively long cold storage on the profiles. The main aim of this study is to investigate the changes in aroma compounds of Japanese plums throughout maturation and ripening and the effects of commercial cold storage regimes. Near infra-red (NIR) spectroscopy was also evaluated as a non-destructive method to determine plum quality parameters aimed at minimising sample variability. In Paper 1, NIR spectroscopy was used to develop prediction models for total soluble solid (TSS), total acidity (TA), sugar-to-acid ratio, firmness and weight in three cultivars (Pioneer, Laetitia and Angeleno) and a multi-cultivar model. Samples were collected for seven consecutive weeks and repeated over two seasons. TSS results showed excellent predictability (R2 = 0.817-0.955; RMSEP= 0.453-0.610 % Brix) but the TA models did not perform well. The sugar-to-acid ratio models had results comparable to that of TSS. Both the firmness and weight models had acceptable results. The models of ‘Pioneer’ and ‘Laetitia’ had a better predictability capacity than the ‘Angeleno’ model. Although the multi-cultivar models outperformed the single cultivar models on R2 values it had higher prediction errors. The robustness of all the TSS, TA and firmness models is high in terms of seasonality, range and cultivar. Papers 2 and 3, the main focus of the study, are concerned with the aroma profile dynamics of Japanese plums. HS-SPME was used in both papers to extract the aroma compounds followed by GC-TOFMS for separation and identification. In Paper 2, the aroma volatile compounds of three cultivars (Pioneer, Laetitia and Angeleno) were determined for a seven week period including samples from three maturity stages (immature, harvest and tree-ripe). A total of 35 compounds were identified of which ten were generic. Each cultivar had five unique compounds resulting in different aroma profiles for each of the maturity stages and distinct separation patterns using discriminant analysis. The study was extended in Paper 3 where the aroma volatile compounds of six cultivars (Pioneer, Sapphire, Laetitia, Songold, Larry Anne and Angeleno) and one plumcot (Flavor King) were determined at three functional stages (commercial harvest, tree-ripe fruit and cold stored fruit). A total of 62 compounds were identified and classified into three groups (‘unique’ (31), ‘generic’ (11) and ‘frequent’ (20)) based on their frequency of occurrence. The aroma profiles of ‘Larry Anne’ and ‘Flavor King’ are the most affected by cold storage conditions and ‘Pioneer’ appears to be the least affected. All the cultivars have significantly different aroma profiles at all three of the functional stages with ‘Sapphire’, ‘Larry Anne’ and ‘Flavor King’ showing the largest differences. ‘Flavor King’, a plumcot, presented a ripe aroma profile that was much diverged from that of the true plums. / AFRIKAANSE OPSOMMING: Pruime met ‘n goeie smaak, aroma en eetkwaliteit lei tot herhaalde verkope en volhoubare aanvraag. Smaak sluit die nie-vlugtige stowwe (suikers en sure) in en is goed nagevors om die verbruikersvoorkeure te bevredig. Pruim aroma het egter nie dieselfde aandag geniet nie. Daar is beperkte literatuur beskikbaar wat handel oor die aroma van Japanese pruime en geen kon gevind word oor die effekte van lang koelopberging op die aromaprofiele nie. Die hoof doel van hierdie studie is om die veranderinge in die aromatiese komponente van Japanese pruime te ondersoek tydens die volwassewording- en rypwordingsprosesse asook die effekte van kommersiele koelopberging. Naby infrarooi (NIR) spektroskopie is ook geevalueer as ‘n nie-destruktiewe manier om pruim kwaliteitsparameters te bepaal met die doel om monstervariasie te beperk. In Artikel 1 is NIR spektroskopie gebruik om voorspellingsmodelle vir totale oplosbare suikers (TOS), totale suur (TS), suiker-tot-suur verhouding, fermheid en gewig te bepaal in drie kultivars (Pioneer, Laetitia en Angeleno) asook ‘n multi-kultivar model. Monsters is vir sewe opeenvolgende weke versamel en herhaal oor twee seisoene. TOS resultate toon uitstekende voorspelbaarheid (R2 = 0.817-0.955; RMSEP= 0.453-0.610 % Brix) maar TS modelle het egter nie so goed gevaar nie. Die suiker-tot-suur verhoudingsmodelle se resultate was vergelykbaar met die van TOS. Beide die fermheid- en gewigsmodelle het aanvaarbare resultate opgelewer. Die modelle vir ‘Pioneer’ en ‘Laetitia’ het ‘n beter voorspelbaarheidskapasiteit getoon as die van ‘Angeleno’. Alhoewel die multi-kultivar model beter presteer het as die enkel kultivar modelle op die R2-waardes was daar meer voorspellingsfoute. Hoe robuustheid is gevind i.t.v. seisoene, datagrense en kultivar vir al die TOS, TA en fermheidsmodelle. Artikels 2 en 3, die fokuspunt van die studie, handel oor die dinamika van die aromaprofiel van Japanese pruime. HS-SPME is in beide artikels gebruik on die aromatiese verbindings te ekstraeer gevolg deur GCTOFMS vir skeiding en identifikasie. In Artikel 2 is die aromatiese stowwe van drie kultivars (Pioneer, Laetitia en Angeleno) bepaal vir sewe opeenvolgende weke en sluit monsters van drie volwassenheidsstadiums in (onvolwasse, oes en boom-rypgemaakte pruime). ‘n Totaal van 35 verbindings is geidentifiseer waarvan tien as generies beskou kan word. Elke kultivar het vyf unieke komponente gehad en het gelei tot verskillende aromaprofiele vir elk van die volwassenheidsstadiums en diverse skeidingspatrone tydens die gebruik van diskriminant analise. Die studie is uitgebrei in Artikel 3 waartydens die aromatiese vlugtige stowwe van ses kultivars (Pioneer, Sapphire, Laetitia, Songold, Larry Anne en Angeleno) en een plumcot (Flavor King) bepaal is tydens drie funksionele stadiums (oes, boom-rypgemaak en koelopgebergde pruime). ‘n Totaal van 62 verbindings is geidentifiseer en in drie groepe geklassifiseer (‘uniek’ (31), ‘generies’(11) en ‘gereeld’ (20)) gebaseer op voorkomsfrekwensie. Die aromaprofiele van ‘Larry Anne’ en ‘Flavor King’ is die meeste deur die koelopberging geaffekteer en ‘Pioneer’ die minste. Al die kultivars het kenmerkend verskil t.o.v. hul aromaprofiele in al drie die funksionele groepe en ‘Sapphire’, ‘Larry Anne’ en ‘Flavor King’ het die grootste verskille getoon. ‘Flavor King’, die plumcot, het ook ‘n ryp aromaprofiel gehad wat baie van die van die egte pruime verskil het.

A busca por um padrão estético globalizado e o aumento da obesidade fazem crescer o uso de suplementos alimentares e compostos emagrecedores à base de extratos vegetais. Produtos contendo a associação de p-sinefrina, efedrina, salicina e cafeína são amplamente consumidos e não apresentam efetividade e segurança bem esclarecidas. Portanto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a toxicidade subcrônica de p-sinefrina, efedrina, cafeína e salicina, isoladas e em associação, em ratos Wistar machos. Doses de salicina 6 mg/kg, efedrina 4 mg/kg, p-sinefrina 10 mg/kg, cafeína 80 mg/kg e a associação de salicina, efedrina, p-sinefrina e cafeína 100 mg/kg (6:4:10:80, respectivamente) foram testadas via oral por 28 dias consecutivos. A massa corporal foi verificada semanalmente e o teste da atividade locomotora foi realizado no 28º dia. O sangue foi coletado para análise bioquímica e órgãos vitais como fígado e rins foram utilizados para avaliação histológica. Os resultados mostraram uma redução significativa (p<0,05) na massa corporal nos dias 21 e 28 do grupo tratado com cafeína comparado ao grupo controle. Nos dias 14, 21 e 28 ocorreu um aumento significativo (p<0,05) da massa corporal no grupo tratado com p-sinefrina comparado com os grupos efedrina, salicina, cafeína e associação. No teste da atividade locomotora houve um aumento significativo (p<0,05) no grupo tratado com a associação comparado ao grupo controle. Não foram encontradas alterações nos marcadores bioquímicos de fígado, rim e coração, bem como nas avaliações macroscópicas dos órgãos vitais. Entretanto, na análise histológica do fígado, verificou-se em todos os grupos a presença de vacuolização e tumefação celular, congestão vascular e alargamento dos sinusóides, e apenas os grupos p-sinefrina, efedrina e salicina apresentaram degeneração hidrópica. Na histologia dos rins todos os grupos demonstraram vacuolização celular e aumento do espaço da cápsula de Bowman e o grupo p-sinefrina mostrou a presença de infiltrado inflamatório. Esses resultados sugerem que o uso dessas substâncias, tanto na forma isolada como em associação, apresenta um perfil toxicológico considerável. / The search for a globalized aesthetic standard and the increasing obesity are enhancing the use of food supplements and weight loss compounds from plant base extracts. Products containing the combination of p-synephrine, ephedrine, caffeine and salicin are widely consumed and the effectiveness and safety are not well understood. Therefore, the aim of this study was to evaluate the subchronic toxicity of p-synephrine, ephedrine, caffeine and salicin, isolated and in combination, in male Wistar rats. Doses of salicin 6 mg/kg, ephedrine 4 mg/kg, p-synephrine 10 mg/kg, caffeine 80 mg/kg and the association of salicin, ephedrine, p-synephrine and caffeine (100 mg/kg; 6:4:10:80, respectively) were administered orally for 28 consecutive days. Body weight was recorded weekly and a locomotor activity test was performed on the 28th day. Blood was collected for biochemical analysis and vital organs such as liver and kidneys were used for histologic evaluation. The results showed a significant reduction (p <0.05) in body mass on days 21 and 28 in the caffeine-treated group compared to control group. Besides that, on days 14, 21 and 28 a significant increase (p <0.05) in body weight was observed in the group treated with p-synephrine compared to the ephedrine, salicin, caffeine and association-treated groups. In the test of locomotor activity, a significant increase (p <0.05) was observed in the association-treated group treated compared to the control group. No changes were found in biochemical markers associated with liver, kidney and heart conditions or in macroscopic evaluations of vital organs. However, the histological analysis of the liver in all groups shown presence of cellular vacuolization and swelling, vascular congestion and enlargement of the sinusoids, whereas the p-synephrine, ephedrine and salicin groups exhibited hydropic degeneration. In the histology of kidneys, all groups showed cellular vacuolation and increased of the Bowman's capsule space and the p-synephrine group showed the presence of inflammatory infiltrate. These results suggest that the use of these substances either in isolation or in combination showed a considerable toxicological profile.

Thesis (MSc Food Sc)--University of Stellenbosch, 2011. / ENGLISH ABSTRACT: Nectar formulations containing red-fleshed plum pulp and varying amounts of red-fleshed plum skin extract were developed. Red-fleshed plum nectar formulations containing 0, 8, 16, 24, and 32% skin extract were benchmarked against twenty-two commercial beverages containing red, violet and blue fruits. The total soluble solid content, pH, titratable acidity, colour, total polyphenolic, individual polyphenolic, total anthocyanin, and ascorbic acid contents, as well as antioxidant activity (oxygen radical antioxidant capacity (ORAC), 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging activity, and ferric reducing/antioxidant power (FRAP)) of the commercial beverages and plum formulations were determined. The plum nectar formulations had similar or higher total polyphenolic content, antioxidant activity, and colour values than the average for the commercial beverages. The individual polyphenolic compounds analysed in the nectar formulations were cyanidin-3-glucoside, cyanidin-3- rutinoside, quercetin-3-glucoside, quercetin-3-rutinoside, quercetin-3-xyloside, and neochlorogenic acid. Increasing polyphenolic content and antioxidant activity was observed with an increase in skin extract content of the formulations. The sensory attributes of the formulations were plum and plantlike aroma, plum and plantlike flavour, sweetness, acidity, and astringency. Increases in plantlike aroma and flavour, acidity, and astringency in conjunction with decreases in plum aroma, plum flavour, and sweetness extract were observed with an increase in skin extract. Consumer analysis indicated that all formulations were acceptable. The 0 and 16% skin extract formulations were most preferred, while the 32% skin extract formulation was least preferred. A shelf-life study was conducted in two phases. In Phase 1, the 0, 16 and 24% skin extract formulations were stored at 0 and 5°C (analysis time points: before pasteurisation, after pasteurisation (week 0), and after 1, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 18, 20, and 24 weeks of storage). Chemical analyses conducted included colour, total polyphenolic, individual polyphenolic compound, and total anthocyanin contents, and antioxidant activity (DPPH• scavenging activity). Results from Phase 1 indicated close associations between the 16 and 24% skin extract formulations, and between these formulations and all chemical attributes. Regression analysis of results indicated significant (P 0.05) decreases in red colour, total anthocyanins, cyanidin-3-glucoside, cyanidin-3- rutinoside, DPPH• scavenging activity, total polyphenolic content, quercetin-3-rutinoside, and quercetin- 3-xyloside for formulations stored at 0°C. The total and red colour, total anthocyanins, cyanidin-3- glucoside, and cyanidin-3-rutinoside in formulations stored at 5°C showed similar results. During Phase 2 of the shelf life study, sensory analysis was conducted on the 0 and 24% skin extract formulations stored at 5°C (preparation time points: 0, 1, 2, and 3 months). Sensory attributes, including plum, plantlike, and raisin flavour, sweetness, acidity, and astringency, were stable during storage. Chemical results from Phase 2 were similar to those of Phase 1. The chemical and sensory stability of formulations after 24 weeks of storage in Phase 1 and Phase 2 indicated that, with the exception of the anthocyanin degradation, the formulations could be beneficial to juice industries. Thus, red-fleshed plum nectars have the potential to compete with high-antioxidant fruit beverages. / AFRIKAANSE OPSOMMING: Nektarformulasies wat rooivleis pruimpulp en varieërende hoeveelhede rooivleis pruimskilekstrak bevat, is ontwikkel en ondersoek. Rooivleis pruimnektarformulasies wat 0, 8, 16, 24, en 32% skilekstrak bevat, is vergelyk met twee-en-twintig kommersiële drankies wat rooi, violet en blou vrugte bevat. Die totale oplosbare vastestof, totale polifenoliese, individuele polifenoliese, totale antosianien- en askorbiensuur inhoude, sowel as die pH, titreerbare suurheid, kleur, antioksidant aktiwiteit (suurstofradikale antioksidantkapasiteit (ORAC), 2,2-difeniel-1-pikrielhidrasiel (DPPH) radikaal blussingsaktiwiteit, en ysterreduserende/antikoksidantkrag (FRAP)) van die kommersiële drankies en pruimnektarformulasies, is bepaal. Die pruimnektarformulasies het soortgelyke of hoër totale polifenoliese inhoud, antioksidantaktiwiteit, en kleurwaardes gehad in vergelyking met die gemiddelde vir die kommersiële drankies. Die individuele polifenoliese verbindings wat in die nektarformulasies geanaliseer is, was sianidien-3-glukosied, sianidien-3-rutinosied, kwersetien-3-glukosied, kwersetien-3-rutinosied, kwersetien-3-xylosied, en neochlorogeniese suur. ‘n Toenames in die kleurwaardes, polifenoliese inhoud, en antioksidantaktiwiteit is waargeneem met ‘n toename in skilekstrak is in die formulasies. Die sensoriese eienskappe van die formulasies was pruim- en plantagtige aroma, pruim- en plantagtige geur, soetheid, suurheid, en frankheid. Toenames in plantagtige aroma en geur, suurheid en frankheid, sowel as ‘n afname in pruimaroma, pruimgeur, en -soetheid, is met ‘n toename in skilekstrak waargeneem. Verbruikersanalise het aangedui dat al die formulasies aanvaarbaar was. Die 0 en 16% skilekstrakformulasies was die mees aanvaarbaarste, terwyl die 32% skilekstrakformulasie die minste aanvaarbaar geag is. ‘n Rakleeftydstudie is in twee fases gedoen. In Fase 1 is die 0, 16, en 24% skilekstrakformulasies by 0 en 5°C gestoor (analiseringstydpunte: voor pasturisasie, na pasturisasie (week 0), en na 1, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 18, 20, en 24 weke van berging). Chemiese analise wat gedoen is, sluit totale polifenoliese, individuele polifenoliese verbinding, en totale antosianien inhoude, sowel as kleur en antioksidantaktiwiteit (DPPH• blussingsaktiwiteit) in. Resultate van Fase 1 het ‘n nou verband tussen die 16 en 24% skilekstrakformulasies, sowel as tussen hierdie formulasies en hul chemiese kenmerke aangedui. Regressie-analise van resultate het betekenisvolle (P 0.05) afnames geïllustreer in rooi kleurwaardes, DPPH• blussingsaktiwiteit, sowel as totale antosianiene, sianidien-3-glukosied, sianidien-3-rutinosied, totale polifenoliese, kwersetien-3-rutinosied, en kwersetien-3-xylosied inhoude van die formulasies wat by 0°C gestoor is. Die totale kleur-, rooi kleurwaardes, sowel as totale antosianien, sianidien-3-glukosied, en sianidien-3-rutinosied in die formulasies wat by 5°C gestoor is, het soortgelyke resultate gegee. Gedurend Fase 2 van die rakleeftydstudie is sensoriese analise op die 0 en 24% skilekstrakformulasies wat by 5°C gestoor is, gedoen (voorbereidingstydpunte: 0, 1, 2, en 3 maande). Sensoriese eienskappe, insluitend pruim-, plantagtige-, en rosyntjiesmake, soetheid, suurheid, en frankheid, was stabiel gedurende berging. Chemiese resultate van Fase 2 was soortgelyk aan dié van Fase 1. Die chemiese en sensoriese stabiliteit van die formulasies na 24 weke van opberging in Fase 1 en Fase 2 nieteenstaande antosianienafname, het aangedui dat die formulasies voordelig kan wees vir die vrugtedrankiebedryf. Dus het rooivleis pruimnektars die vermoeë om met hoë antioksidant vrugtedrankies mee te ding.

A busca por um padrão estético globalizado e o aumento da obesidade fazem crescer o uso de suplementos alimentares e compostos emagrecedores à base de extratos vegetais. Produtos contendo a associação de p-sinefrina, efedrina, salicina e cafeína são amplamente consumidos e não apresentam efetividade e segurança bem esclarecidas. Portanto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a toxicidade subcrônica de p-sinefrina, efedrina, cafeína e salicina, isoladas e em associação, em ratos Wistar machos. Doses de salicina 6 mg/kg, efedrina 4 mg/kg, p-sinefrina 10 mg/kg, cafeína 80 mg/kg e a associação de salicina, efedrina, p-sinefrina e cafeína 100 mg/kg (6:4:10:80, respectivamente) foram testadas via oral por 28 dias consecutivos. A massa corporal foi verificada semanalmente e o teste da atividade locomotora foi realizado no 28º dia. O sangue foi coletado para análise bioquímica e órgãos vitais como fígado e rins foram utilizados para avaliação histológica. Os resultados mostraram uma redução significativa (p<0,05) na massa corporal nos dias 21 e 28 do grupo tratado com cafeína comparado ao grupo controle. Nos dias 14, 21 e 28 ocorreu um aumento significativo (p<0,05) da massa corporal no grupo tratado com p-sinefrina comparado com os grupos efedrina, salicina, cafeína e associação. No teste da atividade locomotora houve um aumento significativo (p<0,05) no grupo tratado com a associação comparado ao grupo controle. Não foram encontradas alterações nos marcadores bioquímicos de fígado, rim e coração, bem como nas avaliações macroscópicas dos órgãos vitais. Entretanto, na análise histológica do fígado, verificou-se em todos os grupos a presença de vacuolização e tumefação celular, congestão vascular e alargamento dos sinusóides, e apenas os grupos p-sinefrina, efedrina e salicina apresentaram degeneração hidrópica. Na histologia dos rins todos os grupos demonstraram vacuolização celular e aumento do espaço da cápsula de Bowman e o grupo p-sinefrina mostrou a presença de infiltrado inflamatório. Esses resultados sugerem que o uso dessas substâncias, tanto na forma isolada como em associação, apresenta um perfil toxicológico considerável. / The search for a globalized aesthetic standard and the increasing obesity are enhancing the use of food supplements and weight loss compounds from plant base extracts. Products containing the combination of p-synephrine, ephedrine, caffeine and salicin are widely consumed and the effectiveness and safety are not well understood. Therefore, the aim of this study was to evaluate the subchronic toxicity of p-synephrine, ephedrine, caffeine and salicin, isolated and in combination, in male Wistar rats. Doses of salicin 6 mg/kg, ephedrine 4 mg/kg, p-synephrine 10 mg/kg, caffeine 80 mg/kg and the association of salicin, ephedrine, p-synephrine and caffeine (100 mg/kg; 6:4:10:80, respectively) were administered orally for 28 consecutive days. Body weight was recorded weekly and a locomotor activity test was performed on the 28th day. Blood was collected for biochemical analysis and vital organs such as liver and kidneys were used for histologic evaluation. The results showed a significant reduction (p <0.05) in body mass on days 21 and 28 in the caffeine-treated group compared to control group. Besides that, on days 14, 21 and 28 a significant increase (p <0.05) in body weight was observed in the group treated with p-synephrine compared to the ephedrine, salicin, caffeine and association-treated groups. In the test of locomotor activity, a significant increase (p <0.05) was observed in the association-treated group treated compared to the control group. No changes were found in biochemical markers associated with liver, kidney and heart conditions or in macroscopic evaluations of vital organs. However, the histological analysis of the liver in all groups shown presence of cellular vacuolization and swelling, vascular congestion and enlargement of the sinusoids, whereas the p-synephrine, ephedrine and salicin groups exhibited hydropic degeneration. In the histology of kidneys, all groups showed cellular vacuolation and increased of the Bowman's capsule space and the p-synephrine group showed the presence of inflammatory infiltrate. These results suggest that the use of these substances either in isolation or in combination showed a considerable toxicological profile.

Os suplementos alimentares e compostos emagrecedores a base de extratos vegetais têm uso muito difundido e indiscriminado, principalmente pela diversidade de produtos disponíveis e facilidade de acesso aos mesmos, aliada à falsa crença popular de que “o que é natural não faz mal”. Produtos contendo a associação de psinefrina, efedrina, salicina e cafeína são amplamente consumidos pela população. Entretanto, a efetividade e, sobretudo, a segurança da associação dessas substâncias ainda não é conhecida, visto que estudos sobre o sinergismo farmacológico e toxicológico dessa associação ainda são praticamente inexistentes. Logo, o objetivo deste trabalho foi elucidar o perfil toxicológico agudo e subcrônico, incluindo avaliação do estresse oxidativo e de alterações fisiológicas, bem como o desenvolvimento de metodologias que permitam analisar e quantificar o teor dessas substâncias nos produtos comerciais. Para avaliação da toxicidade aguda, doses de 300, 350 e 400 mg/kg da associação de p-sinefrina, efedrina, salicina e cafeína (10:4:6:80) foram testadas via oral em camundongos machos e fêmeas. Foi possível observar redução da atividade locomotora, ptose (em todas as doses em ambos os sexos), convulsões (350 mg/kg em fêmeas e 400 mg/kg em machos e fêmeas), além de salivação, agitação, piloereção em fêmeas, bem como mortes em machos (350 e 400 mg/kg) oriunda de hemorragia cardiopulmonar. Redução na atividade locomotora foi confirmada através do teste de atividade locomotora espontânea em machos que mostrou diminuição significativa (p<0,01) em todos os grupos tratados, sendo o mesmo resultado observado quando do teste de temperatura corporal, havendo decréscimo da mesma em todas as doses testadas. O teste de rota-rod mostrou ocorrência de neurotoxicidade em machos tratados com 400 mg/kg. A DL50 da mistura foi estimada entre 350 e 400 mg/kg. No teste de avaliação da toxicidade subcrônica, ratos machos e fêmeas foram tratados por via oral com a mesma mistura por 28 dias consecutivos nas doses de 50, 75, 100 e 150 mg/kg. Avaliações hematológicas, bioquímicas e de marcadores de estresse oxidativo foram realizadas, observando-se ocorrência de peroxidação lipídica e de dano hepático e renal em ratos machos (100 e 150 mg/kg), além de diminuição da GSH em todos os machos tratados. Nas fêmeas não houve indicação de estresse oxidativo, mas sim, ocorrência de alterações hepáticas não conclusivas. O diferente perfil de toxicidade apresentado por machos e fêmeas sugere influência hormonal sobre os efeitos fármaco-toxicológicos da mistura. Os resultados obtidos mostraram que a associação de p-sinefrina, efedrina, salicina e cafeína, nas doses testadas, apresenta considerável perfil de toxicidade, tanto agudo quanto subcrônico, indicando a necessidade de testes toxicológicos mais detalhados para total elucidação dos efeitos, incluindo avaliações relacionadas à influência da presença de estrogênio, avaliações que permitam períodos mais longos de exposição e avaliação de outros marcadores de estresse oxidativo, visto o grande número de acidentes toxicológicos relatados após utilização de suplementos alimentares e compostos emagrecedores cujas formulações frequentemente contém essa associação de substâncias. Com base no desenvolvimento da metodologia de análise, a extração em fase sólida com cartuchos de troca iônica SCX, seguida de extracção líquido-líquido com clorofórmio, subsequente reação de derivatização com anidrido trifluoroacético e posterior análise em CG/DIC (e GC/EM para confirmação) pode ser considerada uma alternativa promissora para analisar simultaneamente sinefrina, efedrina e cafeína em suplementos alimentares e compostos emagrecedores. O método por CG/DIC foi validado pela definição da faixa de linearidade para as substâncias (50, 100, 200, 500, 1000 e 2000 ug/mL para octopamina efedrina e p-sinefrina e 250, 500, 1000, 2500, 5000 e 10000 ug/mL para cafeína), limite de detecção, limite de quantificação, precisão, exatidão, seletividade, especificidade e robustez. O método de análise desenvolvida pode ser utilizado no controle de qualidade de produtos, para identificar e quantificar estas substâncias em uma ampla variedade de matrizes. / Dietary supplements and weight loss compounds plant-based are indiscriminate and widespread use, mainly for the diversity of products available and easy acess to them, coupled with the false popular belief that “what is natural does not hurt”. Products containing p-synephrine associated to ephedrine, salicin and caffeine are largely consumed. However, the effectiveness and safety of this mixture is still unknown, since studies about pharmacological and toxicological synergism are still nonexistent. Therefore, the aim of this study was evaluate the acute and subchronic toxicological profile, including assessment of oxidative stress physiological alterations, as well as the development of methodologies to analyze and quantify these substances in commercial products. To acute toxicological evaluation, 300, 350 and 400 mg/kg doses of association of p-synephrine, ephedrine, salicin and caffeine (10:4:6:80 w/w) were tested by oral gavage in male and female mice and was possible to observed a reduction in locomotor activity and ptose (in all treated groups for both male and female mice), seizures (350 mg/kg in female and 400 mg/kg in male and female), besides salivation, agitation and piloerection in female. Deaths occurred in male (350 and 400 mg/kg) and necropsy showed cardiopulmonary hemorrhage. The decrease in locomotor activity was confirmed throught the spontaneous locomotor activity, in which the number of crossings significantly decreased (p<0.01) in all treated groups, being the similar result obtained in body temperature evaluation, reducing in the all same doses. The rotarod test showed neurotoxicity in male treated with 400 mg/kg. The LD50 of the mixture was estimated between 350 and 400 mg/kg. In subchronic toxicity evaluation, male and female rats were treated by oral gavage with the mixture for 28 consecutive days at doses of 50, 75, 100 and 150 mg/kg. Hematological, biochemical and oxidative stress biomarkers were performed and showed lipid peroxidation, and hepatic and renal damages in male rats (100 and 150 mg/kg) and reduction in GSH levels and all treated male groups. In females, there were no indications of oxidative stress, but were observed not conclusive hepatic enzyme changes. The different toxicity profile displayed by male and female rats suggests hormonal influence in mixture effects. All the results obtained showed that the association of p-synephrine, ephedrine, salicin and caffeine in tested doses has considerable toxicity both acute and subchronic profiles, indicating the need of more detailed investigations for elucidate all the effects, including assessments related to protector role of estrogen, and more longterm studies of exposure, besides evaluations of more oxidative biomarkers, since the large number of toxicological report cases related to these products whose formulations usually contain these substances´s combination. On the basis of analytical methodology development, the SPE with SCX stationary phases followed by liquid-liquid extraction with chloroform and subsequent derivatization with anhydride trifluoroacetic and GC/FID (and GC/MS confirmation) analysis can be considered a promising alternative to analyze simultaneously synephrine, ephedrine and caffeine in supplements and weight loss products. The GC/FID method was validated by defining the linearity (50, 100, 200, 500, 1000 and 2000 μg/mL to ephedrine, octopamine and p-synephrine and 250, 500, 1000, 2500, 5000 and 10000 μg/mL to caffeine), limit of detection, limit of quantification, precision, accuracy, selectivity, specificity and robustness. The analysis method developed can be used in quality control to identify and quantificate these substances in a wide range of matrices.

A busca por um padrão estético globalizado e o aumento da obesidade fazem crescer o uso de suplementos alimentares e compostos emagrecedores à base de extratos vegetais. Produtos contendo a associação de p-sinefrina, efedrina, salicina e cafeína são amplamente consumidos e não apresentam efetividade e segurança bem esclarecidas. Portanto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a toxicidade subcrônica de p-sinefrina, efedrina, cafeína e salicina, isoladas e em associação, em ratos Wistar machos. Doses de salicina 6 mg/kg, efedrina 4 mg/kg, p-sinefrina 10 mg/kg, cafeína 80 mg/kg e a associação de salicina, efedrina, p-sinefrina e cafeína 100 mg/kg (6:4:10:80, respectivamente) foram testadas via oral por 28 dias consecutivos. A massa corporal foi verificada semanalmente e o teste da atividade locomotora foi realizado no 28º dia. O sangue foi coletado para análise bioquímica e órgãos vitais como fígado e rins foram utilizados para avaliação histológica. Os resultados mostraram uma redução significativa (p<0,05) na massa corporal nos dias 21 e 28 do grupo tratado com cafeína comparado ao grupo controle. Nos dias 14, 21 e 28 ocorreu um aumento significativo (p<0,05) da massa corporal no grupo tratado com p-sinefrina comparado com os grupos efedrina, salicina, cafeína e associação. No teste da atividade locomotora houve um aumento significativo (p<0,05) no grupo tratado com a associação comparado ao grupo controle. Não foram encontradas alterações nos marcadores bioquímicos de fígado, rim e coração, bem como nas avaliações macroscópicas dos órgãos vitais. Entretanto, na análise histológica do fígado, verificou-se em todos os grupos a presença de vacuolização e tumefação celular, congestão vascular e alargamento dos sinusóides, e apenas os grupos p-sinefrina, efedrina e salicina apresentaram degeneração hidrópica. Na histologia dos rins todos os grupos demonstraram vacuolização celular e aumento do espaço da cápsula de Bowman e o grupo p-sinefrina mostrou a presença de infiltrado inflamatório. Esses resultados sugerem que o uso dessas substâncias, tanto na forma isolada como em associação, apresenta um perfil toxicológico considerável. / The search for a globalized aesthetic standard and the increasing obesity are enhancing the use of food supplements and weight loss compounds from plant base extracts. Products containing the combination of p-synephrine, ephedrine, caffeine and salicin are widely consumed and the effectiveness and safety are not well understood. Therefore, the aim of this study was to evaluate the subchronic toxicity of p-synephrine, ephedrine, caffeine and salicin, isolated and in combination, in male Wistar rats. Doses of salicin 6 mg/kg, ephedrine 4 mg/kg, p-synephrine 10 mg/kg, caffeine 80 mg/kg and the association of salicin, ephedrine, p-synephrine and caffeine (100 mg/kg; 6:4:10:80, respectively) were administered orally for 28 consecutive days. Body weight was recorded weekly and a locomotor activity test was performed on the 28th day. Blood was collected for biochemical analysis and vital organs such as liver and kidneys were used for histologic evaluation. The results showed a significant reduction (p <0.05) in body mass on days 21 and 28 in the caffeine-treated group compared to control group. Besides that, on days 14, 21 and 28 a significant increase (p <0.05) in body weight was observed in the group treated with p-synephrine compared to the ephedrine, salicin, caffeine and association-treated groups. In the test of locomotor activity, a significant increase (p <0.05) was observed in the association-treated group treated compared to the control group. No changes were found in biochemical markers associated with liver, kidney and heart conditions or in macroscopic evaluations of vital organs. However, the histological analysis of the liver in all groups shown presence of cellular vacuolization and swelling, vascular congestion and enlargement of the sinusoids, whereas the p-synephrine, ephedrine and salicin groups exhibited hydropic degeneration. In the histology of kidneys, all groups showed cellular vacuolation and increased of the Bowman's capsule space and the p-synephrine group showed the presence of inflammatory infiltrate. These results suggest that the use of these substances either in isolation or in combination showed a considerable toxicological profile.

Orientador: Rogério Lopes Vieites / Banca: Regina Marta Evangelista / Banca: Ben Hur Mattiuz / Banca: Luciana Manoel / Banca : André José de Campos / Resumo: Este trabalho teve como objetivo prolongar a vida útil de ameixas cv. Gulfblaze, provenientes de Holambra II - SP, com o emprego da irradiação gama, embalagem e o uso de condicionamento térmico em frutos refrigerados. Foram realizados dois experimentos: Experimento 1 - frutos irradiados (0,0; 0,4; 0,6; 0,8; 1,0kGy) submetidos à atmosfera modificada passiva e Experimento 2 - frutos submetidos ao condicionamento térmico (10±2°C por 2 dias), irradiados (0,0; 0,4; 0,6; 0,8; 1,0kGy) submetidos à atmosfera modificada passiva. Os frutos foram selecionados e embalados para então serem irradiados no IPEN, localizado em São Paulo - SP. Logo após seguiram para o Laboratório de Frutas e Hortaliças, pertencente ao Departamento de Gestão e Tecnologia Agroindustrial, da Faculdade de Ciências Agronômicas - UNESP - Câmpus de Botucatu, SP. Nos dois experimentos, os frutos após os tratamentos, foram armazenados em B.O.D. a 0±2°C e com 90±5% de UR por 35 dias. As avaliações foram realizadas a cada cinco dias, durante 35 dias de armazenamento. As alterações na qualidade pós-colheita foram detectadas por meio das análises de perda de massa fresca, firmeza, pH, acidez titulável, sólidos solúveis, razão SS/AT "Ratio" açúcares redutores, açúcares totais, vitamina C total, pigmentos, compostos fenólicos totais e taxa de respiração. O delineamento estatístico empregado foi inteiramente casualizado com três repetições por tratamento para cada um dos oito tempos de avaliação, utilizando-se o Teste de Tukey a 5% de probabilidade. Nas condições em que os experimentos foram realizados, os resultados permitem concluir que, os frutos da ameixeira 'Gulfblaze' são resistentes à refrigeração (0±2°C), não apresentando sintomas de injúria até os 35 dias de armazenamento. O condicionamento levou a uma aceleração do amadurecimento, mostrando-se não recomendável para essa variedade de ameixas / Abstract: The present work aims at protracting the lifespan of plums cv. Gulfblaze, originating from Holambra II, São Paulo, by application of gamma irradiation, packaging and the use of thermal conditioning on cold fruits. Two experiments were made: Experiment 1. irradiated fruits (0,0; 0,4; 0,6; 0,8; 1,0KGy) undergo a passive modified atmosphere and Experiment 2. fruits undergo thermal conditioning (10±2°C for 2 days), irradiation (0,0; 0,4; 0,6; 0,8; 1,0KGy), and are subjected to passive modified atmosphere. The fruits were selected and packed, and then irradiated at IPEN, located in São Paulo - SP. Thereupon, they were directed to the Laboratory of Fruit and Vegetables from the Department of Management and Agribusiness Technology of the Agronomic Sciences Faculty - UNESP - Botucatu, Brazil. In both experiments, after the treatment the fruits were stored in B.O.D at 0±2°C with 90±5% RH for 35 days. Evaluations were conducted every five days, for the 35 days of storage. Alterations on post-harvest quality were detected by means of analysis of fresh mass loss, consistency (firmness), pH, total titratable acidity, soluble solids, 'Ratio' (SS/TTA), reducing sugar content, total reducing sugar, vitamin C total, pigment, phenolic compounds and respiratory rates. The employed statistical design was thoroughly randomized with three replications per treatment for each of the eight evaluations using the Turkey's Test to 5% of probability. Under the circumstances in which the experiments were performed, the results allow for the conclusion that 'Gulfblaze' plum fruits are resistant to refrigeration (0±2°C), with no symptoms of injury during the 35 days at storage. The conditioning led to ripening acceleration, proving to be not advisable for this sort of plum. The use of gamma radiation did not lead to improvement, regardless of the applied dose / Doutor

Os suplementos alimentares e compostos emagrecedores a base de extratos vegetais têm uso muito difundido e indiscriminado, principalmente pela diversidade de produtos disponíveis e facilidade de acesso aos mesmos, aliada à falsa crença popular de que “o que é natural não faz mal”. Produtos contendo a associação de psinefrina, efedrina, salicina e cafeína são amplamente consumidos pela população. Entretanto, a efetividade e, sobretudo, a segurança da associação dessas substâncias ainda não é conhecida, visto que estudos sobre o sinergismo farmacológico e toxicológico dessa associação ainda são praticamente inexistentes. Logo, o objetivo deste trabalho foi elucidar o perfil toxicológico agudo e subcrônico, incluindo avaliação do estresse oxidativo e de alterações fisiológicas, bem como o desenvolvimento de metodologias que permitam analisar e quantificar o teor dessas substâncias nos produtos comerciais. Para avaliação da toxicidade aguda, doses de 300, 350 e 400 mg/kg da associação de p-sinefrina, efedrina, salicina e cafeína (10:4:6:80) foram testadas via oral em camundongos machos e fêmeas. Foi possível observar redução da atividade locomotora, ptose (em todas as doses em ambos os sexos), convulsões (350 mg/kg em fêmeas e 400 mg/kg em machos e fêmeas), além de salivação, agitação, piloereção em fêmeas, bem como mortes em machos (350 e 400 mg/kg) oriunda de hemorragia cardiopulmonar. Redução na atividade locomotora foi confirmada através do teste de atividade locomotora espontânea em machos que mostrou diminuição significativa (p<0,01) em todos os grupos tratados, sendo o mesmo resultado observado quando do teste de temperatura corporal, havendo decréscimo da mesma em todas as doses testadas. O teste de rota-rod mostrou ocorrência de neurotoxicidade em machos tratados com 400 mg/kg. A DL50 da mistura foi estimada entre 350 e 400 mg/kg. No teste de avaliação da toxicidade subcrônica, ratos machos e fêmeas foram tratados por via oral com a mesma mistura por 28 dias consecutivos nas doses de 50, 75, 100 e 150 mg/kg. Avaliações hematológicas, bioquímicas e de marcadores de estresse oxidativo foram realizadas, observando-se ocorrência de peroxidação lipídica e de dano hepático e renal em ratos machos (100 e 150 mg/kg), além de diminuição da GSH em todos os machos tratados. Nas fêmeas não houve indicação de estresse oxidativo, mas sim, ocorrência de alterações hepáticas não conclusivas. O diferente perfil de toxicidade apresentado por machos e fêmeas sugere influência hormonal sobre os efeitos fármaco-toxicológicos da mistura. Os resultados obtidos mostraram que a associação de p-sinefrina, efedrina, salicina e cafeína, nas doses testadas, apresenta considerável perfil de toxicidade, tanto agudo quanto subcrônico, indicando a necessidade de testes toxicológicos mais detalhados para total elucidação dos efeitos, incluindo avaliações relacionadas à influência da presença de estrogênio, avaliações que permitam períodos mais longos de exposição e avaliação de outros marcadores de estresse oxidativo, visto o grande número de acidentes toxicológicos relatados após utilização de suplementos alimentares e compostos emagrecedores cujas formulações frequentemente contém essa associação de substâncias. Com base no desenvolvimento da metodologia de análise, a extração em fase sólida com cartuchos de troca iônica SCX, seguida de extracção líquido-líquido com clorofórmio, subsequente reação de derivatização com anidrido trifluoroacético e posterior análise em CG/DIC (e GC/EM para confirmação) pode ser considerada uma alternativa promissora para analisar simultaneamente sinefrina, efedrina e cafeína em suplementos alimentares e compostos emagrecedores. O método por CG/DIC foi validado pela definição da faixa de linearidade para as substâncias (50, 100, 200, 500, 1000 e 2000 ug/mL para octopamina efedrina e p-sinefrina e 250, 500, 1000, 2500, 5000 e 10000 ug/mL para cafeína), limite de detecção, limite de quantificação, precisão, exatidão, seletividade, especificidade e robustez. O método de análise desenvolvida pode ser utilizado no controle de qualidade de produtos, para identificar e quantificar estas substâncias em uma ampla variedade de matrizes. / Dietary supplements and weight loss compounds plant-based are indiscriminate and widespread use, mainly for the diversity of products available and easy acess to them, coupled with the false popular belief that “what is natural does not hurt”. Products containing p-synephrine associated to ephedrine, salicin and caffeine are largely consumed. However, the effectiveness and safety of this mixture is still unknown, since studies about pharmacological and toxicological synergism are still nonexistent. Therefore, the aim of this study was evaluate the acute and subchronic toxicological profile, including assessment of oxidative stress physiological alterations, as well as the development of methodologies to analyze and quantify these substances in commercial products. To acute toxicological evaluation, 300, 350 and 400 mg/kg doses of association of p-synephrine, ephedrine, salicin and caffeine (10:4:6:80 w/w) were tested by oral gavage in male and female mice and was possible to observed a reduction in locomotor activity and ptose (in all treated groups for both male and female mice), seizures (350 mg/kg in female and 400 mg/kg in male and female), besides salivation, agitation and piloerection in female. Deaths occurred in male (350 and 400 mg/kg) and necropsy showed cardiopulmonary hemorrhage. The decrease in locomotor activity was confirmed throught the spontaneous locomotor activity, in which the number of crossings significantly decreased (p<0.01) in all treated groups, being the similar result obtained in body temperature evaluation, reducing in the all same doses. The rotarod test showed neurotoxicity in male treated with 400 mg/kg. The LD50 of the mixture was estimated between 350 and 400 mg/kg. In subchronic toxicity evaluation, male and female rats were treated by oral gavage with the mixture for 28 consecutive days at doses of 50, 75, 100 and 150 mg/kg. Hematological, biochemical and oxidative stress biomarkers were performed and showed lipid peroxidation, and hepatic and renal damages in male rats (100 and 150 mg/kg) and reduction in GSH levels and all treated male groups. In females, there were no indications of oxidative stress, but were observed not conclusive hepatic enzyme changes. The different toxicity profile displayed by male and female rats suggests hormonal influence in mixture effects. All the results obtained showed that the association of p-synephrine, ephedrine, salicin and caffeine in tested doses has considerable toxicity both acute and subchronic profiles, indicating the need of more detailed investigations for elucidate all the effects, including assessments related to protector role of estrogen, and more longterm studies of exposure, besides evaluations of more oxidative biomarkers, since the large number of toxicological report cases related to these products whose formulations usually contain these substances´s combination. On the basis of analytical methodology development, the SPE with SCX stationary phases followed by liquid-liquid extraction with chloroform and subsequent derivatization with anhydride trifluoroacetic and GC/FID (and GC/MS confirmation) analysis can be considered a promising alternative to analyze simultaneously synephrine, ephedrine and caffeine in supplements and weight loss products. The GC/FID method was validated by defining the linearity (50, 100, 200, 500, 1000 and 2000 μg/mL to ephedrine, octopamine and p-synephrine and 250, 500, 1000, 2500, 5000 and 10000 μg/mL to caffeine), limit of detection, limit of quantification, precision, accuracy, selectivity, specificity and robustness. The analysis method developed can be used in quality control to identify and quantificate these substances in a wide range of matrices.

Os suplementos alimentares e compostos emagrecedores a base de extratos vegetais têm uso muito difundido e indiscriminado, principalmente pela diversidade de produtos disponíveis e facilidade de acesso aos mesmos, aliada à falsa crença popular de que “o que é natural não faz mal”. Produtos contendo a associação de psinefrina, efedrina, salicina e cafeína são amplamente consumidos pela população. Entretanto, a efetividade e, sobretudo, a segurança da associação dessas substâncias ainda não é conhecida, visto que estudos sobre o sinergismo farmacológico e toxicológico dessa associação ainda são praticamente inexistentes. Logo, o objetivo deste trabalho foi elucidar o perfil toxicológico agudo e subcrônico, incluindo avaliação do estresse oxidativo e de alterações fisiológicas, bem como o desenvolvimento de metodologias que permitam analisar e quantificar o teor dessas substâncias nos produtos comerciais. Para avaliação da toxicidade aguda, doses de 300, 350 e 400 mg/kg da associação de p-sinefrina, efedrina, salicina e cafeína (10:4:6:80) foram testadas via oral em camundongos machos e fêmeas. Foi possível observar redução da atividade locomotora, ptose (em todas as doses em ambos os sexos), convulsões (350 mg/kg em fêmeas e 400 mg/kg em machos e fêmeas), além de salivação, agitação, piloereção em fêmeas, bem como mortes em machos (350 e 400 mg/kg) oriunda de hemorragia cardiopulmonar. Redução na atividade locomotora foi confirmada através do teste de atividade locomotora espontânea em machos que mostrou diminuição significativa (p<0,01) em todos os grupos tratados, sendo o mesmo resultado observado quando do teste de temperatura corporal, havendo decréscimo da mesma em todas as doses testadas. O teste de rota-rod mostrou ocorrência de neurotoxicidade em machos tratados com 400 mg/kg. A DL50 da mistura foi estimada entre 350 e 400 mg/kg. No teste de avaliação da toxicidade subcrônica, ratos machos e fêmeas foram tratados por via oral com a mesma mistura por 28 dias consecutivos nas doses de 50, 75, 100 e 150 mg/kg. Avaliações hematológicas, bioquímicas e de marcadores de estresse oxidativo foram realizadas, observando-se ocorrência de peroxidação lipídica e de dano hepático e renal em ratos machos (100 e 150 mg/kg), além de diminuição da GSH em todos os machos tratados. Nas fêmeas não houve indicação de estresse oxidativo, mas sim, ocorrência de alterações hepáticas não conclusivas. O diferente perfil de toxicidade apresentado por machos e fêmeas sugere influência hormonal sobre os efeitos fármaco-toxicológicos da mistura. Os resultados obtidos mostraram que a associação de p-sinefrina, efedrina, salicina e cafeína, nas doses testadas, apresenta considerável perfil de toxicidade, tanto agudo quanto subcrônico, indicando a necessidade de testes toxicológicos mais detalhados para total elucidação dos efeitos, incluindo avaliações relacionadas à influência da presença de estrogênio, avaliações que permitam períodos mais longos de exposição e avaliação de outros marcadores de estresse oxidativo, visto o grande número de acidentes toxicológicos relatados após utilização de suplementos alimentares e compostos emagrecedores cujas formulações frequentemente contém essa associação de substâncias. Com base no desenvolvimento da metodologia de análise, a extração em fase sólida com cartuchos de troca iônica SCX, seguida de extracção líquido-líquido com clorofórmio, subsequente reação de derivatização com anidrido trifluoroacético e posterior análise em CG/DIC (e GC/EM para confirmação) pode ser considerada uma alternativa promissora para analisar simultaneamente sinefrina, efedrina e cafeína em suplementos alimentares e compostos emagrecedores. O método por CG/DIC foi validado pela definição da faixa de linearidade para as substâncias (50, 100, 200, 500, 1000 e 2000 ug/mL para octopamina efedrina e p-sinefrina e 250, 500, 1000, 2500, 5000 e 10000 ug/mL para cafeína), limite de detecção, limite de quantificação, precisão, exatidão, seletividade, especificidade e robustez. O método de análise desenvolvida pode ser utilizado no controle de qualidade de produtos, para identificar e quantificar estas substâncias em uma ampla variedade de matrizes. / Dietary supplements and weight loss compounds plant-based are indiscriminate and widespread use, mainly for the diversity of products available and easy acess to them, coupled with the false popular belief that “what is natural does not hurt”. Products containing p-synephrine associated to ephedrine, salicin and caffeine are largely consumed. However, the effectiveness and safety of this mixture is still unknown, since studies about pharmacological and toxicological synergism are still nonexistent. Therefore, the aim of this study was evaluate the acute and subchronic toxicological profile, including assessment of oxidative stress physiological alterations, as well as the development of methodologies to analyze and quantify these substances in commercial products. To acute toxicological evaluation, 300, 350 and 400 mg/kg doses of association of p-synephrine, ephedrine, salicin and caffeine (10:4:6:80 w/w) were tested by oral gavage in male and female mice and was possible to observed a reduction in locomotor activity and ptose (in all treated groups for both male and female mice), seizures (350 mg/kg in female and 400 mg/kg in male and female), besides salivation, agitation and piloerection in female. Deaths occurred in male (350 and 400 mg/kg) and necropsy showed cardiopulmonary hemorrhage. The decrease in locomotor activity was confirmed throught the spontaneous locomotor activity, in which the number of crossings significantly decreased (p<0.01) in all treated groups, being the similar result obtained in body temperature evaluation, reducing in the all same doses. The rotarod test showed neurotoxicity in male treated with 400 mg/kg. The LD50 of the mixture was estimated between 350 and 400 mg/kg. In subchronic toxicity evaluation, male and female rats were treated by oral gavage with the mixture for 28 consecutive days at doses of 50, 75, 100 and 150 mg/kg. Hematological, biochemical and oxidative stress biomarkers were performed and showed lipid peroxidation, and hepatic and renal damages in male rats (100 and 150 mg/kg) and reduction in GSH levels and all treated male groups. In females, there were no indications of oxidative stress, but were observed not conclusive hepatic enzyme changes. The different toxicity profile displayed by male and female rats suggests hormonal influence in mixture effects. All the results obtained showed that the association of p-synephrine, ephedrine, salicin and caffeine in tested doses has considerable toxicity both acute and subchronic profiles, indicating the need of more detailed investigations for elucidate all the effects, including assessments related to protector role of estrogen, and more longterm studies of exposure, besides evaluations of more oxidative biomarkers, since the large number of toxicological report cases related to these products whose formulations usually contain these substances´s combination. On the basis of analytical methodology development, the SPE with SCX stationary phases followed by liquid-liquid extraction with chloroform and subsequent derivatization with anhydride trifluoroacetic and GC/FID (and GC/MS confirmation) analysis can be considered a promising alternative to analyze simultaneously synephrine, ephedrine and caffeine in supplements and weight loss products. The GC/FID method was validated by defining the linearity (50, 100, 200, 500, 1000 and 2000 μg/mL to ephedrine, octopamine and p-synephrine and 250, 500, 1000, 2500, 5000 and 10000 μg/mL to caffeine), limit of detection, limit of quantification, precision, accuracy, selectivity, specificity and robustness. The analysis method developed can be used in quality control to identify and quantificate these substances in a wide range of matrices.