Orientador: Sergio Roberto Peres Line / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-12T22:28:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Saito_CristianePereiraBorges_D.pdf: 2404829 bytes, checksum: ef69d02f749dac4b0974b53ad416de6d (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: O gene PAX9 é um regulador chave durante o processo de desenvolvimento dentário e, particularmente em humanos, mutações neste gene estão associadas a fenótipos peculiares como agenesias dentárias. O objetivo deste estudo foi descobrir novas coordenadas acerca da atividade transcricional do promotor desse gene e de um possível padrão de metilação. Quanto ao estudo da metilação, foram avaliadas amostras de DNA genômico extraído da papila dentária de embriões humanos através de enzimas de restrição sensíveis à metilação e através da amplificação por Reação da Polimerase em Cadeia-PCR com oligos específicos. A extração de DNA de amostras incluídas em parafina foi padronizada no laboratório de Morfologia da Faculdade de Odontologia de Piracicaba, FOP-UNICAMP. Amostras de DNA extraídas de saliva humana foram usadas como controle. Para os ensaios de transcrição, foram amplificados através de ensaios com a transcriptase reversa, transcritos do gene Pax9 de Células Embrionárias de Rato, bem como de Células Odontoblastóides de Camundongo- MDPC-23 (Mouse Odontoblast Cell-like-23). Esses transcritos foram quantificados através de PCR semi-quantitativa. A região promotora do gene PAX9 humano íntegra (-947 - +251) e deletada (-485 - +22), recombinada com o vetor de expressão pGL3Basic, contendo o gene repórter luciferase após a região promotora, foi transfectada em cultura de Células Embrionárias de Rato. Todas as placas de cultura foram submetidas à ação de duas drogas: Ácido Retinóico (AR) e Dexametasona (Dex). Após a lise das células, os níveis relativos de expressão da proteína luciferase foram analisados, utilizando o kit Dual-Glo Luciferase (Promega), em um luminômetro. Os resultados mostram que: (1) O gene PAX9 encontra-se metilado in vitro; (2) O AR inibiu a síntese de RNA mensageiro transcrito pelas Células Embrionárias Rato. O promotor do gene humano PAX9 clivado nos sítios -485 e +22 e que não continha 507pb não foi afetado pelos receptores do AR. O Promotor PAX9 íntegro foi ativado na presença do AR na maior concentração da droga ; (3) A Dex estimulou a transcrição do gene Pax9 no grupo de células MDPC-23 e influenciou positivamente ambas as versões do promotor do gene PAX9 com as concentrações: 0.1µM e 1nM. Esses resultados demonstraram que os receptores dos hormônios esteróides AR e Dex podem se ligar diretamente a sequências do gene Pax9 em ratos e camundongos e que a região contendo 507pb retirada do promotor do gene PAX9 humano pode conter sítios de ligação para receptores do AR. Além disso, o sítio de metilação encontrado na região promotora do gene PAX9 humano resultou em novas perspectivas acerca do seu padrão de funcionamento em células normais. / Abstract: PAX9 is a key regulator during tooth development and plays an essential role in the patterning of murine and human dentition. In humans, mutations in PAX9 are associated with unique phenotypes of familial tooth agenesis that mainly involve posterior teeth. The objectives of this study were to gain new insights into the transcriptional activity and DNA methylation within the promoter region of human PAX9 gene in vitro. The methylation pattern was examined by studying PAX9 gene promoter in Dental Papilla of human Embryos through methylation-sensitive restriction enzyme and PCR amplified with specific oligos. DNA extractions from paraffin-embedded tissue sections were well established in Morphology Laboratory, Piracicaba Dental School. DNA samples from Buccal Epithelial Cells were used as control. In the present study, we have PCR amplified cDNAs encoding Rat Pax9 and Mouse Pax9 from Primary embryonic cell culture obtained from 13 day-old Wistar Rat and Mouse odontoblast cell-like culture-23 (MDPC-23) respectively and quantified by Semi-quantitative PCR technique. Furthermore, we examined the transcriptional activity of human Pax9 gene promoter: (-947 - +251) full Pax9 promoter and the promoter lacking 507bp (-485 - +22) through recombination into pGL3Basic expression vector and transfection in primary rat embryonic cells. Cell cultures were all submitted to selective regulation of both drugs: Retinoic Acid (RA) and Dexamethasone (Dex). Relative luciferase expression units were obtained by dual luciferase assay kit (Promega). Our results showed that: (1) human PAX9 promoter region is methylated in vitro; (2) RA inhibited Pax9 mRNA synthesis in Primary Rat embryonic cells while PAX9 promoter lacking 507bp (-485 - +22) was not activated by RA receptors. Human PAX9 full promoter activation was improved by RA treatment at the greater concentration; (3) Dex stimulated Pax9 mRNA activity in MDPC-23 and influenced positively both PAX9 promoter versions with 0.1µM and 1nM concentrations. The present experiments suggest that a 507bp region in PAX9 promoter may contain binding sites for RA receptors and that Dex and RA steroid hormone receptors may be directly bind to the sequences of murine Pax9 gene. The methylation pattern finding give rise to new perspectives on PAX9 patterning in normal cells phisiology. / Doutorado / Histologia e Embriologia / Doutor em Biologia Buco-Dental

This thesis deals with the evaluation of economic risk at a construction point of view of the contractor. The thesis described distribution of risks,identification and risk assessment.The practical part describes and evaluates financial risks specific construction contracts and proposes measures to offset risks.

A titânia (TiO2) é um material amplamente estudado devido ao seu baixo teor de toxicidade, alta disponibilidade e por apresentar propriedades que permitem ser utilizado em uma variedade de aplicações fotocatalíticas. Sua atividade fotocatalítica frente à degradação de poluentes orgânicos, por exemplo, pode ser melhorada quando se prepara uma mistura de fases desse material, como o TiO2 P-25 apresenta. Entretanto, seu elevado valor de band gap lhe permite ser utilizado apenas quando incidido com radiação eletromagnética de alta energia (&#955;< 390 nm). O presente trabalho demonstra que quando TiO2 P-25 é sintetizado em forma de filmes mesoporosos, seu band gap é reduzido e passa a apresentar atividade fotocatalítica sob incidência de luz visível. Essa redução é atribuída ao tratamento térmico que é aplicado no processo de preparo do material. Para comprovar sua atividade na ausência de radiação UV, um estudo foi conduzido a partir da análise da taxa de fotodegradação das moléculas 2-naftol, alaranjado de metila e 2,4,6-trimercapto- 1,3,5-triazina por espectrometria de massas utilizando o composto hexafluorofosfato de amônio como padrão interno. A metodologia desenvolvida pode também ser aplicada para conduzir outros ensaios semi-quantitativos por espectrometria de massas. Foi observado que os filmes de TiO2 promovem fodo-oxidação de 2-naftol sob incidência de luz visível e na presença de gás oxigênio após 6 horas de reação. A fotodegradação do alaranjado de metila e do 2,4,6-trimercapto-1,3,5-triazina também foi confirmada, entretanto em uma taxa mais lenta. O processo também foi observado pela identificação de um subproduto da foto-oxidação do alaranjado de metila no espectro de massas e a partir do decaimento do seu pico de absorção em 468 nm por espectrofotometria no UV-Vis. Foi observado também que a titânia pode ter sua atividade fotocatalítica reduzida ao elevar o pH do meio. Além disso, foram produzidos filmes de titânia modificados com nanopartículas de ouro a partir da utilização de ácido tioglicólico como mediador e por drop casting. Os dois métodosformaram filmes homogêneos de nanopartículas de ouro sobre o TiO2, e estes foram utilizados nos ensaios fotocatalíticos. Entretanto, a presença do metal prejudicou a eficiência fotocatalítica da titânia inibindo sua atividade quando excitada com luz visível. Dessa forma, filmes puros de TiO2 P-25, além de ativos sob incidência de uma faixa espectral mais ampla da radiação solar, apresentam a vantagem de funcionarem como catalisadores heterogêneos de reações de fotodegradação de moléculas orgânicas podendo ser facilmente removidos do meio reacional ao final do processo. / Titania (TiO2) is a widely studied material due to its low toxicity, high availability and to have properties that allow it to be used in a variety of photocatalytic applications. Its photocatalytic activity against the degradation of organic contaminants, for instance, can be even improved when preparing a mixture of phases of this material, as TiO2 P- 25 presents. However, its high band gap allows it to be used only when affected by high energy electromagnetic radiation (&#955;< 390 nm). The present work demonstrates that when TiO2 P-25 is synthesized in the form of mesoporous films, its band gap is reduced, and it starts to present photocatalytic activity under visible light. This reduction is attributed to the heat treatment that is applied during the preparation process of the material. In order to verify its activity in the absence of UV radiation, a study was conducted based on the analysis of the photodegradation rate of 2-naphthol, methyl orange and 2,4,6-trimercapto-1,3,5-triazine molecules by mass spectrometry using the compound ammonium hexafluorophosphate as an internal standard. The developed methodology can also be applied to conduct other semiquantitative assays via mass spectrometry. It was observed that TiO2 films induced 2-naphthol photooxidation under visible light and in the presence of oxygen gas after 6 hours of reaction. Photodegradation of methyl orange and 2,4,6-trimercapto-1,3,5-triazine was also confirmed, yet at a slower rate. The process was also observed by the identification of a methyl orange photooxidation by-product in the mass spectrum and from the decay of its absorption peak at 468 nm by UV-Vis spectrophotometry. It was also observed that titania may have its photocatalytic activity reduced by raising the pH of the medium. Furthermore, it was also produced titania films modified with gold nanoparticles through use of thioglycolic acid as a mediator and by drop casting method. Both techniques formed homogeneous films of gold nanoparticles over TiO2, and their photocatalytic activity were also evaluated. Nevertheless, the presence of the metal impaired the photocatalytic efficiency of titania by inhibiting its activity when excited by visible light. All in all, pure TiO2 P-25 films work under incidence of a wider range of the solar spectrum and has also the advantage of functioning as heterogeneous catalysts for photodegradation reactions of organic molecules and can be easily removed from the reaction medium at the end of the process.

A titânia (TiO2) é um material amplamente estudado devido ao seu baixo teor de toxicidade, alta disponibilidade e por apresentar propriedades que permitem ser utilizado em uma variedade de aplicações fotocatalíticas. Sua atividade fotocatalítica frente à degradação de poluentes orgânicos, por exemplo, pode ser melhorada quando se prepara uma mistura de fases desse material, como o TiO2 P-25 apresenta. Entretanto, seu elevado valor de band gap lhe permite ser utilizado apenas quando incidido com radiação eletromagnética de alta energia (&#955;< 390 nm). O presente trabalho demonstra que quando TiO2 P-25 é sintetizado em forma de filmes mesoporosos, seu band gap é reduzido e passa a apresentar atividade fotocatalítica sob incidência de luz visível. Essa redução é atribuída ao tratamento térmico que é aplicado no processo de preparo do material. Para comprovar sua atividade na ausência de radiação UV, um estudo foi conduzido a partir da análise da taxa de fotodegradação das moléculas 2-naftol, alaranjado de metila e 2,4,6-trimercapto- 1,3,5-triazina por espectrometria de massas utilizando o composto hexafluorofosfato de amônio como padrão interno. A metodologia desenvolvida pode também ser aplicada para conduzir outros ensaios semi-quantitativos por espectrometria de massas. Foi observado que os filmes de TiO2 promovem fodo-oxidação de 2-naftol sob incidência de luz visível e na presença de gás oxigênio após 6 horas de reação. A fotodegradação do alaranjado de metila e do 2,4,6-trimercapto-1,3,5-triazina também foi confirmada, entretanto em uma taxa mais lenta. O processo também foi observado pela identificação de um subproduto da foto-oxidação do alaranjado de metila no espectro de massas e a partir do decaimento do seu pico de absorção em 468 nm por espectrofotometria no UV-Vis. Foi observado também que a titânia pode ter sua atividade fotocatalítica reduzida ao elevar o pH do meio. Além disso, foram produzidos filmes de titânia modificados com nanopartículas de ouro a partir da utilização de ácido tioglicólico como mediador e por drop casting. Os dois métodosformaram filmes homogêneos de nanopartículas de ouro sobre o TiO2, e estes foram utilizados nos ensaios fotocatalíticos. Entretanto, a presença do metal prejudicou a eficiência fotocatalítica da titânia inibindo sua atividade quando excitada com luz visível. Dessa forma, filmes puros de TiO2 P-25, além de ativos sob incidência de uma faixa espectral mais ampla da radiação solar, apresentam a vantagem de funcionarem como catalisadores heterogêneos de reações de fotodegradação de moléculas orgânicas podendo ser facilmente removidos do meio reacional ao final do processo. / Titania (TiO2) is a widely studied material due to its low toxicity, high availability and to have properties that allow it to be used in a variety of photocatalytic applications. Its photocatalytic activity against the degradation of organic contaminants, for instance, can be even improved when preparing a mixture of phases of this material, as TiO2 P- 25 presents. However, its high band gap allows it to be used only when affected by high energy electromagnetic radiation (&#955;< 390 nm). The present work demonstrates that when TiO2 P-25 is synthesized in the form of mesoporous films, its band gap is reduced, and it starts to present photocatalytic activity under visible light. This reduction is attributed to the heat treatment that is applied during the preparation process of the material. In order to verify its activity in the absence of UV radiation, a study was conducted based on the analysis of the photodegradation rate of 2-naphthol, methyl orange and 2,4,6-trimercapto-1,3,5-triazine molecules by mass spectrometry using the compound ammonium hexafluorophosphate as an internal standard. The developed methodology can also be applied to conduct other semiquantitative assays via mass spectrometry. It was observed that TiO2 films induced 2-naphthol photooxidation under visible light and in the presence of oxygen gas after 6 hours of reaction. Photodegradation of methyl orange and 2,4,6-trimercapto-1,3,5-triazine was also confirmed, yet at a slower rate. The process was also observed by the identification of a methyl orange photooxidation by-product in the mass spectrum and from the decay of its absorption peak at 468 nm by UV-Vis spectrophotometry. It was also observed that titania may have its photocatalytic activity reduced by raising the pH of the medium. Furthermore, it was also produced titania films modified with gold nanoparticles through use of thioglycolic acid as a mediator and by drop casting method. Both techniques formed homogeneous films of gold nanoparticles over TiO2, and their photocatalytic activity were also evaluated. Nevertheless, the presence of the metal impaired the photocatalytic efficiency of titania by inhibiting its activity when excited by visible light. All in all, pure TiO2 P-25 films work under incidence of a wider range of the solar spectrum and has also the advantage of functioning as heterogeneous catalysts for photodegradation reactions of organic molecules and can be easily removed from the reaction medium at the end of the process.

Prostate carcinoma is considered to be one of the main medical problem in male population. Prostate carcinoma is the most frequently diagnosed malignancy in men and the death rate has the second position within all diagnosed malignancies in Czech Republic (ÚZIS). There is only one reliable diagnostic tool: PSA (prostate specific antigen). Level of PSA is often elevated in men with prostate carcinoma. This diploma thesis is focused on study of changes in gene expression in prostate carcinoma. Three candidate genes were analyzed: VCL (vinculin), SHB (Src homology 2 binding protein) and OCT3 (organic cation transporter 3). According to recent publications, these genes are related to tumor progression and they could have prognostic significance. In this thesis the following methodological approaches were used: 82 prostatic specimens were collected from patients and mRNA was isolated from these specimens; then RT-PCR was used to obtain cDNA, fragments were detected by electrophoresis. At the end statistical methods were used for evaluation. Relative expression of the genes in prostate carcinoma tissue was compared to relative expression of the genes in BPH (benign prostatic neoplasia) tissue. Results showed higher expression of genes SHB and OCT3 in prostate carcinoma tissue in compariscon to BPH...

4 Abstract Prostate cancer is one of the major medical problems within the male population in the Czech Republic and in the world. It is on second place among cancer illnesses with respect to mortality in czech male population. Its incidence strongly increases with age. Prostate cells have a unique ability to accumulate zinc in high concentrations compared to other tissues of human body. It is necessary for the proper physiological function of the prostate. There was detected loss of this accumulation ability in prostate cancer cells, which seems to be a condition to carcinogenesis in prostate cells. In this thesis was investigated the expression of four genes involved in the maintenance of homeostasis of zinc in prostate cells. Genes ZIP1 and ZIP7 encode zinc transporters, genes MT1-F and MT2 encode metallothioneins. There was collected 90 biopsy specimens from patients with prostate cancer or with benign prostatic hyperplasia. mRNA was isolated from these samples, cDNA was obtained by RT-PCR. This cDNA was detected by gel electrophoresis and the results were statistically evaluated. Several correlations was found between gene expression and the clinical data of patients. The most important result, there was found lower levels of expression of genes MT1- F and ZIP1 in samples of patients with cancer...

Introdução - A quantidade de flúor ingerida, proveniente de todas as fontes, durante o período crítico de formação dos dentes, é o principal fator de risco para a fluorose dentária. Dentre estas fontes estão a água fluoretada, o dentifrício fluoretado e os alimentos, bebidas, fórmulas e suplementos infantis. Considerando-se que a fluorose dentária tem aumentado em todas as regiões é importante avaliar, além da água e do dentifrício, também a contribuição diária do consumo alimentar das crianças e a concentração de flúor nesses itens alimentares para a ingestão de flúor. Objetivo - Descrever o consumo alimentar de crianças de 2 a 6 anos, com relação ao flúor. Métodos - Foram avaliadas 379 crianças, de 2 a 6 anos, faixa etária de risco para fluorose, residentes em Bauru - São Paulo, município com fluoretação artificial da água de abastecimento público. A amostragem foi estratificada por setor, baseando-se no Plano Diretor do Município. O consumo alimentar foi avaliado pelo Questionário de Freqüência Alimentar Semiquantitativo, aplicado aos pais ou responsáveis, e a concentração de flúor nos itens alimentares a partir de análises laboratoriais. As crianças foram classificadas quanto à ingestão diária de f1úor de acordo com a Dietary Reference Intakes. Resultados - Dentre os 70 itens alimentares, o arroz, a água de abastecimento público e o leite foram os mais consumidos; o chá preto, o leite em pó de soja diluído com água de abastecimento público e o biscoito Danyt\'s® apresentaram maior concentração de flúor; a água de abastecimento público, o refrigerante Coca-Cola® e a batata frita representaram maior contribuição diária para ingestão de flúor. Os itens alimentares mais consumidos apresentaram, em média (±DP), concentração de flúor (0,015 ± 0,028 mgF/porção) significantemente menor (p = 0,03) que os menos consumidos (0,107 ± 0,162 mgF/porção). Os itens alimentares com maior concentração de flúor contribuíram significantemente (p < 0,001) para a ingestão do halogênio (0,018 ± 0,037 mgF/dia). A média da ingestão de flúor por meio dos alimentos sólidos e líquidos, da água e da escovação foi de 0,017 ± 0,016; 0,011 ± 0,004 e 0,036 ± 0,028 mgF/kg peso/dia, respectivamente, totalizando 0,064 ± 0,035 mgF/kg peso/dia. Das 379 crianças, 31,2% apresentaram risco de fluorose. O dentifrício e os itens alimentares (sólidos, água e outros líquidos) contribuíram com 57% e 43%, respectivamente, para a ingestão de flúor. Conclusão - O dentifrício foi a principal fonte para a ingestão de f1úor pelas crianças, porém, a concentração desse halogênio nos itens alimentares contribuiu significantemente para a ingestão, representando risco para f1uorose dentária. / The quantity of fluoride ingested, deriving from all sources, during the critical period of formation of the teeth, is the main factor of risk for the dental fluorosis. Among this sources, we have the fluoridated water, the fluoridated dentifrice and the food, drinks, chemical formula and the infant supplements. Taking into consideration that the dental fluorosis has increased in all regions, it is important to evaluate it, besides the water and the dentifrice, the daily contribution of children\'s food consumption and the concentration of fluoride in these food items for the ingestion of fluoride. Objective - Describe the food consumption of children from 2 to 6 years old, relationg to fluoride. Methods - 379 children were evaluated at risking ages for fluorosis, residents in Bauru - São Paulo, district with artificial f1uoridation. The sampling was stratified by sector, based on the Director\'s Plan of the District. The food intake was evaluated by the Food Frequency Semiquantitative Questionnaire, applied on parents or responsable one, and the concentration of fluoride on the food items from analyses in laboraties. The children were classified based on theis daily ingestion of fluoride according to the Dietary Reference Intakes. Results - Among the 70 food items, rice, public water supply and the milk were the most consumed ones; the black tea, the soybean powdered milk diluted in public water and the biscuit Danyt\'s® presented the gratest daily contribution for the ingestion of fluoride. The most consumed food items present, in average (± DP), concentration of fluoride (0,015 ± 0,028 mg F / portion), significantly lower (p = 0,03) that the less consumed (0,107 ± 0,162 mgF/portion). The food items with the greatest concentration of fluoride contributed significantly (p < 0,001) for the ingestion of the mineral (0,018 ± 0,037 mgF/day). The average amount of fluoride ingestion taken from the solid food and the liquid ones (except water) coming from the water and the teeth brushing was 0,017 ± 0,016; 0,011 ± 0,004 and 0,036 ± 0,028 mgF/kg weight/day, respectively, totalizing 0,064 ± 0,035 mgF/kg weight/dia. 31,2% of the 379 children presented risk of fluorosis. The dentifrice and the food items (solid, water and other liquids) contributed with 57% and 43%, respectively, for the ingestion of fluoride. Conclusion - The dentifrice was the main source for the ingestion of fluoride, by the children, however, the concentration of this mineral in food items contributed significantly for the ingestion by the children, representing risk for dental fluorosis.

Introdução - A quantidade de flúor ingerida, proveniente de todas as fontes, durante o período crítico de formação dos dentes, é o principal fator de risco para a fluorose dentária. Dentre estas fontes estão a água fluoretada, o dentifrício fluoretado e os alimentos, bebidas, fórmulas e suplementos infantis. Considerando-se que a fluorose dentária tem aumentado em todas as regiões é importante avaliar, além da água e do dentifrício, também a contribuição diária do consumo alimentar das crianças e a concentração de flúor nesses itens alimentares para a ingestão de flúor. Objetivo - Descrever o consumo alimentar de crianças de 2 a 6 anos, com relação ao flúor. Métodos - Foram avaliadas 379 crianças, de 2 a 6 anos, faixa etária de risco para fluorose, residentes em Bauru - São Paulo, município com fluoretação artificial da água de abastecimento público. A amostragem foi estratificada por setor, baseando-se no Plano Diretor do Município. O consumo alimentar foi avaliado pelo Questionário de Freqüência Alimentar Semiquantitativo, aplicado aos pais ou responsáveis, e a concentração de flúor nos itens alimentares a partir de análises laboratoriais. As crianças foram classificadas quanto à ingestão diária de f1úor de acordo com a Dietary Reference Intakes. Resultados - Dentre os 70 itens alimentares, o arroz, a água de abastecimento público e o leite foram os mais consumidos; o chá preto, o leite em pó de soja diluído com água de abastecimento público e o biscoito Danyt\'s® apresentaram maior concentração de flúor; a água de abastecimento público, o refrigerante Coca-Cola® e a batata frita representaram maior contribuição diária para ingestão de flúor. Os itens alimentares mais consumidos apresentaram, em média (±DP), concentração de flúor (0,015 ± 0,028 mgF/porção) significantemente menor (p = 0,03) que os menos consumidos (0,107 ± 0,162 mgF/porção). Os itens alimentares com maior concentração de flúor contribuíram significantemente (p < 0,001) para a ingestão do halogênio (0,018 ± 0,037 mgF/dia). A média da ingestão de flúor por meio dos alimentos sólidos e líquidos, da água e da escovação foi de 0,017 ± 0,016; 0,011 ± 0,004 e 0,036 ± 0,028 mgF/kg peso/dia, respectivamente, totalizando 0,064 ± 0,035 mgF/kg peso/dia. Das 379 crianças, 31,2% apresentaram risco de fluorose. O dentifrício e os itens alimentares (sólidos, água e outros líquidos) contribuíram com 57% e 43%, respectivamente, para a ingestão de flúor. Conclusão - O dentifrício foi a principal fonte para a ingestão de f1úor pelas crianças, porém, a concentração desse halogênio nos itens alimentares contribuiu significantemente para a ingestão, representando risco para f1uorose dentária. / The quantity of fluoride ingested, deriving from all sources, during the critical period of formation of the teeth, is the main factor of risk for the dental fluorosis. Among this sources, we have the fluoridated water, the fluoridated dentifrice and the food, drinks, chemical formula and the infant supplements. Taking into consideration that the dental fluorosis has increased in all regions, it is important to evaluate it, besides the water and the dentifrice, the daily contribution of children\'s food consumption and the concentration of fluoride in these food items for the ingestion of fluoride. Objective - Describe the food consumption of children from 2 to 6 years old, relationg to fluoride. Methods - 379 children were evaluated at risking ages for fluorosis, residents in Bauru - São Paulo, district with artificial f1uoridation. The sampling was stratified by sector, based on the Director\'s Plan of the District. The food intake was evaluated by the Food Frequency Semiquantitative Questionnaire, applied on parents or responsable one, and the concentration of fluoride on the food items from analyses in laboraties. The children were classified based on theis daily ingestion of fluoride according to the Dietary Reference Intakes. Results - Among the 70 food items, rice, public water supply and the milk were the most consumed ones; the black tea, the soybean powdered milk diluted in public water and the biscuit Danyt\'s® presented the gratest daily contribution for the ingestion of fluoride. The most consumed food items present, in average (± DP), concentration of fluoride (0,015 ± 0,028 mg F / portion), significantly lower (p = 0,03) that the less consumed (0,107 ± 0,162 mgF/portion). The food items with the greatest concentration of fluoride contributed significantly (p < 0,001) for the ingestion of the mineral (0,018 ± 0,037 mgF/day). The average amount of fluoride ingestion taken from the solid food and the liquid ones (except water) coming from the water and the teeth brushing was 0,017 ± 0,016; 0,011 ± 0,004 and 0,036 ± 0,028 mgF/kg weight/day, respectively, totalizing 0,064 ± 0,035 mgF/kg weight/dia. 31,2% of the 379 children presented risk of fluorosis. The dentifrice and the food items (solid, water and other liquids) contributed with 57% and 43%, respectively, for the ingestion of fluoride. Conclusion - The dentifrice was the main source for the ingestion of fluoride, by the children, however, the concentration of this mineral in food items contributed significantly for the ingestion by the children, representing risk for dental fluorosis.

Die Systematische Toxikologische Analyse (STA) stellt auf Grund der großen Vielfalt und der ständigen Zunahme an toxikologisch relevanten Substanzen eine der größten Herausforderungen in der chemischen Analyse dar. In der vorliegenden Arbeit wurde daher die Eignung der Flüssigchromatographie in Kombination mit der Hybrid-Quadrupol-Flugzeitmassenspektrometrie (LC-QTOF-MS) für diesen Zweck untersucht. Dazu wurden eine Datenbank mit über 7360 und eine CID-Spektrenbibliothek mit mehr als 2720 toxikologisch relevanten Substanzen erstellt und geeignete Probenvorbereitungsmethoden entwickelt. Die Erprobung der Methoden erfolgte an dotierten Blut- und Haarproben. Hierbei zeigte sich, dass die Analyse im Auto-MS/MS-Modus (Messzyklen von MS- und MS/MS-Spektren) eine Identifizierung basischer Substanzen mittels CID-Spektren zwischen 0,5 und 2 ng/ml im Blut ermöglichte. Die Nachweisgrenzen der für 24 Wirkstoffe validierten Methode in Haaren lagen bei 3 bis 15 pg/mg. Die Eignung der LC-QTOF-MS zur STA von Haarproben wurde an 30 Drogentodesfällen und 60 Todesfällen mit bekannter chronischer Medikamenteneinnahme zu Lebzeiten sowie an 77 Blutproben nachgewiesen. Für die Suche nach Metaboliten wurde ein Metaboliten-Tool entwickelt. In der praktischen Anwendung auf Datenfiles von Blut- und Haarproben erwies sich das Tool als wertvolles Hilfsmittel zur Identifizierung unbekannter Peaks und zur Bestätigung von Suchergebnissen in der Datenbank. Zur automatischen Konzentrationsabschätzung identifizierter Substanzen wurde ein Tool „Estimate Concentration“ geschaffen. Die Überprüfung des Verfahrens an realen Blut- und Haarproben durch Vergleich mit HPLC-DAD- und GC-MS-Ergebnissen wies eine gute Übereinstimmung der Konzentrationen auf. Insgesamt zeigten die Untersuchungen, dass die LC-QTOF-MS zurzeit die am besten geeignete Methode für die STA darstellt. Auch bei einem erst später aufkommenden Verdacht kann eine gezielte Suche in dem bereits gemessenen Datenfile durchgeführt werden. / Due to the large variety and the steady increase of toxicologically relevant substances, systematic toxicological analysis (STA) is one of the most difficult tasks in analytical chemistry and, therefore, a steady topic of research and methodical improvement. For this reason, the suitability of liquid chromatography in combination with hybrid quadrupole time-of-flight mass spectrometry (LC-QTOF-MS) for STA was investigated. For this purpose, a database of more than 7360 and a CID spectra library of more than 2720 toxicologically relevant substances and suitable methods for sample preparation were developed. The application was evaluated at spiked blood and hair samples. It was found that the analysis in Auto-MS/MS mode (alternating measurement cycles of MS and MS/MS spectra) allowed substance identification in blood using CID spectra between 0.5 and 2 ng/ml for basic substances. The detection limits of the validated method in hair ranged from 3 to 15 pg/mg for 24 drugs. The suitability of LC-QTOF-MS for STA was tested for hair samples from 30 drug-related death cases and from 60 death cases with known chronic medication as well as for 77 blood samples. For the search of metabolites, a metabolite tool was developed. In the practical application to data files from blood and hair samples, the tool proved to be very helpful for identification of unknown peaks and for confirmation of results obtained only from the database without CID spectra. A tool "Estimate Concentration" was created for automatic estimation of concentrations of identified substances. The application to real blood and hair samples and the comparison of the concentrations with results from HPLC-DAD and GC-MS showed good agreement. Overall, these investigations showed that LC-QTOF-MS is currently the most favorable method for STA. Because of the comprehensive registration of all substances in a sample, the data files can be checked for the presence of certain poisons even later without new measurements.