Orientador: Maricilda Palandi de Mello / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-25T05:17:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Guaragna_MaraSanches_D.pdf: 3317402 bytes, checksum: 18a0edd0d0e225eed7d57b65d9bea76b (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A Síndrome Nefrótica (SN) é a principal doença renal na infância, sendo caracterizada por proteinuria, edema, hipoalbuminuria e hiperlipidemia. Usualmente é classificada de acordo com a idade em que se apresenta em Congênita (SNC), quando se manifesta intraútero ou durante os primeiros três meses de vida, Infantil durante o primeiro ano de vida, na Infância, entre o primeiro ano até os 12 anos de idade e Juvenil, entre os 12 e os 18 anos de idade, aproximadamente. De acordo com a resposta ao tratamento com corticoesteróides os pacientes podem ser divididos em córtico-resistentes (CR), córtico-sensíveis (CS) ou córtico-sensíveis com recidiva frequente (CS,RF). Uma disfunção na barreira de filtração glomerular leva às manifestações clínicas decorrentes da síndrome, tais como proteinúria maciça na urina. Mutações em diversos genes vêm sendo correlacionadas com a SN em crianças. No entanto, os genes mais estudados e responsáveis pela maioria dos casos são os genes NPHS1, NPHS2 e WT1. Os objetivos deste trabalho foram identificar e verificar a distribuição de mutações nestes três genes em uma casuística brasileira com SN ou proteinúria isolada e avaliar cada alteração identificada utilizando diversas predições in silico, com o intuito de se esclarecer suas respectivas funções biológicas. Para isto foi realizada a análise molecular de 150 crianças e adolescentes, sendo três não aparentados com SNC e os demais 147 com SN Infantil, SN na infância, SN juvenil e proteinúria isolada, dos quais 134 eram não aparentados. Além destes 150 pacientes, também foram analisados os materiais de biópsias renais fixadas em bloco de parafina de sete pacientes que já foram a óbito com SNC. Para verificar a segregação alélica nas famílias, para os casos nos quais foram identificadas alterações, a análise molecular dos pais foi realizada, quando possível. Um grupo controle de indivíduos saudáveis foi incluído para se avaliar a frequência de alterações não depositadas em bancos de dados. No estudo do gene NPHS1 para os casos com SNC identificamos mutações missense, frameshift e em região de splicing nos três pacientes encaminhados no período da tese e em um dos materiais proveniente de biópsia renal. Assim, um total de quatro pacientes com SNC apresentaram mutações que se correlacionam com o grave quadro clínico apresentado. Para os pacientes com SN infantil, SN infância/juvenil e proteinúria isolada, foram triados o gene NPHS2 e os éxons 8-9 do gene WT1. No estudo do gene NPHS2 foram identificadas duas alterações em heterozigose nos padrões de herança autossômica recessiva em 2,7% (4/147), todos CR, enquanto que apenas uma alteração em heterozigose simples foi identificada em 9,5% (14/147) em casos de SN com apresentação menos grave e tardia. Em três dos 14 pacientes com uma alteração no gene NPHS2, alterações no gene NPHS1 foram também identificadas, todas já descritas como polimorfismos frequentes na população em geral. Para o gene WT1, com herança autossômica dominante, foram identificadas mutações em heterozigose simples em 2,04% (3/147). A avaliação da frequência e distribuição de mutações nestes genes em crianças com SN é inédita no Brasil e traz um direcionamento para a análise molecular de grupos específicos das crianças com SN. Além disto, este trabalho contribui para o estabelecimento das bases moleculares da doença na população brasileira, o que tem uma repercussão importante na conduta dos pacientes, uma vez que, nos que apresentam mutações, pode-se considerar o transplante renal a partir de doador vivo, pois para estes considera-se um risco menor de recidiva de glomérulo esclerose focal e segmentar após transplante do que para pacientes sem mutações / Abstract: Nephrotic syndrome (NS) is the main kidney disease in children. It is characterized by proteinuria, edema, hypoalbuminemia and hyperlipidemia. Acccording to the age of the diagnosis, it is usually classified as Congenital (CNS) when it manifests in utero or during the first three months of life, Infantile when the event occurs during the first year of life, in Childhood when symptoms occur between one year and 12 years and Juvenile, with onset between 12 and 18 years old. NS is traditionally separated on the basis of the response to standard steroid treatment as steroid-resistant (SRNS), steroid-sensitive (SSNS) or steroid sensitive with frequent relapses. A dysfunction in the glomerular filtration barrier leads to the characteristic clinical manisfestations of the syndrome such as massive loss of essential proteins in the urine. Mutations in different genes have been associated with NS in children. However, the most studied genes are NPHS1, NPHS2 and WT1, which are responsible for the great majority of the cases. The aims of this study were to identify and verify mutation distributions in those three genes in a Brazilian cohort with NS or isolated proteinuria and to characterize each identified variation by using different in silico prediction programs in order to understand its biological functions. For that, we performed molecular analyses of 150 children and adolescents, being three unrelated children with CNS and the remaining 147 with Infantile, Childhood, Juvenile NS and isolated proteinuria, being 134 unrelated. Besides those 150 patients, paraffin-embebbed renal biopsies of seven patients who had died from CNS have been also analysed. To verify allelic segregation in the family, molecular analyses were also held, whenever possible, for parents of patients in whom mutations were identified. A healthy control group was included in the study to evaluate the frequency of alterations that were absent in the databanks. In the NPHS1 study for CNS cases, we identified missense, frameshift and splicing mutations in the three patients included during the thesis project and in the paraffin-embedded renal biopsy tissue of a patient who had died of CNS. Therefore a total of four CNS cases bore mutations that are associated with the disease. NPHS2 gene and exons 8-9 of WT1 were screened for the 147 patients with infantile NS, childhood/juvenile NS and isolated proteinuria. In the NPHS2 study, two heterozygous alterations compatible to an autossomal recessive inheritance have been identified in 2,7% (4/147), all of the cases were SRNS; whereas, only one heterozygous alteration was identified in 9,5% (14/147), such cases had a less severe and late onset form of NS. Three out of those 14 patients presented sequence variations also in NPHS1 gene, but they have been described as neutral polymorphisms. For the WT1 gene whose mutations present a dominant pattern of inheritance, heterozygous alterations have been identified in 2,04% (3/147). This is the first study focusing frequency evaluation and mutation distribution in Brazilian children with NS and provides a guidance to the molecular analysis of specific case groups of SN. Moreover, this work contributes to the establishment of the molecular bases of this disease in the Brazilian population, what reflects mainly in the conduction of patients, since those bearing mutations can be considered for receiving a kidney from a living donor, because for them it is considered a lower risk of recurrent focal segmental glomerulosclerosis after kidney transplant than for patients without mutations / Doutorado / Genetica Animal e Evolução / Doutora em Genética e Biologia Molecular

Orientador: Marilda Mazzali / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-06T18:21:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Salvatti_LuisGuilhermeCamargo_M.pdf: 14809141 bytes, checksum: 514c7ccc816dddf973c841a301a3f11f (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Proteinúria pós transplante renal é associada a uma menor sobrevida, tanto de enxerto como de paciente. Proteinúria> 5 gramas/dia está associada a progressão mais rápida, com maior mortalidade. O uso de inibidores da enzima conversora da angiotensina (iECA) tem sido proposto para reduzir a proteinúria em inúmeras doenças renais, entre elas a nefropatia crônica do transplante. No presente estudo, os autores analisaram o efeito de baixas doses de enalapril (2,5 mg/dia) sobre a proteinúria e a função renal de 23 transplantados renais, comparando os resultados com os de um grupo de controle histórico. Critérios de inclusão foram ausência de estenose de artéria renal do enxerto, proteinúria persistente pós transplante e função renal normal. Os pacientes foram tratados por um período mínimo de 12 meses, sem alteração da dose de enalapril. Os pacientes do grupo tratamento apresentaram redução da proteinúria a partir do primeiro mês de tratamento, e este efeito foi mantido pelo período de 1 e 4 anos de acompanhamento. Não ocorreram alterações da função renal, medida através da creatinina sérica. Nos pacientes do grupo controle histórico, proteinúria nefrótica persistiu durante o acompanhamento de 1 ano, seguida de deterioração progressiva da função renal do enxerto, pior controle pressórico, com 3 perdas de enxerto no primeiro ano de seguimento e sobrevida média de 40 meses. Estes resultados sugerem que o uso prolongado de baixas doses de enalapril foi útil e seguro para o tratamento da proteinúria pós transplante. Este efeito ocorreu precocemente, no primeiro mês de tratamento e foi perpetuado pela manutenção da terapêutica / Abstract: Post transplant proteinuria is associated with increased incidence of graft loss and proteinuria > 5 grams/24 hours with a faster progression. The use of angiotensin converting inhibitors (ACEi) has been proposed to reduce proteinuria in many glomerular diseases, including chronic allograft nephropathy. In the present study, the authors analyzed the effect oflow dose of enalapril (2.5 mg/day) on protein excretion and renal function in 23 renal transplant recipients and compared the results with a historical control group. Inclusion criteria was absence of renal artery stenosis, persistent post transplant proteinuria after the 6th month and presence of normal renal function. Patients were treated for a minimum period of one year, and the ACEi dose was maintained at 2.5 mg/day. Treated patients developed a reduction in protein excretion from the first month of treatment, and this effect was maintained for the one-year follow up period. No changes in serum creatinine or blood pressure were observed in the treated patient. In the historical control group, nephritc range proteinuria was maintained and followed by a progressive deterioration in renal function and deficient blood pressure control, with 3 graft losses during the one-year period. In the treatment group, use of enalapril during 48 months proved to be safe, with low incidence of graft loss and adverse events. These data suggest that the long-term use of enalapril is safe and useful to reduce post transplant proteinuria. This effect occurs as early as the first month of treatment and is accentuated with the maintenance of the therapy. Association with persistent nephritic proteinuria and functional graft deterioration reinforce the need of treatment in this group of patients / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Clinica Medica

Orientador: Vera Maria Santoro Belangero / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-13T01:13:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_IzadeCastro_M.pdf: 676306 bytes, checksum: f6b42aa8aa8314e5682d47b1b1333c87 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: A síndrome nefrótica (SN) é definida pela perda maciça de proteína pela urina associada à hipoalbuminemia, edema e dislipidemia. O tratamento específico em crianças e adolescentes com síndrome nefrótica é realizado com medicações imunossupressoras. Sabe-se que a terapia prolongada de corticoesteróides ocasiona efeitos colaterais como: hipertensão arterial, alterações no crescimento e fácies cunshigóides (caracterizada por distribuição atípica de gordura corporal). Estudou-se retrospectivamente e transversalmente todos os pacientes com síndrome nefrótica córtico dependente (SNCD) e córtico resistente (SNCR), acompanhados no Ambulatório de Nefropediatria da FCM-Unicamp, com o objetivo de avaliar a evolução de parâmetros clínicos e laboratoriais. O estudo foi dividido em duas etapas: a primeira com o objetivo de avaliar a prevalência de síndrome metabólica em pacientes com SNCD e SNCR, a partir do prontuário foram obtidos: idade do início da SN, o tempo de tratamento, o total de doses de esteróides (mg/kg/dia), uso prévio de ciclosporina. Peso, estatura, circunferência da cintura, glicemia e isulinemia foram determinados no início do presente estudo. A SM foi definida utilizando quatro definições anteriormente publicadas sendo estas: Cook et al (2003), Weiss et al (2004), Silva et al (2005) e Jollife et al (2007), no qual foram estudados 21 pacientes, com idade média de 12,38±3,4 anos. A prevalência de síndrome metabólica variou de 14,2% a 23,8%, dependendo da definição utilizada, A freqüência de sobrepeso foi de 19,0% (4 / 21) e de obesidade foi de 23,5% (5 / 21). Na avaliação de fatores predisponentes para síndrome metabólica somente foram estatisticamente significativos os seguintes: uso prévio de ciclosporina (p=0,042) e síndrome nefrótica secundária à doença sistêmica (p=0,041). O segundo fetapa teve como objetivo avaliar o crescimento e a composição corporal em crianças e adolescentes com SNCD, no qual foram estudados crianças e adolescentes, em acompanhamento no ambulatório de Nefropediatria da FCM-Unicamp. A partir do prontuário foram obtidos: idade do início da SN, o tempo de tratamento, o total de doses de esteróides (mg/kg e mg/kg/d), peso e estatura da primeira visita, e os valores da albuminemia, proteinemia total, colesterol total, a cada seis meses em todo o tempo de seguimento. Determinou-se a dose total do uso de corticosteróide. As avaliações antropométricas (circunferência muscular do braço, dobra tricipital) foram determinadas quando os pacientes não tinham edema clínico. Estatística não paramétrica foi utilizada com significância de p <0,05. Dezoito pacientes, onze do sexo masculino, com idades de 12,22 ± 2,98 anos. Os z-escore de estatura/idade inicial e final foram significativamente diferentes (-0,69 ± 0,80 e -2,07 ± 1,61 (p = 0.003)). A média de perda de z-escore de estaura/idade foi de -1,37 ± 1, 55. Apenas quatro pacientes mantiveram seu crescimento dentro da normalidade. Neste grupo, os valores de proteinúria residual foi menor do que aqueles que tinham um déficit de crescimento. A circunferência muscular do braço foi significativamente pior neste último grupo. Concluiu-se que a alta prevalência de sobrepeso e obesidade pode estar relacionada com a elevada prevalência da SM. Além disso, o uso de ciclosporina e à presença do de doenças sistêmicas também são fatores predisponentes para o SM. O beneficio da corticoterapia na SNCD para obtenção da melhora da proteinúria e da hipoalbuminemia deve ser questionado em função dos seus efeitos colaterais irreversíveis sobre o crescimento e comprometimento da massa magra nesses pacientes, pois outros problemas como alterações de vitamina D e de insuficiência renal crônica pode ser minimizada durante o tratamento / Abstract: Nephrotic syndrome is characterized for massive proteinuria, edema and hyperlipidemia. The basis of treatment is immunosuppressive drugs meanly corticosteroids and cyclosporine. As the disease recurs, the treatment is prolonged and many collateral effects can be met. So arterial hypertension, growth failure and Cushing syndrome exogenous are common. Patients with cortico-depedent and cortico resistant were evaluated regardless to clinical and laboratorial aspects. The study was made in two fases: the first had as objective to evaluate the prevalence of metabolic syndrome (MS) in children and adolescents with steroid dependent (SDNS) and steroid resistant (SRNS) nephritic syndrome (NS). All children followed at the Pediatric Nephrology Unit, aged from five to eighteen with SDNS or SRNS. From the medical records were gotten: age of the start of NS, time of treatment, total doses of steroids (mg/kg/dial), previous use of cyclosporine. Weight, stature, waist circumference, glicemia and isulinemia were determined in the beginning of this study. The MS was defined using four previous published definitions by: Cook et al (2003); Weiss et al (2004); Silva et al (2005) e Jollife et al (2007). Twenty one patients, twelve male, media of age of 12.4±3.4 years old. The prevalence of MS varied from 14.28% (3/21) to 23.8% (5/21) according the MS definition. The frequency of overweight was 19.0% (4/21) and the obesity was 23.5% (5/21). In the assessment of predispose factors associated with MS only were statically significant the previous use of cyclosporine (p=0.042), the presence of NS due to systemic disease (p=0.041) and obesity (p=0.008). In the second part the objective was to evaluate the growth and body composition in children and adolescents with steroid-dependent nephrotic syndrome (SDNS). All children followed at the Pediatric Nephrology Unit, aged from five to eighteen with SDNS. From the medical records were gotten: age of the start of NS, time of treatment, total doses of steroids (mg/kg and mg/kg/d), weight and stature of the first visit and the values of albuminemia, total proteinemia, total cholesterol, every six months in all time of the follow-up. It was determined the total dosis of the use of corticosteroid. The anthropometric evaluations (arm muscle circumference, triceps skinfold) were determined when the patients had no clinical edema. Non parametric statistics was used with significance of p<0,05. Eighteen patients, eleven male, aged of 12,22±2,98 years old. Initial and final z score stature/age were significantly different (-0,69 ± 0,80 and -2,07 ± 1,61 (p=0,003). The media of loss of z score was -1,37±1,55. Only four patients keep their growth rate. In these group, the values of residual proteinuria was less than those one that had growth deficit. The arm muscle circunference was significantly worse in this last group. It was concluded that the high prevalence of overweight and obesity could be evolved in the high prevalence of MS. Besides that, the use of cyclosporine and the presence of system disease are also predispose factors to MS. For steroid dependent patients the use of steroids must be used with concerning the adverse effects upon growth since that is the most important cause of failure to thrive, because other problems like alterations of vitamin D and chronic renal failure can be minimized / Mestrado / Saude da Criança e do Adolescente / Mestre em Saude da Criança e do Adolescente