A Doença de Marek é uma enfermidade linfoproliferativa das aves, causada por um alfaherpesvírus e caracterizada pela infiltração de células em nervos periféricos, gônadas, íris, vísceras, músculos e pele. Desde 1970, vacinas atenuadas têm sido utilizadas como ferramenta principal no controle da doença. Esse trabalho descreve a implantação da Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real (qPCR) para a titulação de vacinas contra o vírus da doença de Marek do sorotipo 3, herpesvírus dos perus (HVT). A qPCR foi comparada com a técnica tradicional de titulação, baseada no cultivo celular de fibroblastos de embrião de galinha. Foram avaliadas três vacinas vivas (congeladas, cepa FC126) provenientes de distintos fabricantes. A técnica molecular apresentou alta correlação entre os valores de threshold cycle (CT) e respectivas diluições das vacinas (R2 = 0,99), indicando que, dentro desta faixa linear testada (102 a 104 PFU/dose), a qPCR foi capaz de quantificar as vacinas disponíveis no mercado. A reprodutibilidade da titulação em cultivo celular e qPCR foi avaliada pela realização dos testes em três dias distintos a partir de ampolas de um mesmo lote da vacina. Os títulos obtidos por ambos os métodos demonstraram alta reprodutibilidade e coerência com o fornecido pelo fabricante. Caracterizou-se também a proporção de vírus livres e associados às células, onde foi observado que, pelo menos, 90% dos vírus encontravamse na forma associada. Este trabalho indicou que a qPCR é reprodutível, rápida e menos trabalhosa do que a titulação em cultivo celular tradicionalmente utilizada.

A Doença de Marek é uma enfermidade linfoproliferativa das aves, causada por um alfaherpesvírus e caracterizada pela infiltração de células em nervos periféricos, gônadas, íris, vísceras, músculos e pele. Desde 1970, vacinas atenuadas têm sido utilizadas como ferramenta principal no controle da doença. Esse trabalho descreve a implantação da Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real (qPCR) para a titulação de vacinas contra o vírus da doença de Marek do sorotipo 3, herpesvírus dos perus (HVT). A qPCR foi comparada com a técnica tradicional de titulação, baseada no cultivo celular de fibroblastos de embrião de galinha. Foram avaliadas três vacinas vivas (congeladas, cepa FC126) provenientes de distintos fabricantes. A técnica molecular apresentou alta correlação entre os valores de threshold cycle (CT) e respectivas diluições das vacinas (R2 = 0,99), indicando que, dentro desta faixa linear testada (102 a 104 PFU/dose), a qPCR foi capaz de quantificar as vacinas disponíveis no mercado. A reprodutibilidade da titulação em cultivo celular e qPCR foi avaliada pela realização dos testes em três dias distintos a partir de ampolas de um mesmo lote da vacina. Os títulos obtidos por ambos os métodos demonstraram alta reprodutibilidade e coerência com o fornecido pelo fabricante. Caracterizou-se também a proporção de vírus livres e associados às células, onde foi observado que, pelo menos, 90% dos vírus encontravamse na forma associada. Este trabalho indicou que a qPCR é reprodutível, rápida e menos trabalhosa do que a titulação em cultivo celular tradicionalmente utilizada.

A Doença de Marek é uma enfermidade linfoproliferativa das aves, causada por um alfaherpesvírus e caracterizada pela infiltração de células em nervos periféricos, gônadas, íris, vísceras, músculos e pele. Desde 1970, vacinas atenuadas têm sido utilizadas como ferramenta principal no controle da doença. Esse trabalho descreve a implantação da Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real (qPCR) para a titulação de vacinas contra o vírus da doença de Marek do sorotipo 3, herpesvírus dos perus (HVT). A qPCR foi comparada com a técnica tradicional de titulação, baseada no cultivo celular de fibroblastos de embrião de galinha. Foram avaliadas três vacinas vivas (congeladas, cepa FC126) provenientes de distintos fabricantes. A técnica molecular apresentou alta correlação entre os valores de threshold cycle (CT) e respectivas diluições das vacinas (R2 = 0,99), indicando que, dentro desta faixa linear testada (102 a 104 PFU/dose), a qPCR foi capaz de quantificar as vacinas disponíveis no mercado. A reprodutibilidade da titulação em cultivo celular e qPCR foi avaliada pela realização dos testes em três dias distintos a partir de ampolas de um mesmo lote da vacina. Os títulos obtidos por ambos os métodos demonstraram alta reprodutibilidade e coerência com o fornecido pelo fabricante. Caracterizou-se também a proporção de vírus livres e associados às células, onde foi observado que, pelo menos, 90% dos vírus encontravamse na forma associada. Este trabalho indicou que a qPCR é reprodutível, rápida e menos trabalhosa do que a titulação em cultivo celular tradicionalmente utilizada.

Made available in DSpace on 2018-08-01T22:56:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_7905_Braulio Pêgo.pdf: 6430012 bytes, checksum: b61de833d6619e6f99752ca25e710f7b (MD5) Previous issue date: 2016-02-23 / Para a determinação do perfil hematológico serão feitas coletas de sangue para determinar a concentração de hemoglobina, valor do hematócrito e contagem diferencial de leucócitos. Para a coleta de sangue, os peixes serão anestesiados com uma solução contendo 65 ppm de eugenol. A coleta de sangue será feita através de pulsão da veia caudal, retirando um volume mínimo de 0,4 ml de sangue por peixe. Para avaliação dos parâmetros hematológicos o hematócrito será determinado segundo o método de Goldenfarb et al. (1971) e a taxa de hemoglobina de acordo com as recomendações de Collier (1944). Em posse desses resultados será calculada a concentração de hemoglobina corpuscular média (CHCM) Segundo Wintrobe (1934). Para a contagem diferencial de células sanguíneas de defesa orgânica, serão preparadas extensões coradas pelo método de Rosenfeld (1947) adaptado. Será acrescida maior quantidade de maygruwald e Giemsa além de mais uma substancia corante (1,0g de May-Grunwald; 1,0g de Giensa; 0,5 de Wrigth; em 1000mL de metanol). Com essa modificação será necessário também modificar o procedimento de coloração (Corar as extensões sanguíneas por 1 minuto). Serão contadas cem células em cada extensão para estabelecer o percentual de cada componente celular.

O presente trabalho foi conduzido na ESALQ/USP com os objetivos de se avaliar as qualidades fisiológicas e a sanidade de sementes de girassol (Helianthus annus L.) e, ao mesmo tempo, verificar a eficiência dos diversos testes utilizados, bem como, a correlação entre eles. Os ensaios foram realizados periodicamente sobre 4 (quatro) cultivares cujas sementes (aquênios) classificou-se em 2 (dois) tamanhos (pequenas e grandes). Os testes de germinação (TPG), primeira contagem do TPG, frio, envelhecimento precoce, precocidade de emissão de raiz primária (PER), condutividade elétrica, tetrazólio, emergência de plântulas em campo e sanidade foram aplicados sobre os materiais acima citados. Durante 3 (três) épocas distintas obteve-se dados que, analisados estatisticamente, sofreram interpretação e discussão em relação à literatura. Finalmente conclui-se que: a) os cultivares G3 e G1 foram fisiologicamente superiores aos outros dois; b) foi encontrado Sclerotinia sp. Nas sementes do G3; c) dos métodos empregados o TPG, primeira contagem do TPG e emergência em campo produziram os resultados mais constantes nas três épocas / not available

O presente trabalho foi conduzido na ESALQ/USP com os objetivos de se avaliar as qualidades fisiológicas e a sanidade de sementes de girassol (Helianthus annus L.) e, ao mesmo tempo, verificar a eficiência dos diversos testes utilizados, bem como, a correlação entre eles. Os ensaios foram realizados periodicamente sobre 4 (quatro) cultivares cujas sementes (aquênios) classificou-se em 2 (dois) tamanhos (pequenas e grandes). Os testes de germinação (TPG), primeira contagem do TPG, frio, envelhecimento precoce, precocidade de emissão de raiz primária (PER), condutividade elétrica, tetrazólio, emergência de plântulas em campo e sanidade foram aplicados sobre os materiais acima citados. Durante 3 (três) épocas distintas obteve-se dados que, analisados estatisticamente, sofreram interpretação e discussão em relação à literatura. Finalmente conclui-se que: a) os cultivares G3 e G1 foram fisiologicamente superiores aos outros dois; b) foi encontrado Sclerotinia sp. Nas sementes do G3; c) dos métodos empregados o TPG, primeira contagem do TPG e emergência em campo produziram os resultados mais constantes nas três épocas / not available

Orientador: Fabiana Pilarski / Resumo: Dentre os peixes nativos com potencial para a piscicultura, destaca-se o Astyanax lacustris, espécie de pequeno porte, pelágica, com hábito alimentar onívoro e amplamente distribuída nas bacias hidrográficas neotropicais. Esta espécie é comum na região sudeste do Brasil e têm se destacado pelo potencial para a produção comercial. Todavia, a intensificação da produção tem acarretado problemas de saúde, principalmente causados por parasitos, em que relatos sobre o status sanitário da espécie são escassos. Assim, este estudo teve como objetivo identificar os principais parasitos que afetam o A. lacustris e determinar os índices ecológicos do parasitismo. O estudo foi desenvolvido no Laboratório de Microbiologia e Parasitologia de Organismos Aquáticos, do Centro de Aquicultura da UNESP (LAPOA) em parceria com pisciculturas comerciais de lambari, localizadas no município de Buritizal/SP e Jaboticabal/SP. Para tanto, 270 peixes foram submetidos ao exame parasitológico através de raspado da pele e brânquias, análise de órgãos internos, como fígado, rim, cérebro e trato gastrointestinal, sendo este material observado em microscópio. Foi verificada a ocorrência de protozoário ciliado (tricodinídeos), protozoário mastigóforo (Piscinoodinium pillulare), nematódeos cistos de mixosporídeos e monogenéticos. A maior prevalência foi de tricodinídeos, sendo a espécie Tricodina heterodentata primeiramente relatada no lambari como ectoparasito e os mixosporídeos (Henneguya sp.) como endoparasit... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Among the native fish with potential for aquaculture, Astyanax lacustris stands out, a small, pelagic species with an omnivorous dietary and widely distributed in neotropical watersheds. This species is common in the southeastern region of Brazil and has stood out for its potencial for commercial production has caused health problems, mainly caused by parasites in which reports about the health status os the species are scarce. Thus, this study aims to identify the main parasites affecting A. lacustris and to determine the ecological indices of parasitism. The study was developed at the Laboratory of Microbiology and Parasitology of Aquatic Organisms of the UNESP Aquaculture Center (LAPOA) in partnership with commercial lambari fish farms, located in Buritizal/SP and Jaboticabal/SP. For this purpose, 270 fish were submitted to parasitological examination through skin scraping and gills, analysis of internal organs, such as liver, kidney, brain and gastrointestinal tract, this material being observed under a microscope. The ocurrence of ciliated protozoan (trichodina), mastigophore protozoan (Piscinoodinium pillulare), nematodes, myxozoa cysts and monogenetic were found. The highest prevalence was observed by parasitism of trichodinids as ectoparasites, being Trichodina heterodentata as the first species related to A. lacustris and myxozoa (Henneguya sp.) as endoparasites. The results of water analyzes, especially the high phosphorus level, may indicate the need for intervetio... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Este trabalho foi realizado com o objetivo de verificar o efeito do deslintamento através da flambagem, quando comparado ao mecânico, sobre a qualidade fisiológica e sanitária de sementes de algodão, logo após o deslintamento e durante o armazenamento por 18 meses. Foram avaliadas a umidade, a germinação, o vigor <<parênteses>>emergência em areia e envelhecimento acelerado<<parênteses>> e a sanidade das sementes de algodão submetidas aos deslintamentos por flambagem e mecânico. Para avaliação da umidade utilizou-se o método da estufa a 105°C por 24 horas. Para a avaliação da germinação foram seguidas as Regras para análise de sementes (BRASIL, 1980) e a emergência em areia foi efetuada plantando-se as sementes em bandejas plásticas e contando-se as plântulas normais após 15 dias. O outro teste de vigor (envelhecimento acelerado) foi avaliado por intermédio do teste de envelhecimento acelerado, que se processou com a colocação das sementes em câmara a 42°C por 96 horas. A avaliação da sanidade foi realizada com a utilização do método do papel filtro, com a incubação das sementes por 7 dias a 20°C. Os resultados mostraram que as sementes flambadas mantiveram teores de umidade constantemente inferiores aos das sementes deslintadas mecanicamente, durante os 18 meses de armazenamento. Como aparente consequência, a germinação e a emergência em areia das sementes flambadas foram nitidamente superiores às das sementes unicamente deslintadas mecanicamente, durante o período de estocagem, acentuando a diferenciação com o passar do tempo. Quanto ao vigor, estimado pelo envelhecimento acelerado, considerando todo o período do experimento, os dados mostraram que, embora as sementes flambadas tenham apresentado índices superiores aos das deslintadas mecanicamente, a diferença não foi tão expressiva quanto para a germinação. Considerou-se que o período de manutenção das sementes na câmara tenha sido prolongado. Com relação à sanidade, muitos fungos saprófitas ocorreram, mas só foram considerados os fungos com atividade patogênica: Colletotrichum gossypii, Fusarium spp. e Botryodiplodia sp. e os fungos de armazenamento, Aspergillus spp. e Penicillium spp. Não houve diferença quanto à incidência de C. gossypii e Botryodiplodia sp. entre as sementes flambadas e as deslintadas mecanicamente. Para Fusarium,/i> spp. não houve diferença logo após o deslintamento, mas o decréscimo na viabilidade do fungo durante o armazenamento foi mais acentuado nas sementes flambadas. Aspergillus spp. e Penicillium spp. ocorreram em maiores níveis em sementes deslintadas mecanicamente, possivelmente devido ao maior teor de umidade que as mesmas possuíam durante todo o período de estocagem. Os fungos de campo perderam a viabilidade durante o armazenamento, com decréscimo mais rápido para C. gossypii e mais lento para Fusarium spp. Os fungos de armazenamento apresentaram aumento na incidência com o transcorrer do período de estocagem. Não houve correlação entre germinação e emergência em areia, possivelmente devido à interferência do fungo Rhizopus sp. que foi observado, mas não quantificado, prejudicando a germinação das sementes. Destaca-se que o referido fungo encontra condições ideais para se desenvolver no ambiente em que é conduzido o teste de germinação. / not available

Para avaliar a diversidade de Salmonella enterica, foram analisados os sorovares presentes em amostras de Salmonela isoladas de aves e seu ambiente do Sul do Brasil (n=155), Colômbia (n=141) e Mississippi (EUA, n=50). No total, foram examinados 346 isolados de Salmonela pela técnica de ribotipificação de sequências Intergênicas (ISR) usando PCR convencional (para bactérias vivas isoladas no Estado de Mississippi) ou nested PCR (para o DNA de Salmonelas do Brasil e da Colômbia, em cartões FTA). O sequenciamento da região intergênica do gene dkgB avalia polimorfismos de nucleotídeos simples que ocorrem em torno do gene ribossomal 5S. A concordância geral entre o esquema Kauffman-White-LeMinor (KWL) e a ISR foi de 85,2% em isolados do Brasil, e de 89,58% em isolados do Mississippi. É possível que a divergência seja devida à capacidade da ISR de detectar as misturas de sorovares numa cultura. Os sorovares de Salmonella enterica identificados nos isolados brasileiros foram: Heidelberg, Enteritidis, Hadar, Typhimurium, Gallinarum, Agona, Cerro, Livingstone, Infantis, Isangi, Mbandaka, Montevideo e Senftenberg. Três sorovares ISR únicos foram detectados (UN0041, UN0042, UN0043). Nos isolados colombianos, foram identificados os sorovares Enteritidis, Gallinarum, Isangi, Heidelberg, Paratyphi B var. Java, Tennessee, Saintpaul, Agona, Isangi, Mbandaka, Urbana, Albany, Javiana, Fresno, Miami, Muenster, Rissen, Braenderup, Yoruba e um sorovar ISR Único (UN0048). Já no tocante aos isolados de Mississippi, foram identificados os sorovares Enteritidis, Typhimurium, Kentucky, Bredeney, Mbandaka, Saintpaul, Montevideo, Cubana, Lille, Senftenberg, Johannesburg e um ISR Único (UN0094). Em geral, a ISR forneceu mais informações do que KWL sobre a ecologia de Salmonella enterica das aves comerciais. Em 73 isolados da Colômbia e 50 isolados de Mississippi, foram estabelecidas as resistências para 15 e 17 agentes antimicrobianos, respectivamente. Não foram identificados isolados pansusceptíveis. Todas as amostras analisadas foram classificadas como multirresistentes. Os resultados deste estudo mostram uma grande diversidade entre os isolados analisados, não só com respeito aos sorovares identificados em cada país, mas também sobre a sua resistência aos antimicrobianos. Os resultados desta pesquisa irão beneficiar a indústria avícola do sul do Brasil, da Colômbia e de Mississippi, porque a caracterização de cepas isoladas de aves comerciais poderá ser usada no futuro para o desenvolvimento e adaptação de programas de controle. / To assess diversity of Salmonella enterica serotypes present in poultry and their environment from Southern Brazil (n=155), Colombia (n=141) and Mississippi (EUA, n=50); 346 isolates were examined with conventional PCR (live bacteria from Mississippi) or nested PCR (Brazilian and Colombian Salmonella DNA in FTA cards) and sequencing of the dkgB-linked intergenic sequence ribotyping (ISR) region that assesses single nucleotide polymorphisms occurring around a 5S ribosomal gene. Overall agreement between Kauffman-White-LeMinor (KWL) scheme and ISR was 85.2% in Brazilian Salmonella isolates, and 89.58% in Mississippi´s isolates. It is possible that the disagreement was due to the ability of ISR to detect mixtures of serotypes in culture. Salmonella enterica serotypes identified among Brazilian isolates were Heidelberg, Enteritidis, Hadar, Typhimurium, Gallinarum, Agona, Cerro, Livingstone, Infantis, Isangi, Mbandaka, Montevideo, and Senftenberg. Three unique ISRs were detected (UN0041, UN0042, UN0043). Regarding the Colombian isolates, serotypes Enteritidis, Gallinarum, Isangi, Heidelberg, Paratyphi B var. Java, Tennessee, Saintpaul, Agona, Isangi, Mbandaka, Urbana, Albany, Javiana, Fresno, Miami, Muenster, Rissen Braenderup, Yoruba, and One Unique ISR (UN0048) were identified and among Mississippian isolates, serotypes Enteritidis, Typhimurium, Kentucky, Bredeney, Mbandaka, Saintpaul, Montevideo, Cubana, Lille, Senftenberg, Johannesburg, and one Unique ISR (UN0094). Overall, ISR provided more information than KWL about the ecology of on-farm Salmonella enterica. In 73 isolates from Colombia and 50 isolates from Mississippi, there were established the antimicrobial resistance against 15 and 17 antimicrobial agents, respectively. No pansusceptible isolate was identified. All analyzed isolates were classified as Multidrug resistant. The results of this study show a great diversity among analyzed isolates, not only in respect to the serotypes, but also about their antimicrobial resistance. The results of this research will benefit the poultry industries of Southern Brazil, Colombia and Mississippi, because the characterization of strains isolated from poultry can be used in the future to the development and adaptation of Salmonella control programs.

O novo cenário econômico, desenhado pela abertura econômica e de mercados, desencadeou uma série de desafios para o setor lácteo brasileiro, resultando na necessidade de alguns ajustamentos, buscando amenizar problemas, tanto de natureza estrutural como tecnológica. Este trabalho se propõe a estudar a forma de organização, o padrão tecnológico e alguns indicadores sociais de unidades produtivas familiares de leite no Rio Grande do Sul, através de diferentes Tipologias, a fim de proporcionar subsídios para o desenvolvimento de políticas para o setor, partindo do pressuposto da existência de características peculiares em cada sistema de produção, objetivando promover um desenvolvimento social e econômico mais harmônico. A utilização de diferentes Tipologias ideais quais sejam, produtor Moderno Convencional, em Transição e Tradicional, no estudo de produtores familiares de leite, possibilitou a análise de unidades produtivas, mesmo considerando sua diferenciação frente às estratificações Tradicionalmente empregadas.