Made available in DSpace on 2014-03-18T17:13:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 monique_pimenta_ipec_mest_2009.pdf: 1163623 bytes, checksum: 5dc211aca9c9d9abe2ea14f0c292f834 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2013-11-21 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A esporotricose é a micose subcutânea mais freqüente no Brasil. O diagnóstico definitivo dessa doença se dá com o isolamento em cultivo do fungo, o que em algumas vezes não é possível. Portanto, o desenvolvimento de métodos sorológicos que venham auxiliar no diagnóstico da esporotricose e na avaliação terapêutica dos pacientes é de grande interesse. No presente estudo foi empregada uma técnica imunológica aplicada à detecção de anticorpos em soro, no formato de ELISA, em pacientes com esporotricose cutânea confirmada por isolamento do fungo (n=58), assim como em pacientes com indicação clínico-epidemiológica de esporotricose, mas sem isolamento do fungo em cultivo (n=23). A avaliação da especificidade da técnica foi feita utilizando-se soros heterólogos. Os resultados demonstraram uma sensibilidade de 98% para ensaios de detecção de IgG e de 99% para ensaios de detecção de IgM, e a especificidade de ambos os testes foi de 89%. Reações cruzadas foram observadas, da mesma forma como em outros imunoensaios para o diagnóstico da esporotricose. Foram colhidas três amostras de soro, uma no momento do diagnóstico (tempo 1), uma três a seis meses após o início da micose (tempo 2) e uma de nove a 12 meses após início da micose (tempo 3). A avaliação dos anticorpos ao longo do tratamento mostra que na forma fixa da doença não foram observadas diferenças estatisticamente significantes, tanto nos ensaios de IgG como de IgM Apenas nos ensaios do grupo de pacientes com forma linfocutânea, observou uma diferença estatisticamente significante ente os tempos 2 [1,498 (IIQ: 1,026-2,009)] e tempo 3 [1,398 (IIQ: 0,925-1,678] com p=0,004 nos ensaio de IgG e uma diferença entre os tempos 1 [1,263 (IIQ: 0,639-1,658)] e tempo 2 [1,015 (IIQ: 0,511-1,336)], tempos 2 e 3 [0,853 (IIQ: 0,453-1,173)] e tempos 1 e 3 nos ensaios de detecção de IgM. Paralelamente foram analisados também, soros de 15 pacientes com infecção pelo HIV e esporotricose de diferentes formas clínicas nos quais a técnica de ELISA mostrou uma sensibilidade de 90% nos ensaios de detecção de IgG e sensibilidade de 80% nos ensaios de detecção de IgM. Concluímos que a técnica de ELISA pode ser utilizada como ferramenta de auxílio diagnóstico para pacientes com esporotricose e para pacientes com esporotricose infectados pelo HIV. Um maior tempo de acompanhamento de pacientes é necessário para melhor se estabelecer a importância da detecção de anticorpos como critério de cura da esporotricose. A técnica de ELISA é uma excelente ferramenta diagnóstica para pacientes de esporotricose sem confirmação micológica / The sporotrichosis is the most common subcutaneous mycosis in Braz il. The definitive diagnosis of this disease occurs in isolation with the fungal culture, which some times is not possible. Therefore, the development of serological methods that may assist in the diagnosis of sporotrichosis and in evaluating treatment of patients is of great interest. In the present study employed a technique applied to the detection of immune antibodies in serum, the ELISA format, in patients with cutaneous sporotrichosis confirmed by isolation of the fungus (n = 58) and in patients with clinical and epidemiological aspects of sporotrichosis, but without isolation of the fungus in culture (n = 23). The evaluation of the specificity of the technique was performed using heterologous sera. The results showed a sensitivity of 98% for testing t he detection of IgG and 99% for testing the detection of IgM, and specificity of both tests was 89%. Cross - reactions were observed in the same way as in other immunoassays for the diagnosis of sporotrichosis. Were harvested three serum samples, one at the time of diagnosis (time 1), a three to six months after the onset of mycosis (time 2) and one of nine to 12 months after onset of mycosis (time 3). Evaluation of antibodies during the treatment shows that the fixed form of the disease shows no statisticall y significant differences in both tests for IgG and IgM. Only the tests of the group of patients with linfocutânea way, was a statistically significant difference between the time 2 [1498 (IQR: 1026 - 2009)] and time 3 [1398 (IQR: 0925 - 1678] with p = 0004 in the testing of IgG and a difference between times 1 [1263 (IQR: 0639 - 1658)] and time 2 [1015 (IQR: 0511 - 1336)], times 2 and 3 [0853 (IQR: 0453 - 1173)] and days 1 and 3 in tests for detection of IgM. At was also studied, sera from 15 patients with HIV infec tion and different clinical forms of sporotrichosis which the technique of ELISA showed a sensitivity of 90% in tests for detection of IgG and sensitivity of 80% in tests for IgM detcção. We conclude that the ELISA technique could be used as a tool to aid diagnosis in patients with sporotrichosis and sporotrichosis patients with HIV. A longer follow - up of patients is needed to better establish the importance of detection of antibodies as a criterion for cure of sporotrichosis. The technique of ELISA is an e xcellent diagnostic tool for patients with sporotrichosis without mycological confirmation

Made available in DSpace on 2014-08-11T12:37:16Z (GMT). No. of bitstreams: 4 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) monique_pimenta_ipec_mest_2009.pdf: 1163623 bytes, checksum: 5dc211aca9c9d9abe2ea14f0c292f834 (MD5) monique_pimenta_ipec_mest_2009.pdf.txt: 140620 bytes, checksum: bb365a50c641ebc127426b00325ad8af (MD5) monique_pimenta_ipec_mest_2009.pdf.jpg: 1440 bytes, checksum: 06136ba9e03bb5038426117c5efe979b (MD5) Previous issue date: 2013-11-21 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A esporotricose é a micose subcutânea mais freqüente no Brasil. O diagnóstico definitivo dessa doença se dá com o isolamento em cultivo do fungo, o que em algumas vezes não é possível. Portanto, o desenvolvimento de métodos sorológicos que venham auxiliar no diagnóstico da esporotricose e na avaliação terapêutica dos pacientes é de grande interesse. No presente estudo foi empregada uma técnica imunológica aplicada à detecção de anticorpos em soro, no formato de ELISA, em pacientes com esporotricose cutânea confirmada por isolamento do fungo (n=58), assim como em pacientes com indicação clínico-epidemiológica de esporotricose, mas sem isolamento do fungo em cultivo (n=23). A avaliação da especificidade da técnica foi feita utilizando-se soros heterólogos. Os resultados demonstraram uma sensibilidade de 98% para ensaios de detecção de IgG e de 99% para ensaios de detecção de IgM, e a especificidade de ambos os testes foi de 89%. Reações cruzadas foram observadas, da mesma forma como em outros imunoensaios para o diagnóstico da esporotricose. Foram colhidas três amostras de soro, uma no momento do diagnóstico (tempo 1), uma três a seis meses após o início da micose (tempo 2) e uma de nove a 12 meses após início da micose (tempo 3). A avaliação dos anticorpos ao longo do tratamento mostra que na forma fixa da doença não foram observadas diferenças estatisticamente significantes, tanto nos ensaios de IgG como de IgM Apenas nos ensaios do grupo de pacientes com forma linfocutânea, observou uma diferença estatisticamente significante ente os tempos 2 [1,498 (IIQ: 1,026-2,009)] e tempo 3 [1,398 (IIQ: 0,925-1,678] com p=0,004 nos ensaio de IgG e uma diferença entre os tempos 1 [1,263 (IIQ: 0,639-1,658)] e tempo 2 [1,015 (IIQ: 0,511-1,336)], tempos 2 e 3 [0,853 (IIQ: 0,453-1,173)] e tempos 1 e 3 nos ensaios de detecção de IgM. Paralelamente foram analisados também, soros de 15 pacientes com infecção pelo HIV e esporotricose de diferentes formas clínicas nos quais a técnica de ELISA mostrou uma sensibilidade de 90% nos ensaios de detecção de IgG e sensibilidade de 80% nos ensaios de detecção de IgM. Concluímos que a técnica de ELISA pode ser utilizada como ferramenta de auxílio diagnóstico para pacientes com esporotricose e para pacientes com esporotricose infectados pelo HIV. Um maior tempo de acompanhamento de pacientes é necessário para melhor se estabelecer a importância da detecção de anticorpos como critério de cura da esporotricose. A técnica de ELISA é uma excelente ferramenta diagnóstica para pacientes de esporotricose sem confirmação micológica / The sporotrichosis is the most common subcutaneous mycosis in Braz il. The definitive diagnosis of this disease occurs in isolation with the fungal culture, which some times is not possible. Therefore, the development of serological methods that may assist in the diagnosis of sporotrichosis and in evaluating treatment of patients is of great interest. In the present study employed a technique applied to the detection of immune antibodies in serum, the ELISA format, in patients with cutaneous sporotrichosis confirmed by isolation of the fungus (n = 58) and in patients with clinical and epidemiological aspects of sporotrichosis, but without isolation of the fungus in culture (n = 23). The evaluation of the specificity of the technique was performed using heterologous sera. The results showed a sensitivity of 98% for testing t he detection of IgG and 99% for testing the detection of IgM, and specificity of both tests was 89%. Cross - reactions were observed in the same way as in other immunoassays for the diagnosis of sporotrichosis. Were harvested three serum samples, one at the time of diagnosis (time 1), a three to six months after the onset of mycosis (time 2) and one of nine to 12 months after onset of mycosis (time 3). Evaluation of antibodies during the treatment shows that the fixed form of the disease shows no statisticall y significant differences in both tests for IgG and IgM. Only the tests of the group of patients with linfocutânea way, was a statistically significant difference between the time 2 [1498 (IQR: 1026 - 2009)] and time 3 [1398 (IQR: 0925 - 1678] with p = 0004 in the testing of IgG and a difference between times 1 [1263 (IQR: 0639 - 1658)] and time 2 [1015 (IQR: 0511 - 1336)], times 2 and 3 [0853 (IQR: 0453 - 1173)] and days 1 and 3 in tests for detection of IgM. At was also studied, sera from 15 patients with HIV infec tion and different clinical forms of sporotrichosis which the technique of ELISA showed a sensitivity of 90% in tests for detection of IgG and sensitivity of 80% in tests for IgM detcção. We conclude that the ELISA technique could be used as a tool to aid diagnosis in patients with sporotrichosis and sporotrichosis patients with HIV. A longer follow - up of patients is needed to better establish the importance of detection of antibodies as a criterion for cure of sporotrichosis. The technique of ELISA is an e xcellent diagnostic tool for patients with sporotrichosis without mycological confirmation

A sífilis adquirida e a congênita continuam aumentando e preocupando as autoridades sanitárias do mundo, ao verem que as metas estabelecidas para o seu controle estão longe de serem atingidas. Apesar dos esforços feitos na descoberta de novas ferramentas para o diagnóstico e monitoramento da sífilis, vemos um despreparo muito grande, principalmente entre os laboratoristas, em processar corretamente os reagentes disponíveis e melhor selecionar aqueles que apresentem qualidade para serem usados na rotina do laboratório. O que constatamos neste estudo é um espelho da realidade do diagnóstico da sífilis e mostra a dificuldade que os clínicos enfrentam ao receberem um laudo do laboratório. Trabalhando em colaboração com diferentes serviços e grupos de pesquisa, selecionamos aqueles que trabalhavam com: gestantes atendidas no pré-natal, doadores de sangue, pacientes infectados pelo HIV e pacientes de laboratório clínico e fizemos um estudo crítico da sorologia utilizada em cada serviço. Verificamos discrepância dos resultados obtidos nos testes não-treponêmicos VDRL e RPR, principalmente entre os soros de baixa reatividade, e nos treponêmicos FTA-abs, TPHA e ELISA. Decidimos aplicar o método de Western blotting e analisar o seu comportamento em todas as amostras de soros ensaiadas. Para obtenção de resultados reprodutíveis, fizemos a industrialização do método e formatamos um reagente na forma de um kit diagnóstico, WB Tp-IgG, que pudesse ser facilmente utilizado e interpretado. Os resultados obtidos mostraram que o WB Tp-IgG pode ser utilizado como método confirmatório da sífilis, substituindo o FTA-abs, tradicionalmente recomendado para essa finalidade e que pudesse fazer parte de uma proposta de algoritmo para o diagnóstico sorológico da sífilis. / Acquired and congenital syphilis have been increased and worried the worldwide health authorities, mainly because the WHO targets for syphilis control are far from to be held. Much effort had been made for development of new tools to be used in syphilis diagnosis and following up, however we noticed a lack of ability of laboratory workers in the correctly choosing and using the reagents in laboratory routine. In this study what we observed were the reality of syphilis diagnosis and the difficulties that physicians have in how to procedure when they received the results from the laboratory. Working in collaboration with different settings and research groups we choose some of them that attend pregnant women, blood donors, HIV patients and patients from clinical laboratory. With these group individuals we made a critical study of the serology methods used in each one. We verified high level of discordant results between nontreponemal tests VDRL and RPR, mainly in serum samples with low reactivity and between treponemal tests FTA-abs, TPHA and ELISA, in all services. To obtain reproducibility of the results we made the industrialization of the method and set up a reagent as a kit diagnosis, easily to performer. Appling the western blotting method we evaluated the performance of the test in all sera samples assayed. The results showed that the WB Tp-IgG can be useful as confirmatory test for syphilis, replacing FTA-abs, traditionally recommended for this and that could be included in algorithm propose for serological diagnosis of syphilis.

A sífilis adquirida e a congênita continuam aumentando e preocupando as autoridades sanitárias do mundo, ao verem que as metas estabelecidas para o seu controle estão longe de serem atingidas. Apesar dos esforços feitos na descoberta de novas ferramentas para o diagnóstico e monitoramento da sífilis, vemos um despreparo muito grande, principalmente entre os laboratoristas, em processar corretamente os reagentes disponíveis e melhor selecionar aqueles que apresentem qualidade para serem usados na rotina do laboratório. O que constatamos neste estudo é um espelho da realidade do diagnóstico da sífilis e mostra a dificuldade que os clínicos enfrentam ao receberem um laudo do laboratório. Trabalhando em colaboração com diferentes serviços e grupos de pesquisa, selecionamos aqueles que trabalhavam com: gestantes atendidas no pré-natal, doadores de sangue, pacientes infectados pelo HIV e pacientes de laboratório clínico e fizemos um estudo crítico da sorologia utilizada em cada serviço. Verificamos discrepância dos resultados obtidos nos testes não-treponêmicos VDRL e RPR, principalmente entre os soros de baixa reatividade, e nos treponêmicos FTA-abs, TPHA e ELISA. Decidimos aplicar o método de Western blotting e analisar o seu comportamento em todas as amostras de soros ensaiadas. Para obtenção de resultados reprodutíveis, fizemos a industrialização do método e formatamos um reagente na forma de um kit diagnóstico, WB Tp-IgG, que pudesse ser facilmente utilizado e interpretado. Os resultados obtidos mostraram que o WB Tp-IgG pode ser utilizado como método confirmatório da sífilis, substituindo o FTA-abs, tradicionalmente recomendado para essa finalidade e que pudesse fazer parte de uma proposta de algoritmo para o diagnóstico sorológico da sífilis. / Acquired and congenital syphilis have been increased and worried the worldwide health authorities, mainly because the WHO targets for syphilis control are far from to be held. Much effort had been made for development of new tools to be used in syphilis diagnosis and following up, however we noticed a lack of ability of laboratory workers in the correctly choosing and using the reagents in laboratory routine. In this study what we observed were the reality of syphilis diagnosis and the difficulties that physicians have in how to procedure when they received the results from the laboratory. Working in collaboration with different settings and research groups we choose some of them that attend pregnant women, blood donors, HIV patients and patients from clinical laboratory. With these group individuals we made a critical study of the serology methods used in each one. We verified high level of discordant results between nontreponemal tests VDRL and RPR, mainly in serum samples with low reactivity and between treponemal tests FTA-abs, TPHA and ELISA, in all services. To obtain reproducibility of the results we made the industrialization of the method and set up a reagent as a kit diagnosis, easily to performer. Appling the western blotting method we evaluated the performance of the test in all sera samples assayed. The results showed that the WB Tp-IgG can be useful as confirmatory test for syphilis, replacing FTA-abs, traditionally recommended for this and that could be included in algorithm propose for serological diagnosis of syphilis.

A sífilis adquirida e a congênita continuam aumentando e preocupando as autoridades sanitárias do mundo, ao verem que as metas estabelecidas para o seu controle estão longe de serem atingidas. Apesar dos esforços feitos na descoberta de novas ferramentas para o diagnóstico e monitoramento da sífilis, vemos um despreparo muito grande, principalmente entre os laboratoristas, em processar corretamente os reagentes disponíveis e melhor selecionar aqueles que apresentem qualidade para serem usados na rotina do laboratório. O que constatamos neste estudo é um espelho da realidade do diagnóstico da sífilis e mostra a dificuldade que os clínicos enfrentam ao receberem um laudo do laboratório. Trabalhando em colaboração com diferentes serviços e grupos de pesquisa, selecionamos aqueles que trabalhavam com: gestantes atendidas no pré-natal, doadores de sangue, pacientes infectados pelo HIV e pacientes de laboratório clínico e fizemos um estudo crítico da sorologia utilizada em cada serviço. Verificamos discrepância dos resultados obtidos nos testes não-treponêmicos VDRL e RPR, principalmente entre os soros de baixa reatividade, e nos treponêmicos FTA-abs, TPHA e ELISA. Decidimos aplicar o método de Western blotting e analisar o seu comportamento em todas as amostras de soros ensaiadas. Para obtenção de resultados reprodutíveis, fizemos a industrialização do método e formatamos um reagente na forma de um kit diagnóstico, WB Tp-IgG, que pudesse ser facilmente utilizado e interpretado. Os resultados obtidos mostraram que o WB Tp-IgG pode ser utilizado como método confirmatório da sífilis, substituindo o FTA-abs, tradicionalmente recomendado para essa finalidade e que pudesse fazer parte de uma proposta de algoritmo para o diagnóstico sorológico da sífilis. / Acquired and congenital syphilis have been increased and worried the worldwide health authorities, mainly because the WHO targets for syphilis control are far from to be held. Much effort had been made for development of new tools to be used in syphilis diagnosis and following up, however we noticed a lack of ability of laboratory workers in the correctly choosing and using the reagents in laboratory routine. In this study what we observed were the reality of syphilis diagnosis and the difficulties that physicians have in how to procedure when they received the results from the laboratory. Working in collaboration with different settings and research groups we choose some of them that attend pregnant women, blood donors, HIV patients and patients from clinical laboratory. With these group individuals we made a critical study of the serology methods used in each one. We verified high level of discordant results between nontreponemal tests VDRL and RPR, mainly in serum samples with low reactivity and between treponemal tests FTA-abs, TPHA and ELISA, in all services. To obtain reproducibility of the results we made the industrialization of the method and set up a reagent as a kit diagnosis, easily to performer. Appling the western blotting method we evaluated the performance of the test in all sera samples assayed. The results showed that the WB Tp-IgG can be useful as confirmatory test for syphilis, replacing FTA-abs, traditionally recommended for this and that could be included in algorithm propose for serological diagnosis of syphilis.

A sífilis adquirida e a congênita continuam aumentando e preocupando as autoridades sanitárias do mundo, ao verem que as metas estabelecidas para o seu controle estão longe de serem atingidas. Apesar dos esforços feitos na descoberta de novas ferramentas para o diagnóstico e monitoramento da sífilis, vemos um despreparo muito grande, principalmente entre os laboratoristas, em processar corretamente os reagentes disponíveis e melhor selecionar aqueles que apresentem qualidade para serem usados na rotina do laboratório. O que constatamos neste estudo é um espelho da realidade do diagnóstico da sífilis e mostra a dificuldade que os clínicos enfrentam ao receberem um laudo do laboratório. Trabalhando em colaboração com diferentes serviços e grupos de pesquisa, selecionamos aqueles que trabalhavam com: gestantes atendidas no pré-natal, doadores de sangue, pacientes infectados pelo HIV e pacientes de laboratório clínico e fizemos um estudo crítico da sorologia utilizada em cada serviço. Verificamos discrepância dos resultados obtidos nos testes não-treponêmicos VDRL e RPR, principalmente entre os soros de baixa reatividade, e nos treponêmicos FTA-abs, TPHA e ELISA. Decidimos aplicar o método de Western blotting e analisar o seu comportamento em todas as amostras de soros ensaiadas. Para obtenção de resultados reprodutíveis, fizemos a industrialização do método e formatamos um reagente na forma de um kit diagnóstico, WB Tp-IgG, que pudesse ser facilmente utilizado e interpretado. Os resultados obtidos mostraram que o WB Tp-IgG pode ser utilizado como método confirmatório da sífilis, substituindo o FTA-abs, tradicionalmente recomendado para essa finalidade e que pudesse fazer parte de uma proposta de algoritmo para o diagnóstico sorológico da sífilis. / Acquired and congenital syphilis have been increased and worried the worldwide health authorities, mainly because the WHO targets for syphilis control are far from to be held. Much effort had been made for development of new tools to be used in syphilis diagnosis and following up, however we noticed a lack of ability of laboratory workers in the correctly choosing and using the reagents in laboratory routine. In this study what we observed were the reality of syphilis diagnosis and the difficulties that physicians have in how to procedure when they received the results from the laboratory. Working in collaboration with different settings and research groups we choose some of them that attend pregnant women, blood donors, HIV patients and patients from clinical laboratory. With these group individuals we made a critical study of the serology methods used in each one. We verified high level of discordant results between nontreponemal tests VDRL and RPR, mainly in serum samples with low reactivity and between treponemal tests FTA-abs, TPHA and ELISA, in all services. To obtain reproducibility of the results we made the industrialization of the method and set up a reagent as a kit diagnosis, easily to performer. Appling the western blotting method we evaluated the performance of the test in all sera samples assayed. The results showed that the WB Tp-IgG can be useful as confirmatory test for syphilis, replacing FTA-abs, traditionally recommended for this and that could be included in algorithm propose for serological diagnosis of syphilis.