A esquistossomose é uma das doenças parasitárias mais antigas que existem. Acredita-se que a doença chegou ao Brasil com o tráfico de escravos, e encontrou condições favoráveis ao seu estabelecimento. Entre as principais áreas de transmissão no Estado de São Paulo está incluída a região do Vale do Ribeira. O Vale do Ribeira caracteriza-se por sua hidrografia rica em pequenas coleções hídricas tais como valas de irrigação. Sua história de transmissão para a doença tem inicio em 1953 quando foi descrito o foco de Ana Dias, no município de Itariri. Nesse local o molusco hospedeiro intermediário é a espécie Biomphalaria tenagophila. Essa área é historicamente endêmica permanecendo um foco importante de esquistossomose no Estado de São Paulo justificando a necessidade de novos estudos desse ambiente. O objetivo deste estudo foi fazer um levantamento da malacofauna límnica em valas de irrigação consideradas focos e criadouros na região de Ana Dias, verificando quais espécies de moluscos ocorrem associadas a Biomphalaria tenagophila, além de aspectos climáticos, físico-químicos e ambientais, relacionando essas variáveis. O estudo de campo foi realizado com coletas mensais de água e moluscos, durante um ano. O material coletado foi identificado e analisado em laboratório juntamente com as variáveis ambientais e climáticas do local. Os resultados receberam tratamento estatístico e foram relacionados entre si. Através deste estudo foi possível concluir que as valas são excelentes criadouros de moluscos. A malacofauna local é composta pelas espécies B. tenagophila, M. tuberculatus, P. sordida, P. marmorata, L. columella, D. depressissimum, D. anatinun, D. lucidum, G. ticaga e Pisidum sp. A B. tenagophila foi a espécie dominante e apresentou competição com M. tuberculatus. As variáveis abióticas exercem influencia sobre a riqueza e abundância da malacofauna, principalmente aquelas relacionadas a pluviosidade. / Schistosomiasis is one of the oldest parasitic diseases that exist. It is believed that the disease arrived in Brazil with the slave trade, and found favorable conditions to its spreading out. The Vale do Ribeira region is among the main transmission areas in the State of Sao Paulo. The valley is characterized by a hydrographic layout rich in small water veins such as irrigation ditches. Its disease transmission history dates back to 1953 when the Ana Dias focus, in the Itariri district, was described. There the intermediate host mollusc is the Biomphalaria tenagophila specie. This area is historically endemic remaining as an important schistosomiasis focus in the State of Sao Paulo, which justifies the necessity of new studies on its environment. The objective of this study was to carry out a malacofauna survey in irrigation ditches considered focus and breeding habitats in the region of Ana Dias, verifying which snail species occur associated to Biomphalaria tenagophila, as well as climatic, physical-chemical and environmental aspects and their correlations. The field study was carried through monthly water and snail sample collections during one year. The collected material was identified and analyzed in laboratory together with the site’s environmental and climatic variables. The results received statistical treatment and compared among themselves. Through this study was possible to conclude that the ditches are excellent breeding habitats for snails. The local Malacofauna is composed by the B. tenagophila, M. tuberculatus, P. sordida, P. marmorata, L. columella, D. depressissimum, D. anatinun, D. lucidum, G. ticaga and Pisidum sp species. The B. tenagophila specie was the dominant one competing with the M. tuberculatus one. The abiotic variables have influence on the malacofauna wealth and abundance, specially on those related to rainfall level.

A esquistossomose é uma das doenças parasitárias mais antigas que existem. Acredita-se que a doença chegou ao Brasil com o tráfico de escravos, e encontrou condições favoráveis ao seu estabelecimento. Entre as principais áreas de transmissão no Estado de São Paulo está incluída a região do Vale do Ribeira. O Vale do Ribeira caracteriza-se por sua hidrografia rica em pequenas coleções hídricas tais como valas de irrigação. Sua história de transmissão para a doença tem inicio em 1953 quando foi descrito o foco de Ana Dias, no município de Itariri. Nesse local o molusco hospedeiro intermediário é a espécie Biomphalaria tenagophila. Essa área é historicamente endêmica permanecendo um foco importante de esquistossomose no Estado de São Paulo justificando a necessidade de novos estudos desse ambiente. O objetivo deste estudo foi fazer um levantamento da malacofauna límnica em valas de irrigação consideradas focos e criadouros na região de Ana Dias, verificando quais espécies de moluscos ocorrem associadas a Biomphalaria tenagophila, além de aspectos climáticos, físico-químicos e ambientais, relacionando essas variáveis. O estudo de campo foi realizado com coletas mensais de água e moluscos, durante um ano. O material coletado foi identificado e analisado em laboratório juntamente com as variáveis ambientais e climáticas do local. Os resultados receberam tratamento estatístico e foram relacionados entre si. Através deste estudo foi possível concluir que as valas são excelentes criadouros de moluscos. A malacofauna local é composta pelas espécies B. tenagophila, M. tuberculatus, P. sordida, P. marmorata, L. columella, D. depressissimum, D. anatinun, D. lucidum, G. ticaga e Pisidum sp. A B. tenagophila foi a espécie dominante e apresentou competição com M. tuberculatus. As variáveis abióticas exercem influencia sobre a riqueza e abundância da malacofauna, principalmente aquelas relacionadas a pluviosidade. / Schistosomiasis is one of the oldest parasitic diseases that exist. It is believed that the disease arrived in Brazil with the slave trade, and found favorable conditions to its spreading out. The Vale do Ribeira region is among the main transmission areas in the State of Sao Paulo. The valley is characterized by a hydrographic layout rich in small water veins such as irrigation ditches. Its disease transmission history dates back to 1953 when the Ana Dias focus, in the Itariri district, was described. There the intermediate host mollusc is the Biomphalaria tenagophila specie. This area is historically endemic remaining as an important schistosomiasis focus in the State of Sao Paulo, which justifies the necessity of new studies on its environment. The objective of this study was to carry out a malacofauna survey in irrigation ditches considered focus and breeding habitats in the region of Ana Dias, verifying which snail species occur associated to Biomphalaria tenagophila, as well as climatic, physical-chemical and environmental aspects and their correlations. The field study was carried through monthly water and snail sample collections during one year. The collected material was identified and analyzed in laboratory together with the site’s environmental and climatic variables. The results received statistical treatment and compared among themselves. Through this study was possible to conclude that the ditches are excellent breeding habitats for snails. The local Malacofauna is composed by the B. tenagophila, M. tuberculatus, P. sordida, P. marmorata, L. columella, D. depressissimum, D. anatinun, D. lucidum, G. ticaga and Pisidum sp species. The B. tenagophila specie was the dominant one competing with the M. tuberculatus one. The abiotic variables have influence on the malacofauna wealth and abundance, specially on those related to rainfall level.

No Brasil a esquistossomose é causada pela espécie Schistosoma mansoni e leva principalmente à formação de granulomas e fibroses, hipertensão portal e hepatoesplenomegalia. O praziquantel (PZQ) é o fármaco de primeira escolha para o tratamento e possui baixa solubilidade aquosa, sendo necessárias altas doses para ação terapêutica. A taxa de dissolução do PZQ é fator limitante para a sua biodisponibilidade, portanto, melhorar sua solubilidade é fundamental. O objetivo deste trabalho foi aumentar a solubilidade do PZQ pela obtenção de grânulos contendo dispersões sólidas deste fármaco pelo processo hot melt em leito fluidizado. Além disto, buscou-se estudar a fluidodinâmica e as variáveis do processo de granulação. Inicialmente, dispersões sólidas foram preparadas por simples fusão em polietilenoglicol (PEG) 4000 e PEG 6000 nas proporções 2:1; 1:1; 1:2; 1:5 e 1:10 e estas foram caracterizadas por teste de solubilidade, difração de raios-X, espectroscopia em infravermelho e análises térmicas (DSC e TG). Foram obtidas dispersões sólidas com uma solubilidade duas vezes maior do PZQ, uma menor cristalinidade, uma possível interação fármaco-carreador e sem degradação ou alteração nos principais grupos funcionais. Com estes resultados, a dispersão sólida 1:10 PZQ:PEG 6000 foi escolhida para a etapa da granulação. Os granulados foram obtidos utilizando o planejamento fatorial Box Behnken com as seguintes variáveis: % de dispersão sólida, proporção PZQ:PEG das dispersões e carga de lactose spray-dried (SD) (g). A caracterização dos grânulos foi realizada pelos testes: granulometria, densidade aparente, densidade compactada, fator de Hausner, índice de Carr, ângulo de repouso e doseamento do fármaco, sendo todas estas propriedades avaliadas pela técnica de superfície de resposta (ANOVA). A análise estatística demonstrou que as características dos granulados são, na maioria dos casos, dependentes da % de dispersão sólida e da proporção de PZQ:PEG, sendo satisfatórios e toleráveis os resultados do fluxo dos granulados. Os três melhores granulados foram escolhidos para as análises de microscopia eletrônica de varredura, espectroscopia em infravermelho, difração de raios-X, análise térmica e perfil de dissolução. Estas análises mostraram que nos grânulos houve diminuição da cristalinidade, possíveis interações entre PZQ, PEG e lactose, além do grande aumento no perfil de dissolução. Com estes resultados, confirmam-se as vantagens da granulação por hot melt em leito fluidizado e a importância do estudo de suas variáveis. / In Brazil, schistossomiasis is mainly attributed to the species Schistosoma mansoni, which causes granulomas and fibrosis, portal hypertension and hepatosplenomegaly. Praziquantel (PZQ) is the first choice in the treatment; however, it has low water solubility, thus requiring high doses for a proper therapeutical result. The PZQ dissolution rate is the limiting factor for its bioavailability; therefore, it is fundamental to improve of this drug solubility. The objective of this work was to increase the PZQ solubility with the production of granules containing its solid dispersions, prepared by hot melt process in fluidized bed. Moreover, the fluid dynamic and several variables of the process were studied. First, solid dispersions were prepared by mixing with melted polyethylene glycol (PEG) 4000 and PEG 6000 at the ratios of 2:1; 1:1; 1:2; 1:5 and 1:10. These were characterized by solubility test, x-ray powder diffraction, fourier transform infrared spectroscopy and thermal analyses (DSC and TG). Solid dispersions were obtained with PZQ solubility two times higher than the pure drug, lower crystallinity and without degradation or alteration in the main functional groups. With these results, the solid dispersion 1:10 PZQ:PEG 6000 was chosen for the studies of granulation. The granulates were obtained using the Box Behnken factorial design with the following independent variables: % of solid dispersion, ratio PZQ:PEG in the dispersions and amount of spray-dried lactose (g). The granules characterization was made by the tests of granulometry, bulk density, tapped density, Hausner ratio, Carr index, angle of repose and PZQ assay. In addition, all these properties were evaluated by response surface technique (ANOVA). The statistical analysis, in most cases, showed that the granules characteristics depend significantly on the % of solid dispersion and on the ratio PZQ:PEG. The results on the granules flow properties are satisfactory and acceptable for tableting. The three granulates with best properties were submitted to scanning electron microscopy, fourier transform infrared spectroscopy, x-ray powder diffraction, thermal analysis and dissolution test. These analyses showed that there were, in the granules, decrease of crystallinity, possible interaction among PZQ, PEG and lactose, and also, greater increase in the dissolution test. The advantages of fluid bed hot melt granulation and the importance of studying the process variables are confirmed by the results in this work.

No Brasil a esquistossomose é causada pela espécie Schistosoma mansoni e leva principalmente à formação de granulomas e fibroses, hipertensão portal e hepatoesplenomegalia. O praziquantel (PZQ) é o fármaco de primeira escolha para o tratamento e possui baixa solubilidade aquosa, sendo necessárias altas doses para ação terapêutica. A taxa de dissolução do PZQ é fator limitante para a sua biodisponibilidade, portanto, melhorar sua solubilidade é fundamental. O objetivo deste trabalho foi aumentar a solubilidade do PZQ pela obtenção de grânulos contendo dispersões sólidas deste fármaco pelo processo hot melt em leito fluidizado. Além disto, buscou-se estudar a fluidodinâmica e as variáveis do processo de granulação. Inicialmente, dispersões sólidas foram preparadas por simples fusão em polietilenoglicol (PEG) 4000 e PEG 6000 nas proporções 2:1; 1:1; 1:2; 1:5 e 1:10 e estas foram caracterizadas por teste de solubilidade, difração de raios-X, espectroscopia em infravermelho e análises térmicas (DSC e TG). Foram obtidas dispersões sólidas com uma solubilidade duas vezes maior do PZQ, uma menor cristalinidade, uma possível interação fármaco-carreador e sem degradação ou alteração nos principais grupos funcionais. Com estes resultados, a dispersão sólida 1:10 PZQ:PEG 6000 foi escolhida para a etapa da granulação. Os granulados foram obtidos utilizando o planejamento fatorial Box Behnken com as seguintes variáveis: % de dispersão sólida, proporção PZQ:PEG das dispersões e carga de lactose spray-dried (SD) (g). A caracterização dos grânulos foi realizada pelos testes: granulometria, densidade aparente, densidade compactada, fator de Hausner, índice de Carr, ângulo de repouso e doseamento do fármaco, sendo todas estas propriedades avaliadas pela técnica de superfície de resposta (ANOVA). A análise estatística demonstrou que as características dos granulados são, na maioria dos casos, dependentes da % de dispersão sólida e da proporção de PZQ:PEG, sendo satisfatórios e toleráveis os resultados do fluxo dos granulados. Os três melhores granulados foram escolhidos para as análises de microscopia eletrônica de varredura, espectroscopia em infravermelho, difração de raios-X, análise térmica e perfil de dissolução. Estas análises mostraram que nos grânulos houve diminuição da cristalinidade, possíveis interações entre PZQ, PEG e lactose, além do grande aumento no perfil de dissolução. Com estes resultados, confirmam-se as vantagens da granulação por hot melt em leito fluidizado e a importância do estudo de suas variáveis. / In Brazil, schistossomiasis is mainly attributed to the species Schistosoma mansoni, which causes granulomas and fibrosis, portal hypertension and hepatosplenomegaly. Praziquantel (PZQ) is the first choice in the treatment; however, it has low water solubility, thus requiring high doses for a proper therapeutical result. The PZQ dissolution rate is the limiting factor for its bioavailability; therefore, it is fundamental to improve of this drug solubility. The objective of this work was to increase the PZQ solubility with the production of granules containing its solid dispersions, prepared by hot melt process in fluidized bed. Moreover, the fluid dynamic and several variables of the process were studied. First, solid dispersions were prepared by mixing with melted polyethylene glycol (PEG) 4000 and PEG 6000 at the ratios of 2:1; 1:1; 1:2; 1:5 and 1:10. These were characterized by solubility test, x-ray powder diffraction, fourier transform infrared spectroscopy and thermal analyses (DSC and TG). Solid dispersions were obtained with PZQ solubility two times higher than the pure drug, lower crystallinity and without degradation or alteration in the main functional groups. With these results, the solid dispersion 1:10 PZQ:PEG 6000 was chosen for the studies of granulation. The granulates were obtained using the Box Behnken factorial design with the following independent variables: % of solid dispersion, ratio PZQ:PEG in the dispersions and amount of spray-dried lactose (g). The granules characterization was made by the tests of granulometry, bulk density, tapped density, Hausner ratio, Carr index, angle of repose and PZQ assay. In addition, all these properties were evaluated by response surface technique (ANOVA). The statistical analysis, in most cases, showed that the granules characteristics depend significantly on the % of solid dispersion and on the ratio PZQ:PEG. The results on the granules flow properties are satisfactory and acceptable for tableting. The three granulates with best properties were submitted to scanning electron microscopy, fourier transform infrared spectroscopy, x-ray powder diffraction, thermal analysis and dissolution test. These analyses showed that there were, in the granules, decrease of crystallinity, possible interaction among PZQ, PEG and lactose, and also, greater increase in the dissolution test. The advantages of fluid bed hot melt granulation and the importance of studying the process variables are confirmed by the results in this work.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_vanusa_hora.pdf: 894481 bytes, checksum: 1cff4e13f238f761e9054b5864d2655e (MD5) Previous issue date: 2006-10-30 / Schistosomiasis, caused by Schistosoma mansoni, is the second most prevalent parasitic disease worldwide causing chronic disease in millions of people in developing countries. Similarly, fascioliasis, caused by the trematode Fasciola hepatica, represents a recognized unsolved agricultural problem responsible for economic losses as well as causing a significant number of human infections worldwide. Although chemotherapy for both parasites has been available, this approach has limitations, including high reinfection rates in endemic areas. Vaccines represent the most attractive long-term alternative to invert this scenario. Accordingly, the World Health Organization selected S. mansoni fatty acid-binding protein 14kDa (Sm14) as one out of two anti-schistosome vaccine priority candidates for human clinical trials. Furthermore, Sm14 is the only vaccine candidate to have been shown to afford significant immune protection against both of the above-mentioned helminthes. The objective of this study was to develop and evaluate in mice a recombinant subunit vaccine containing the Sm14 fused to the B subunit of the heat-labile enterotoxin of Escherichia coli (LTB), which is a potent immunoadjuvant; furthermore, was describe the production and characterization of monoclonal antibodies (MAbs) against the Sm14 for use as a tool to detect and characterize Sm14 and for development of future diagnostic test. The ltb and sm14 gene were obtained by PCR amplification from E. coli DNA and plasmid pAESm14, respectively, and fused by PCR. The recombinant chimera was expressed in E. coli and purified by nickel affinity chromatography. Groups of outbreed Swiss mice were immunized with three footpad doses of either rLTB/Sm14, rLTB/Sm14 plus aluminum hydroxide (Al(OH)3), rSm14 plus Al(OH)3, rLTB or Al(OH)3. Levels of protection were determined by number of worms recovered after S. mansoni cercarial challenge. The pooled sera of immunized mice were evaluated by ELISA and Western blot. The results showed that the chimera protein was able to elicit specific antibody production to rSm14 and rLTB, however the use of LTB as adjuvant to rSm14 immunization failed to enhance protection against challenge. Furthermore, seven MAbs were obtained after immunization of BALB/c mice with rLTB/Sm14. MAbs isotyping revealed that five were of the isotype IgG1, one belonged to the IgG2b isotype and another to the IgM isotype. These MAbs will be usefull for monitoring protein expression in recombinant systems, protein stability and may have potential for developing diagnostic test. / A esquistossomose, causada por Schistosoma mansoni, é a segunda doença parasitária mais prevalente no mundo causando doença crônica em milhões de pessoas em países em desenvolvimento. Semelhantemente, a fasciolose, causada pelo trematódeo Fasciola hepatica, representa um reconhecido problema agrícola responsável por perdas econômicas assim como causa um significante número de infecções em humanos por todo mundo. Embora a quimioterapia para ambos os parasitas esteja disponível, ela tem apresentado limitações, incluindo altas taxas de reinfecção em áreas endêmicas. Vacinas representam a alternativa mais atraente para inverter este cenário. Assim, a Organização Mundial da Saúde selecionou a proteína ligadora de ácidos graxos 14kDa de S. mansoni (Sm14) como uma de duas candidatas à vacina anti-esquistossomose prioritárias para triagem clínica em humanos. Além disso, a Sm14 é a única proteína candidata a vacina que induz imunidade protetora significativa contra ambos os helmintos acima mencionados. O objetivo deste estudo foi desenvolver e avaliar em camundongos uma vacina de subunidade contendo a Sm14 fusionada com a subunidade B da enterotoxina termolábil de Escherichia coli (LTB), a qual é um potente imunoadjuvante; além disso, foi descrever a produção e caracterização de anticorpos monoclonais (MAbs) contra a Sm14 para usa-los como uma ferramenta para detectar e caracterizar a Sm14 e para o desenvolvimento de futuro teste diagnóstico. Os genes ltb e sm14 foram amplificados por PCR a partir do DNA de E. coli e do plasmídeo pAESm14, respectivamente, e fusionados por PCR. A quimera recombinante foi expressa em E. coli e purificada por cromatografia de afinidade em coluna com níquel. Grupos de camundongos suíços não singênicos foram imunizados por via subcutânea com três doses de rLTB/Sm14, rLTB/Sm14 mais hidróxido de alumínio (Al(OH)3), rSm14 plus Al(OH)3, rLTB ou Al(OH)3. Os níveis de proteção foram determinados através do número de parasitas recuperados após desafio com cercárias de S. mansoni. O pool de soros dos camundongos imunizados foi avaliado por ELISA e Western blot. Os resultados mostraram que a proteína quimera foi capaz de estimular a produção de anticorpos específicos para Sm14 e LTB, contudo o uso de LTB como adjuvante para imunização de rSm14 falhou em aumentar a proteção contra o desafio. Além disso, sete MAbs foram obtidos após imunização de um camundongo BALB/c com rLTB/Sm14. A isotipagem dos MAbs revelou que cinco foram do isotipo IgG1, um pertencente ao isotipo IgG2b e outro ao isotipo IgM. Estes MAbs serão úteis para monitorar a expressão da proteína em sistemas recombinantes, a estabilidade protéica e pode ter potencial para desenvolver teste diagnóstico.