A degeneração testicular (DT) possui grande relevância dentre os distúrbios da reprodução e pode ser causada pelo aumento da temperatura testicular. Este provoca aumento do metabolismo celular, levando ao estresse oxidativo (EO) e apoptose. O tratamento usual consiste na retirada do agente causador e administração de antioxidantes; entretanto, pode não ser eficiente. Dessa forma, o presente estudo preconizou o tratamento da DT por meio de agentes com poder proliferativo: vitamina A e laserterapia de baixa intensidade (LTBI). Foram realizados três experimentos; o experimento 1 objetivou definir a dose de energia da LTBI necessária para a bioestimulação testicular. Foram utilizados seis carneiros distribuídos em três grupos: GC) insulação escrotal (IE) e sem tratamento (n=2); G28) IE e tratado com LTBI com 808 nm de comprimento de onda, 30 mW de potência e 28 J/cm² de densidade de energia por 15 dias a cada 48 horas (n=2); G56) IE e tratado com LTBI com 808 nm, 30 mW e 56 J/cm² por 15 dias a cada 48 horas (n=2). Foram feitas análises clínicas, reprodutivas e histopatológicas. Os dados foram submetidos à análise de variância (ANOVA) e teste de Tukey. Apesar da LTBI diminuir as taxas de espermatozoides com membrana acrossomal íntegra, esta foi eficiente em aumentar a população celular dos túbulos seminíferos no G28. Portanto, a LBTI provocou efeito bioestimulatório em testículos degenerados de carneiros. O experimento 2 objetivou validar a técnica de avaliação do EO espermático por meio da sonda fluorescente CellROX Deep Red®. Foram realizados dois experimentos; o primeiro utilizou ejaculados de três carneiros tratados em T0 (ejaculado não submetido à indução de EO), T50 (50% não induzido e 50% induzido ao EO) e T100 (submetido ao EO). Os dados foram submetidos à regressão linear. No segundo experimento foram utilizados 16 carneiros submetidos à IE. Foram feitas avaliações do EO antes e após a IE. Os dados foram submetidos à ANOVA e teste LSD de Fisher. O coeficiente de determinação foi de 0,728 e houve aumento do EO após a IE. Assim, a sonda CellROX® foi capaz de detectar o EO espermático. No experimento 3 foi proposto tratamento para a DT baseado na suplementação vitamínica ou LTBI. Foram utilizados 33 carneiros distribuídos em seis grupos: CC) sem IE e sem tratamento (n=5); CA) sem IE e tratado com vitamina A IM 120.000 UI/animal, duas vezes por semana durante três semanas (n=6); CL) sem IE e tratado com LTBI protocolo G28 (experimento 1) (n=5); IC) IE e sem tratamento (n = 5); IA) IE e tratado com vitamina A IM 120.000 UI/animal, duas vezes por semana durante três semanas (n=6); IL) IE e tratado com LTBI protocolo G28 (n=6). Foram realizadas análises clínicas, reprodutivas, hormonais e histopatológicas. Os dados foram analisados usando o procedimento de modelos mistos e os efeitos dos tratamentos foram avaliados utilizando contrastes ortogonais. Não houve efeito benéfico dos tratamentos para as características ultrassonográficas, qualidade espermática, concentração de testosterona e aspectos histopatológicos. Assim, os tratamentos não foram eficientes para melhorar a qualidade espermática nem promover a proliferação celular. / The testicular degeneration (TD) has great significance among the reproductive disorders and one of the main causes is the increase in testicular temperature. High testicular temperature results in increase cellular metabolism, leading to oxidative stress and apoptosis. The treatment consists in removing the causative agent and administration of antioxidants; however, it could be not efficient. The objective of this study is to recommend the treatment of TD by administering agents with proliferative action: vitamin A and low level laser therapy (LLLT). For this, three experiments were conducted. In experiment 1 the objective was to define the dose of energy for LLLT testicular biostimulation; it was used six rams distributed in three groups: GC) scrotal insulation (SI) and untreated (n=2); G28) SI and treated with LLLT with 808 nm, 30 mW and 28 J/cm ² of power density for 15 days every 48 hours (n=2); G56) SI and treated with LLLT with 808 nm, 30 mW and 56 J/cm² for 15 days every 48 hours (n=2). Clinics, reproductive and histopathological analyzes were done. Data were subjected to analysis of variance and Tukey test. The rates of sperm with intact acrosome membrane were decreased by LLLT, but the LLLT was effective in increasing the cell population of the seminiferous tubules in the G28. Thus, LLLT was able of causing stimulatory effect in degenerate testis of rams. The objective of experiment 2 was to assess the technique of evaluation of sperm oxidative stress (OS). This study was divided in two experiments; in experiment 1 was used ejaculates of three rams treated in T0 (ejaculate that was not submitted to OS induction), T50 (50% without OS and 50% inducted to OS) and T100 (entire submitted to OS induction). Data obtained were evaluated by linear regression analysis. In experiment 2, sixteen rams were submitted to SI. Analyses of OS were done before and after the SI. Data obtained were evaluated by analysis of variance and Fisher\'s LSD test. The determination coefficient was of 0.728 and there were increase in sperm showing OS after SI period. Thus, CellROX® fluorescent probe was able to detect sperm OS. The objective of experiment 3 was establish a treatment for TD based on vitamin A supplementation or LLLT; 33 rams were distributed in six groups: CC) no SI and non-treated (n=5); CA) no SI and treated with 120,000 IU/animal of IM vitamin A, twice a week for three weeks (n=6); CL) no SI and treated with LLLT G28 protocol (experiment 1) (n=5); IC) SI and untreated (n=5); IA) SI and treated with 120,000 IU/animal of IM vitamin A, twice a week for three weeks (n=6); IL) SI and treated with LLLT G28 protocol (n=6). Clinics, reproductive, hormonal and histopathological analyzes were performed. Data were analyzed using the mixed models procedure and treatments effects were evaluated using orthogonal contrasts. There was no beneficial effect of treatments for ultrasonographic characteristics, sperm quality, testosterone concentration and histopathological aspects. Thus, the treatments were not effective for improving sperm quality or promoting cell proliferation.

A degeneração testicular (DT) possui grande relevância dentre os distúrbios da reprodução e pode ser causada pelo aumento da temperatura testicular. Este provoca aumento do metabolismo celular, levando ao estresse oxidativo (EO) e apoptose. O tratamento usual consiste na retirada do agente causador e administração de antioxidantes; entretanto, pode não ser eficiente. Dessa forma, o presente estudo preconizou o tratamento da DT por meio de agentes com poder proliferativo: vitamina A e laserterapia de baixa intensidade (LTBI). Foram realizados três experimentos; o experimento 1 objetivou definir a dose de energia da LTBI necessária para a bioestimulação testicular. Foram utilizados seis carneiros distribuídos em três grupos: GC) insulação escrotal (IE) e sem tratamento (n=2); G28) IE e tratado com LTBI com 808 nm de comprimento de onda, 30 mW de potência e 28 J/cm² de densidade de energia por 15 dias a cada 48 horas (n=2); G56) IE e tratado com LTBI com 808 nm, 30 mW e 56 J/cm² por 15 dias a cada 48 horas (n=2). Foram feitas análises clínicas, reprodutivas e histopatológicas. Os dados foram submetidos à análise de variância (ANOVA) e teste de Tukey. Apesar da LTBI diminuir as taxas de espermatozoides com membrana acrossomal íntegra, esta foi eficiente em aumentar a população celular dos túbulos seminíferos no G28. Portanto, a LBTI provocou efeito bioestimulatório em testículos degenerados de carneiros. O experimento 2 objetivou validar a técnica de avaliação do EO espermático por meio da sonda fluorescente CellROX Deep Red®. Foram realizados dois experimentos; o primeiro utilizou ejaculados de três carneiros tratados em T0 (ejaculado não submetido à indução de EO), T50 (50% não induzido e 50% induzido ao EO) e T100 (submetido ao EO). Os dados foram submetidos à regressão linear. No segundo experimento foram utilizados 16 carneiros submetidos à IE. Foram feitas avaliações do EO antes e após a IE. Os dados foram submetidos à ANOVA e teste LSD de Fisher. O coeficiente de determinação foi de 0,728 e houve aumento do EO após a IE. Assim, a sonda CellROX® foi capaz de detectar o EO espermático. No experimento 3 foi proposto tratamento para a DT baseado na suplementação vitamínica ou LTBI. Foram utilizados 33 carneiros distribuídos em seis grupos: CC) sem IE e sem tratamento (n=5); CA) sem IE e tratado com vitamina A IM 120.000 UI/animal, duas vezes por semana durante três semanas (n=6); CL) sem IE e tratado com LTBI protocolo G28 (experimento 1) (n=5); IC) IE e sem tratamento (n = 5); IA) IE e tratado com vitamina A IM 120.000 UI/animal, duas vezes por semana durante três semanas (n=6); IL) IE e tratado com LTBI protocolo G28 (n=6). Foram realizadas análises clínicas, reprodutivas, hormonais e histopatológicas. Os dados foram analisados usando o procedimento de modelos mistos e os efeitos dos tratamentos foram avaliados utilizando contrastes ortogonais. Não houve efeito benéfico dos tratamentos para as características ultrassonográficas, qualidade espermática, concentração de testosterona e aspectos histopatológicos. Assim, os tratamentos não foram eficientes para melhorar a qualidade espermática nem promover a proliferação celular. / The testicular degeneration (TD) has great significance among the reproductive disorders and one of the main causes is the increase in testicular temperature. High testicular temperature results in increase cellular metabolism, leading to oxidative stress and apoptosis. The treatment consists in removing the causative agent and administration of antioxidants; however, it could be not efficient. The objective of this study is to recommend the treatment of TD by administering agents with proliferative action: vitamin A and low level laser therapy (LLLT). For this, three experiments were conducted. In experiment 1 the objective was to define the dose of energy for LLLT testicular biostimulation; it was used six rams distributed in three groups: GC) scrotal insulation (SI) and untreated (n=2); G28) SI and treated with LLLT with 808 nm, 30 mW and 28 J/cm ² of power density for 15 days every 48 hours (n=2); G56) SI and treated with LLLT with 808 nm, 30 mW and 56 J/cm² for 15 days every 48 hours (n=2). Clinics, reproductive and histopathological analyzes were done. Data were subjected to analysis of variance and Tukey test. The rates of sperm with intact acrosome membrane were decreased by LLLT, but the LLLT was effective in increasing the cell population of the seminiferous tubules in the G28. Thus, LLLT was able of causing stimulatory effect in degenerate testis of rams. The objective of experiment 2 was to assess the technique of evaluation of sperm oxidative stress (OS). This study was divided in two experiments; in experiment 1 was used ejaculates of three rams treated in T0 (ejaculate that was not submitted to OS induction), T50 (50% without OS and 50% inducted to OS) and T100 (entire submitted to OS induction). Data obtained were evaluated by linear regression analysis. In experiment 2, sixteen rams were submitted to SI. Analyses of OS were done before and after the SI. Data obtained were evaluated by analysis of variance and Fisher\'s LSD test. The determination coefficient was of 0.728 and there were increase in sperm showing OS after SI period. Thus, CellROX® fluorescent probe was able to detect sperm OS. The objective of experiment 3 was establish a treatment for TD based on vitamin A supplementation or LLLT; 33 rams were distributed in six groups: CC) no SI and non-treated (n=5); CA) no SI and treated with 120,000 IU/animal of IM vitamin A, twice a week for three weeks (n=6); CL) no SI and treated with LLLT G28 protocol (experiment 1) (n=5); IC) SI and untreated (n=5); IA) SI and treated with 120,000 IU/animal of IM vitamin A, twice a week for three weeks (n=6); IL) SI and treated with LLLT G28 protocol (n=6). Clinics, reproductive, hormonal and histopathological analyzes were performed. Data were analyzed using the mixed models procedure and treatments effects were evaluated using orthogonal contrasts. There was no beneficial effect of treatments for ultrasonographic characteristics, sperm quality, testosterone concentration and histopathological aspects. Thus, the treatments were not effective for improving sperm quality or promoting cell proliferation.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / The present study was conducted to evaluate the effects of heat stress on testis and semen criteria, and seminal plasma proteome of rams. Scrotal insulation (SI) was in place for eight days, using six rams. Animals were evaluated before (day 0), during and after SI until semen parameters returned to normal. Scrotal circumference, other testis parameters and sperm motility decreased after SI but returned to pre-insulation values on days 71, 85 and 113, respectively. Rams became azoospermic from day 29 to 71. The number of detectable spots per 2D gel decreased from 256  31 to 104  14 between days 0 and 29 (p < 0.05), returning to pre-insulation values on day 134. Several seminal proteins detected before insulation were absent when animals had low sperm motility or azoospermia, including albumin, arylsulfatase A, plasma glutamate carboxypeptidase, cathepsin F, transferrin, alpha-2-macroglobulin, angiotensin-converting enzyme, alpha fucosidase, beta galactosidase, TCP-1 containing chaperonins, heat shock protein 70 kDa, clusterin, palate, lung and nasal epithelium clone, ram seminal vesicle proteins, bodhesin 2, superoxide dismutase, cystatin B, peroxiredoxin 5, tissue inhibitor of metalloproteinase 2. Expression of other 17 proteins were quantitatively changed in the seminal plasma 2-D maps as the result of SI, such as actin, protein DJ-1, HRPE773-like, C-reactive protein precursor and porcine seminal plasma spermadhesins, among others. In conclusion, the expression of seminal plasma proteins was drastically altered by scrotal insulation, coincidental with changes in testis size and semen criteria. Proteins affected by heat stress are potentially involved in several events, from sperm protection and maturation to fertilization. / O presente estudo foi conduzido para avaliar os efeitos do estresse tÃrmico no testÃculo, parÃmetros seminais e proteoma do plasma seminal de carneiros. Seis carneiros da RaÃa Morada Nova var. branca foram submetidos à insulaÃÃo escrotal (IE) por oito dias. Os animais foram avaliados antes (dia 0), durante e apÃs a insulaÃÃo atà que os parÃmetros seminais tivessem retornado a normalidade. A circunferÃncia escrotal, bem como os demais parÃmetros de biometria testicular e a motilidade espermÃtica diminuÃram apÃs a IE, mas com retorno aos valores de prÃinsulaÃÃo entre os dias 71, 85 e 113, respectivamente. Os carneiros tornaram-se azoospÃrmicos entre os dias 29 e 71. O nÃmero de spots detectÃveis/gel diminuiu de 256  31 para 104  14 entre os dias 0 e 29 (p < 0,05), retornando aos valores prÃinsulaÃÃo no dia 134. Algumas proteÃnas detectadas no plasma seminal antes da insulaÃÃo estavam ausentes quando os animais tiveram menor motilidade espermÃtica ou azoospermia, incluindo albumina, arilsulfatase A, plasma glutamato carboxipeptidase, catepsina F, transferrina, alfa-2-macroglobulina, enzima conversora de angiotensina, alfa fucosidase, beta galactosidase, chaperonina contendo TCP-1, proteÃna de choque tÃrmico 70 kDa, clusterina, âpalate, lung and nasal epithelium cloneâ, âram seminal vesicle proteinsâ, bodesina 2, superÃxido dismutase, cistatina B, peroxiredoxina 5, tecido inibidor de metaloproteinase 2. ExpressÃes de outras 17 proteÃnas foram quantitativamente alteradas nos mapas bidimensionais do plasma seminal como resultado da IE, como a actina, proteÃna DJ-1, HRPE773, proteÃna C-reativa, âporcine seminal plasma espermadhesinsâ, entre outras. Conclui-se, que a expressÃo de proteÃnas no plasma seminal foi drasticamente alterada pela insulaÃÃo escrotal, coincidindo com mudanÃas no tamanho testicular e parÃmetros espermÃticos. As proteÃnas afetadas pelo calor estÃo potencialmente envolvidas em diversos eventos, como proteÃÃo espermÃtica, maturaÃÃo e fertilizaÃÃo.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-11T14:42:47Z No. of bitstreams: 1 Guadalupe de Carvalho Xavier.pdf: 1269249 bytes, checksum: 9e9b65665bfe96096243db3a76a3bafa (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-11T14:42:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Guadalupe de Carvalho Xavier.pdf: 1269249 bytes, checksum: 9e9b65665bfe96096243db3a76a3bafa (MD5) Previous issue date: 2007-02-27 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Aiming to evaluate the effect of diet supplementation with Selenium and Vitamin E (Selevit E®) on the testis and seminal parameters of goats induced to scrotal insulation, it were used 12 animals with age varying between seven and eight months, distributed randomly in two groups (G1= Control; G2= Selenium and Vitamin E) and submitted to adaptation period of 60 days. In this period the animals were submitted to two semen harvests and weighted each seven days to supplement and diet correction on the G2 animals. Before putting the testis plastic bags to SI, it was measured scrotal circumference of all animals. Animals of both groups were induced to SI during 18 days, period of which they were submitted to six semen harvests, one before SI (0d), one at the finish of SI (18d) and four on the post-insulation period (PSI). At the end of SI, it was chosen randomly three animals of each group to be submitted to bilateral orchiectomy. The G2 animals have diet supplementation with Selenium and Vitamin E during this period. The maintenance diet was offered to both groups during 42 days, corresponding to post-scrotal insulation (PSI). At the end of this period, the animals of G1 and G2 groups also were orchietomized to have biometric and volumetric testis parameters, where left and right testis as well as left and right epididymis were weighted and prepared to biometric and histometric analyses. The semen harvests were done by eletroejaculation method. The Seleniun and Vitamin E group animals have significantly high scrotal circumference at the end of SI, whereas the Selenium and Vitamin E group had values significantly higher of scrotal circumference at the end of SI, whereas the Control animals were more sensitive to degenerative effects of the SI on the same period. The SI time had significant effect on the quanti-qualitative characteristics of the semen on the animals of both groups (G1 and G2), with reduction of the evaluated parameters (PM, vigor, sperm concentration, acrosoma and DNA integrity), except to semen volume. At the same way it was observed damages like testis degeneration on orchiectomized animals of both groups. However, there was significant difference on the biometric and volumetric parameters of testis parenchyma only to blood vessel volume at this period. In contrast, the serum testosterone concentration increased highly at the end of SI and differed between groups (P<0.05). During the PSI period (36d PSI) there was no treatment effect on the seminal parameters, but it was observed day effect. However, at the end of PSI period the seminal parameters have values close to basal day (0d). The biometric and volumetric parameters of testis parenchyma, at the end of PSI period, have significant difference on the seminiferous tubules and seminiferous epithelium, as well as on the tubular diameter and ephitelium height of goats induced to scrotal insulation. It was observed also significant variation between groups to serum testosterone concentration. It can be concluded that the supplementation with Selenium and Vitamin E did not prevent drastic alterations caused by scrotal insulation technique. However, the continuous supplementation, 36 days after the end of SI, accelerated the spermatogenic recuperation process on goats. / Objetivando verificar o efeito da suplementação alimentar com Selênio e Vitamina E (Selevit E®) nos parâmetros testiculares e seminais de caprinos submetidos a estresse térmico induzido por insulação escrotal (IE), utilizou-se 12 animais com idade variando entre 7 e 8 meses, os quais foram distribuídos aleatoriamente em dois grupos (G1= Controle; G2= Selênio e Vitamina E - Selevit E), passando por um período de adaptação de 60 dias, período no qual os animais foram submetidos a duas colheitas de sêmen e pesados a cada sete dias para correção alimentar de dieta de mantença e correção da suplementação para o G2. Antes de serem colocadas as bolsas para IE, realizou-se a mensuração da circunferência escrotal dos animais de ambos os grupos. Animais de ambos os grupos foram induzidos a IE durante 18 dias, período no qual foram submetidos a duas colheitas de sêmen, uma anterior à IE (0d), uma ao término da IE (18d) e quatro no período PIE (7, 21, 35 e 42d). Ao término da IE, sortearam-se aleatoriamente três animais de cada grupo para orquiectomia bilateral, mantendo-se a suplementação alimentar com Selênio e Vitamina E nos animais restantes do G2. A dieta de mantença foi fornecida para ambos os grupos por mais 42 dias, correspondendo à fase de pós IE (PIE), no final do qual os animais restantes de G1 e G2 também foram orquiectomizados para registro de parâmetros biométricos e volumétricos do parênquima testicular, onde os testículos direito e esquerdo, assim como o epidídimo direito e esquerdo, foram pesados e preparados para posterior análise biométrica e histométrica. As colheitas de sêmen foram realizadas pelo método de eletroejaculação. O grupo de animais que recebeu Selênio e Vitamina E teve média significativamente maior de circunferência escrotal ao término da IE, enquanto que o grupo controle apresentou-se mais suscetíveis aos efeitos degenerativos da IE. O tempo de IE teve efeito significativo sobre as características quanti-qualitativas do sêmen nos animais de ambos os grupos (G1 e G2), com redução dos parâmetros avaliados (MIP, vigor, concentração espermática, integridade de DNA e de acrosoma), exceto o volume seminal. Da mesma forma, observou-se lesões compatíveis com degeneração testicular nos animais orquiectomizados de ambos os grupos. No entanto, constatou-se diferença significativa para os parâmetros biométricos e volumétricos do parênquima testicular apenas para o parâmetro vaso sanguíneo nesse mesmo período. Em contrapartida, a concentração sérica de testosterona aumentou significativamente ao término da IE e diferiu estatisticamente (P<0,05) entre os grupos. Durante o período PIE (42d PIE) não foi observado efeito de tratamento nos parâmetros seminais, mas constatou-se efeito de dias. No entanto, ao término do período PIE os parâmetros seminais apresentaram-se, em média, com valores próximos aos valores antes da IE. Os parâmetros biométricos e volumétricos do parênquima testicular, ao término do período PIE, evidenciaram diferença significativa para os parâmetros de túbulo seminífero, epitélio seminífero, diâmetro tubular e altura de epitélio. Pode-se observar também variação significativa entre os grupos para a concentração sérica de testosterona. Conclui-se que o suplemento com Selênio e Vitamina E não previniu ou reverteu os efeitos provocados pela técnica de insulação escrotal. Entretanto, a continuação desta suplementação, 42 dias após término da IE, acelerou a recuperação do processo espermatogênico em caprinos.