Os compostos pertencentes ao grupo caracterizado como BTEX (sigla para designar Benzeno Tolueno Etilbenzeno e Xileno) sÃo largamente utilizados na indÃstria como matÃria prima para diversos produtos como herbicidas tintas gasolina corantes borracha dentre outras substÃncias que podem ser praticamente inertes ou potencialmente poluidoras A utilizaÃÃo da atividade microbiana como alternativa aos tratamentos convencionais de despoluiÃÃo destas substÃncias tem sido bastante estudada como forma de remoÃÃo destes compostos visto que à um processo viÃvel e que muitas vezes deixa pouco ou nenhum resÃduo secundÃrio Este trabalho teve como objetivo analisar a capacidade de biodegradaÃÃo por meio de curvas de crescimento do perfil proteÃmico e do potencial de formaÃÃo de biofilme de Burkholderia SMF090 submetida ao crescimento em meio mÃnimo BH suplementado com gasolina comercial Curvas de crescimento foram feitas em meio BH suplementados com 2000 ppm do poluente A anÃlise proteÃmica foi feita a partir de crescimentos em meio BH suplementados com 2000 ppm de gasolina comercial As proteÃnas bacterianas do referido crescimento foram extraÃdas a fim de realizar a eletroforese bidimensional Foram analisadas as proteÃnas diferencialmente expressas entre tratamento e controle (crescimento apenas em meio BH) anÃlise da tendÃncia de pI e massa molecular das proteÃnas obtidas e identificaÃÃo das mesmas a partir do Expert Protein Analysis System (Expasy) As curvas de crescimento mostraram que à medida em que a bactÃria à submetida ao poluente seu crescimento à mais rÃpido sugerindo uma adaptaÃÃo ao poluente pela cÃlula bacteriana As proteÃnas encontradas na anÃlise proteÃmica sÃo principalmente proteÃnas relacionadas à sÃntese protÃica e ao metabolismo energÃtico bacteriano Nos gÃis bidimensionais foram encontrados tambÃm proteÃnas pertencentes à via de degradaÃÃo de compostos BTEX presentes na gasolina As anÃlises prÃvias do potencial de formaÃÃo de biofilme demonstraram alta capacidade da cÃlula de formar esta estrutura inclusive nÃo havendo diferenÃas na formaÃÃo de biofilme em presenÃa e ausÃncia de gasolina comercial Os resultados sugerem que Burkholderia SMF 090 tem alto potencial de bidegradaÃÃo dos compostos BTEX presentes na gasolina podendo futuramente ser estudada como possÃvel alternativa biotecnolÃgica para fins de biorremediaÃÃo

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Jatropha curcas L. is a plant native to America and belongs to the Euphorbiaceae family. Currently it is gaining economical interest mainly because it is an oilseed crop with potential to produce biodiesel. However, presence of phorbol esters (a class of diterpenes) that are the major toxic constituents of the seeds, limits a better usage of the plant, by making the use of the residue, obtained after the oil extraction from the seeds, unfeasible for animal feed, due to its pro-carcinogenic activity and inflammatory action. Proteomic analysis of the plastids isolated from developing seeds of Jatropha is important because the synthesis of fatty acid as well as phorbol esters, the two most attractive compounds in the study of Jatropha curcas, occur in plastids. Proteomic analysis of this organelle is crucial to better understand and explore not only the biosynthetic pathway of these two compounds but other metabolic pathways , and addtionaly providing foundation for researchs that aimed to develope genotypes with more suitable characteristics for industrial applications. In this study, we performed a proteomic analysis of plastids isolated from the endosperm of developing Jatropha curcas seeds that were in the initial stage of deposition of protein and lipid reserves. Proteins extracted from the plastids were digested with trypsin, and the peptides were applied to an EASY-nano LC system coupled online to an ESI-LTQ-Orbitrap Velos mass spectrometer, and this led to the identification of 1103 proteins representing 804 protein groups, of which 923 were considered as true identifications, and this considerably expands the repertoire of J. curcas proteins identified so far. Of the identified proteins, only five are encoded in the plastid genome, and none of them are involved in photosynthesis, evidentiating the nonphotosynthetic nature of the isolated plastids. Homologues for 824 out of 923 identified proteins were present in three different plastids proteins databases i.e. PPDB, SUBA and PlProt, while homologues for 13 proteins were not found in any of these three databases but were marked as plastidial by at least one of the three prediction programs used (TargetP, ChloroP and PlantMPloc). Functional classification showed that proteins belonging to amino acids metabolism comprise the main functional class, followed by carbohydrate, energy, and lipid metabolisms. The small and large subunits of Rubisco were identified, and their presence in plastids is considered to be an adaptive feature counterbalancing for the loss of one-third of the carbon as CO2 as a result of the conversion of carbohydrate to oil through glycolysis. While several enzymes involved in the biosynthesis of several precursors of diterpenoids were identified, we were unable to identify any terpene synthase/cyclase, which suggests that the plastids isolated from the endosperm of developing seeds do not synthesize phorbol esters. In conclusion, this study provides insights into the major biosynthetic pathways and certain unique features of the plastids from the endosperm of developing seeds at the whole proteome level. / O pinhÃo manso (Jatropha curcas L.) à uma planta nativa da AmÃrica, pertencente à famÃlia Euphorbiaceae. Atualmente, ela desperta interesse econÃmico principalmente por se tratar de uma oleaginosa com potencial para a produÃÃo de biodiesel. Entretanto, a presenÃa de Ãsteres de forbol (uma classe de diterpeno), que sÃo os principais constituintes tÃxicos das sementes, limita uma melhor utilizaÃÃo dessa planta, por inviabilizar o uso do resÃduo de extraÃÃo do Ãleo das sementes na alimentaÃÃo animal, bem como, por apresentar atividade prÃ-carcinogÃnica e aÃÃo inflamatÃria. A anÃlise proteÃmica de plastÃdeos, isolados de sementes em desenvolvimento de pinhÃo manso, à uma importante vertente de estudo, pois tanto a sÃntese de Ãcidos graxos como dos Ãsteres de forbol, os dois compostos mais atrativos no estudo de Jatropha curcas, ocorrem nos plastÃdeos. O estudo proteÃmico dessa organela torna-se crucial para melhor compreender e explorar nÃo somente as vias biossintÃticas desses dois compostos, como de outras vias metabÃlicas, alÃm de proporcionar um conjunto de dados que pode ser utilizado em pesquisas voltadas para o desenvolvimento de genÃtipos com caracterÃsticas mais adequadas para aplicaÃÃes industriais. No presente trabalho, realizou-se uma anÃlise proteÃmica de plastÃdeos isolados do endosperma de sementes em desenvolvimento do pinhÃo manso, que estavam nos estÃgios iniciais de deposiÃÃo de lipÃdios e proteÃnas de reserva (25-30DAA), confirmados por meio de anÃlises histolÃgica e histoquÃmica. As proteÃnas extraÃdas dos plastÃdeos foram digeridas com tripsina e os peptÃdeos foram aplicados no sistema de nano-LC EASYII acoplado online ao espectrÃmetro de massa nano ESI LTQ-Orbitrap velos, o que resultou na identificaÃÃo 1103 proteÃnas, representando 804 grupos de proteÃnas, dos quais 923 foram consideradas identificaÃÃes verdadeiras. Isso expandiu consideravelmente o repertÃrio de proteÃnas do pinhÃo manso atà agora identificas. Dentre as proteÃnas identificadas, apenas 5 sÃo codificadas pelo genoma plastidial, e nenhuma delas està envolvida na fotossÃntese, o que evidencia a natureza nÃo fotossintÃtica dos plastÃdeos isolados. HomÃlogos de 824, dentre as 923 proteÃnas identificadas, estavam presentes nos bancos de dados PPDB, SUBA e PlProt, enquanto homÃlogos para 13 proteÃnas nÃo foram encontrados em nenhum dos trÃs bancos de dados plastidiais, mas foram detectados como plastidiais por pelo menos um dos trÃs programas de prediÃÃo de localizaÃÃo subcelular utilizados (TargetP, ChloroP, PlantMPloc). A classificaÃÃo funcional mostrou que a maioria das proteÃnas identificadas pertencia ao metabolismo dos aminoÃcidos, seguido dos metabolismos dos carboidratos, energÃtico e dos lipÃdios. As subunidades maiores e menores da Rubisco foram identificadas, e sua presenÃa nos plastÃdeos foi considerada uma caracterÃstica adaptativa para contrabalancear a perda de um terÃo do carbono na forma de CO2 como um resultado da conversÃo de carboidratos em Ãleo atravÃs da glicÃlise. Apesar de enzimas envolvidas na biossÃntese de diversos precursores dos diterpenÃides terem sido identificadas, nÃo foi detectado nenhuma terpeno sintase/ciclase, o que sugere que os plastÃdeos isolados do endosperma de sementes em desenvolvimento nÃo sintetizam Ãsteres de forbol, apesar de uma grande quantidade desse composto ser encontrada neste tecido. Como conclusÃo, o presente trabalho proporciona insights sobre as principais vias biossÃntÃticas, e sobre caracterÃsticas peculiares dos plastideos isolados do endosperma de sementes em desenvolvimento.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de NÃvel Superior / BactÃrias do gÃnero Burkholderia apresentam como uma das suas aplicaÃÃes biotecnolÃgicas a capacidade de biodegradar compostos xenobiÃticos recalcitrantes. Dessa forma, este trabalho teve como objetivo avaliar a capacidade da Burkholderia sp. SMF 07 tolerar e utilizar o fenol como Ãnica fonte de carbono e realizar a anÃlise proteÃmica desta bactÃria, em resposta ao fenol, com a finalidade de identificar proteÃnas diferencialmente expressas que estÃo relacionadas à biodegradaÃÃo do fenol, à resposta ao estresse ou ainda, que participem das vias metabÃlicas de produÃÃo de energia para as cÃlulas. A avaliaÃÃo da capacidade da Burkholderia sp. SMF 07 utilizar o fenol como Ãnica fonte de carbono foi realizada a partir na construÃÃo da curva de crescimento em meio mineral (BH). A fim de realizar a extraÃÃo das proteÃnas totais foi realizado o crescimento bacteriano em meio de cultivo TY (Triptone-Yeast Medium), suplementado ou nÃo com 1000 mg/L de fenol, incubado a 28ÂC. A extraÃÃo das proteÃnas totais foi feita apÃs as culturas atingirem o final da fase log do crescimento bacteriano (O.D entre 0,8 e 1,0 e 0,6 e 0,8, para as condiÃÃes controle e fenol, respectivamente). As proteÃnas foram quantificadas pelo mÃtodo de Bradford (1976) e a avaliaÃÃo da pureza das amostras proteicas foi realizada por SDS-PAGE. O mapa protÃico para cada condiÃÃo testada foi determinado a partir da eletroforese bidimensional (2-D). O ajuste das imagens dos gÃis bidimensionais, a detecÃÃo de spots protÃicos e a avaliaÃÃo dos dados para determinaÃÃo de variaÃÃes quantitativas e qualitativas dos spots foi feito pelo programa ImageMasterÂ. A identificaÃÃo das proteÃnas foi feita atravÃs do ExPASy Proteomics Server, utilizando os valores de pI e MW do spot. AtravÃs dos dados obtidos foi possÃvel observar proteÃnas diferencialmente expressas entre os grupos testados. Entre as proteÃnas que apresentaram expressÃo quantitativa aumentada na presenÃa do fenol destaca-se a 4-hidroxi-2-oxovalerato aldolase, uma enzima envolvida na via meta de degradaÃÃo do fenol. Entre aquelas que apresentaram expressÃo reduzida na presenÃa do fenol se destacam aquelas envolvidas na biossÃntese de nucleotÃdeos e de Ãcidos graxos, molÃculas importantes para o desenvolvimento e manutenÃÃo da estrutura microbiana. As proteÃnas que tiveram sua expressÃo inibida na presenÃa do fenol estavam envolvidas principalmente na biossÃntese de aminoÃcidos, proteÃnas, lipÃdeos, ubiquinona, purinas e pirimidinas; alÃm de participarem do processamento do RNAt, sÃntese do peptideoglicano e na resposta ao estresse. Em conclusÃo, o estudo mostrou que a Burkholderia sp. SMF 07 nÃo foi capaz de utilizar o fenol como Ãnica fonte de carbono, mas apresentou capacidade de tolerar o fenol quando cultivada em meio nutritivo nas concentraÃÃes testadas. AtravÃs da anÃlise proteÃmica concluiu-se que o poluente alterou a expressÃo de proteÃnas importantes para o metabolismo e manutenÃÃo da estrutura celular. / Bacteria of the genus Burkholderia have as one of its biotechnological applications the ability to biodegrade recalcitrant xenobiotic compounds. Thus, this study aimed to evaluate the ability of Burkholderia sp. SMF 07 tolerate and using phenol as the sole carbon source and performing proteomic analysis of this bacterium, in response to phenol, in order to identify differentially expressed proteins that are related to biodegradation of phenol, the stress response or metabolic pathways involving the production of energy for cells. The evaluation of the capacity of Burkholderia sp. SMF 07 using phenol as the sole carbon source was based on the construction of the curve of growth in mineral medium (BH). For extraction of total proteins was performed bacterial growth in culture medium TY (Triptone-Yeast Medium), supplemented or not with 1000 mg/L phenol, incubated at 28ÂC. The extraction of total proteins was done after the cultures reached the end of the log phase of bacterial growth (O.D between 0.8 and 1.0 and 0.6 and 0.8 for the control conditions and phenol, respectively). The proteins were quantified by the Bradford method (1976) and assessment of protein purity of the samples was performed by SDS-PAGE. The protein map for each tested condition was determined from two-dimensional electrophoresis (2-D). The adjustment of two-dimensional images of the gels, the detection of protein spots, and data evaluation to determine quantitative and qualitative changes of spots was made by the ImageMaster  software. The identification of proteins was performed using the ExPASy Proteomics Server, using the values of pI and MW of spot. Through the data obtained was observed differentially expressed proteins between the groups tested. Among the proteins that showed increased expression quantitative in the presence of phenol is highlight 4-hydroxy-2-oxovalerate aldolase, an enzyme involved in the degradation meta pathway phenol. Among those that showed decreased expression in the presence of phenol are highlights those involved in the biosynthesis of nucleotides and fatty acids, molecules important to the development and maintenance of microbial structure. Proteins which have inhibited its expression in the presence of phenol were mainly involved in the biosynthesis of amino acids, proteins, lipids, ubiquinone, purines and pyrimidines; beyond participate processing of tRNA, peptidoglycan synthesis, and in the stress response. In conclusion, the study showed that Burkholderia sp. SMF 07 not been able to utilize phenol as the sole carbon source but showed the ability to tolerate phenol when grown in nutrient medium at the concentrations tested. Through proteomic analysis was concluded that the pollutant alter the expression of proteins important for metabolism and maintenance of cellular structure.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Proteomic studies of sperm cells may be contribute in the biological reproduction potential by mapping biomarkers of fertility. The present study aims to evaluate the effect of seasonality in the protein profile of sperm Moxotà breed goats, in order to identify markers of fertility. We used six animals in reproductive age (24-36 months) for the collection of semen in artificial vagina, which was carried out weekly during the dry and rainy seasons. After collection, semen was submitted to evaluation of sperm parameters (motility, vigor, concentration and testis volume). The profile of sperm proteins was obtained using the two-dimensional electrophoresis technique . Analysis of seminal parameters showed no significant differences between periods. We detected 330 and 246 spots for 2D gels representing the rainy and dry seasons. The distribution of spots through isoelectric point in the two study periods are concentrated in the pH range 5-6, both in the dry season (PS) and in the rainy season (PC) this region contains about 50% of the total protein . Regarding the molecular weight of 20-40 kDa proteins showed greater frequency over the years. It was observed the presence of 56 spots similar and constant expression in six animals. The qualitative and quantitative differences were observed between the season, highlighting the 349 spot that was present only in the PC, while the 566 and 1115 spots were differentially expressed in the dry season. Individual differences have been identified yet and it seems is correlated with sperm parameters evaluated. In general there was greater expression of proteins in the PS. In conclusion, the results show the influence of seasonality on the expression of some proteins, which may be strong candidates for biomarkers of fertility and may be related to some characteristics such as sperm maturation, capacitation, acrosome reaction and interaction between the gametes. / Estudos proteÃmicos da cÃlula espermÃtica podem contribuir para a utilizaÃÃo do potencial biolÃgico reprodutivo atravÃs do mapeamento de biomarcadores de fertilidade. O presente trabalho tem o objetivo de avaliar o efeito da sazonalidade no perfil proteico de espermatozÃides da raÃa caprina MoxotÃ, visando à identificaÃÃo de marcadores de fertilidade. Foram utilizados seis reprodutores em idade reprodutiva (24 a 36 meses) para a coleta de sÃmen em vaginal artificial, a qual foi realizada semanalmente durante os perÃodos seco e chuvoso. ApÃs a coleta, o sÃmen foi submetido à avaliaÃÃo dos parÃmetros espermÃticos (motilidade, vigor, concentraÃÃo e volume espermÃtico). O perfil das proteÃnas espermÃticas foi obtido atravÃs da tÃcnica de eletroforese bidimensional (2D). A anÃlise dos parÃmetros seminais nÃo apresentou diferenÃas significativas entre os perÃodos. Foram detectados 330 e 246 spots em gÃis 2D para os perÃodos chuvoso e seco, respectivamente. A distribuiÃÃo dos spots pelo ponto isoelÃtrico nos dois perÃodos estudados, encontram-se majoritariamente concentrados na faixa de pH de 5 a 6, tanto no perÃodo seco (PS) quanto no perÃodo chuvoso (PC) essa regiÃo contem cerca 50% do total de proteÃnas. Em relaÃÃo a massa molecular as proteÃnas de 20-40 kDa apresentaram maior frequÃncia ao longo do ano. Observou-se a presenÃa de 56 spots similares e com expressÃo constante nos seis animais. As diferenÃas qualitativas e quantitativas foram observadas entre os perÃodos, destacando-se o spot 349 que esteve presente apenas no PC, enquanto que os spots 566 e 1115 foram diferencialmente expressos no PS. Foram identificadas ainda diferenÃas individuais e estas parecem està correlacionadas com os parÃmetros espermÃticos avaliados. De uma forma geral observou-se maior expressÃo de proteÃnas no PC. Em conclusÃo, os resultados apontam influÃncia da sazonalidade na expressÃo de algumas proteÃnas, as quais podem ser fortes candidatas a biomarcadores de fertilidade e podem estar relacionadas a vÃrias caracterÃsticas do espermatozÃide como maturaÃÃo, capacitaÃÃo, reaÃÃo acrossÃmica e interaÃÃo entre os gametas.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / The study was conducted to evaluate the influence of supplementation of different lipid sources on performance and quantitative characteristics of housing and not housing, fatty acid profile and muscle proteome Longissimus dorsi of Santa Ines lambs fed different additional sources of lipids. 35 lambs bulls were used, with initial body weight (13  1.80 kg) and approximately two months in a randomized block design with five treatments and seven repetitions. The treatments consisted of five diets, one free additional lipids (control) and the other, added cottonseed (CA), bran cashew (FCC), cottonseed with cashew nut meal (CALFCC) and calcium salts of long chain fatty acids (LCFA-Ca). The duration of the experiment was determined by the time required for the average body weight of all animals in each treatment were 28 kg, and this selected group for slaughter. No significant effect was observed with the use of supplementary sources of lipids on the loss of fasting, body weight at slaughter, empty body weight, hot carcass weight, cold carcass weight loss by cooling and biological yield. The non-carcass components, intestines and organs showed no differences across lipid additional sources. Regarding the fatty acid profile were observed 13 fatty acids, four of which are saturated, monounsaturated five-four polyunsaturated (PUFA). In proteome analysis, the proteins were expressed in greater quantity were located primarily at pH less than 5.5. Comparing the expression intensity spots between treatments can observe significant difference in the intensity of the spots 23 for the diet revealed fifteen proteins and of this total, seven were differentiated with respect to time. The proteins identified in this experiment can be mainly classified as structural cellular organization and protection to stress, as well as specific metabolic functions and other functions. The addition of various sources of lipid influenced the productive performance and features: hot carcass dressing and cold, yield and weight of the rack the weight and performance of the gastrointestinal tract filled, small intestine and liver income in Santa Ines sheep growing. Supplementation with different lipid sources influence the profile of fatty acids of Longissimus dorsi, so that diets containing FCC and Lcfa-Ca increased the amount of CLA in the muscle. The proteome analysis may be a method to identify marker proteins meat quality prediction. In this study, the identified proteins are highly relevant to the meat tenderness process, wherein the meat maturation process is complex and involves protein in different biological processes. The type of power had greater influence on the proportions of bodies responsible for digestion and absorption of nutrients. / O estudo foi realizado com objetivo de avaliar a influÃncia da suplementaÃÃo de diferentes fontes de lipÃdeos sobre o desempenho produtivo e as caracterÃsticas quantitativas de carcaÃa e nÃo carcaÃa, perfil de Ãcidos graxos e proteoma do mÃsculo Longissimus dorsi de cordeiros Santa InÃs alimentados com diferentes fontes suplementares de lipÃdeos. Foram utilizados 35 cordeiros nÃo-castrados, com peso corporal mÃdio inicial (13  1,80 kg) e aproximadamente, dois meses de idade em delineamento de blocos ao acaso com cinco tratamentos e sete repetiÃÃes. Os tratamentos experimentais consistiram de cinco raÃÃes, sendo uma isenta de lipÃdeos suplementares (controle) e as demais, adicionadas de caroÃo de algodÃo (CA), farelo da castanha de caju (FCC), caroÃo de algodÃo com farelo de castanha de caju (CALFCC) e sais de cÃlcio de Ãcidos graxos de cadeia longa (Ca-Agcl). A duraÃÃo do experimento foi determinada pelo tempo necessÃrio para que a mÃdia do peso corporal de todos os animais de cada tratamento atingisse 28 kg, sendo este grupo selecionado para o abate. NÃo foi observado efeito significativo com a utilizaÃÃo de fontes suplementares de lipÃdeos sobre a perda do jejum, peso corporal ao abate, peso de corpo vazio, peso de carcaÃa quente, peso de carcaÃa fria, perda por resfriamento e rendimento biolÃgico. Os componentes nÃo-carcaÃa, vÃsceras e ÃrgÃos, nÃo apresentaram diferenÃas em funÃÃo das fontes suplementares lipÃdicas. No tocante ao perfil de Ãcidos graxos foram observados 13 Ãcidos graxos, dos quais quatro sÃo saturados, cinco monoinsaturados e quatro poliinsaturados(AGPI). Na anÃlise do proteÃma as proteÃnas que foram expressas em maior quantidade se localizaram principalmente em pH inferior a 5,5. Comparando a expressÃo da intensidade de spots entre os tratamentos pode-se observar diferenÃa significativa na intensidade de 23 spots em funÃÃo da dieta revelando quinze proteÃnas sendo que desse total, sete foram diferenciadas em funÃÃo do tempo. As proteÃnas identificadas neste experimento podem ser classificadas principalmente como estruturais de organizaÃÃo celular e proteÃÃo ao stresse, bem como com especÃficas funÃÃes metabÃlicas e outras funÃÃes. A adiÃÃo de diferentes fontes de lipÃdeo suplementar influenciou o desempenho produtivo e as caracterÃsticas: rendimento da carcaÃa quente e fria, rendimento e peso da costela o peso e rendimento do trato gastrointestinal cheio, intestino delgado e rendimento do fÃgado em ovinos Santa InÃs em crescimento. A suplementaÃÃo com diferentes fontes lipÃdicas influenciou o perfil de Ãcidos graxos do Longissimus dorsi, de modo que as dietas contendo FCC e Ca-Agcl aumentou a quantidade de CLA neste mÃsculo. A anÃlise do proteoma pode ser um mÃtodo para identificar as proteÃnas marcadoras de prediÃÃo da qualidade da carne. Nesse estudo, as proteÃnas identificadas sÃo altamente relevantes para o processo de maciez da carne, sendo que o processo de maturaÃÃo da carne à complexo e envolve proteÃnas em diferentes processos biolÃgicos. O tipo de alimentaÃÃo teve maior influÃncia sobre as proporÃÃes dos ÃrgÃos responsÃveis pela digestÃo e absorÃÃo de nutrientes.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Nas Ãltimas dÃcadas, as lectinas vegetais tÃm atraÃdo grande interesse devido Ãs suas diversas atividades biolÃgicas das quais se destaca a aÃÃo antitumoral in vivo e in vitro que, em geral, causa a inibiÃÃo do crescimento celular e a induÃÃo da morte celular por apoptose. No presente estudo, foi investigado o efeito da lectina de Dioclea altissima (DAL), uma lectina de leguminosa, alfa-D-manose ligante, sobre as linhagens tumorais A549 (carcinoma pulmonar), OVCAR-8 (carcinoma de ovÃrio) e PC3M (carcinoma de prÃstata) e linhagem normal CMSP (cÃlulas do tecido sanguÃneo). DAL foi isolada e purificada por cromatografia de afinidade em coluna de Sephadex G-50 e sua citotoxicidade foi avaliada atravÃs do ensaio do MTT. DAL foi seletivamente citotÃxica para as cÃlulas cancerÃgenas A549, PC3M, apÃs 48 e 72 horas de incubaÃÃo, e para OVCAR-8, apÃs 72 horas de tratamento apresentando valores de CI50 entre 23,0 e 55,7 μg/mL, promovendo aglutinaÃÃo celular a partir de 24 horas de incubaÃÃo. DAL nÃo se mostrou citotÃxica para cÃlulas normais. O teste do cometa revelou que DAL nÃo causa dano direto ao DNA. A linhagem PC3M foi selecionada para anÃlise proteÃmica por espectrometria de massas (nanoUPLC nanoESI-MSE) por apresentar maior sensibilidade à DAL. ApÃs tratamento das cÃlulas com diversas concentraÃÃes de DAL, por 24, 48 e 72 horas, foi identificado um total de 837 proteÃnas vÃlidas, 140 (24h), 321 (48h) e 376 (72h). O estudo das proteÃnas diferencialmente expressas das cÃlulas tratadas com a lectina em relaÃÃo ao controle definiu o efeito citotÃxico de DAL em PC3M como apoptÃtico gerado, principalmente, via estresse do retÃculo endoplasmÃtico. / Recently, plant lectins have attracted great interest due to their several biological activities of which stands out the antitumoral action in vivo and in vitro that in general result in inhibition of cell growth and induction of cell death by apoptosis. In the present study, it was investigated the effect of the Dioclea altissima (DAL) lectin, a legume alfa-D-mannose ligand lectin on A549 (lung cancer), OVCAR-8 (ovarian cancer) and PC3M (prostate cancer) and normal line PBMC (cell blood tissue). DAL was isolated and purified by affinity chromatography on a Sephadex G-50 column and its cytotoxicity was evaluated by MTT assay. DAL was selectively cytotoxic to cancer cells A549, PC3M after 48 and 72 hours of incubation, and OVCAR-8 after 72 hours of treatment with DAL (CI50 values between 23.0 e 55.7 μg/mL). Moreover, it was observed cell agglutination from 24 hours of incubation. Comet assay revealed DAL does not cause direct DNA damage. The line PC3M was selected for proteomic analysis by mass spectrometry (nanoUPLC nanoESI-MSE) to present the best evidence of sensitivity to DAL. PC3M line was treated with various concentrations of DAL during 24, 48 e 72 hours, it was identified a total of 837 proteins, 140 (24h), 321 (48h) e 376 (72h). The study of differential protein expression of the DAL-treated PC3M cells compared to control demonstrated apoptotic effect generated, mainly, via ER stressed-dependent.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / The present study was conducted to evaluate the effects of heat stress on testis and semen criteria, and seminal plasma proteome of rams. Scrotal insulation (SI) was in place for eight days, using six rams. Animals were evaluated before (day 0), during and after SI until semen parameters returned to normal. Scrotal circumference, other testis parameters and sperm motility decreased after SI but returned to pre-insulation values on days 71, 85 and 113, respectively. Rams became azoospermic from day 29 to 71. The number of detectable spots per 2D gel decreased from 256  31 to 104  14 between days 0 and 29 (p < 0.05), returning to pre-insulation values on day 134. Several seminal proteins detected before insulation were absent when animals had low sperm motility or azoospermia, including albumin, arylsulfatase A, plasma glutamate carboxypeptidase, cathepsin F, transferrin, alpha-2-macroglobulin, angiotensin-converting enzyme, alpha fucosidase, beta galactosidase, TCP-1 containing chaperonins, heat shock protein 70 kDa, clusterin, palate, lung and nasal epithelium clone, ram seminal vesicle proteins, bodhesin 2, superoxide dismutase, cystatin B, peroxiredoxin 5, tissue inhibitor of metalloproteinase 2. Expression of other 17 proteins were quantitatively changed in the seminal plasma 2-D maps as the result of SI, such as actin, protein DJ-1, HRPE773-like, C-reactive protein precursor and porcine seminal plasma spermadhesins, among others. In conclusion, the expression of seminal plasma proteins was drastically altered by scrotal insulation, coincidental with changes in testis size and semen criteria. Proteins affected by heat stress are potentially involved in several events, from sperm protection and maturation to fertilization. / O presente estudo foi conduzido para avaliar os efeitos do estresse tÃrmico no testÃculo, parÃmetros seminais e proteoma do plasma seminal de carneiros. Seis carneiros da RaÃa Morada Nova var. branca foram submetidos à insulaÃÃo escrotal (IE) por oito dias. Os animais foram avaliados antes (dia 0), durante e apÃs a insulaÃÃo atà que os parÃmetros seminais tivessem retornado a normalidade. A circunferÃncia escrotal, bem como os demais parÃmetros de biometria testicular e a motilidade espermÃtica diminuÃram apÃs a IE, mas com retorno aos valores de prÃinsulaÃÃo entre os dias 71, 85 e 113, respectivamente. Os carneiros tornaram-se azoospÃrmicos entre os dias 29 e 71. O nÃmero de spots detectÃveis/gel diminuiu de 256  31 para 104  14 entre os dias 0 e 29 (p < 0,05), retornando aos valores prÃinsulaÃÃo no dia 134. Algumas proteÃnas detectadas no plasma seminal antes da insulaÃÃo estavam ausentes quando os animais tiveram menor motilidade espermÃtica ou azoospermia, incluindo albumina, arilsulfatase A, plasma glutamato carboxipeptidase, catepsina F, transferrina, alfa-2-macroglobulina, enzima conversora de angiotensina, alfa fucosidase, beta galactosidase, chaperonina contendo TCP-1, proteÃna de choque tÃrmico 70 kDa, clusterina, âpalate, lung and nasal epithelium cloneâ, âram seminal vesicle proteinsâ, bodesina 2, superÃxido dismutase, cistatina B, peroxiredoxina 5, tecido inibidor de metaloproteinase 2. ExpressÃes de outras 17 proteÃnas foram quantitativamente alteradas nos mapas bidimensionais do plasma seminal como resultado da IE, como a actina, proteÃna DJ-1, HRPE773, proteÃna C-reativa, âporcine seminal plasma espermadhesinsâ, entre outras. Conclui-se, que a expressÃo de proteÃnas no plasma seminal foi drasticamente alterada pela insulaÃÃo escrotal, coincidindo com mudanÃas no tamanho testicular e parÃmetros espermÃticos. As proteÃnas afetadas pelo calor estÃo potencialmente envolvidas em diversos eventos, como proteÃÃo espermÃtica, maturaÃÃo e fertilizaÃÃo.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Atualmente à crescente o nÃmero de estudos com base na alteraÃÃo de perfis glicoproteÃmicos em diversas doenÃas, principalmente na busca de biomarcadores sÃricos para o cÃncer. A identificaÃÃo e quantificaÃÃo direta, de glicoproteÃnas sorolÃgicas pouco abundantes, sÃo difÃceis, pois proteÃnas muito abundantes no sangue podem dificultar a identificaÃÃo. Assim, ferramentas de fracionamento sÃo necessÃrias para isolar, eficientemente, glicoformas proteicas aberrantes no proteoma sanguÃneo. Tendo em vista a interaÃÃo especÃfica e reversÃvel de lectinas com glicoconjugados, o uso de lectinas imobilizadas em matriz cromatogrÃfica tem sido frequente, visando fracionar misturas complexas, envolvendo glicoproteÃnas, para posterior anÃlise por espectrometria de massas. Mediante este contexto, o objetivo do presente trabalho foi investigar o uso da lectina glucose/ manose ligante de sementes de Dioclea altÃssima (DaL) imobilizada em matriz cromatogrÃfica Sepharose 4B (DaL-Sepharose), no fracionamento de glicoproteÃnas sÃricas e na pesquisa de potenciais biomarcadores para o cÃncer de prÃstata (CaP). As glicoproteÃnas da fraÃÃo retida, obtidas pela cromatografia do soro sanguÃneo na matriz de DaL-Sepharose, foram identificadas e quantificadas, por espectrometria de massas, e assim, foi obtido o perfil proteico para os trÃs grupos estudados: controle, hiperplasia prostÃtica benigna e CaP. A identificaÃÃo das proteÃnas diferentemente expressas entre os grupos revelou 132 glicoproteÃnas, destas, 29 foram unicamente identificadas no grupo com cÃncer de prÃstata ou apresentaram uma razÃo de ln maior que 1,2, quando comparado à quantificaÃÃo no grupo controle. ApÃs uma anÃlise considerando a confiabilidade da identificaÃÃo, estimada pelo escore, e as evidencias na literatura que justifiquem um possÃvel envolvimento da proteÃna no cÃncer de prÃstata, destacaram-se: alfa-1-glicoproteÃna Ãcida, trombospondin-5, complemento C4 A, heptaglobina, pregnancy zone protein, isoforma 3 de alfa-1-antitripsina, alfa-2-glicoproteÃna rica em leucina e Zinc finger protein. A anÃlise do soro sanguÃneo fracionado pela matriz DaL-Sepharose, com prÃvia depleÃÃo de Albumina sÃrica humana e IgG, permitiu a identificaÃÃo de alfa-1-antitripsina e a proteÃna IGK âÃnicasâ no grupo com CaP e a pregnancy zone protein e a proteÃna like alfa 1 mieloma up reguladas no CaP quando comparadas ao grupo controle. A identificaÃÃo destas glicoproteÃnas gera novas perspectivas e servem de indicativo para nortear a pesquisa e desenvolvimento de mÃtodos de validaÃÃo destes resultados para usos clÃnicos. / Nowadays there are an increase number of studies based on the change of glycoproteomics profiles in several diseases, especially in the search for serum biomarkers for cancer. The direct identification and quantification of serum glycoprotein of low abundance are difficult, because proteins very abundance in the blood can difficult the identification. Thus, fractionation tools are necessary to isolate efficiently changed protein glycoforms on the blood proteome. Given the specific and reversible interaction of lectins to glycoconjugates, the use of immobilized lectins on chromatographic matrix has been frequent in order to fractionate complex mixtures, involving glycoprotein for analysis for mass spectrometry. In this context, the goal of this work was to investigate the use of binding glucose/ mannose lectin from Dioclea altÃssima seed (DaL) immobilized on Sepharose chromatography matrix 4B (DaL-Sepharose), on the fractionation of serum glycoproteins and research of potential biomarkers for prostate cancer (PC). Glycoproteins from the retained fraction obtained by chromatography of blood serum on DaL-Sepharose matrix were identified and quantified by mass spectrometry and it was obtained the protein profile to the three groups: control, benign prostatic hyperplasia and PC. The identification of differentially expressed proteins between the groups showed 132 glycoproteins, in which 29 were only identified on the group with prostate cancer or showed one reason of ln greater than 1.2 when compared to quantification on control group. After an analysis, considering the confiability of the identification, estimated by score, and the evidences on the literature that justified a possible involvement of the protein on prostate cancer, stood out: alpha-1-acid glycoprotein, thrombospondin-5 complement C4 A, haptoglobin, pregnancy zone protein, isoform 3 of alpha 1-antitrypsin, alpha-2 glycoprotein rich in leucine and Zinc finger protein. The analysis of fractionated bood serum by DaL-Sepharose matrix with prior depletion of Human Serum Albumin and IgG allowed the identification of alpha 1-antitrypsin and the IGK protein âonlyâ on the group with CaP and the pregnancy zone protein and protein like alfa-1 mieloma up regulated on CaP when compared to the control group. The identification of these glycoproteins generates new perspectives and suit as indicative for guiding research and validation methods development of these results for clinical uses.

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Dentre os vÃrios microrganismos entomopatogÃnicos utilizados no controle biolÃgico, o Bacillus thuringiensis (Bt) vem sendo considerado uma das alternativas mais viÃveis, devido à presenÃa de proteÃnas inseticidas em seus esporos, como as &#948;-endotoxinas Cry. As toxinas Cry apresentam atividade contra diferentes ordens de insetos, como Coleoptera, Diptera, Hymenoptera, Hemiptera e Lepidoptera. Tais proteÃnas sÃo altamente especÃficas, ou seja, sÃo inÃcuas para a maioria dos organismos nÃo-alvo, fato que favorece sua utilizaÃÃo na agricultura. Hoje existem mais de 114 milhÃes de hectares de lavouras geneticamente modificadas e 37% expressam traÃos de proteÃnas inseticidas de Bt. Como os organismos geneticamente modificados (OGMs) estÃo se tornando cada vez mais predominantes, vÃrias organizaÃÃes internacionais tÃm dado orientaÃÃes no sentido de investigar a seguranÃa de alimentos provenientes de OGMs. Este trabalho teve como objetivo utilizar uma abordagem toxicoproteÃmica para anÃlise de risco da proteÃna recombinante Cry1Ac de Bt a fim de contribuir para uma maior compreensÃo de seus efeitos em modelo de mamÃferos. O ensaio de toxicidade foi conduzido de acordo com o protocolo 425 da âOrganizaÃÃo para a CooperaÃÃo e Desenvolvimento EconÃmicoâ - OECD e nÃo foram verificadas mortes ou sinais de toxicidade. As anÃlises proteÃmicas baseadas em gel mostraram 4 proteÃnas diferencialmente expressas Serpina &#945;-1, Serpina A3K, CininogÃnio e Complemento C3. Essas proteÃnas tiveram uma reduÃÃo em sua expressÃo no grupo tratado com a toxina Cry1Ac. Na abordagem âgel-freeâ foram identificadas 7 proteÃnas diferencialmente expressas. Dentre elas, fator I, inibidor de tripsina H3, plasminogÃnio, serpina A6, albumina e proteÃna resistente à oxidaÃÃo apresentaram uma expressÃo maior em animais tratados com Cry1Ac, enquanto que a protrombina teve sua expressÃo reduzida em animais tratados com a mesma proteÃna. Tais molÃculas sÃo importantes para hemostasia e sistema imune, podendo interferir no processo inflamatÃrio, na ativaÃÃo da via do complemento e da cascata de coagulaÃÃo. No entanto, a abordagem toxicoproteÃmica adotada mostra-se Ãtil para a identificaÃÃo de efeitos adversos, atà mesmo de uma jà amplamente conhecida por sua baixa toxicidade. Isso encoraja a utilizaÃÃo da referida abordagem para a avaliaÃÃo de risco de proteÃnas recombinantes. Apesar das alteraÃÃes fisiolÃgicas causadas, a proteÃna Cry1Ac ainda à considerada segura jà que tais alteraÃÃes ocorreram na dose mais alta recomenda pela OECD (2000mg/Kg) e sem causar morte dos animais. / Among the various pathogenic bacteria used in biological control, Bacillus thuringiensis has been considered one of the most viable alternatives, due to the presence of insecticidal proteins in their spores, such as the &#948;-endotoxin, Cry. The Cry toxins exhibit activity against different insect orders, such as Coleoptera, Diptera, Hymenoptera, Hemiptera and Lepidoptera. Such proteins are highly specific, which means, they are harmless to most organisms. This fact justifies their use in agriculture. Nowadays, there are over 114 million hectares of GM crops and 37% express traits of insecticidal proteins of B. thuringiensis. Since genetically modified organisms (GMOs) are becoming increasingly prevalent, several international organizations have given guidelines to investigate the safety of food derived from GMOs. This work aimed to evaluate the acute toxicity of the entomotoxin Cry1Ac in rats through classical in vivo analyzes associated with proteomic study by two-dimensional electrophoresis and shotgum proteomic technique (gel-free). Toxicity tests were conducted according to the protocol of 425 "Organization of Economic Cooperation and Development" - OECD and no deaths or signs of toxicity were observed. The gel-based proteomic analysis showed four differentially expressed proteins: Serpin &#945;-1, Serpin A3K, Kininogen and Complement C3. These proteins expressions were reduced for the group treated with the Cry1Ac toxin. In gel-free approach, seven differentially expressed proteins were identified. Among them, factor I, H3 trypsin inhibitor, plasminogen, serpin A6, albumin, and protein resistant to oxidation showed a higher expression in animals treated with Cry1Ac, while the prothrombin expression was reduced in animals treated with the same protein. Such molecules are important for hemostasis and immune system, and may interfere with the inflammatory process, activation of the complement pathway and the coagulation cascade. Despite the physiological changes caused by Cry1Ac, this protein is still considered safe since these changes occurred at the highest dose recommended by OECD (2000 mg / kg) and without causing death of the animals.

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O presente estudo foi realizado com o objetivo de identificar o perfil das principais proteÃnas do plasma seminal suÃno e suas associaÃÃes com parÃmetros seminais. Amostras de sÃmen foram coletadas de 12 cachaÃos adultos e submetidas à avaliaÃÃo dos parÃmetros seminais (motilidade total, morfologia, vitalidade e porcentagem de cÃlulas com acrossoma intacto). O plasma seminal foi obtido por centrifugaÃÃo e as proteÃnas seminais foram analisadas por eletroforese 2-D e espectrometria de massa. Foram testados modelos de regressÃo usando a soma das intensidades dos spots referentes Ãs mesmas proteÃnas como variÃveis independentes e parÃmetros seminais como variÃveis dependentes (p < 0,05). Cento e doze spots foram identificados nos gÃis do plasma seminal, equivalentes a 39 proteÃnas diferentes. As espermadesinas PSP-I, PSP-II, AQN1, AQN3 e AWN1 representaram 45,2  8 % do total da intensidade de todos os spots detectados nos geis. Outras proteÃnas expressas no plasma seminal suÃno incluem a albumina, proteÃnas do complemento (complement factor H precursor, complement C3 precursor e adipsin/complement factor D), imunoglobulinas (IgG heavy chain precursor, imunoglobulina delta heavy chain membrane bound form, imunoglobulina gamma-chain, Ig lambda chain V-C region PLC3 e CH4 and secreted domain of swine IgM), IgG-binding proteins, epididymal specific lipocalin-5, epididymal secretory protein E1 precursor, epididymal glutathione peroxidase precursor, transferrin, lactotransferrin e fibronectin tipo 1 (FN1). Em funÃÃo das anÃlises de regressÃo, o percentual de espermatozoides com defeito na peÃa intermediÃria foi relacionado com a quantidade de âCH4 and secreted domain of swine IgMâ e FN1 (R2 = 0,58), a proteÃna IgG-binding (R2 = 0,61), o fator H do complemento (R2 = 0,61) e lactaderina (R2 = 0,45). Porcentagem percentual de defeitos de cauda tambÃm foi relacionado com âCH4 and secreted domain of swine IgMâ e FN1 (R2 =0,40), a proteÃna IgG-binding (R2 = 0,34), e lactaderina (R2 = 0,74). A motilidade espermÃtica, por sua vez, teve associaÃÃo com a intensidade dos spots identificados como lactaderina (R2 = 0,48). Em conclusÃo, descreve-se, neste trabalho, o proteoma do plasma seminal suÃno e associaÃÃes significativas entre proteÃnas especÃficas do plasma seminal e parÃmetros seminais. Tais relaÃÃes servirÃo como base para a determinaÃÃo de marcadores moleculares da funÃÃo espermÃtica na espÃcie suÃna. / The present study was conducted to identify the major seminal plasma protein profile of boars and its associations with semen criteria. Semen samples were collected from 12 adult boars and subjected to evaluation of sperm parameters (motility, morphology, vitality and percent of cells with intact acrosome). Seminal plasma was obtained by centrifugation, analyzed by 2-D SDS-PAGE and proteins identified by mass spectrometry (electrospray ionization quadrupole-time-of-flight). We tested regression models using spot intensities related to the same proteins as independent variables and semen parameters as dependent variables (p < 0,05). One hundred and twelve spots were indentified in the boar seminal plasma gels, equivalent to 39 different proteins. Spermadhesins PSP-I, PSP-II, AQN1, AQN3 and AWN1 represented 45,2  8 % of the total intensity of all spots. Other proteins expressed in the boar seminal plasma include albumin, complement proteins (complement factor H precursor, complement C3 precursor and adipsin/complement factor D), immunoglobulins (IgG heavy chain precursor, immunoglobulin delta heavy chain membrane bound form, immunoglobulin gamma-chain, Ig lambda chain V-C region PLC3 and CH4 and secreted domain of swine IgM), IgG-binding proteins, epididymal specific lipocalin-5, epididymal secretory protein E1 precursor, epididymal secretory glutathione peroxidase precursor, transferrin, lactotransferrin and fibronectin type 1 (FN1). Based on regression analysis, the percentage of sperm with midpiece defects was related to the amount of CH4 and secreted domains of swine IgM and FN1 (R = 0,58), IgG-binding protein (R = 0,61), complement factor H precursor (R = 0,61) and lactadherin (R = 0.45). The percentage of sperm with tail defects was also related to CH4 and secreted domains of swine IgM and FN1 (R = 0,40), IgG-binding protein (R = 0,34) and lactadherin (R = 0,74). Sperm motility, in turn, had association with the intensities of spots identified as lactadherin (R = 0,48). In conclusion, we presently describe the major proteome of boar seminal plasma and significant associations between specific seminal plasma proteins and semen parameters. Such relationships will serve as the basis for determination of molecular markers of sperm function in the swine species.