p. 1-204 / Submitted by Santiago Fabio (fabio.ssantiago@hotmail.com) on 2013-05-02T19:30:43Z No. of bitstreams: 1 999999999999999999.pdf: 821652 bytes, checksum: a675e81264e0276fcd87b509e674c613 (MD5) / Approved for entry into archive by Maria Creuza Silva(mariakreuza@yahoo.com.br) on 2013-05-04T17:40:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 999999999999999999.pdf: 821652 bytes, checksum: a675e81264e0276fcd87b509e674c613 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-04T17:40:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 999999999999999999.pdf: 821652 bytes, checksum: a675e81264e0276fcd87b509e674c613 (MD5) Previous issue date: 2007 / Fatores associados ao retardo no crescimento intra-uterino ainda não foram totalmente esclarecidos. Recém-nascidos (RN) pequenos para a idade gestacional (PIG) apresentam alterações nos valores hematológicos comparados aos RN adequados para a idade gestacional (AIG) e pré-termos. Persistem também limitações metodológicas inerentes a acurácia dos métodos de determinação da idade gestacional. Objetivos: Determinar os fatores associados ao RCIU, as características hematológicas dos recém nascidos portadores do RCIU e avaliar a acurácia dos métodos da avaliação da idade gestacional utilizados no diagnóstico antropométrico desses recém-nascidos. Metodologia: Estudo envolvendo puérperas e 564 RN em 2 maternidades públicas da cidade de Salvador. Foram classificados de AIG, RN com o peso ≥10th e <90th, de PIG aqueles com peso <10th, avaliados pela curva de Williams; e pré-termo, aqueles com <37 semanas de gestação. Os dados foram coletados utilizando-se de questionário padronizado. Foram tomadas as medidas antropométricas da criança e da puérpera e coletou-se o sangue do cordão umbilical. A idade gestacional foi calculada pelos métodos da data da última menstruação, ultrassonografia e físico de Capurro. Estudo 1 de desenho caso-controle. Estudos 2 e 3 de desenhos de corte transversal. Análise estatística: No estudo 1, utilizou-se a regressão logística não condicional para testar a associação entre a variável dependente e as preditoras e Odds Ratio foi adotado como medida de associação. No estudo 2, a média e seu respectivo DP, valor máximo e mínimo foram usados para descrever os valores hematológicos do cordão umbilical. Para o estudo 3, realizou-se a diferença entre as medianas da idade gestacional segundo os métodos, utilizando-se do teste não paramétrico “Wilcoxon Signed Rank Test”. A correlação entre as idades gestacional estimadas pelo DUM, USG e Capurro e entre estes métodos e o peso ao nascer foi realizada utilizando-se do coeficiente de correlação de Pearson. Utilizou-se o Coeficiente Kappa para avaliar a concordância entre os métodos na estimação do estado antropométrico do recém-nascido. A validade dos métodos na estimação da idade gestacional foi avaliada por meio do cálculo da sensibilidade, especificidade, VPP, VPN e pela curva ROC. Foram utilizados os pacotes estatístico SPSS.11 e o Stata 8, aceitando-se a significância de 5% nas estimativas de interesse. Resultados: Com o estudo 1, identificou-se que a primeira gestação (OR:2,85; 1,73-4,71), o hábito de fumar (OR: 2,65; 1,35-5,19) e a gestação anterior desfavorável (OR:2.10; 1,21-3,64) se comportaram como fatores de risco para retardo no crescimento intra-uterino. Os resultados do estudo 2 indicaram que valores mais altos de hemácias (4,21×1012/l±0,48), hemoglobina (14,50 g/dl ±1,42), hematócrito (43,50%±4,36), ferritina (162,61 µg/l ±100,10); RDW (13,34±0,85%) e leucócitos (12,82 109/l ±3,39) foram identificados nos RN PIG, quando comparados com aqueles dos AIG a termo e pré-termos. Os RN AIG pré-termos apresentaram valores mais altos de VGM e HGM. Os valores médios das plaquetas foram mais altos nos RN AIG a termo. A partir dos resultados do estudo 3, observou-se que o método de Capurro incrementou a idade gestacional em intervalos menores de 39 semanas e a USG a aumentou a partir deste patamar, em relação ao método DUM. Os métodos DUM e USG apresentaram maior correlação entre a estimativa da idade gestacional e o estado antropométrico para o conjunto dos RN (r=0,668) e para a identificação do RN AIG (r=0,685). Considerando a idade gestacional estimada pelo DUM e a relação com o peso ao nascer, o coeficiente de correlação foi mais elevado (r=0,609) na identificação dos RN PIG’s. Na predição de RN PIG’s, maior sensibilidade foi observada para a USG (96,6%) e maior especificidade para o Capurro (75,5%). Acurácia mais elevada na estimativa da idade gestacional foi observada para a USG na 41ª, tomando como referencia o DUM (ROC=77%). Conclusão: O RCIU associou-se à primeira gestação, à gestação anterior desfavorável e ao hábito de fumar. RN portadores de RCIU apresentaram valores ematológicos mais elevados em relação os RN AIG e pré-termos e o método físico de Capurro apresentou pior desempenho na identificação de RCIU. / Salvador

Orientador: Dimas Tadeu Covas / Banca: Dimas Tadeu Covas / Banca: Rodrigo Alexandre Panepucci / Banca: Haroldo Wilson Moreira / Resumo: A maior expressão de alvos transcricionais e componentes da via NFkB é uma característica distintiva das células-tronco hematopoéticas (CTH) CD34+ de sangue de cordão umbilical (SCU) comparadas às CTH CD34+ de medula óssea (MO) e pode estar relacionada com o estado mais primitivo das CTH dos neonatos. No entanto, as células CD34+ são um grupo heterogêneo de célulastronco (CT) e progenitoras em diferentes estágios de maturação e diferenças na composição celular entre MO e SCU poderiam contribuir para os resultados mencionados. Estudos recentes têm identificado o marcador de superfície CD133, como um marcador de CT mais primitivas, expresso em uma subpopulação de células CD34bright, com um sugestivo potencial de hemangioblasto. Com o objetivo de caracterizar a composição celular de MO e SCU e identificar mecanismos moleculares envolvidos com a maior primitividade das células CD133+, propusemos avaliar o perfis imunofenotípico (quanto à expressão de CD34 e CD133) por citometria de fluxo e de expressão gênica de células CD34+ e células CD133+ selecionadas imunomagneticamente, de ambas as fontes, pelas técnicas de microarray e PCR em tempo real. Nossos resultados revelaram que enquanto a maioria das células CD133+ são CD34+, independente da fonte, as células CD34+ de SCU possuem uma porcentagem significativamente maior de células CD133+ do que às células CD34+ de MO. A análise de clusterização revelou que as células CD133+ de MO se agrupam com as células de SCU (CD34+ e CD133+), enquanto as CD34+ de MO aparecem como um grupo distinto. A comparação dos perfis de expressão gênica entre as células CD133+ e as células CD34+, revelou a hiper-expressão... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: A higher expression of transcription targets and components of the NF-kB pathway is a distinctive feature of umbilical cord blood (UCB) CD34+ hematopoietic stem cells (HSC) when compared to bone marrow (BM) CD34+ HSC and this could be related to the more primitive state of the newborn's HSC. However, CD34+ cells represent a heterogeneous group of cells composed by stem and progenitors cells in different developmental stages, and differences in cellular composition between both sources could contribute for these finding. The surface marker CD133 has been identified as a very primitive marker, expressed in a subpopulation of CD34bright, with a proposal hemangioblast potential. Thus, in attempt to better characterize the cellular composition of UCB and BM and to identify molecular mechanisms related to the more primitive characteristics of CD133+ cells, we proposed to evaluate the immunophenotypic profile (expression of CD34 and CD133) by flow-cytometry and the gene expression profiles of immunomagnetically selected CD34+ and CD133+ cells, from both sources, by microarray and Real time PCR. Our results highlighted that, while almost all CD133+ cells are CD34+ independently of the evaluated source, the UCB CD34+ cells showed a significantly higher proportion of CD133 expression, compared to BM CD34+ cells. After obtaining the expression profiles from distinct HSC pooled samples generated by microarrays, cluster analysis showed that BM CD133+ cells preferentially grouped with UCB cells (CD34+ and CD133+) instead of BM CD34+ cells, which appeared as a very distinct profile The comparison between CD133+ and CD34+ samples revealed the over-expression of 47 transcriptional factors (TF) in CD133+ cells, many of them well-known and related... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

O sangue do cordão umbilical e placentário (SCUP) tem sido usado como fonte de células-tronco hematopoiéticas (CTH) para reconstituir a função medular (hematopoiese). A maioria das vezes, esta modalidade de transplante requer a criopreservação das CTH, que permanecem congeladas até uma possível utilização futura. Na criopreservação de CTH, o reagente químico dimetilsulfóxido (DMSO) tem sido utilizado como um crioprotetor. No entanto, tem sido provado que DMSO tem efeitos tóxicos para o corpo humano. Muitos organismos na natureza possuem uma capacidade de sobreviver ao congelamento e à desidratação acumulando dissacarídeos, como a trealose e sacarose, por isso a trealose, tem sido investigada como um crioprotetor alternativo para diversos tipos celulares. Outro dano muito comum durante o congelamento é a formação de espécie reativas de oxigênio (ERO) que diminui a viabilidade celular, por isso a adição de bioantioxidantes na solução de criopreservação das células é passo muito importante. Este estudo foi dividido em duas fases na primeira foram avaliados os resultados obtidos com a adição de antioxidantes na solução de criopreservação das células de SCUP e na segunda fase avaliou-se a hipótese que a solução de criopreservação contendo trealose intracelular e extracelular melhora a recuperação e a viabilidade das células-tronco do SCUP, após a criopreservação. SCUP foi processado e submetido à criopreservação em soluções contendo na primeira fase: soluções com diferentes concentrações de DMSO (10%, 5% e 2,5%), assim como as combinações de DMSO (5%, 2,5%) com um dos dissacarídeos (60mmol/L) e ácido ascórbico e/ou catalase (10mg/mL); e na segunda fase: soluções contendo diferentes concentrações de DMSO (10% e 2,5%), assim como as combinações de DMSO (2,5%) com trealose intra (a trealose foi introduzida na célula por meio de lipossomas) e extracelular e soluções contendo trealose intra e extracelular sem DMSO, armazenados por duas semanas em N2L, e descongeladas. As células descongeladas foram avaliadas por citometria de fluxo, pelo ensaio metabólico pelo MTT e de unidades formadoras de colônias (UFC). Na primeira fase do estudo, a catalase, melhorou a preservação das células CD34+ e CD123+, a UFC e a viabilidade celular, em comparação com a solução padrão de criopreservação. Já na segunda fase do estudo, após as análises de todos os testes vimos que a solução que continha trealose intra/extracelular e DMSO mostrou uma capacidade de manutenção da viabilidade/integridade celular superior a todas as outras testadas. A solução que continha trealose intra e extracelular sem DMSO, obteve um resultado comparável com seu controle (2,5%DMSO), porém quando avaliamos a solução que continha apenas trealose intracelular não obtivemos resultados satisfatórios. A catalase pode atuar sobre a redução dos níveis ERO na solução de criopreservação das CTH de SCUP, diminuindo os danos por ele causados e a trealose deve estar presente em ambos os lados das células durante o processo de congelamento. Portanto, em testes clínicos futuros, ela poderá ser um potencial crioprotetor das células-tronco de SCUP, podendo substituir totalmente o DMSO da solução de criopreservação, minimizando com os efeitos colaterais provenientes da infusão de produtos criopreservados nos pacientes. / The umbilical cord blood (UCB) has been used as a source of primitive hematopoietic stem cells (HSC) to reconstitute the hematopoiesis. Most often, it is required the cryopreservation of HSC, which remain frozen in banks for possible future use. For cryopreservation of HSC, the chemical reagent dimethylsulfoxide (DMSO) has been used as a cryoprotectant. Many organisms in nature have a capacity of survive freezing and dehydration by accumulating disaccharides, so the trehalose, has been actively investigated as an alternative cryoprotector, other damage which is very common during freezing is oxygen free radicals formation which decreases the cellular viability after thawing, so the addition of bioantioxidants in the solution of cryopreservation of cells is very important. This study was divided into two phases: first, we evaluated the results obtained with the addition of antioxidants in the solution for cryopreservation of cord blood cells and the second phase: evaluate the hypothesis that the cryopreservation solution containing intracellular and extracellular trehalose improves recovery and viability of cord blood stem cells after cryopreservation. UBC was processed and subjected to cryopreservation solutions containing for the first phase: solutions with different concentrations of DMSO (10%, 5% and 2.5%), as well as combinations of DMSO (5%, 2.5 %) with a disaccharide (60 mmol/L), ascorbic acid and/or catalase (10mg/mL), and for the second phase: solutions containing different concentrations of DMSO (10% and 2.5%), as well as combinations of DMSO (2.5%) with intracellular trehalose (trehalose was introduced into the cell by means of liposomes) and solutions containing extra and intracellular trehalose without DMSO, stored for two weeks in N2L, and thawed. The thawed cells were assessed by flow cytometry, MTT and colony forming units (CFU) assays. In the first phase of the study our analysis showed catalase improved the preservation CD34+ and CD123+ cells, cell viability and CFU compared to standard cryopreservation solution. In the second phase, after testing of all test we observed that the solution containing intra/extracellular trehalose and DMSO showed superior capacity of maintaining the cell viability/integrity in relation to the others, the solution containing intra-and extracellular trehalose without DMSO, obtained a result that can be compared with its control (2.5% DMSO), and that the solution containing only intracellular trehalose did not generate satisfactory results. The catalase can act on reducing the levels of reactive oxygen species in the solution for cryopreservation of HSC of UCB reducing the damage it caused, trehalose must be present on both sides of the cells during the freezing process. Future clinical trials are needed to confirm that it may be a potential cryoprotectant of stem cells from cord blood, which can totally replace the DMSO in cryopreservation solution, eliminating the side effects from the infusion of cryopreserved products in patients already suffering from the disease base.

A coleta de sangue de cordão umbilical e placentário (SCUP) é uma atividade delegada ao enfermeiro, abrindo um novo campo de atuação para esse profissional que se configura em um novo processo de trabalho e na inserção de mais um procedimento no contexto da assistência obstétrica. O objetivo deste estudo foi compreender a vivência de enfermeiras no exercício da atividade de coleta de amostras de SCUP para armazenamento de células progenitoras hematopoiéticas. Trata-se de um estudo descritivo com abordagem metodológica qualitativa. Os referenciais teórico e metodológico adotados neste estudo foram o Interacionismo Simbólico e a Teoria Fundamentada nos Dados. Participaram do estudo nove enfermeiras que atuam na atividade de coleta de SCUP para bancos de sangue de privados e públicos. Os dados foram obtidos por meio de entrevistas que foram gravadas e transcritas. A experiência da enfermeira que exerce a atividade de coleta de SCUP é compreendida pelas categorias: ACEITANDO A PROPOSTA DE TRABALHO, TENDO ATRIBUIÇÕES A CUMPRIR, PREPARANDO-SE PARA PROCEDER A COLETA DE SCUP, ENCONTRANDO CONDIÇÕES FAVORÁVEIS PARA REALIZAR A COLETA DE SCUP, UTILIZANDO ESTRATÉGIAS PARA GARANTIR A COLETA DE SCUP, ENCONTRANDO CONDIÇÕES DESFAVORÁVEIS PARA REALIZAR A COLETA DE SCUP, PROCEDENDO À COLETA DE SCUP, CONCLUINDO A COLETA DE SCUP e AVALIANDO O TRABALHO REALIZADO. Trabalhar como um profissional tendo de se inserir em um contexto desconhecido com profissionais que atuam em equipe nas diversas maternidades, coloca a enfermeira coletadora frente a situações que exigem rápida adaptação para que realize a coleta de SCUP, atendendo todas as recomendações exigidas para a coleta desse material. Um dos aspectos evidenciados e merecedor de destaque é o fato da enfermeira coletadora deparar-se com dificuldades referentes ao relacionamento com a equipe que presta assistência obstétrica; esta necessita compreender e incorporar em seu processo de trabalho no contexto da assistência ao parto que a enfermeira coletadora de SCUP presta serviço ao BSCUP público ou privado. Apesar das dificuldades relatadas pelas enfermeiras coletadoras no desenvolvimento de sua atividade, percebe-se que elas se encontram motivadas a continuar atuando nesse novo campo, seja pela remuneração, seja pela percepção de estar realizando uma atividade que beneficiará o tratamento de doenças. Vale ressaltar que este estudo poderá ajudar aos profissionais envolvidos no contexto do parto e nascimento a entenderem a atividade de coleta e a compreenderem que a equipe multiprofissional deve atuar em prol de um objetivo comum, além de serem informados a respeito do potencial que as células-tronco vêm mostrando no tratamento de doenças hematológicas / The umbilical cord blood (UCB) collection is an activity delegated to the nurse, opening a new field of action for this professional who is set on a new process of work and the insertion of a further procedure in the context of obstetrical care. The objective of this study was to understand the experience of nurses in the exercise of the activity of collecting samples of UCB for storage hematopoietic progenitor cells. This is a descriptive study with qualitative approach. The benchmarks theoretical and methodological used in this study were the Interacionism Symbolic and Grounded Theory. Were involved in the study nine nurses who serve in the activity of UCB collection for blood banks, on private and public institutions. The data were obtained through interviews that were recorded and transcribed. The experience of the nurse who carries out the activity of UCB collection is understood by the categories: ACCEPTING THE WORK PROPOSAL, HAVING TASKS TO DELIVER, PREPARING TO PROCEDER THE UCB COLLECTION, FACING FAVOURABLE CONDITIONS TO PROCEDURE THE UCB COLLECTION, USING STRATEGIES TO ASSURE THE UCB COLLECTION, FACING UNFAVOURABLE CONDITIONS TO PROCEDURE THE UCB COLLECTION, DOING THE UCB COLLECTION PROCEDURE, FINALIZING THE UCB COLLECTION PROCEDURE and UNALIZING THE WORK CARRIED. Working as a professional who needs to take part into an unknown context with other professionals who works together in various maternity, puts the nurse through situations that require quick adaptation to develop the UCB collection, attending all the recommendations required for the material collection. One of the aspects highlighted and worthy of note is the fact the nurse encounter themselves with difficulties relating to the relationship with the team that provides obstetrical care, which needs to understand and incorporate in the process of work in the context of assistance for delivery that the nurse provides service to coord bank. Despite the difficulties reported by nurses who develop this activity, is known that they are motivated to continue working in this new field, by the remuneration or by the perception of performing an activity that will benefit the treatment of diseases. This study may help the professionals involved in the obstetrical care to understand the activity of UCB collection and that the multiprofessional team should work towards a common goal, besides being informed about the potential that stem cells come showing in the treatment of hematological diseases

Introdução. As células progenitoras hematopoéticas (CPH) têm sido utilizadas no tratamento de algumas doenças malignas hematológicas e de desordens hematopoéticas. Dentre estas células estão as CPHs provenientes de cordão umbilical e placentário (SCUP). Para coleta e armazenamento destas células foram criados os Bancos de Sangue de Cordão Umbilical e Placentário (BSCUP). No Brasil existe a rede BrasilCord e o BSCUP do Hemocentro de Ribeirão Preto é um dos que compõem esta rede. Objetivo. Avaliar a viabilidade financeira de um banco de sangue de cordão umbilical e placentário público comparando os custos de seus procedimentos com os valores ressarcidos definidos pela tabela SUS. Metodologia: Este estudo utilizou a metodologia de Custeio Baseado em Atividades (Activity-Based Costing - ABC), que procura reduzir as distorções provocadas pelo rateio arbitrário dos custos indiretos utilizando direcionadores de custos. Foram avaliados os custos diretos e indiretos da coleta, transporte, processamento, testagem e criopreservação de CPH proveniente de SCUP no primeiro semestre de 2015. Para os custos indiretos foram definidos os direcionadores de custo. Resultados Os resultados mostram que o BSCUP do Hemocentro de Ribeirão Preto foi deficitário no primeiro semestre de 2015. O déficit apurado por unidade foi de R$1.155,69 para o processamento semiautomatizado e R$1.703,78 para o processamento automatizado. O déficit total no período foi de R$ 100.376,50 quando 50 unidades foram processadas utilizando o método semiautomatizado e 25 pelo método automatizado. Conclusão. O valor ressarcido pelo SUS não cobre os gastos do BSCUP do Hemocentro de Ribeirão Preto. Isso pode ser atribuído a várias causas como: sistemática de pagamento pelo SUS apenas pelo produto criopreservado, elevados índices de rejeição das doadoras na maternidade e de descarte das unidades coletadas, embora este último seja menor que o descrito na literatura, e o custo do armazenamento em longo prazo. Os custos do BSCUP são menores que os descritos na literatura e poderiam ser reduzidos com melhorias de processos de gestão e aumento do número de unidades criopreservadas, bem como, por meio de descentralização de coletas para processamento centralizado. / Introduction. Hematopoietic progenitor cells (HPC) are being used in some hematologic malignancies and hematopoietic disorders treatment. Among these cells are the HPCs from umbilical blood cord (UCB). Umbilical cord blood banks were created to collect and store these cells. In Brazil there is a net called Brasilcord and the umbilical cord blood bank (UCBB)of the Hemocentro de Ribeirão Preto belongs to this net. Objective. To evaluate the financial viability of a public umbilical cord blood bank and compare the costs from its procedure with the values reimbursed defined by the SUS table. Methodology.This study used the ActivityBased Costing, which tries to reduce distortions caused by arbitrary apportionment of indirect costs using cost drivers. Direct and indirect costs of collection, transport, processing, testing and cryopreservation of HPCs from umbilical cord blood were evaluated. Cost drivers were defined for indirect costs. Results. The results showed that there was a deficit in the UCBB of the Hemocentro de Ribeirão Preto in the first semester of 2015. The deficit was R$1.155,69 when the unit was processed by the semi-automated method and R$1.703,78 when it was processed by an automated method. The total deficit in the period was R$100.376,50 as 50 units were processed by a semi-automated method and 25 by an automated method. Conclusion. The amount reimbursed by SUS does not cover the UCBB of Hemocentro de Ribeirão Preto expenses. This can be attributed to several causes such as: systematic of reimbursement used by SUS that only cryopreserved units are payed, high percentage of deferral in the maternity and of discard of collected units, although this latter is smaller than that described in the literature and the cost of storage of the units for long periods. The costs of UCBB are lower than that described in the literature and could be reduced with improvements in managing process and increase the number of cryopreserved units as well as decentralization of collections for centralizes processing.

As células-tronco mesenquimais (MSCs) são células estromais não-hematopoiéticas que possuem capacidade de diferenciação, sendo capazes, de diferenciar em diversos tecidos. As MSCs residem em vários tecidos vêm sido isoladas de diferentes tecidos, tais como cartilagem, tendão, tecido adiposo, do vaso e sangue umbilical, além de tecidos fetais . O isolamento e caracterização das populações mesenquimais no modelo ovino se faz importante, visto que ele é usado em ensaios pré-clínicos ortopédicos . Nesse estudo foram utilizados 5 amostras de sangue de cordão umbilical e 5 amostras de tecido adiposo peri-renal, provenientes de 10 ovinos fêmeas adultas. As coletas foram realizadas através de cirurgia para que o material coletado fosse o mais asséptico possível. Essas amostras foram submetidas a diferentes protocolos de isolamento, com a finalidade de se testar o mais eficiente. Somente um protocolo de cada tecido mostrou-se eficiente no isolamento da MSCs, porém nenhuma dessas amostras manteve-se viável após a primeira passagem. / Mesenchymal stem cells (MSCs) are non hematopoietic stromal cells that are able to differentiate through several tissues . MCSs home in several tissues and are being isolated from different tissues, such cartilage, tendon, adipose tissue, vessels and umbilical blood, and also from fetal tissues . The isolation and characterization of mesenchymal cells in sheep are important, because it is used in orthopedic pre-clinical trials . In this study were used 5 samples of umbilical blood and 5 samples of perirenal adipose tissue from 10 female sheep. All the samples were obtained through surgery, to harvest aseptic samples. These samples were tested in different protocols to evaluate the more efficient. Just one protocol from each source showed significant results in isolation, although none of the samples survived trough the first passage.

Qualificar as primeiras unidades de Sangue de Cordão Umbilical e Placentá- rio (SCUP) criopreservadas no Banco de Sangue Umbilical e placentário da Fundação de Hematologia e Hemoterapia de Pernambuco (BSCUP/HEMOPE), no período de dezembro de 2014 a junho de 2017. Justificativa: O sangue do cordão é rico em células progenitoras hematopoéticas (CPH), utilizado para transplante e tratamento de patologias benignas e malignas. Avaliar as primeiras unidades coletadas no BSCUP/ HEMOPE será de grande valia para sua caracterização, planejamento de ações de melhoria do processo, contribuindo para o aumento da eficácia dos transplantes. Métodos: Foram triadas gestantes sem histórico de diagnóstico para doenças transmissíveis pelo sangue, com gestação terminada em recém-nascido (RN) vivo; caracterizadas através das variáveis sociodemográficas: idade, idade gestacional, antecedentes obstétricos e cor da pele dos RN foram caracterizados pelas variáveis explicativas: Gênero e Peso; as amostras das mães foram coletadas no dia do parto ou em até 48h após. O tempo entre o término da coleta e o início da criopreservação da unidade das CPH não excedeu 48 horas. As unidades de SCUP foram avaliadas quanto ao volume, total de células nucleadas (TCN), quantificação de células CD 34+, contagem de eritroblastos viabilidade celular e contaminação microbiológica. Neste estudo foi avaliada a variável \"unidades adequadas ao uso em relação ao peso do receptor, tomando com o base o TCN e o peso de um provável receptor, assim categorizados: unidades <12,5 x10e8 para peso 12,5 para peso >50kg; Resultados: Volume Inicial (ml):(min.50,0; max.166,80); Volume final(mL): (min.19,07;max.21,75); TCN pré (x108): (min.6,0;max.27,80);TCN pós(x108): (min.5,0; max.22,6); Recuperação Celular (%): (min.0,67; max.39,50); CD34+(x106):(min.0,67;max.39,50);Viabilidade(%): (min.71,35max.100); Conclusão: Das 113 unidades armazenadas, 89 (78,76%) atendem a receptores < 50kg (crianças) e 24 (21,24%) atendem a receptores >50k (adultos). O inventário apresentou resultados em conformidades com o especificado na legislação vigente, portanto, qualificadas para atender à demanda transfusional de transplantes de CPH. / To qualify the first units of cryopreserved Umbilical Cord and Placental Blood (SCUP) in the Umbilical and Placental Blood Bank of the Hematology and Hemotherapy Foundation of the State of Pernambuco (BSCUP / HEMOPE), from December 2014 to June 2017 Rationale: Cord blood is rich in hematopoietic progenitor cells (HPC), used for transplantation and treatment of benign and malignant pathologies. Evaluating the first units collected in the BSCUP / HEMOPE will be of great value for its characterization, planning of actions to improve the process, contributing to increase the efficiency of transplants. Methods: Pregnant women with no history of diagnosis for blood-borne diseases were screened, with gestation terminated in live newborn (NB); characterized by the sociodemographic variables: age, gestational age, obstetric history and skin color, NB were characterized by the explanatory variables: Gender and Weight; the samples of the mothers were collected on the day of delivery or within 48 hours after delivery. The time between the end of the collection and the beginning of the cryopreservation of the MHC unit did not exceed 48 hours. SCUP units were evaluated for volume, total nucleated cells (TNC), CD34 + cell count, cell viability erythroblast counts, and microbiological contamination. In this study, the variable \"units suitable for use in relation to the weight of the receptor\" was evaluated, taking as base the TNC and the weight of a probable receiver, as follows: units <12.5 x10e8 for weight 12 , 5 for weight> 50 kg; Results: Initial volume (ml): (min.50.0, max.166.80); Final volume (mL): (min.19.07, max.21.75); TCN pre (x108): (min.6,0; max.27,80); TCN post (x108): (min.5,0; max.22,6); Cellular Recovery (%): (min.0.67, max.39,50); CD34 + (x106): (min.0.67, max.39.50); Viability (%): (min.71,35max.100); : Of the 113 stored units, 89 (78.76%) attend to receptors <50kg (children) and 24 (21.24%) attend receptors> 50k (adults). Conclusion: The inventory presented results in compliance with that specified in current legislation, therefore, qualified to meet the transfusional demand for HPC transplants.

Em estudos anteriores desenvolvidos por este grupo de pesquisa uma expressão mais elevada de alvos transcricionais e componentes da via NF-kB, bem como altos níveis de NOTCH1, foi identificada em células-tronco hematopoéticas (CTH) CD34+ de sangue de cordão umbilical (SCU) quando comparadas às CTH CD34+ de medula óssea (MO). Este grupo verificou ainda, por comparação das células CD34+ com as CD133+ (mais primitivas) que diversos fatores de transcrição (FT) envolvidos com o potencial de hemangioblasto, com a autorenovação das CTH, e com a diferenciação linfóide; como: RUNX1/AML1, GATA3, USF1, TAL1/SCL, HOXA9 e HOXB4 apresentaram-se mais expressos em células mais primitivas. A potencial participação das vias Notch e NF-kB na regulação destes FT tem importância conceitual e prática no entendimento da biologia das CTH, e dos processos envolvidos na diferenciação destas células. Com isto em vista, este projeto teve como objetivo, estudar o papel da via NF-kB e da via Notch na regulação destes FT. Para isso, um modelo experimental in vitro, de diferenciação de CTH CD34+ em linfócitos T, foi utilizado e a influência de fatores agonistas e inibidores farmacológicos destas vias, foram avaliados por citometria de fluxo e PCR em tempo real. Nossos resultados evidenciam o papel da via Notch na regulação transcricional de HOXB4 e GATA3 em células-tronco hematopoéticas CD34+ humanas, o que foi confirmado com base na expressão dos alvos diretos de Notch (HEY1 e HES1). Notamos ainda, que a expressão dos transcritos HES1, GATA3 e HOXB4 é prejudicada pela síntese protéica das CTH, uma vez que quando empregamos o prétratamento com a droga CHX há aumento da transcrição dos mesmos. Também podemos inferir que a ação do TNF- é positiva sobre esses transcritos, já que quando o utilizamos há elevação do nível de expressão desses transcritos, com exceção a HES1. Em relação ao cocultivo das CTH com as células estromais de camundongos, verificamos que apenas a linhagem OP9-DL1 detém a capacidade de promover a diferenciação celular T, e isso foi comprovado pelo surgimento de células comprometidas com a linhagem linfocítica T, através da presença dos marcadores de superfície específico CD7+ e CD1a+. Esses resultados auxiliarão na compreensão dos mecanismos moleculares de regulação transcricional envolvidos não apenas na diferenciação de linfócitos T, mas também na manutenção de um estado mais primitivo das CTH. Este conhecimento pode vir a contribuir com o desenvolvimento ou otimização de protocolos laboratoriais visando à expansão de CTH ou geração de células T para usos terapêuticos. / In previous studies by this research group a higher expression of transcriptional targets and components via NF-kB, as well as high levels of NOTCH1, was identified in hematopoietic stem cells (HSC) CD34 + cells from umbilical cord blood (UCB) compared to CD34 + hematopoietic stem cells from bone marrow (BM). This group also found, by comparing the CD34 + cells with CD133 + (more primitive) that several transcription factors (TF) involved in the potential of hemangioblast, with self-renewal of hematopoietic stem cells and to differentiated lymphocytic; as Runx1 / AML1, GATA3, USF1, TAL1/SCL, HOXB4 and HOXA9 were more expressed in more primitive cells. The potential involvement of Notch signaling pathways and NF-kB in the regulation of FT has conceptual and practical importance in understanding the biology of HSC, and the processes involved in differentiation of these cells. With this in mind, this project aimed to study the role of NF-kB pathway and Notch signaling in the regulation of FT. For this, an experimental model in vitro differentiation of CD34 + hematopoietic stem cells into T lymphocytes, was used and the influence of pharmacological agonists and inhibitors of these pathways were evaluated by flow cytometry and real-time PCR. Our results highlight the role of Notch signaling in the transcriptional regulation of GATA3 and HOXB4 in hematopoietic stem cells CD34 + human, which was confirmed based on the expression of direct targets of Notch (HES1 and HEY1). We also note that the expression of transcripts HES1, GATA3 and HOXB4 protein synthesis is hampered by the HSC, since when we use the pre-treatment with the drug there CHX increased transcription thereof. We can also infer that the action of TNF- is positive about these transcripts, since when we use it for raising the level of expression of these transcripts, except the HES1. In relation to the HSC coculture with stromal cells of mice, we found that only the line-DL1 Op9 has the ability to promote T cell differentiation, and this was evidenced by the appearance of cells committed to the T lymphocyte lineage, through the presence of specific surface markers CD7 + and CD1a +. These results will help understand the molecular mechanisms of transcriptional regulation involved not only in the differentiation of T lymphocytes, but also in maintaining a more primitive state of HSC. This knowledge may contribute to the development or optimization of laboratory protocols aimed at the expansion of HSC or generation of T cells for therapeutic use.

Made available in DSpace on 2016-01-26T12:51:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 heloisacaldas_tese.pdf: 13961449 bytes, checksum: adc041656d053c466bd2f0851119388c (MD5) Previous issue date: 2011-07-26 / Chronic renal failure (CRF) is characterized by progressive and irreversible loss of renal function and its treatment generates significant public spending for maintenance and care of patients on dialysis. Stem cell (SC) therapy, in its potential for treatment of chronic diseases, may be a promising strategy for repairing the damage from or slowing the progression of CRF. There are questions about cell type, quantity of cells, method and ideal place for deployment of SC and the role it plays in the repair of renal parenchyma. Objective: 1) To evaluate the effect of infusion of bone marrow derived cells (BMDC) in the treatment of experimental CRF; 2) Evaluate the combined effect of SC and biomaterial (BM) in the progression of CRF and study the effect of this therapy in different stages of CRF; 3) Evaluate the development of techniques for isolation and cultivation of human umbilical cord blood (HUCB) mesenchymal cells. Methods: Article 1: We used the 5/6 mass reduction model to induce experimental CRF. Kidney function was measured at the beginning of the experiment and 60 and 120 days after the surgery; Article 2: Animals were subdivided as to the amount of renal parenchyma injured (5/6 or 2/3), the use of BM as a scaffold to cell implantation, and cell type used (mononuclear or mesenchymal cells). Renal function was evaluated on days 0, 45, and 90 after surgery. Histological and immunohistochemical analyses were done in all groups at the end of the study; Article 3: Ten samples of HUCB were used and two different procedures for cultivation of mesenchymal stem cells (MSC) were tested: without Ficoll-Paque density gradient, to obtain nucleated cells; with Ficoll-Paque density gradient, for obtaining mononuclear cells. Results: Article 1: CRF progression analysis showed that treatment with BMDC significantly reduced the rate of decline of creatinine clearance (Clcr) when compared with the control group; Article 2:Treated animals showed significantly lower increases in serum creatinine and 24 hour proteinuria, and higher increases in Clcr after 90 days when compared to control animals in both models of CRF; Article 3: The MSC in culture from the method without Ficoll-Paque density gradient maintained growth forming confluent cell foci. Conclusions: Article 1: Progression of CRF can be delayed by injection of BMDC in the renal parenchyma; Article 2: a) Use of SC combined with BM can be an alternative way to administer BMDC; b) Cell therapy seems to be most effective when administered in less severe stages of CRF; Article 3: Nucleated cells without using Ficoll-Paque density gradient showed more efficiency in the cultivation of MSC from HUCB when compared with the procedure employing Ficoll-Paque density gradient / A insuficiência renal crônica (IRC) é caracterizada pela perda progressiva e irreversível da função renal e seu tratamento gera um gasto público significativo para manutenção de pacientes em tratamento dialítico. A terapia com células-tronco (CT), pelo seu potencial de tratamento das doenças crônicas, pode ser uma estratégia promissora para reparar ou retardar a progressão da IRC. Existem dúvidas sobre o tipo celular, a quantidade de células, o método e local ideal para implantação das CT e o papel por elas desempenhado na reparação do parênquima renal. Objetivos: 1) avaliar o efeito da infusão de células derivadas da medula óssea (CDMO) no tratamento da IRC experimental; 2) avaliar o efeito combinado das CT e biomaterial (BM) na progressão da IRC e estudar o efeito dessa terapia em diferentes estágios da IRC; 3) Avaliar o desenvolvimento de técnicas de isolamento e cultivo de células mesenquimais do sangue de cordão umbilical humano (SCU). Métodos: artigo 1: usamos o modelo de redução de massa 5/6 para induzir a IRC experimental. Função renal foi medida no início do experimento e 60 e 120 dias depois da cirurgia; artigo 2: animais foram subdivididos conforme a quantidade de parênquima renal lesado (5/6 ou 2/3), o uso de BM como arcabouço para o implante celular e o tipo de células utilizado (célula mononuclear ou mesenquimal). A função renal foi avaliada nos dias 0, 45 e 90 após cirurgia. Análise histológica e imunohistoquimica foram realizadas em todos os grupos ao final do estudo; artigo 3: Foram utilizadas dez amostras de SCU e testados dois diferentes procedimentos para cultivo de células-tronco mesenquimal (CTM): sem gradiente de densidade Ficoll-Paque, para obtenção de células nucleadas; por gradiente de densidade Ficoll-Paque, para obtenção de células mononucleares. Resultados: artigo 1: Análises da progressão da IRC mostraram que o tratamento com CDMO reduziu significativamente a taxa de declínio do clearance ( Clcr) quando comparados com o grupo controle; artigo 2: animais tratados apresentaram aumentos significativamente menores de creatinina sérica, proteinúria e Clcr maiores após 90 dias, quando comparado aos animais controles em ambos os modelos de IRC; artigo 3: as CTM em cultura provenientes do método sem gradiente de densidade Ficoll- Paque mantiveram o crescimento formando focos confluentes de células. Conclusões: artigo 1: a progressão da IRC pode ser retardada pela injeção de CDMO no parênquima renal; artigo 2: a) utilização da CT combinada com o BM pode ser uma via alternativa para administrar a CTMO; b) terapia celular parece ser mais eficaz quando administrada em estágios menos graves da IRC; artigo 3: As células nucleadas sem uso do gradiente de densidade Ficoll-Paque mostraram mais eficiente para o cultivo de CTM do SCU quando comparado ao procedimento com gradiente de densidade Ficoll-Paque.

Em estudos anteriores desenvolvidos por este grupo de pesquisa uma expressão mais elevada de alvos transcricionais e componentes da via NF-kB, bem como altos níveis de NOTCH1, foi identificada em células-tronco hematopoéticas (CTH) CD34+ de sangue de cordão umbilical (SCU) quando comparadas às CTH CD34+ de medula óssea (MO). Este grupo verificou ainda, por comparação das células CD34+ com as CD133+ (mais primitivas) que diversos fatores de transcrição (FT) envolvidos com o potencial de hemangioblasto, com a autorenovação das CTH, e com a diferenciação linfóide; como: RUNX1/AML1, GATA3, USF1, TAL1/SCL, HOXA9 e HOXB4 apresentaram-se mais expressos em células mais primitivas. A potencial participação das vias Notch e NF-kB na regulação destes FT tem importância conceitual e prática no entendimento da biologia das CTH, e dos processos envolvidos na diferenciação destas células. Com isto em vista, este projeto teve como objetivo, estudar o papel da via NF-kB e da via Notch na regulação destes FT. Para isso, um modelo experimental in vitro, de diferenciação de CTH CD34+ em linfócitos T, foi utilizado e a influência de fatores agonistas e inibidores farmacológicos destas vias, foram avaliados por citometria de fluxo e PCR em tempo real. Nossos resultados evidenciam o papel da via Notch na regulação transcricional de HOXB4 e GATA3 em células-tronco hematopoéticas CD34+ humanas, o que foi confirmado com base na expressão dos alvos diretos de Notch (HEY1 e HES1). Notamos ainda, que a expressão dos transcritos HES1, GATA3 e HOXB4 é prejudicada pela síntese protéica das CTH, uma vez que quando empregamos o prétratamento com a droga CHX há aumento da transcrição dos mesmos. Também podemos inferir que a ação do TNF- é positiva sobre esses transcritos, já que quando o utilizamos há elevação do nível de expressão desses transcritos, com exceção a HES1. Em relação ao cocultivo das CTH com as células estromais de camundongos, verificamos que apenas a linhagem OP9-DL1 detém a capacidade de promover a diferenciação celular T, e isso foi comprovado pelo surgimento de células comprometidas com a linhagem linfocítica T, através da presença dos marcadores de superfície específico CD7+ e CD1a+. Esses resultados auxiliarão na compreensão dos mecanismos moleculares de regulação transcricional envolvidos não apenas na diferenciação de linfócitos T, mas também na manutenção de um estado mais primitivo das CTH. Este conhecimento pode vir a contribuir com o desenvolvimento ou otimização de protocolos laboratoriais visando à expansão de CTH ou geração de células T para usos terapêuticos. / In previous studies by this research group a higher expression of transcriptional targets and components via NF-kB, as well as high levels of NOTCH1, was identified in hematopoietic stem cells (HSC) CD34 + cells from umbilical cord blood (UCB) compared to CD34 + hematopoietic stem cells from bone marrow (BM). This group also found, by comparing the CD34 + cells with CD133 + (more primitive) that several transcription factors (TF) involved in the potential of hemangioblast, with self-renewal of hematopoietic stem cells and to differentiated lymphocytic; as Runx1 / AML1, GATA3, USF1, TAL1/SCL, HOXB4 and HOXA9 were more expressed in more primitive cells. The potential involvement of Notch signaling pathways and NF-kB in the regulation of FT has conceptual and practical importance in understanding the biology of HSC, and the processes involved in differentiation of these cells. With this in mind, this project aimed to study the role of NF-kB pathway and Notch signaling in the regulation of FT. For this, an experimental model in vitro differentiation of CD34 + hematopoietic stem cells into T lymphocytes, was used and the influence of pharmacological agonists and inhibitors of these pathways were evaluated by flow cytometry and real-time PCR. Our results highlight the role of Notch signaling in the transcriptional regulation of GATA3 and HOXB4 in hematopoietic stem cells CD34 + human, which was confirmed based on the expression of direct targets of Notch (HES1 and HEY1). We also note that the expression of transcripts HES1, GATA3 and HOXB4 protein synthesis is hampered by the HSC, since when we use the pre-treatment with the drug there CHX increased transcription thereof. We can also infer that the action of TNF- is positive about these transcripts, since when we use it for raising the level of expression of these transcripts, except the HES1. In relation to the HSC coculture with stromal cells of mice, we found that only the line-DL1 Op9 has the ability to promote T cell differentiation, and this was evidenced by the appearance of cells committed to the T lymphocyte lineage, through the presence of specific surface markers CD7 + and CD1a +. These results will help understand the molecular mechanisms of transcriptional regulation involved not only in the differentiation of T lymphocytes, but also in maintaining a more primitive state of HSC. This knowledge may contribute to the development or optimization of laboratory protocols aimed at the expansion of HSC or generation of T cells for therapeutic use.