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Estimativa dos níveis glicêmicos a partir do pH salivar: desenvolvimento de um kit diagnóstico / Estimating glycemic levels from salivary pH: development of a diagnostic kitSauaia, Bismarck Ascar 31 March 2016 (has links)
Submitted by Rosivalda Pereira (mrs.pereira@ufma.br) on 2017-06-12T18:19:02Z
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Previous issue date: 2016-03-31 / Estimation of blood glucose levels using invasive methods currently is a routine in emergency and ambulatory attendance of public health services, as well as in residential glucose monitoring, in order to prevent glucose levels variation, which may evolve to ophthalmic, renal, vascular and neurological complications. In order to develop a low-cost, socially accessible and non-invasive method to establish blood glucose levels, it was created a linear conversion mathematical model from salivary hidrogenionic potential (pH) values to blood glucose level. After signing the informed consent form and filling out the survey questionnaire to gather personal, clinical and family history data, it was collected a drop of blood from the tip of the right index finger, which was submitted to the glucometer for blood glucose level determination and after that, it was also collected 2 mL of saliva in a 5ml glass Beacker to salivary pH definition with a digital pH meter. Data collection was performed between May and November, 2014, with a sample of 333 cappilary blood glucose (CG) and salivary ph tests from non - diabetic adult volunteers, in fasting state from 2 to 4 hours after last meal, who were randomly selected from medicine and physiotherapy clinics of UNICEUMA. After entering data in EPINFO 2000 program, results were analyzed with Pearson’s correlation coefficient (r) in Bioestat 5.3 Software and presented a value of – 0,7522, showing the existence of a correlation between capillary blood glucose and salivary pH. Then, we defined that variables were related in a mathematical form of a straight line. Thus, we found the coefficient of determination between capillary blood glucose and salivary pH using simple linear regression test: R2 = 0,5658. Regarding alpha level = 0.05, we established a mathematical model: y = a + bx, where a = 9.3286 and b = - 0.0278. So, after calculating blood glucose level from pH (pH = F (Glycemia); we have: CG = (9.3286 - pH)/ 0.0278. The results demonstrated the relation among CG values (mg/dl), corresponding salivary ph and the diagnosis respectively: CG < 70 pH > 7,94 with (Variation (Δ) = 7,784 to 8,096) = Hypoglycemic Risk; CG between 70 and 100 pH 7,94 to 6,69 = Security Gap or normality; CG > 100 pH < 6,69 with (Δ = 6,536 to 6,848) = Hyperglycemic Risk. The proposed mathematical model may allow the definition of a diagnostic kit to estimate blood glucose levels from salivary pH through a non-invasive, low-cost, socially accessible and less traumatic method either in healthy patients or at risk for developing diabetes. / A estimativa dos níveis de açúcar no sangue, por método invasivo, atualmente é rotina no atendimento de emergência e ambulatorial das unidades públicas de saúde, assim como, no controle e monitoramento glicêmico domiciliar, para prevenir variações, que podem evoluir em complicações oftalmológicas, renais, vasculares, neurológicas, entre outras. Com a finalidade de minimizar gastos e disponibilizar um kit de baixo custo, acessível e não invasivo para a determinação de níveis glicêmicos capilares, foi criado um modelo matemático linear de conversão dos valores do potencial Hidrogeniônico (pH) salivar em glicêmico capilar. Após assinatura do Termo de Consentimento livre e Esclarecido (TCLE) e preenchimento do questionário de avaliação contendo dados pessoais, clínico e de histórico familiar do paciente, coletou-se uma gota de sangue da extremidade do indicador direito, a qual foi submetida à glicosímetro para a definição do nível de glicemia, e a seguir, em um recipiente de 5 ml, coletou-se 2 ml de saliva para leitura do pH em phgâmetro digital. A coleta foi realizada entre os meses de maio a novembro de 2014, sendo a amostragem constituída por 333 exames de Glicemia Capilar (GC) e pH do fluido, de voluntários, adultos, não diabéticos, em jejum alimentar de 2 a 4 horas, os quais foram selecionados aleatoriamente, provenientes da demanda da clínica médica e de fisioterapia do UNICEUMA. Os resultados após tabulados no banco do programa EPINFO 2000 e, analisados com auxílio do Software Bioestat 5.3 a partir da aplicação do teste de correlação de Pearson apresentaram o valor de r (coeficiente de correlação) igual a – 0,7522, admitindo-se a existência de correlação entre GC e o pH salivar. Em seguida, definiu-se a forma matemática em que as variáveis estão relacionadas, nesse caso, uma reta. Desta forma, a partir da aplicação do teste de regressão linear simples obteve-se o coeficiente de determinação ou explicação da correlação entre GC e pH da saliva: R2 = 0,5658. Considerando-se o nível de decisão alfa = 0.05, estabeleceu-se um modelo matemático: y = a + bx, sendo a = 9,3286 e b = - 0,0278. Logo, calculando glicemia a partir do pH (pH = F(Glicemia); temos: GC = (pH - 9,3286)/ - 0,0278. Os resultados demonstraram a relação entre valores de GC (mg/dl), seu correspondente no pH da saliva e o diagnóstico, respectivamente: GC < 70 pH > 7,94 com (Variação (Δ) = 7,784 a 8,096) = Risco Hipoglicêmico; GC Entre 70 e 100 pH 7,94 a 6,69 = Faixa de Segurança ou normalidade; GC > 100 pH < 6,69 com (Δ = 6,536 a 6,848) = Risco Hiperglicêmico. O modelo matemático proposto pode ser utilizado para a definição de um kit de diagnóstico na estimativa dos níveis glicêmicos, a partir do pH salivar por método não invasivo, de baixo custo, socialmente acessível, com menos trauma em pacientes adultos hígidos ou com risco de desenvolver a diabetes
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Avaliação de testes de captura de antígeno NS1 para o diagnóstico precoce das infecções por dengueLima, Monique da Rocha Queiroz January 2009 (has links)
Submitted by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2012-03-29T13:29:04Z
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Previous issue date: 2009 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / O diagnóstico laboratorial de dengue é muito importante para apoiar os
programas Vigilância Epidemiológica considerando-se a dificuldade da confirmação dos
casos em bases clínicas apenas, em especial, durante períodos inter-epidêmicos.
Atualmente estão disponíveis kits comerciais para o diagnóstico sorológico do dengue,
embora o seu custo ainda represente um alto encargo financeiro para países em
desenvolvimento. Um diagnóstico rápido pode direcionar as medidas de controle do
vetor. A proteína não-estrutural 1 (NS1) do vírus dengue por ser um marcador utilizado
durante a fase aguda da doença e tem sido proposto para o diagnóstico da doença.
Desta forma, a sensibilidade e especificidade de três kits comerciais para captura de
antígeno NS1 disponíveis no mercado foram avaliadas com um painel de 852 amostras
obtidos a partir da coleção do Laboratório de Flavivírus no Instituto Oswaldo Cruz,
FIOCRUZ, de epidemias ocorridas durante os anos de 1986 a 2008. O desempenho de
cada kit foi avaliado individualmente e, a comparação entre os três kits foi baseada na
análise de uma sub-população de 450 amostras. Dentre os três kits analisados, o kit
NS1 Ag Strip (BioRad Laboratories) foi o mais sensível em confirmar casos de dengue
na amostragem testada (89%, 197/220), seguido pelo Platelia NS1 (BioRad
Laboratories) (84%, 184/220) .O menos sensível foi o pan -E Early ELISA (PanBio
Diagnostics) com 72% (159/220) de sensibilidade. Porém, neste estudo o kit da PanBio
foi o mais especifico (100%), enquanto que ambos os kits da BioRad apresentaram 99%
de especificidade. Os resultados obtidos demonstraram uma maior sensibilidade de
confirmação de casos de infecção primária pelos três kits, porém não houve diferença
significativa em relação aos casos de infecção secundária. Os três kits foram mais
sensíveis em confirmar casos positivos por isolamento viral do que em casos positivos
por RT-PCR. A sensibilidade dos três kits foi maior no período compreendido entre o
primeiro ao quinto dia após o inicio dos sintomas. Reações cruzadas foram raramente
observadas em vacinados contra o vírus da febre amarela e casos de rubéola. Os
resultados obtidos demonstraram que três kits podem ser utilizados para a detecção
precoce da infecção viral por dengue. / Dengue virus diagnosis is an important tool to support Epidemiological
Surveillance Programs considering the difficulties found in confirm dengue cases based
only on the clinical symptoms, especially during inter-epidemic periods. Currently, there
are many commercial serological kits for dengue diagnosis, however its costs poses a
financial burden for many developing countries. The dengue virus non- structural protein
a (NS1) can be used as a marker during the acute phase of the illness and its use has
been proposed for the disease diagnosis. Therefore, here we evaluated the sensitivity
and specificity of three newly available NS1 antigen capture commercial kits with a panel
of 852 samples from the collection of the Flavivirus Laboratory at the Oswaldo Cruz
Institute, FIOCRUZ, from epidemics occurred from 1986 to 2008. Each kit was evaluated
individually and the comparison among them was based on the analysis of a sub-
population of 450 samples. From the three kits analyzed, the NS1Ag Strip (Biorad
Laboratories) showed the highest sensitivity (89%, 197/220) in confirming dengue cases,
followed by the PlateliaTM NS1 (Biorad Laboratories). The less sensitive one was the
pan-E Early ELISA (PanBio Diagnostics) with a sensitivity of 72% (159/220). However, in
this study the PanBio kit was the most specific (100%) while the two kits from BioRad
showed both 99% of specificity. Primary dengue cases were more frequently confirmed
than secondary ones. A higher sensitivity was observed in cases positive by virus
isolation, when compared to cases positive by RT-PCR. The highest NS1 antigen
detection was from the first to the fifth day after the onset of the symptoms. Cross
reactivity were rarely observed in yellow fever vaccinees and rubella cases. The results
showed that the three kits can be used in the early diagnosis of dengue infections.
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Controle da qualidade dos conjuntos para o diagnóstico do HIV / Quality control of HIV diagnostic kitsRibeiro, Álvaro da Silva January 2008 (has links)
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Previous issue date: 2008 / Made available in DSpace on 2014-12-22T16:56:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2
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Previous issue date: 2008 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / Com o avanço tecnológico e a crescente demanda de testes mais sensíveis e específicos para o diagnóstico sorológico do HIV, a cada ano o mercado nacional e internacional disponibiliza uma grande variedade de kits, que em sua maioria são empregados na triagem de doadores em Unidades Hemoterápicas (UH) e para o diagnóstico laboratorial. Isto justifica a necessidade da avaliação sistemática destes produtos buscando a qualidade dos kits de diagnóstico e conseqüentemente a segurança do sangue utilizado no Brasil. Este trabalho fundamenta-se na avaliação da qualidade dos conjuntos para o diagnóstico do HIV no período de janeiro de 2002 a dezembro de 2006. A metodologia adotada foi a análise retrospectiva dos dados e resultados obtidos referente às amostras de conjuntos para o diagnóstico do HIV analisadas no Laboratório de Sangue e Hemoderivados do Departamento de Imunologia do Instituto Nacional de Controle de Qualidade e Saúde LSH/DI/INCQS. A partir do Sistema de Gerenciamento de Amostras(SGA 2000) do INCQS e dos registros internos do LSH foram selecionadas 85 amostras de kits nas diferentes metodologias, avaliados quanto à sensibilidade e especificidade além dos tipos de antígenos utilizados na sensibilização. Os produtos foram recebidos para análise provenientes dos seguintes segmentos: instituições públicas e privadas, resultando em 85 por cento relativos à análises prévias, 8 por cento (análises fiscais), 6 por cento (de análises controle) e 1 por cento de orientação. Noventa e cinco por cento dos kits analisados são importados e 5 por cento nacionais. Dos kits avaliados, 98 por cento apresentaram resultado satisfatório para sensibilidade e especificidade e 2 por cento apresentaram resultados Insatisfatórios para especificidade. / As technology advances and due to the increased necessity for more specific and sensitive tests for HIV serological diagnostic each year the Brazilian and international markets give provide a great variety of kits, which most of them are used for blood donors screening and diagnostic tests. This justifies the need for a systematic evaluation of these products in order to analyze the quality of the lab tests and blood used in the country. This study was based on the evaluation of the quality of kits reagent for HIV diagnostics between January 2002 and December 2006. The chosen methodology was the retrospective data analysis of the obtained results referring to samples of HIV reagents kits analyzed by Laboratory of Blood and Blood Components of the Departmentof Immunology of the Institute of the Quality Control and Health(LSH/DI/INCQS), during the period mentioned above. Based on the Samples Management System (SGA 2000) at INCQS and the internal registers o of LSH and SGA 2000, 85 samples of HIV reagent tests were selected, The analyzed products came from the two main segments: public and private companies. In relation to the type of analysis: 85% were previous, 8% fiscal analysis, 6%, control analysis and 1% orientation analysis. A total of 95% of kits analyzed were imported and 5% were from Brazil. The analyzed products showed 98% of satisfactory results for sensitivity and specificity and 2% presented unsatisfactory results for specificity. The results demonstrated the necessity of the maintenance of a systematic, permanent and strict quality monitoring to evaluate the efficacy and safety of the Brazilian market products.
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Comparação entre BDNA e PCR na detecção da carga viral do HIV-1Passos, Daniela Ferreira January 2013 (has links)
Introdução: A AIDS (Síndrome da Imunodeficiência Adquirida) é caracterizada por uma disfunção grave no sistema imunológico causada por uma infecção por HIV (Human Immunodeficiency Virus). A quantificação da viremia (carga viral) é uma ferramenta muito útil no monitoramento dos pacientes infectados pelo HIV, sendo um marcador de progressão da doença e eficácia do tratamento. A estimativa incorreta da carga viral pode levar à decisão terapêutica equivocada, portanto métodos acurados de quantificação se fazem necessários. Diversas técnicas comerciais estão disponíveis para a quantificação da carga viral do HIV-1: a maioria destas se baseiam na detecção de ácidos nucléicos e outras na detecção de enzimas e antígenos. O grau de automação varia nas diferentes técnicas assim como os procedimentos de isolamento, amplificação e detecção. A correlação e a concordância entre estas técnicas têm sido estudadas e há relatos de discordância entre os valores de carga viral produzidos por diferentes métodos. O conhecimento sobre o efeito das variações entre as técnicas se faz necessário para assegurar a interpretação adequada dos resultados. A interpretação dos resultados correta é particularmente importante quando estes estão próximos a pontos de corte utilizados para definições de rebote viral e falha virológica. Objetivos: O objetivo deste estudo é comparar as técnicas de PCR (Cobas AmpliPrep TaqMan HIV-1 v2.0) e b-DNA (Siemens Versant HIV-1 RNA 3.0) para quantificação do HIV-1. Métodos: 1000 amostras recebidas no HIV/GUM Research Laboratory do Chelsea and Westminster Hospital para quantificação da carga viral do HIV-1 durante os meses de Dezembro de 2009 e Janeiro de 2010 foram testadas pelos métodos de PCR (Cobas AmpliPrep TaqMan HIV-1 v2.0) e b-DNA (Siemens Versant HIV-1 RNA 3.0). Resultados: Uma superquantificação sistemática foi observada nos resultados testados por PCR. Esta superquantificação ficou evidente nos resultados entre 50 e 250 cópias. Uma concordância elevada foi observada na análise dos pontos de corte de 500 e 1000 copias/mL. Uma correlação linear forte foi observada entre estas técnicas na análise das amostras que obtiveram resultados dentro do limite comum de detecção de ambas as técnicas, porém o nível de concordância foi insatisfatório. Conclusão: A superquantificação observada nos resultados obtidos pelo Cobas AmpliPrep TaqMan HIV- 1 v2.0 em relação ao bDNA Siemens Versant HIV-1 RNA 3.0 é provavelmente o resultado de uma sensibilidade aumentada desta técnica. Nós recomendamos cautela quando resultados de duas metodologias diferentes são comparados, especialmente quando se comparam metodologias convencionais com aquelas baseadas em PCR em tempo real. / Introduction: AIDS (Acquired Immunodeficiency Syndrome) is characterised by a severe immune dysfunction caused by the HIV (Human Immunodeficiency Virus). The HIV viral load quantification is an essential tool to monitor HIV-infected patients. The HIV quantification is a disease progression marker and it is a key indicator in treatment efficacy. Inaccurate viral RNA values may subsequently lead to inappropriate treatment decisions hence accurate quantification methods are necessary. Several different methodologies are available to quantify the HIV viral load: a number of them are based on nucleic acid detection and others in detection of enzymes and antigens. Automation is also variable among these methods in addition to differences in isolation, amplification and detection. Several studies have been carried out to evaluate their correlation and agreement and some have evidenced discordant viral load values assessed by different assays. The knowledge about these differences should be taken in to account when analysing viral load results, particularly when low-level viraemia is concerned or those close to endpoints employed for definition of virological failure. Objectives: In this study, two methods to quantify viral load are evaluated: one is based on real-time PCR (AmpliPrep TaqMan HIV-1 v2.0) and the other is based on branched-DNA technology (Siemens Versant HIV-1 RNA 3.0). Methods: 1000 plasma samples received at the HIV/GUM Research Laboratory within Chelsea and Westminster Hospital for HIV-1 viral load quantification between December 2009 and January 2010 were tested by both Cobas AmpliPrep TaqMan HIV-1 v2.0 and Siemens Versant HIV-1 RNA 3.0 methods. Results: Results obtained show that Cobas AmpliPrep TaqMan HIV-1 v2.0 PCR systematically overquantifies the viral loads results when compared to bDNA Siemens Versant HIV-1 RNA 3.0. Conclusion: The overquantification by Cobas AmpliPrep TaqMan HIV-1 v2.0 over bDNA Siemens Versant HIV-1 RNA 3.0 is likely to be a result of its increased sensitivity. We recommend caution when comparing results from different methodologies, especially when a conventional assay and a real-time PCR assay are concerned.
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Comparação entre BDNA e PCR na detecção da carga viral do HIV-1Passos, Daniela Ferreira January 2013 (has links)
Introdução: A AIDS (Síndrome da Imunodeficiência Adquirida) é caracterizada por uma disfunção grave no sistema imunológico causada por uma infecção por HIV (Human Immunodeficiency Virus). A quantificação da viremia (carga viral) é uma ferramenta muito útil no monitoramento dos pacientes infectados pelo HIV, sendo um marcador de progressão da doença e eficácia do tratamento. A estimativa incorreta da carga viral pode levar à decisão terapêutica equivocada, portanto métodos acurados de quantificação se fazem necessários. Diversas técnicas comerciais estão disponíveis para a quantificação da carga viral do HIV-1: a maioria destas se baseiam na detecção de ácidos nucléicos e outras na detecção de enzimas e antígenos. O grau de automação varia nas diferentes técnicas assim como os procedimentos de isolamento, amplificação e detecção. A correlação e a concordância entre estas técnicas têm sido estudadas e há relatos de discordância entre os valores de carga viral produzidos por diferentes métodos. O conhecimento sobre o efeito das variações entre as técnicas se faz necessário para assegurar a interpretação adequada dos resultados. A interpretação dos resultados correta é particularmente importante quando estes estão próximos a pontos de corte utilizados para definições de rebote viral e falha virológica. Objetivos: O objetivo deste estudo é comparar as técnicas de PCR (Cobas AmpliPrep TaqMan HIV-1 v2.0) e b-DNA (Siemens Versant HIV-1 RNA 3.0) para quantificação do HIV-1. Métodos: 1000 amostras recebidas no HIV/GUM Research Laboratory do Chelsea and Westminster Hospital para quantificação da carga viral do HIV-1 durante os meses de Dezembro de 2009 e Janeiro de 2010 foram testadas pelos métodos de PCR (Cobas AmpliPrep TaqMan HIV-1 v2.0) e b-DNA (Siemens Versant HIV-1 RNA 3.0). Resultados: Uma superquantificação sistemática foi observada nos resultados testados por PCR. Esta superquantificação ficou evidente nos resultados entre 50 e 250 cópias. Uma concordância elevada foi observada na análise dos pontos de corte de 500 e 1000 copias/mL. Uma correlação linear forte foi observada entre estas técnicas na análise das amostras que obtiveram resultados dentro do limite comum de detecção de ambas as técnicas, porém o nível de concordância foi insatisfatório. Conclusão: A superquantificação observada nos resultados obtidos pelo Cobas AmpliPrep TaqMan HIV- 1 v2.0 em relação ao bDNA Siemens Versant HIV-1 RNA 3.0 é provavelmente o resultado de uma sensibilidade aumentada desta técnica. Nós recomendamos cautela quando resultados de duas metodologias diferentes são comparados, especialmente quando se comparam metodologias convencionais com aquelas baseadas em PCR em tempo real. / Introduction: AIDS (Acquired Immunodeficiency Syndrome) is characterised by a severe immune dysfunction caused by the HIV (Human Immunodeficiency Virus). The HIV viral load quantification is an essential tool to monitor HIV-infected patients. The HIV quantification is a disease progression marker and it is a key indicator in treatment efficacy. Inaccurate viral RNA values may subsequently lead to inappropriate treatment decisions hence accurate quantification methods are necessary. Several different methodologies are available to quantify the HIV viral load: a number of them are based on nucleic acid detection and others in detection of enzymes and antigens. Automation is also variable among these methods in addition to differences in isolation, amplification and detection. Several studies have been carried out to evaluate their correlation and agreement and some have evidenced discordant viral load values assessed by different assays. The knowledge about these differences should be taken in to account when analysing viral load results, particularly when low-level viraemia is concerned or those close to endpoints employed for definition of virological failure. Objectives: In this study, two methods to quantify viral load are evaluated: one is based on real-time PCR (AmpliPrep TaqMan HIV-1 v2.0) and the other is based on branched-DNA technology (Siemens Versant HIV-1 RNA 3.0). Methods: 1000 plasma samples received at the HIV/GUM Research Laboratory within Chelsea and Westminster Hospital for HIV-1 viral load quantification between December 2009 and January 2010 were tested by both Cobas AmpliPrep TaqMan HIV-1 v2.0 and Siemens Versant HIV-1 RNA 3.0 methods. Results: Results obtained show that Cobas AmpliPrep TaqMan HIV-1 v2.0 PCR systematically overquantifies the viral loads results when compared to bDNA Siemens Versant HIV-1 RNA 3.0. Conclusion: The overquantification by Cobas AmpliPrep TaqMan HIV-1 v2.0 over bDNA Siemens Versant HIV-1 RNA 3.0 is likely to be a result of its increased sensitivity. We recommend caution when comparing results from different methodologies, especially when a conventional assay and a real-time PCR assay are concerned.
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Comparação entre BDNA e PCR na detecção da carga viral do HIV-1Passos, Daniela Ferreira January 2013 (has links)
Introdução: A AIDS (Síndrome da Imunodeficiência Adquirida) é caracterizada por uma disfunção grave no sistema imunológico causada por uma infecção por HIV (Human Immunodeficiency Virus). A quantificação da viremia (carga viral) é uma ferramenta muito útil no monitoramento dos pacientes infectados pelo HIV, sendo um marcador de progressão da doença e eficácia do tratamento. A estimativa incorreta da carga viral pode levar à decisão terapêutica equivocada, portanto métodos acurados de quantificação se fazem necessários. Diversas técnicas comerciais estão disponíveis para a quantificação da carga viral do HIV-1: a maioria destas se baseiam na detecção de ácidos nucléicos e outras na detecção de enzimas e antígenos. O grau de automação varia nas diferentes técnicas assim como os procedimentos de isolamento, amplificação e detecção. A correlação e a concordância entre estas técnicas têm sido estudadas e há relatos de discordância entre os valores de carga viral produzidos por diferentes métodos. O conhecimento sobre o efeito das variações entre as técnicas se faz necessário para assegurar a interpretação adequada dos resultados. A interpretação dos resultados correta é particularmente importante quando estes estão próximos a pontos de corte utilizados para definições de rebote viral e falha virológica. Objetivos: O objetivo deste estudo é comparar as técnicas de PCR (Cobas AmpliPrep TaqMan HIV-1 v2.0) e b-DNA (Siemens Versant HIV-1 RNA 3.0) para quantificação do HIV-1. Métodos: 1000 amostras recebidas no HIV/GUM Research Laboratory do Chelsea and Westminster Hospital para quantificação da carga viral do HIV-1 durante os meses de Dezembro de 2009 e Janeiro de 2010 foram testadas pelos métodos de PCR (Cobas AmpliPrep TaqMan HIV-1 v2.0) e b-DNA (Siemens Versant HIV-1 RNA 3.0). Resultados: Uma superquantificação sistemática foi observada nos resultados testados por PCR. Esta superquantificação ficou evidente nos resultados entre 50 e 250 cópias. Uma concordância elevada foi observada na análise dos pontos de corte de 500 e 1000 copias/mL. Uma correlação linear forte foi observada entre estas técnicas na análise das amostras que obtiveram resultados dentro do limite comum de detecção de ambas as técnicas, porém o nível de concordância foi insatisfatório. Conclusão: A superquantificação observada nos resultados obtidos pelo Cobas AmpliPrep TaqMan HIV- 1 v2.0 em relação ao bDNA Siemens Versant HIV-1 RNA 3.0 é provavelmente o resultado de uma sensibilidade aumentada desta técnica. Nós recomendamos cautela quando resultados de duas metodologias diferentes são comparados, especialmente quando se comparam metodologias convencionais com aquelas baseadas em PCR em tempo real. / Introduction: AIDS (Acquired Immunodeficiency Syndrome) is characterised by a severe immune dysfunction caused by the HIV (Human Immunodeficiency Virus). The HIV viral load quantification is an essential tool to monitor HIV-infected patients. The HIV quantification is a disease progression marker and it is a key indicator in treatment efficacy. Inaccurate viral RNA values may subsequently lead to inappropriate treatment decisions hence accurate quantification methods are necessary. Several different methodologies are available to quantify the HIV viral load: a number of them are based on nucleic acid detection and others in detection of enzymes and antigens. Automation is also variable among these methods in addition to differences in isolation, amplification and detection. Several studies have been carried out to evaluate their correlation and agreement and some have evidenced discordant viral load values assessed by different assays. The knowledge about these differences should be taken in to account when analysing viral load results, particularly when low-level viraemia is concerned or those close to endpoints employed for definition of virological failure. Objectives: In this study, two methods to quantify viral load are evaluated: one is based on real-time PCR (AmpliPrep TaqMan HIV-1 v2.0) and the other is based on branched-DNA technology (Siemens Versant HIV-1 RNA 3.0). Methods: 1000 plasma samples received at the HIV/GUM Research Laboratory within Chelsea and Westminster Hospital for HIV-1 viral load quantification between December 2009 and January 2010 were tested by both Cobas AmpliPrep TaqMan HIV-1 v2.0 and Siemens Versant HIV-1 RNA 3.0 methods. Results: Results obtained show that Cobas AmpliPrep TaqMan HIV-1 v2.0 PCR systematically overquantifies the viral loads results when compared to bDNA Siemens Versant HIV-1 RNA 3.0. Conclusion: The overquantification by Cobas AmpliPrep TaqMan HIV-1 v2.0 over bDNA Siemens Versant HIV-1 RNA 3.0 is likely to be a result of its increased sensitivity. We recommend caution when comparing results from different methodologies, especially when a conventional assay and a real-time PCR assay are concerned.
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Industrialização e avaliação do método de Western blotting - WB Tp-IgG - como confirmatório na sorologia da sífilis / Industrialization and evaluation of Western blotting method - WB Tp-IgG - as confirmatory for syphilis serologyLemos, Elaine Antunes de 17 August 2007 (has links)
A sífilis adquirida e a congênita continuam aumentando e preocupando as autoridades sanitárias do mundo, ao verem que as metas estabelecidas para o seu controle estão longe de serem atingidas. Apesar dos esforços feitos na descoberta de novas ferramentas para o diagnóstico e monitoramento da sífilis, vemos um despreparo muito grande, principalmente entre os laboratoristas, em processar corretamente os reagentes disponíveis e melhor selecionar aqueles que apresentem qualidade para serem usados na rotina do laboratório. O que constatamos neste estudo é um espelho da realidade do diagnóstico da sífilis e mostra a dificuldade que os clínicos enfrentam ao receberem um laudo do laboratório. Trabalhando em colaboração com diferentes serviços e grupos de pesquisa, selecionamos aqueles que trabalhavam com: gestantes atendidas no pré-natal, doadores de sangue, pacientes infectados pelo HIV e pacientes de laboratório clínico e fizemos um estudo crítico da sorologia utilizada em cada serviço. Verificamos discrepância dos resultados obtidos nos testes não-treponêmicos VDRL e RPR, principalmente entre os soros de baixa reatividade, e nos treponêmicos FTA-abs, TPHA e ELISA. Decidimos aplicar o método de Western blotting e analisar o seu comportamento em todas as amostras de soros ensaiadas. Para obtenção de resultados reprodutíveis, fizemos a industrialização do método e formatamos um reagente na forma de um kit diagnóstico, WB Tp-IgG, que pudesse ser facilmente utilizado e interpretado. Os resultados obtidos mostraram que o WB Tp-IgG pode ser utilizado como método confirmatório da sífilis, substituindo o FTA-abs, tradicionalmente recomendado para essa finalidade e que pudesse fazer parte de uma proposta de algoritmo para o diagnóstico sorológico da sífilis. / Acquired and congenital syphilis have been increased and worried the worldwide health authorities, mainly because the WHO targets for syphilis control are far from to be held. Much effort had been made for development of new tools to be used in syphilis diagnosis and following up, however we noticed a lack of ability of laboratory workers in the correctly choosing and using the reagents in laboratory routine. In this study what we observed were the reality of syphilis diagnosis and the difficulties that physicians have in how to procedure when they received the results from the laboratory. Working in collaboration with different settings and research groups we choose some of them that attend pregnant women, blood donors, HIV patients and patients from clinical laboratory. With these group individuals we made a critical study of the serology methods used in each one. We verified high level of discordant results between nontreponemal tests VDRL and RPR, mainly in serum samples with low reactivity and between treponemal tests FTA-abs, TPHA and ELISA, in all services. To obtain reproducibility of the results we made the industrialization of the method and set up a reagent as a kit diagnosis, easily to performer. Appling the western blotting method we evaluated the performance of the test in all sera samples assayed. The results showed that the WB Tp-IgG can be useful as confirmatory test for syphilis, replacing FTA-abs, traditionally recommended for this and that could be included in algorithm propose for serological diagnosis of syphilis.
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Diagnóstico de laboratório da sífilis adquirida e congênita e definição das fases clínicas da doença por western-blotting / Industrialization and evaluation of Western blotting method - WB Tp-IgG - as confirmatory for syphilis serologyLemos, Elaine Antunes de 13 September 2002 (has links)
A sífilis adquirida e a congênita continuam aumentando e preocupando as autoridades sanitárias do mundo, ao verem que as metas estabelecidas para o seu controle estão longe de serem atingidas. Apesar dos esforços feitos na descoberta de novas ferramentas para o diagnóstico e monitoramento da sífilis, vemos um despreparo muito grande, principalmente entre os laboratoristas, em processar corretamente os reagentes disponíveis e melhor selecionar aqueles que apresentem qualidade para serem usados na rotina do laboratório. O que constatamos neste estudo é um espelho da realidade do diagnóstico da sífilis e mostra a dificuldade que os clínicos enfrentam ao receberem um laudo do laboratório. Trabalhando em colaboração com diferentes serviços e grupos de pesquisa, selecionamos aqueles que trabalhavam com: gestantes atendidas no pré-natal, doadores de sangue, pacientes infectados pelo HIV e pacientes de laboratório clínico e fizemos um estudo crítico da sorologia utilizada em cada serviço. Verificamos discrepância dos resultados obtidos nos testes não-treponêmicos VDRL e RPR, principalmente entre os soros de baixa reatividade, e nos treponêmicos FTA-abs, TPHA e ELISA. Decidimos aplicar o método de Western blotting e analisar o seu comportamento em todas as amostras de soros ensaiadas. Para obtenção de resultados reprodutíveis, fizemos a industrialização do método e formatamos um reagente na forma de um kit diagnóstico, WB Tp-IgG, que pudesse ser facilmente utilizado e interpretado. Os resultados obtidos mostraram que o WB Tp-IgG pode ser utilizado como método confirmatório da sífilis, substituindo o FTA-abs, tradicionalmente recomendado para essa finalidade e que pudesse fazer parte de uma proposta de algoritmo para o diagnóstico sorológico da sífilis. / Acquired and congenital syphilis have been increased and worried the worldwide health authorities, mainly because the WHO targets for syphilis control are far from to be held. Much effort had been made for development of new tools to be used in syphilis diagnosis and following up, however we noticed a lack of ability of laboratory workers in the correctly choosing and using the reagents in laboratory routine. In this study what we observed were the reality of syphilis diagnosis and the difficulties that physicians have in how to procedure when they received the results from the laboratory. Working in collaboration with different settings and research groups we choose some of them that attend pregnant women, blood donors, HIV patients and patients from clinical laboratory. With these group individuals we made a critical study of the serology methods used in each one. We verified high level of discordant results between nontreponemal tests VDRL and RPR, mainly in serum samples with low reactivity and between treponemal tests FTA-abs, TPHA and ELISA, in all services. To obtain reproducibility of the results we made the industrialization of the method and set up a reagent as a kit diagnosis, easily to performer. Appling the western blotting method we evaluated the performance of the test in all sera samples assayed. The results showed that the WB Tp-IgG can be useful as confirmatory test for syphilis, replacing FTA-abs, traditionally recommended for this and that could be included in algorithm propose for serological diagnosis of syphilis.
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Ensaio imunoenzimático para o diagnóstico da hepatite A utilizando IgY anti-HAVSilva, Alexandre dos Santos da January 2010 (has links)
Submitted by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2012-05-21T19:40:25Z
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Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / A hepatite A é uma doença endêmica no Brasil e na América Latina. A
prevalência da infecção tem correlação com precárias condições de higiene e
saneamento. Em países em desenvolvimento, um saneamento inadequado
resulta em maior transmissão desta doença, principalmente entre crianças e
jovens. Atualmente, devido às melhorias das condições sanitárias, o perfil
epidemiológico da doença está se deslocando para idades mais avançadas, o
que facilita a ocorrência de surtos epidemiológicos. Os kits comerciais para
detecção de anti-HAV total normalmente utilizam imunoglobulina G (IgG) de
mamíferos no período convalescente da doença para a produção dos
anticorpos de captura e do conjugado. Uma alternativa à aplicação dos
anticorpos de mamíferos no diagnóstico é o uso da imunoglobulina Y (IgY),
encontrada no soro e gema dos ovos de aves e répteis. Essas proteínas têm
varias vantagens quando comparadas com IgG: alta resposta contra antígenos
de mamíferos, redução da cor de fundo em ensaios imunoenzimáticos e de
serem obtidas por um método não-invasivo (coleta da gema dos ovos). O
objetivo deste trabalho foi a obtenção de anticorpos IgY anti-HAV produzidos
em galinhas imunizadas contra o vírus da Hepatite A (HAV) e o
desenvolvimento de um ensaio imunoenzimático para detecção de anti-HAV
total utilizando IgY anti-HAV como imunoglobulinas de captura e conjugado.
Cinco grupos de galinhas foram imunizadas com diferentes inóculos contendo:
vacina com e sem o adjuvante CpG-ODN, HAV com adjuvante incompleto de
Freund (IFA) com e sem o adjuvante CpG-ODN e um grupo controle com IFA.
Os ovos foram coletados e a gema foi purificada pela precipitação com
polietileno glicol. A solução purificada contendo IgY anti-HAV foi avaliada para
determinação da concentração da IgY anti-HAV por espectrofotometria e sua
especificidade e título foram determinados à partir de um teste
imunoenzimático. Os anticorpos foram conjugados com a peroxidase e foi
estabelecida a diluição ideal para os anticorpos de captura e conjugado. Para
avaliar o ensaio imunoenzimático “in-house” com IgY anti-HAV, foi avaliado um
painel composto de 100 amostras positivas e 100 amostras negativas para anti-
HAV-total. A presença da IgY anti-HAV nas gemas dos ovos foi confirmada por
SDS-PAGE e Western Blotting, e após a purificação, a média da concentração
de proteínas nas gemas dos ovos foi de 8,7406 mg /mL. O grupo imunizado
com HAV, IFA e CPG-ODN apresentou os maiores títulos de anticorpo. O
ensaio “in-house” apresentou sensibilidade de 84%, especificidade de 79% e
eficiência de 81,5%. Os métodos utilizados para a produção de IgY anti-HAV e
sua conjugação com peroxidase foram eficientes e o ensaio imunoenzimático
“in-house” IgY anti-HAV demonstrou uma boa sensibilidade e especificidade. A
produção de anti-HAV IgY apresenta vantagens quando comparado com
obtenção da IgG anti-HAV. O teste imunoenzimático “in house” com IgY anti-
HAV pode ser uma alternativa a utilização da IgG nos ensaios
imunoenzimáticos. / Hepatitis A is an endemic disease in Brazil and Latin America.
Prevalence of this infection is related to the low degree of hygiene and
sanitation. In developing countries, inadequate sanitation results in larger
transmission of the disease mostly in children and young people. Nowadays,
due to better sanitation conditions, the epidemiological profile of disease is
changing to older ages resulting in the occurrence of outbreaks. Diagnostic kits
for detection of total anti-HAV generally use mammals immunoglobulin G (IgG)
in the convalescent period of disease for production of capture and conjugated
antibodies. One alternative to the application of mammals antibodies in the
diagnosis is the use of immunoglobulin Y (IgY), encountered in birds and
reptiles. These proteins have several advantages when compared to IgG: high
response against mammals antigens, reduction of the background in
imunoenzymatic assays and it is obtained by a non-invasive method (harvest of
the egg yolks). The objective of this work was the acquisition of anti-HAV IgY
antibodies produced in immunized chickens against Hepatitis A virus and the
development of an immunoenzymatic assay for total anti-HAV detection using
IgY anti-HAV as capture and conjugated immunoglobulins. Five groups of
chickens were immunized with different inocula containing: vaccine with and
without CpG-ODN adjuvant, HAV with incomplete Freund adjuvant (IFA) with
and without CpG-ODN and one control group with IFA. The eggs were
harvested and the yolk was purified by precipitation with polyethylene glycol.
The purified solution containing anti-HAV IgY was evaluated by
espectrofotometry and their specificity and title were determined by an
immunoenzymatic assay. These antibodies were conjugated with peroxidase
and was estabilized the ideal dilution for capture and conjugated antibodies. For
evaluation of the immunoenzymatic “in-house” assay with IgY anti-HAV, a panel
composed of 100 positive samples and 100 negative samples for total anti-HAV
was assessed. The presence of IgY anti-HAV in egg yolks was established by
SDS-PAGE and Western Blotting, and after the purification, the average of the
proteins concentrations in the egg yolks was of 8,7406 mg/mL. The group
immunized with HAV, IFA and CpG-ODN demonstrate the higher titer of
antibodies. The “in-house” assay showed sensibility of 84%, specificity of 79%
and efficiency of 81,5%. The methods used for anti-HAV IgY production and
conjugation with peroxidase were efficient and the “in-house” immunoenzymatic
assay IgY anti-HAV demonstrated a good sensitivity and specificity. The
production of IgY anti-HAV showed advantages when compared to the
acquisition of IgG anti-HAV. The immunoenzymatic “in-house” assay IgY anti-
HAV can be an alternative to the utilization of IgG in immunoenzymatic assays.
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Análise estratégica da indústria brasileira de reagentes para diagnóstico e das potencialidades do Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos frente aos desafios da saúde no BrasilPaiva, Leonardo Batista January 2009 (has links)
Submitted by Priscila Nascimento (pnascimento@icict.fiocruz.br) on 2012-11-23T17:06:52Z
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Previous issue date: 2009 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / Esta dissertação apresenta uma análise estratégica da indústria brasileira de
reagentes para diagnóstico. Nesta análise são discutidos a dinâmica industrial, os
fatores críticos de sucesso e as características deinovação do setor. A partir desta análise são identificadas oportunidades mercadológicas e tecnológicas e discutidas estratégias de inovação passíveis de utilização pelo Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos (Bio-Manguinhos), da Fundação Oswaldo Cruz, Ministério da Saúde. A estrutura analítica utilizada para atingir esses objetivos foi o Modelo para Análise Estratégica de Indústrias baseadas em Ciência de Países em Desenvolvimento (MAEI) e os elementos explorados neste estudo foram: o regime mercadológico, o regime tecnológico e papel do governo. A análise permitiu evidenciar oportunidades a partir das demandas atuais e futuras do Sistema Único de Saúde (SUS), em conformidade com os perfis demográficos e
de carga de doença do país. Foram identificadas demandas por produtos que
possam contribuir com a redução dos gastos em saúde, sejam novos produtos,
novas formas de acesso e uso dos reagentes para diagnóstico. No que se refere às tecnologias, observou-se que o país vem acompanhando o processo de difusão das tecnologias. A capacitação tecnológica atual do país não segue o mesmo padrão do estágio de difusão, entretanto existem potencialidades para atender as demandas identificadas. As estratégias de inovação propostas para Bio-Manguinhos buscam, com
oportunidades de curto e médio-longo prazo, contribuir para enfrentar os desafios do
SUS. / This dissertation presents a strategic analysis of Brazilian industry for in vitro
diagnostic assay. In this analysis it has been discussed the industrial dynamics, the
critical success factors and the innovation characteristics of this sector. From this
analysis, marketing and technological opportunitiesare identified and strategies are discussed for technological innovation in order to implement on Technology
Immunobiologicals Institute (Bio-Manguinhos), Oswaldo Cruz Foundation from Ministry of Health. The analytical structure used to achieve these goals was the strategic analysis framework of science-based industries in evelopingcountries (SAF) and the
elements explored in this study were: the marketingstructure, the technological
regime and the role of government.
The analysis allowed to highlight opportunities from current and future demands of the Brazilian Public Health System/Unified Health System (UHS), in accordance with
the demographic profiles and burden disease of the country. It was identified
demands for products that can contribute to reduct health costs, using new products,
new ways to access and/or use in vitro diagnostic assays. About technologies is concerned it was observed that the country is following the process of diffusion. The current technological capabilities of the country does not follow the same pattern of stage of diffusion, however there is potential to meet the demands identified.
The innovation strategies proposed to Bio-Manguinhos search, with opportunities for short and medium-long term, to face the challenges from UHS.
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