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Etude des événements moléculaires de la gamétogenèse de Plasmodium berghei par des approches protéomiques / Estudo dos eventos moleculares da gametogênese de Plasmodium berghei por abordagens proteômicas / Investigation of the molecular events in Plasmodium berghei gametogenesis through proteomic approaches

Saraiva Garcia, Carlos Henrique 27 October 2016 (has links)
Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2016. / Este trabalho foi elaborado em conjunto com a Université Pierre et Marie Curie. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2017-02-07T16:06:48Z No. of bitstreams: 1 2016_CarlosHenriqueSaraivaGarcia_Parcial.pdf: 4658600 bytes, checksum: a608388f9b6fa01da088371cfde06c09 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-02-27T20:54:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_CarlosHenriqueSaraivaGarcia_Parcial.pdf: 4658600 bytes, checksum: a608388f9b6fa01da088371cfde06c09 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-27T20:54:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_CarlosHenriqueSaraivaGarcia_Parcial.pdf: 4658600 bytes, checksum: a608388f9b6fa01da088371cfde06c09 (MD5) / Na história da medicina, a malária é uma das doenças parasitárias mais graves e distribuídas que afetam seres humanos. A doença é causada por parasitas do gênero Plasmodium. A malária de roedores é utilizada comumente como modelo por permitir a combinação de experimentos in vivo e in vitro, além de estudos por genética reversa. Embora a gametogênese dos estágios sexuais de Plasmodium seja um passo essencial da transmissão da malária, dados moleculares sobre a reorganização nuclear, montagem do flagelo e sua regulação na gametogênese estão incompletas. A ATPase cinesina-8 de P. berghei é uma proteína motora sugerida como um importante componente para a gametogênese macho. Os gametócitos com o gene kin8 interrompido (Δkin8) são semelhantes morfologicamente aos tipos selvagens (WT), enquanto que na gametogênese existe disfunção que tornam as células Δkin8 incompetentes para gametogênese completa e incapazes de exflagelar. Nos esforços para melhorar o conhecimento sobre a exflagelação de gametas, fizemos experimentos quantitativos de proteômica e fosfoproteômica com gametócitos WT e Δkin8. A amostra enriquecida de gametócitos do sangue murinho no tempo T0 foi induzida a exflagelação por ácido xanturênico e colhida no tempo T7 e T15 min. A quantificação relativa entre amostras foi realizada com uso de peptídeos marcados por iTRAQ na triplicata biológica independente e analisados por nanoLC/MS-MS Orbitrap Elite Mass Spectrometer após enriquecimento TiO2. Os dados foram processados através do softwares Patternlab for Proteomics e Blast2GO. Em parasitas WT, 443 proteínas e 206 fosfoproteínas foram identificados a partir de 2.617 peptídeos. Em parasitas Δkin8, 530 proteínas e 218 fosfoproteínas proteínas foram identificadas a partir de 3.198 peptídeos. A produção de gametas é regulada por fosforilações nas duas condições celulares. Entre os processos biológicos da Ontologia de Genes, aqueles relacionados a tradução de RNA, e biossíntese de DNA e proteínas foram as que mais se destacaram e mais regulados na gametogênese. Foi observado também que a glicólise e a resposta ao estresse ambiental foram mais notável principalmente no início da diferenciação celular. Para Δkin8, a desorganização de microtúbulos dos axonemas e fusos mitóticos é causa provável da supressão de proteínas motoras (cinesina -8, -13 e dineína) como também pela superexpressão de proteínas de organização do braço interno e braço radial. Observamos importante diminuição de unidades de nucleossomos e aumento de proteínas envolvidas com a desorganização da divisão nuclear. Quando comparado com o WT, no mutante houve maior expressão de proteínas envolvidas no complexo proteassoma dependente de ubiquitina e menor quantidade de algumas proteínas interferentes no metabolismo energético e egresso. A análise do Δkin8 traz novas informações sobre a exflagelação e mal funcionamento do microgameta mutante. Em conclusão, a gametogênese exige manifestamente a expressão de proteínas e sua regulação por fosforilações para a produção de energia na diferenciação dos gametas. A Cinesina 8 é essencial para a gametogênese masculina normal como também para a montagem de axonemas em P. berghei, e seu estudo fornece informações quanto a organização celular e biologia de Plasmodium. / Malaria is one of the most serious and widespread parasitic diseases that affected humans in medicine history. The disease is caused by parasites from Plasmodium genus. Rodent malaria parasites are commonly used as model since it permits the combination of in vivo and in vitro experiments and reverse genetic studies. Although Plasmodium sexual stages gametogenesis is an essential step to ensure the malaria transmission, molecular data on nuclear reorganization and intracytoplasmic flagellum assembly proteins and their regulating in gametogenesis is still missing. The P. berghei motor ATPase kinesin 8 is proposed as important component for male gametogenesis. Kin8-disrupted gametocytes (Δkin8) were morphologically similar to wild-type (WT) parasites, while male gametogenesis is not functional and able to exflagellate. In efforts to improve the knowledge on gamete exflagellation, we did quantitative proteomic and phosphoproteomic experiments with WT and Δkin8 gametocytes. Gametocytes-enriched sample from mice blood at time T0 were xanthurenic acid-induced to exflagellate and harvested at time T7 and T15 min. The relative quantitative comparisons overtime were performed through iTRAQ labelled peptides from independent biological triplicate sample analysed by nanoLC/MS-MS Orbitrap Elite Mass Spectrometer after TiO2 enrichment. Data was processed through Patternlab for Proteomics software and Blast2GO. In the WT parasites, 443 proteins and 206 phosphoproteins were identified from 2,617 peptides. In Δkin8 parasites, 530 proteins and 218 phosphoproteins were identified from 3,198 peptides. Gamete formation is highly regulated by phosphorylation in both cell conditions. Among GO biological processes, those related to RNA translation, DNA and protein biosynthesis were most prominent and strongly regulated throughout the gametogenesis, and phosphorylated proteins are mainly RNA, ATP or protein binding proteins. We observed that glycolysis and environmental stress response are predominant, mainly at the beginning of the differentiation. For Δkin8 parasites, axoneme and mitotic spindle microtubules disorganization is likely to be caused by motor proteins down-regulation (kinesin-8, -13, and dynein) as well as by up-regulated proteins from inner arm and radial spoke organization. We noticed important down-expression of nucleosome units, up-expression of proteins involved in the replication that could be related to the nuclear division disorganisation. A higher expression of proteins involved in the ubiquitin-dependant proteasome complex and stress response and folding, and lower expression of some proteins that interferes in energy metabolism and egress in the mutant compared to the WT. The Δkin8 proteomic approach brings new clues on the exflagellation and the mutant microgamete impairment observed. In conclusion, gametogenesis clearly requires a high protein expression and phosphorylation modulation to produce energy for gamete differentiation. Kinesin 8 is essential for male gametogenesis and normal axoneme assembly in P. berghei, providing new insights into Plasmodium flagellar organization and biology. / Dans l'histoire de la médecine, le paludisme est l'une des maladies parasitaires les plus graves et répandues. Elle est causée par des parasites du genre Plasmodium. Les parasites du paludisme de rongeurs sont couramment utilisés comme modèles pour étudier le paludisme humain permettant des études de génétique inverse in vivo. Bien que la gamétogenèse des stades sexués de Plasmodium soit une étape essentielle pour la transmission du paludisme, les données moléculaires sur la réorganisation nucléaire, l'assemblage du flagelle et de leurs régulations pendant la gamétogenèse, sont toujours incomplètes. La kinésine-8 de P. berghei est une protéine motrice qui jouerait un rôle important lors de la formation des gamètes mâles. Les gamétocytes avec le gène kin8 interrompu (Δkin8) sont morphologiquement semblables au type sauvage (WT) mais la gametogenèse mâle n’est pas fonctionnelle et les cellules mutantes sont incapables de produire des gamètes mâles. Afin d’avoir une meilleure connaissance des mécanismes moléculaires mis en oeuvre au cours de la gamétogenese, nous avons entrepris des études protéomiques et phosphoprotéomiques comparatives et quantitatives chez le parasite de type sauvage et chez le mutant Δkin8. Les gamétocytes enrichis à partir du sang de souris infectées ont été récoltés au temps 0, 7 et 15 min après induction de la gamétogenese par l'acide xanthurénique. Des comparaisons quantitatives relatives ont été effectuées par nanoLC/MS-MS du type Orbitrap Elite à partir des peptides et phosphopeptides préalablement enrichis par TiO2, marqués par iTRAQ, et de triplicats biologiques. Les données ont été traitées par les logiciels Patternlab for Proteomics et Blast2GO. Chez WT, 443 protéines et 206 phosphoprotéines ont été identifiées à partir de 2.617 peptides. Chez Δkin8, 530 protéines et 218 phosphoprotéines ont été identifiées à partir de 3.198 peptides. La formation de gamètes est fortement régulée par phosphorylation dans les deux conditions cellulaires. Parmi les processus biologiques (GO term), ceux liés à la traduction de l’ARN, la biosynthèse de l’ADN et de protéines sont les plus marquants et les plus régulés. La glycolyse et la réponse aux stress environnementaux sont également prédominantes, surtout au début de la différenciation des gamètes. Chez Δkin8, une forte sous-expression des protéines motrices kinésine-13 et dynéine, et une surexpression de protéines de l'organisation des bras intérieur et radiaire des axonèmes sont observées. La modulation de l’expression de ces protéines participe certainement, en plus de l’absence de la kinésine-8, au phénotype observé chez Δkin8: l’absence d’assemblage des axonèmes des gamètes mâles. Nous avons constaté également une sous-expression significative d’unités des nucléosomes et la surexpression de protéines impliquées dans la réplication. Ceci pourrait être relié à la perturbation de la division nucléaire observée chez Δkin8. Par rapport au WT, Δkin8 montre une expression élevée de protéines du complexe de protéasome dépendant de l’ubiquitine et de protéines impliquées dans la réponse au stress et le repliement des protéines, ainsi qu’une faible expression de certaines protéines qui interviennent dans le métabolisme énergétique et la sortie de l’hématie. Ces approches de protéomique et phosphoprotéomique comparatives permettent pour la première fois d’identifier les évènements moléculaires, leur dynamique et leur modulation, mis en jeux lors de la gamétogenèse de P. berghei.
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Avaliação epidemiológica das parasitoses intestinais no Parque Oswaldo Cruz, Manguinhos, Rio de Janeiro, RJ

Espíndola, Carina Martins de Oliveira January 2014 (has links)
Made available in DSpace on 2016-03-01T13:59:41Z (GMT). No. of bitstreams: 2 carina_espindola_ioc_mest_2014.pdf: 2358356 bytes, checksum: 47750043a9c123f2a1101a1ac8f5bf14 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-01-13 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A importância das parasitoses intestinais no Brasil não comporta contestação. Estas acometem principalmente a população de baixa renda, sem acesso ao saneamento básico, à assistência médica e às informações adequadas sobre medidas profiláticas. O objetivo do presente trabalho foi realizar um estudo integrado para avaliação epidemiológica das parasitoses intestinais na Comunidade do Amorim - Parque Oswaldo Cruz (POC), localizada no Complexo de Favelas de Manguinhos, RJ, reforçando políticas públicas de prevenção e visando à melhoria da qualidade de vida da população. Realizou-se inquéritos socioeconômico e coproparasitológico, através do método de sedimentação de Lutz (1919), a fim de verificar a prevalência de parasitoses intestinais. Além disso, foram realizadas oficinas de prevenção e discussões com a comunidade, no âmbito do Curso \201CSaúde Comunitária: Uma Construção de Todos\201D, ministrado no IOC, Fiocruz. Para a análise estatística utilizou-se o teste do qui-quadrado e o cálculo da Odds Ratio. Em relação às condições socioeconômicas, os moradores cadastrados, em sua maioria, apresentavam escolaridade com ensino médio completo, renda mensal de 2 a 4 salários mínimos e cerca de 90% afirmavam possuir água canalizada em seus domicílios A prevalência das parasitoses intestinais foi de 19,9%. Os parasitos mais frequentes foram os protozoários Endolimax nana e Entamoeba coli. Giardia lamblia apresentou prevalência de 1,8% (p< 0,001). Entre os helmintos, Enterobius vermicularis foi o mais frequente (p< 0,001). Este estudo possibilitou concluir que o perfil epidemiológico das parasitoses intestinais na comunidade do Amorim (POC), foi estabelecido, servindo de base científica para ações governamentais. Devido às condições ambientais e a falta da fiscalização do provimento de políticas públicas em saneamento, na localidade, há a necessidade de padronização de metodologia a ser utilizada no SUS, para o controle da transmissão em áreas vulneráveis tais como Manguinhos, RJ. O curso \201CSaúde Comunitária: Uma Construção de Todos\201D, apresentou-se como uma metodologia inclusiva em Manguinhos, RJ, que pode ser replicada em outros territórios para o enfrentamento das parasitoses intestinais, visando a promoção da saúde / The importance of intestinal parasite infections (IPIs) in Brazil does not carry on defense. These affect mainly the low - income population without access to basic sanitation, health care and adequate information on preventive measures. The aim of this stud y was to achieve an integrated epidemiological survey of intestinal parasites in the Amorim - Parque Oswaldo Cruz (POC) Community, located at Manguinhos complex of slums, RJ, reinforcing public policies for prevention and improvement of the quality of life . It were performed socioeconomic surveys and stool examination by the Lutz (1919) sedimentation method, in order to determine the prevalence of intestinal parasites. In addition, prevention workshops and discussions were conducted with the community, with in the course "Saúde Comunitária: Uma Construção de Todos" , hosted by IOC, Fiocruz. The statistical analysis used the chi - square test and odds ratio . Regarding their socioeconomic features, residents had high school education, monthly income 2 - 4 minimum salaries and approximately 90% claimed to have piped water at their homes. The overall prevalence of IPIs was 19.9 %. The most frequent parasites were protozoa Endolimax nana and Entamoeba coli . Giardia lamblia showed prevalence 1.8 % (p < 0.001). Among th e helminths, Enterobius vermicularis was the most common (p <0.001). This study allowed concluding which the epidemiological profile of IPIs in the Amorim (POC) community was established, serving as a scientific basis for government actions. Due to environ mental conditions and lack surveillance providing public policy on sanitation in the locality, there is a need to standardize the methodology to be used in the SUS, to control the transmission at vulnerable areas, including Manguinhos, RJ. The course “Saú de Comunitária: Uma Construção de Todos” , presented by itself as an inclusive methodology in Manguinhos, RJ, a
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Dengue no Estado do Rio Grande do Norte, 2010-2012vigilância virológica e aspectos epidemiológicos

Branco, Mário Sérgio Duarte January 2014 (has links)
Made available in DSpace on 2016-03-28T12:47:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 mario_branco_ioc_mest_2014.pdf: 3531615 bytes, checksum: 912f973f0f85cb9d0adb10d8d1d806d7 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-02-23 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A dengue é a arbovirose mais importante do mundo. Nos últimos 50 anos, vem progressivamente alcançando o status de pandemia global. Este trabalho descreve a vigilância virológica e os aspectos epidemiológicos da dengue no Estado do Rio Grande do Norte, no período de 2010 a 2012. Foram estudados 1581 casos pela metodologia de isolamento viral e/ou RT-PCR para detecção e tipagem viral, provenientes de diferentes Centros de Saúde do Estado do Rio Grande do Norte, no período compreendido entre Janeiro de 2010 e Dezembro de 2012. A infecção foi confirmada através do isolamento viral em 27% dos casos, enquanto a RT-PCR confirmou 24% dos casos estudados, a união das duas metodologias confirmou 30% dos casos estudados. Este estudo detectou a circulação de todos os quatro sorotipos do vírus Dengue no Rio Grande do Norte, havendo a circulação do DENV-1, DENV-2 e DENV-3 em 2010, já em 2011 ocorreu a circulação do DENV-1, DENV-2 e a introdução do DENV-4 no Estado, após um período de 30 anos sem registro no país. Em 2012 foi detectada apenas a circulação do DENV-4. O sorotipo predominante em 2010 foi o DENV-2, representando 53,33% dos casos positivos, seguido do DENV-1, com 45,33% e DENV-3 com 1,33%. Em 2011, o DENV-1 foi predominante com 75,49% dos casos positivos, seguido por DENV-2 e DENV-4. Em 2012, o DENV-4 foi o único detectado, com 100% dos casos positivos A distribuição geográfica dos casos concentrou-se em Natal, com 53,97% dos casos confirmados. Em relação à distribuição mensal, tivemos um maior número de casos nos meses de Maio e Abril, 23% e 21% dos casos positivos respectivamente (p< 0,0001). A faixa etária mais acometida foi a de 0 a 10 anos, com 38% dos casos positivos, sendo que apenas em 2012, a faixa etária de 11 a 30 anos foi a mais acometida com 51,33% dos casos (p=0,0001). A média de idade dos casos confirmados por sorotipo foi significativamente maior para o DENV-4 (p<0,0001), sendo de 29,87 anos (DP: 17,01). Em relação ao gênero, o sexo feminino representou 52% dos casos. A média de idade de mulheres afetadas pela Dengue foi maior (p=0,0345) que a dos homens afetados, sendo de 22,69 (DP: 18,85). A caracterização genética das cepas circulantes confirmou a circulação do genótipo V, genótipo Sudeste Asiático/Americano e genótipo II, respectivamente para DENV-1, DENV-2 e DENV-4. Este trabalho subsidiará uma melhor compreensão sobre a ação desses vírus na população Norte-Riograndense, fornecendo auxílio às ações voltadas ao controle da doença na região, constituindo uma importante contribuição ao se considerar o grande impacto dessa doença no RN / Dengue is considered as the most important arthropod - borne viral disease throughout the world, which currently represents a major public health problem in tropical and subtropical countries, i ncluding Brazil. This work presents results of virological surveillance and epidemiological aspects of dengue in the state of Rio Grande do Norte, Brazil, 2010 - 2012. A total of 1,581 cases, reported from January 2010 to December 2012 at various health cent ers in the state, were studied by the method of viral isolation and / or RT - PCR for viral detection and typing. The infection was confirmed by virus isolation in 27% of the cases, while the RT - PCR confirmed 24% of the cases studied; the union of the two me thodologies confirmed 30% of the cases studied. This study detected the circulation of all four serotypes of dengue virus in Rio Grande do Norte, with the circulation of DENV - 1, DENV - 2, and DENV - 3 in 2010, and the circulation of DENV - 1, DENV - 2, and the in troduction of DENV - 4 in the state in 2011, after a 30 - year period without registration in the country. The predominant serotype in 2010 was the DENV - 2, representing 53.33% of the positive cases, followed by DENV - 1, with 45.33% and DENV - 3 with 1.33%. In 201 1, DENV - 1 was predominant with 75.49% of the positive cases, followed by DENV - 2 and DENV - 4. In 2012, DENV - 4 was predominant and exclusive, 100% of positive cases. Regarding the spatial distribution, most of cases occurred in Natal, with 53,97% of confirmed cases. The monthly distribution showed a greater number of positive cases in the months of April (21%) and May (23%) (p <0.0001). The most affected age group was 0 - 10 years with 38% positive cases, and only in 2012, the age group 11 - 30 years was the most affected with 51.33% of the cases (p = 0.0001). The average age of confirmed cases was significantly higher for serotype DENV - 4 (p <0.0001), being 29.87 years (SD: 17,01). Regarding gender, females represented 52% of the cases. The average age of women aff ected by dengue was higher (p = 0.0345) than the affected men, with 22.69 (SD: 18.85). Genetic characterization of circulating strains confirmed the circulation of genotypes V, Southeast Asian / American and II, respectively, for DENV - 1, DENV - 2 and DENV - 4. This work furthers a better understanding of the action of these viruses in the local population. Providing assistance to efforts aimed at controlling the disease in the region is an important contribution when considering the major impact of this disease
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Estudo da infecção por Plasmodium spp no município de Guapimirim, Estado do Rio de Janeiro

Miguel, Renata Bortolasse January 2011 (has links)
Submitted by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2012-03-29T18:25:06Z No. of bitstreams: 1 renata_b_miguel_ioc_mt_0017_2011.pdf: 2399561 bytes, checksum: 3c878a06daf8bffcef22ffdf3de0a6c4 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-03-29T18:25:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 renata_b_miguel_ioc_mt_0017_2011.pdf: 2399561 bytes, checksum: 3c878a06daf8bffcef22ffdf3de0a6c4 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / No ano 2010, no Brasil mais de 300.000 casos de malária foram detectados, 99,8% deles dos quais, ocorridos na Amazônia legal. Na região extra-amazônica a malária é notificada, embora, a maioria casos são importados das áreas endêmicas do Brasil ou de outros países. Estudos de base populacional realizados em São Paulo e no Espírito Santo têm mostrado a presença de malária autóctone e infecção assintomática em diversas áreas da Mata Atlântica, sendo que os casos apresentam-se com sintomatologia tipicamente leve e baixas densidades parasitárias. De acordo com a Secretaria Estadual de Vigilância Epidemiológica do Rio de Janeiro, no período entre 2001-2008 foram notificados 29 casos de malária autóctones e o município de Nova Friburgo foi responsável por 30% deles. Em 2008, foi diagnosticado um caso autóctone no município de Guapimirim e dois outros casos ocorreram em dezembro de 2009. Com o objetivo de investigar a presença de casos de malária e de infecção assintomática na área peri-urbana e rural do município de Guapimirim e identificar os principais fatores associados à sua ocorrência, foi realizado um estudo observacional misto, que consistiu de uma análise retrospectiva dos dados secundários da Secretaria Estadual de Saúde (2002-2010), uma entrevista com informante chave e um corte seccional no município de Guapimirim no primeiro semestre de 2010. O estudo retrospectivo mostrou uma média anual de 90 casos por ano. Os casos eram importados em sua maioria com predomínio do gênero masculino; a média de idade de 41,96±14,6 (44,3±14,56 anos em 2002 e de 37,6±16 anos em 2010) (p<0,001). As freqüências por espécies de plasmódios foram 49,1% por P. falciparum, 47,3% para P. vivax e 1,0% por P. malariae. P. falciparum foi responsável por 39,4% dos casos em 2002 e por 68,2% em 2010 (p<0,001). De 176 indivíduos que tiveram o diagnóstico de malária fechado ou investigação epidemiológica completa, a maioria adquiriu a doença no estado do Amazonas (38,1%), seguido por Rio de Janeiro, (19,9%) e Rondônia (16,5%). O município de Cachoeira de Macacu contribuiu com 22,7% dos casos autóctones do RJ; 63,0% ocorreram no primeiro semestre de cada ano. No estudo seccional foram entrevistadas 324 pessoas maiores de cinco anos de idade, das quais foram coletadas amostras para exames parasitológico e sorológico. Duas gotas espessas foram positivas, uma para Plasmodium spp e a outra para Babesia spp. Nove pessoas foram positivas pela PCR (seis para P. malariae, duas para P. vivax e uma para P. falciparum). Na sorologia, 3,5% das amostras apresentaram anticorpos para IgG anti P. falciparum e 7,7% para o IgG anti P. vivax. Observamos que o ingresso na mata foi um comportamento de risco para infecção plasmodial e as localidades de Garrafão, Orindi e Paraíso (próximas à Cachoeira de Macacu) foram as mais afetadas. Discute-se que a transmissão da malária no estado não está interrompida e que o Rio de Janeiro pode ser considerado como uma área de malária residual com presença de infecção assintomática. Três possíveis cenários diferentes de transmissão são apresentados. / In 2010, more than 300,000 cases of malaria were detected in Brazil, 99.8% in the Amazon. In the extra-Amazonian region, malaria is reported, although most cases are imported from endemic areas of Brazil or other countries. Population-based studies conducted in São Paulo and Espirito Santo have shown the presence of malaria and asymptomatic infection in several areas of the Atlantic Florest, where the cases present with symptoms typically mild and low parasite loads. According to the state Department of Epidemiological Surveillance of Rio de Janeiro in the period 2001-2008 were 29 reported cases of malaria and the municipality of Nova Friburgo was responsible for 30% of them. In 2008, a case was diagnosed in the native city of Guapimirim and two other cases occurred in December 2009. Investigate the presence of cases of malaria and asymptomatic infection in the peri-urban and rural areas of Guapimirim and identify key factors associated with its occurrence, was an observational study mixture, which consisted of a retrospective analysis of secondary data from the Department of Health (2002-2010), an interview with key informant and a cross section of the city Guapimirim the first half of 2010. The retrospective study showed an annual average of 90 cases per year. The cases were mostly imported, predominantly male and the average age of 41.96 ± 14.6 (44.3 ± 14.56 years in 2002 and 37.6 ± 16 years in 2010) (p < 0.001). The frequencies of species of parasites were 49.1% for P. falciparum, 47.3% for P. vivax and 1.0% for P. malariae. P. falciparum accounted for 39.4% of cases in 2002 and by 68.2% in 2010 (p <0.001). The 176 individuals who were diagnosed with malaria epidemiological investigation closed or complete, most acquired the disease in the state of Amazonas (38.1%), followed by Rio de Janeiro (19.9%) and Rondônia (16.5%). The city of Cachoeira de Macacu contributed 22.7% of native Rio de Janeiro, 63.0% occurred in the first half of each year. In cross-sectional study interviewed 324 people over the age of five, of which samples were collected for parasitological and serological tests. Two thick blood smears were positive for Plasmodium spp and one another for Babesia sp. Nine persons were found positive by PCR (six for P. malariae, two for P. vivax and one for P. falciparum). In serology, 3,5% of samples showed to P.falciparum and 7.7% for IgG anti-P vivax. We note that admission into the woods was a risk behavior for plasmodium infection and the localities of Caneca Fina, Orinda and Paraíso (near the Cachoeira de Macacu) were the most affected. It is argued that the transmission of malaria in the state is not interrupted and that the Rio de Janeiro can be considered as an area of malaria with a residual presence of asymptomatic infection. Three different transmission scenarios are presented.
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Ocorrência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii associada a fatores de risco em gatos com esporotricose oriundos da região metropolitana do Rio de Janeiro

Barros, Renata Simões January 2013 (has links)
Made available in DSpace on 2015-10-16T12:52:52Z (GMT). No. of bitstreams: 2 renata_barros_ini_mest_2013.pdf: 649069 bytes, checksum: ccf984958e0979b9f8cb5d6df59ab3fd (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-06-10 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A toxoplasmose é uma zoonose causada pelo protozoário Toxoplasma gondii que acomete várias espécies de vertebrados, inclusive o ser humano. Os gatos, assim como os outros felinos, têm papel de suma importância na epidemiologia da infecção, pois são os hospedeiros definitivos do T. gondii. Esse trabalho teve como objetivo determinar a frequência de anticorpos anti-T.gondii associados a fatores de risco e co-infecções em 213 gatos com esporotricose oriundos da região metropolitana do Rio de Janeiro e assistidos no LAPCLIN-DERMZOO, no período de novembro de 2007 a fevereiro de 2011. Esses animais foram acompanhados mensalmente devido ao tratamento para esporotricose, até os seus desfechos clínicos. Foram realizadas sorologias seriadas para toxoplasmose por meio da hemaglutinação indireta (HAI) e pela reação da imunofluorescência indireta (RIFI) e diagnóstico para o feline imunnodeficiency virus (FIV) e o feline leukemia vírus (FeLV) através de um imunoensaio rápido. Dos 213 gatos, 14 (6,6%) apresentaram anticorpos anti-T. gondii na RIFI (IgG) e na HAI. Houve um caso único de soroconversão, no quarto acompanhamento Houve variação de pelo menos dois títulos na IgG-RIFI nos acompanhamentos de dois animais. Apenas um animal (7,1%) apresentou co-infecção de toxoplasmose com o FIV e três animais (21,4%) com o FeLV. Não foi detectada associação entre as variáveis e co-infecções estudadas e a presença de anticorpos anti-T. gondii, porém 78,6% dos gatos com infecção toxoplásmica apresentaram falência terapêutica no tratamento para esporotricose, sendo quatro deles (27,3%) FIV ou FeLV positivos. A frequência da infecção toxoplásmica nos gatos estudados foi baixa, houve uma maior frequência de animais soropositivos para T. gondii entre aqueles que tinham livre acesso a rua, conviviam com outros gatos e possuíam mais de três anos de idade e foi observada 100% de concordância no teste diagnóstico para T. gondii entre a RIFI e a HAI / Toxoplasmosis is a zoonotic disease caused by the Toxoplasma gondii protozoan that affects several species of vertebrates, incl uding human s . Cats, as well as other felines, a re important in the epidemiology of the infection because they are the definite hosts of T . gondii . This study aim ed to determine the frequency of anti - T . gondii antibodies associated with risk factors and coinfections in 213 cats infected with sporotrichosis in the metropolitan Rio de Janeiro and assisted in the LAPCLIN - DERMZOO , in the period of november 2007 to february 2011. These animals were monthly evaluate d due to sporotrichosis treatment until their sporotrichosis treatment outcomes. Serologic series for toxoplasmosis were performed through indirect he magglutination assay (IHA) and indirect fluorescence antibody test (I F A T) , and feline immunodeficiency vi rus (FIV) and feline leukemi a vi rus ( FeLV) diagnose s were made by fast immunoassay. Am ong the 213 studied cats, 14 (6. 6%) showed anti - T. gondii antibodies in the I F A T and in the IHA. There was only one occurrence of seroconversion in the fourth clinical evaluation . There was a variation of at least two titles in the I F A T - IgG in the clinical follow up of two animals. Just one animal (7. 1%) showed coinfection of toxoplasmosis with FIV a nd three animals (21. 4%) with FeLV. The association between variables a nd studied coinfections with the presence of T. gondii antibodies has not been detected, nonetheless 78.6% of the infected cats showed therapeutical failure in the sporotrichosis treatment , and four of them (27. 3%) were FIV or FeLV positive. The frequency of toxoplasmosis infection in the cats was low ; cats that had free access to the street , coexisted with other cats and were older than three years showed a higher rate of T. gondii positivity and a 100% concordance in the diagnostic test for T. gondii between IFAT and IHA was also observed.
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Diversidade genética dos rotavirus da espécie A antes e após a introdução da vacina monovalente no Brasil

Martínez Gómez, Mariela January 2014 (has links)
Made available in DSpace on 2015-11-11T12:09:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 mariela_gomez_ioc_dout_2014.pdf: 8571554 bytes, checksum: 662bf4d26fe89925ff0e648a52a7d4e6 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-06-10 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Os Rotavírus da espécie A (RVA) são os principais agentes etiológicos causadores de gastroenterite aguda (GA) em crianças \22645 anos. Após a introdução, em março de 2006, da vacina monovalente G1P[8] (Rotarix® - RV1) no Programa Nacional de Imunizações (PNI) pelo Ministério da Saúde (MS) do Brasil, observou-se uma mudança na epidemiologia dos genótipos de RVA circulantes na população. Apesar desta variação dos genótipos circulantes, observou-se no Brasil uma redução de 22-28% de mortes e de 21-25% de hospitalizações em crianças \02C22 anos de idade, particularmente nas regiões Norte e Nordeste. Provavelmente a variação dos genótipos de RVA, tanto no tempo quando nas regiões geográficas, esteja relacionada a diversos fatores. O fato da vacina RV1 apresentar uma constelação genética (11 genes) Wa-like pode estar influenciando na eficácia da mesma frente aos RVA que apresentem constelações diferentes, como vírus DS-1-like e AU-1-like. Neste estudo foi analisada a diversidade genética de RVA de diversos genótipos detectados no Brasil antes e após a introdução da vacina RV1 pelo PNI, tanto em crianças vacinadas quanto não vacinadas, com o intuito de: i) identificar e caracterizar variantes de RVA emergentes e reemergentes; ii) contribuir para um melhor entendimento da dinâmica evolutiva deste vírus; iii) identificar mutações pontuais e genes que foram introduzidos mediante reestruturação genética, que eventualmente posam estar vinculados ao fato de RVA causarem GA inclusive em crianças vacinadas Deve-se ressaltar que este estudo engloba amostras de diferentes regiões geográficas do Brasil, visto que dados epidemiológicos sugerem diversidades genotípicas regionais. Todas as cepas G2P[4] para as quais foram analisados os 11 segmentos gênicos apresentaram uma constelação gênica DS-1-like: I2-R2-C2-M2-A2-N2-T2-E2-H2, apesar de que diversas variantes virais circularam no período estudado. Não foram observadas diferenças nos sítios antigênicos das proteínas VP8* e VP7 entre crianças vacinadas e não vacinadas. As cepas G1P[6] analisadas apresentaram uma constelação gênica Wa-like: I1-R1-C1-M1-A1-N1-T1-E1-H1. As cepas G12P[9] apresentaram uma constelação gênica AU-1-like: I3-R3-C3-M3-A3-N3-T3-E3-H6, enquanto as cepas G12P[8] revelaram uma constelação gênica Wa-like: I1-R1-C1-M1-A1-N1-T1-E1-H1. Além disso, a análise do viéis no uso de códons de RVA genótipo G2P[4] revelou que existe uma correlação entre o viéis no uso de códons e a composição de bases, o que sugere que a pressão mutacional é um fator importante na determinação do viéis no uso de códons em RVA humanos / Specie A rotaviruses (RVA) are the main etiological agents of acute gastroenteritis (AG) in children ≤ 5 years old. After the introduction of monovalent vaccine G1P[8] (Rotarix® - RV1) in the National Immunization Program (NIP) in March 2006, a change in the epidemiology of RVA circulating genotypes in the population was observed in Brazil. Despite this variation, a reduction of 22-28% of deaths and 21-25% of hospital admissions in children ˂ 2 years of age, particularly in the North and Northeast regions, occurred after RV1 introduction. RVA genotypes variation along time and in the different geographical regions might be related to several factors. Since the RV1 vaccine has a Wa-like genetic constellation the effectiveness of this vaccine against RVA showing different genetic constellations, such as DS-1-like and AU-1-like viruses, it might be influenced. In this study we analyzed the genetic diversity of different RVA genotypes detected in Brazil, before and after the introduction of the RV1 vaccine by the NIP, in vaccinated and unvaccinated children in order to: i) identify and characterize RVA emerging and reemerging variants; ii) contribute to a better understanding of the evolutionary dynamics of this virus; iii) identify point mutations and genes that have been introduced by reassortment events and that could eventually be linked to the fact that some RVA are capable to cause AG in vaccinated children. It should be emphasized that this study includes different geographical regions of Brazil, as epidemiological data suggests regional genotypic diversity. All G2P[4] strains analyzed revealed a DS-1-like genome constellation: I2-R2-C2-M2-A2-N2-T2-E2-H2. However, several viral variants circulated during the study period. No differences were observed inside antigenic sites of VP7 and VP8* proteins between vaccinated and unvaccinated children. The G1P[6] strains analyzed showed a Wa-like genome constellation: I1-R1-C1-M1-A1-N1-T1-E1-H1. The G12P[9] strains showed a AU-1-like genome constellation: I3-R3-C3-A3-M3-N3-T3-E3-H6, while G12P[8] strains showed a Wa-like genome constellation: I1-R1-C1-M1-A1-N1-T1-E1-H1. Furthermore, analysis of codon usage bias of RVA G2P[4] genotype revealed that a correlation between the codon usage bias and base composition exists, suggesting that the mutational pressure is the main factor in determining the codon usage bias in human RVA.
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Vigilância virológica dos vírus dengue: genotipagem e caracterização molecular de vírus isolados em mosquitos naturalmente infectados e humanos, 1986-2011

Castro, Marcia Gonçalves de January 2012 (has links)
Made available in DSpace on 2015-11-11T12:13:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 marcia_castro_ioc_dout_2012.pdf: 21978043 bytes, checksum: e9eba4cae64a400b5fd4d642dfb66bf2 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-05-21 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O dengue tem se apresentado como um grave problema de saúde pública no Brasil, razão pela qual, vários estudos têm sido realizados com o intuito de esclarecer aspectos da epidemiologia dessa doença em diferentes localidades, com histórias distintas de circulação dos diferentes sorotipos dos vírus dengue (DENV). A implantação de um Programa de vigilância entomológica e virológica e, que desde 1986 visa detectar e monitorar a circulação dos sorotipos e genótipos DENV, resultou em distintas oportunidades, no isolamento de amostras de DENV de vetores e de casos humanos permitindo a caracterização molecular e a análise filogenética, fornecendo informações relevantes para a compreensão da interação vetor- vírus- humanos. O entendimento da variação genética no vírus quando este replica em mosquitos, e como essas variações atuam durante a transmissão entre humanos e mosquitos permanecem desconhecidos. Portanto, visando contribuir para um melhor conhecimento dos DENV e sua interação com o mosquito vetor, realizamos neste trabalho, a caracterização molecular e análise filogenética de DENV isolados de mosquitos naturalmente infectados e de casos humanos, provenientes de epidemias ocorridas entre 1986 e 2011 no Brasil. Foi demonstrado que os métodos moleculares foram fundamentais por facilitarem a rápida identificação dos vírus e consequentemente o monitoramento dos genótipos circulantes A RT-PCR para a triagem de DENV em vetores se mostrou uma ferramenta útil para a vigilância virológica, com taxas de detecção que variaram de 0,78% a 25% no período estudado. A análise filogenética dos DENV-1 isolados de mosquitos e humanos mostrou que o genótipo V (Américas/África) continua o mesmo circulante desde a sua introdução, porém foi demonstrada a co-circulação de duas novas linhagens (II e III) no período de 2009 a 2011. O sequenciamento do genoma completo de DENV-3 isolado a partir de Ae. aegypti naturalmente infectados no Rio de Janeiro (RJ), assim como a análise da região 3´NC de vírus isolados em mosquitos e humanos, caracterizou estes vírus como pertencentes ao GIII e revelou a presença de inserções e deleções na região 3´NC do genoma. As deleções observadas na região 3´NC resultaram em estruturas secundárias porém nem todas as cepas com inserções nesta região apresentaram estrutura similar substituições exclusivas à cepa de DENV-3 isolada em mosquito foram observadas no gene NS5, incluindo a substituição que resultou na formação de um códon de terminação. O teste comercial Simplexa\2122 Dengue Real Time RT-PCR, disponível recentemente, foi utilizado pela primeira vez para detecção dos DENV e se mostrou um método molecular alternativo para as vigilâncias entomológica e virológica. O RT-PCR em Tempo Real possibilitou, pela primeira vez, a quantificação de DENV-1 e DENV-4 em fêmeas individuais naturalmente infectadas (1,6 x 104 cópias/mL e 1,08 x 103 cópias/mL, respectivamente) Considerando-se o elevado índice de infestação por Ae. aegypti em todo o país, o estudo da caracterização dos DENV circulantes torna-se de grande importância no conhecimento da relação vírus-vetor pela análise da variabilidade genética, dispersão e persistência de genótipos durante a transmissão destes vírus / Dengue has been a major public health problem in Brazil with several studies performed aiming to elucidate the disease epidemiology in geographically distinct areas with different dengue viruses (DENV) circulation. The establishment of an entomological and virological program since 1986 with the objective of detecting and monitoring DENV serotypes and genotypes resulted in distinct opportunities in DENV isolation from vectors and human cases, allowing the molecular characterization and phylogenetic analysis, providing relevant information for the understanding of the vector-virus-humans interactions. The understanding of the virus genetic variability when it replicates on mosquitoes and how those variations act during the transmission between humans and mosquitoes is not fully understood. Therefore, aiming to contribute for a better understanding of DENV and its interactions with the mosquito vector, we performed in this study the molecular characterization and phylogenetic analysis of viruses isolated from naturally infected mosquitoes and human cases, from epidemics occurred between 1986 and 2011 in Brazil. It has been shown that the molecular techniques were essential for allowing the rapid identification of the viruses and consequently the monitoring of the circulating genotypes. The RT-PCR for DENV screening in vectors has shown to be a useful tool for the virological surveillance, with detection rates varying from 0.78% to 25% in the studied period. The phylogenetic analysis from DENV-1 isolated from mosquitoes and human cases showed that genptype V (America/Africa) is still the same genotype circulating since this serotype introduction, however it was demonstrated the co-circulation of two distinct new viral lineages (II and III) from 2009 to 2011. The complete genome sequencing of a DENV-3 isolated from naturally infected Ae. aegypti in Rio de Janeiro (RJ) and the analysis of the 3´UTR region from viruses isolated from mosquitoes and humans, has characterized those viruses as belonging to genotype III (GIII) and revealed the presence of insertions and deletions in the 3´UTR region of the genome. The deletions observed in the 3´UTR region resulted in similar secondary structures, however not all strains with insertions were similar in structure. Exclusive substitutions to the DENV-3 isolated from the mosquitoes were observed in NS5, including a substitution leading to a stop codon formation. The Simplexa™ Dengue Real Time RT-PCR commercial kit, recently available, was used for the first time for DENV detection and it has been shown to be an alternative molecular method for the entomological and virological surveillances, The Real Time RT-PCR has allowed, for the first time the DENV-1 and DENV-4 quantification in single Ae. aegypti naturally infected (1.6 x 104 copies/mL e 1.08 x 103 copies/mL, respectively). Considering the high Ae. aegypti infestation index in the country, the characterization of DENV circulating is very relevant for the understanding of the virus-vector relations by the analysis of the genetic variability, spread and persistence of genotypes during the transmission of those viruses.
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Análise da soroprevalência da hepatite A em povoados de Tocantinópolis e índios Apinajé em Tocantins \2013 Brasil

Oliveira, Guilherme de Macêdo January 2013 (has links)
Made available in DSpace on 2015-11-18T13:16:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2 guilherme_oliveira_ioc_mest_2013.pdf: 3479656 bytes, checksum: 4ad372ddeca17dc08f228d0e510e0f7e (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-04-14 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A hepatite A é uma doença hepática aguda, causada pelo vírus da hepatite A (HAV), um vírus de RNA da família Picornaviridae com transmissão fecal-oral. Atualmente, o Brasil apresenta um padrão de endemicidade intermediária da doença. Normalmente, a doença possui curso autolimitado e é benigna, porém existem formas graves que podem causar insuficiência hepática aguda em 0,01% dos casos. Além de medidas sanitárias, outro método importante de prevenção é a utilização de vacinas inativadas, esta porém só é utilizada na imunização de grupos de risco. É conhecido o elevado risco de infecção pelo HAV em comunidades nativas no mundo, no entanto, poucos trabalhos abordam este tema em comunidades indígenas do Brasil. O objetivo deste estudo foi avaliar a prevalência de hepatite A em aldeias e povoados pertencentes a reserva Apinajé, Tocantinópolis/TO. Foram analisadas 799 amostras sorológicas para anti-HAV total, sendo 358 indígenas e 441 dos povoados locais, em onze comunidades geograficamente separadas. Para tal, utilizou-se o Kit imunoenzimático comercial da marca Diasorin®. A prevalência total de anti-HAV na população estudada foi de 85,5 %. A localidade que apresentou maior prevalência foi a Aldeia Girassol (95,5%) Observou-se o aumento da prevalência de anti-HAV com o envelhecimento da população, sendo menor a prevalência (32,7%) observada no grupo etário mais jovem (0-2 anos) e maior prevalência (100%) acima dos 40 anos de idade. Observa-se que, entre os indígenas, 84,87% possuem anti-HAV reagente e nos povoados 85,97%, não havendo diferença ao comparar estas prevalências. Observamos que 39% das crianças até 12 anos estão sob risco de adquirir a doença, e até os 5 anos este número sobe para 59%, logo, a população média suscetível à hepatite A é baixa por situar-se entre a faixa de 5 à 14 anos. A reserva Apinajé apresenta prevalência intermediária de anti- HAV, tanto nas aldeias quanto nos povoados. Em relação a tendência de soroconversão de hepatite A, nas aldeias isto ocorre com maior frequência durante a transição da fase pré-escolar para escolar, enquanto que nos povoados este risco se dá entre a fase escolar e a adolescência. A prevalência encontrada em crianças e adolescentes reforça a possibilidade da implementação da vacina contra hepatite A no calendário infantil / Hepatitis A is an acute liver disease cause d by hepatitis A virus (HAV), an RNA virus of the Picornaviridae's family of fecal-oral transmission. Curre ntly Brazil has a pattern of intermediate endemicity of the disease. Usually the disease is self-limited and has a benign course, but there are severe forms that can cause acute liver failure in 0.01% of cases. Besides to sanitary actions, another impor tant method of prevention is to use inactivated vaccines, but this is only used to immunize ri sk groups in Brazil. In native communities, the risk of HAV infection is high around the wo rld, however, few works addre ss this issue in indigenous communities in Brazil. The objective of this stu dy was to evaluate the prevalence of hepatitis A in villages and towns belonging to Apinajé reservation, Tocantinópolis/TO. For this purpose, 799 serum samples were analyzed for anti-HAV to tal being 358 from indigenous villages and 441 from local town in eleven geographically separated communities. It was used the commercial immunoenzymatic kit DiaSorin® br and. The overall prevalence of anti-HAV in the population studied was 85.5%. Th e locality with th e highest prevalence was the Girassol Village (95.5%). We observed in creased prevalence of anti-HAV with an ascending aging of population, and the lowest prevalence (32.7%) in the younger age group (0-2 years) and a higher prevalence (100%) over 40 years of age. It is observed that among the indigenous people 84.87% have anti-HAV reagent and in the town s 85.97%, with no difference when comparing these prevalences. We observed that 39% of children under 12 years are bound to acquire the disease, and up to 5 years, this prevalence ri ses to 59%, so the averag e population susceptible to hepatitis A is low as it is between the ranges of 5 to 14 years old. The reserve Apinajé has intermediate prevalence of anti-HAV, both in villages and in the town. Regarding the trend of seroconversion of hepatitis A in the villages that occurs most frequently during the transition from preschool to school phase, while in the vi llages this risk occurs between middle childhood and adolescence. The prevalence in children and adolescents strengthens implementation of hepatitis A vaccine included in the childhood schedule could minimize the risks associated with the disease.
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Diagnóstico da hanseníase paucibacilar com lesão única

Barbieri, Raquel Rodrigues January 2013 (has links)
Made available in DSpace on 2015-12-29T16:20:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 raquel_barbieri_ini_mest_2013.pdf: 1834473 bytes, checksum: 1e591eb91c0a6e3d12d71fd1c53d6769 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-10-29 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Introdução: Apesar do recente declínio dos coeficientes de detecção de casos novos, a hanseníase permanece endêmica no Brasil e em outros países do mundo. O diagnóstico da doença se baseia nos aspectos clínicos, embora o índice baciloscópico e a histopatologia sejam usados como suporte para o diagnóstico. Nas formas paucibacilares, bacilos são raramente detectados e o exame histopatológico pode ser inconclusivo. Neste estudo, analisamos os aspectos clínicos e histopatológicos de pacientes com suspeita de hanseníase paucibacilar e estabelecemos a contribuição do PCR no manejo clínico destes casos. Pacientes e Métodos: Foram estudados 66 pacientes com lesão cutânea única em placa, atendidos no Ambulatório Souza Araújo (ASA) da Fundação Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, Brasil, no período de janeiro de 2008 a dezembro de 2011. Dois patologistas independentes, que não tinham informações sobre a história clínica dos pacientes, realizaram a reanálise histopatológica. Os pacientes foram classificados como Alta (A), Média (M) e Baixa (B) probabilidade do diagnóstico de hanseníase ou outras dermatoses (O). O DNA foi extraído de fragmentos de biópsias de pele e os níveis de M. leprae Ag85B e 16S rDNA foram estimados usando a amplificação por PCR quantitativo (qPCR) Resultados: O qPCR foi positivo em 46/66 (69.7%) das amostras de pele. Dos 66 pacientes, 57 (86.3%) tinham recebido tratamento com poliquimioterapia (PQT) baseado nos aspectos clínicos e histopatológicos. A associação entre o resultado do PCR e a variável tratamento mostrou que entre os 19 pacientes classificados como L+O, 2 pacientes com PCR positivo não tinham recebido tratamento e 6 pacientes com PCR negativo tinham sido tratados com PQT por 6 meses. Conclusão: Concluímos que o qPCR é uma ferramenta útil para o diagnóstico e o manejo clínico dos pacientes com suspeita de hanseníase paucibacilar, nos casos em que a histopatologia não é conclusiva / Background: Despite recent decline in detection rates, leprosy remains endemic in Brazil and in others countries around the world. Frequently, the disease diagnosis is based only on clinical aspects, although the bacteriological index in skin smears and histopathological examination are used to support conclusions. In paucibacillary forms, ba cilli are rarely detected, and histopathological examination may not be conclusive. In this study, we analised the clinics and histopathological aspects of patients suspected of paucibacillary leprosy and try to establish the contribution of PCR to the clinical management of these cases. Methods: We evaluated 66 patients with single - plaque skin lesions who attended the Leprosy Outpatient Unit of Oswaldo Cruz Foundation, Rio de Janeiro, Brazil, between 2008 and 2011. Two independent pathologists who were blinded to the patients’ clinical details performed pathological reanalysis of slides. Patients were classified as High (H), Medium (M), and Low probability (L) for the diagnosis of leprosy or another dermatosis (O). DNA was extracted from the fragmen ts of skin biopsies, and the levels of M. leprae Ag85B and 16S rDNA were estimated using qPCR amplification . Findings: The qPCR was positive in 46/66 (69.7%) of skin samples. Out of 66 patients, 57 (86.3%) received multidrug therapy (MDT) based on clinical and histopathological examination. The association between previous treatment and qPCR results showed that among 19 patients classified as L+O, 2 qPCR - positive patients were not treated, whereas 6 patients with negative qPCR results were treated with MDT for 6 months. Conclusion: In conclusion, qPCR is a useful tool to diagnosis and clinical management in suspected cases of paucibacilary leprosy in cases with inconclusive histopathology.
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Diversidade e ecologia de mosquitos do gênero Anopheles (Diptera: Culicidae: Anophelinae) e avaliação do risco de reintrodução de malária no Pantanal de Miranda, Mato Grosso do Sul, Brasil

Silva, Mariana Marinho e January 2012 (has links)
Submitted by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2016-02-19T15:51:39Z No. of bitstreams: 1 dissertacao_mestrado_mariana_marinho_e_silva.pdf: 20546294 bytes, checksum: 7d6bff68d1a4d2ce6ef7b31d5db46bc9 (MD5) / Approved for entry into archive by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2016-02-19T18:22:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 dissertacao_mestrado_mariana_marinho_e_silva.pdf: 20546294 bytes, checksum: 7d6bff68d1a4d2ce6ef7b31d5db46bc9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-19T18:22:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_mestrado_mariana_marinho_e_silva.pdf: 20546294 bytes, checksum: 7d6bff68d1a4d2ce6ef7b31d5db46bc9 (MD5) / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O número de casos de malária autóctone e importada tem aumentado na Região Extra - Amazônica. O fluxo de indivíduos infectados para regiões não endêmicas com p resença de vetores e demais condições necessárias à transmissão pode provocar surtos. O Mato Grosso do Sul, especialmente o Pantanal, está próximo a áreas malarígenas do Brasil e países vizinhos e por ele transitam milhares de pessoas, particularmente turi stas brasileiros e advindos de várias partes do mundo. Assim, é importante a determinação das espécies de Anopheles que podem atuar como vetor e o estudo da ecologia desses mosquitos, para permitir avaliar o risco de reintrodução da malária, o melhor enten dimento da epidemiologia da doença e o controle vetorial eficaz. A localidade Salobra, Pantanal do Município de Miranda, MS, outrora malarígena, é bastante peculiar, devido à sazonalidade das chuvas e rios com distintas características fisico - químicas, que transbordam alagando vasta planície durante parte do ano. Tal peculiaridade pode ter favorecido a especiação e aparecimento de complexos de espécies crípticas. Neste trabalho, realizamos capturas bimestrais de anofelinos em Salobra, de setembro - 2010 a jul ho - 2011. Em cada mês, foram realizadas coletas durante cinco dias, de 17 - 20h, nas paredes de uma casa, em atrativo humano no peridomicílio e em armadilha Shannon com cavalo no extradomicílio, além de três capturas de 18h no extradomicílio. Foi realizado le vantamento de dados epidemiológicos secundários acerca dos casos autóctones de malária ocorridos no MS nos últimos anos. No total, foram capturados 24.894 anofelinos, cuja maior frequência se deu na transição entre a estação chuvosa e seca. As identificaçõ es morfológica e molecular revelaram a presença de 13 espécies ou complexos em Salobra: An. albitarsis s.l. , An. darlingi , An. deaneorum , An. galvaoi , An. halophylus , An. mattogrossensis , An. oswaldoi s.l. , An. rondoni, An. triannulatus s.s. , An. triannula tus C , An. arthuri , An. konderi e An. oryzalimnetes , sendo as três últimas registradas pela primeira vez no MS. A espécie mais frequente no total das capturas foi An. darlingi ( 63,1%), principal vetor de malária no Brasil, seguida de An. triannulatus s.l. (19,7%). Todas as espécies apresentaram comportamento predominantemente exofágico e também foram abundantemente capturadas em atrativo animal, embora também tenham sido capturadas picando o homem no peridomicílio e coletadas repousando nas paredes internas da casa. O pico de maior frequência de anofelinos se dá no crepúsculo matutino e momentos peri - crepusculares do amanhecer, embora picos no crepúsculo vespertino e, principalmente, nas horas altas da noite também tenham sido observados, especialmente para An. darlingi. O levantamento epidemiológico revelou que, anualmente, ocorrem casos de malária autóctone e importada no MS, alguns diagnosticados no Pantanal. Mais de 66% dos casos eram de homens, com idade entre 18 e 52 anos, cujas atividades profissionais , como garimpo, extrativismo vegetal e agropecuária, aumentam a exposição à picada de anofelinos no extradomicílio durante o amanhecer e anoitecer, como se viu ocorrer em Salobra. Conclui - se que Salobra e o Pantanal de Miranda são consideravelmente recepti vos e vulneráveis à transmissão de malária. Portanto, a vigilância deve ser intensificada nesta área, de modo a se evitar surtos e o restabelecimento da endemicidade da malária. / The number of cases of imported and autochthonous malaria has increased in recent years in the Extra - Amazonian Region. The migration of malaria - infected individuals to non - endemic regions with presence of vectors and other conditions necessary for the malaria transmission can c ause outbreaks. Mato Grosso do Sul Stat e (MS), especially the Pantanal Region, is close to malarious areas in Brazil and in bordering countries, and thousands of people, particularly Brazilians and tourists coming from various parts of the world, transit trough Pantanal. It is, therefore, impor tant to determine the Anopheles species that can act as vectors and to study the ecolog y of these mosquitoes, in order to allow risk assessment of reintroduction of ma laria, better understanding of disease epidemiology, and effective vector control. The lo cation of Salobra, in the Pantanal of Miranda Municipality, MS, a malarious area in the past, is quite peculiar, due to seasonal rainfall s and rivers with different physico - chemical characteristics, which overflow flooding a vast plain during a time of yea r. This peculiarity may have favored speciation and appearance of complexes of cryptic species. We carried out bimonthly collections of Anopheles mosquitoes in Salobra, from 2010 - September to 2011 - July. Each month, collections were conducted for five days, from 17 - 20 h, in the walls of a domicile, in human bait in the peridomicile and in Shannon trap with animal bait in extradomicile. Three 18 - hour collections in extradomicile were performed . An epidemiological survey, based on secondary data, about autochth onous malaria cases occurred in MS in recent years was conducted. In total, 24,894 anophelines were collected, which occurred more frequently in the transition between the rainy and dry seasons. Morphological and molecular identification revealed the prese nce of 13 species in Salobra: An. albitarsis s.l. , An. darlingi , An. deaneorum , An. galvaoi , An. halophylus , An. mattogrossensis , An. oswaldoi s.l. , An. rondoni , An. triannulatus s.s. , An. triannulatus C , An. a rthuri , An. konderi and An. oryzalimnetes , the last three being registered for the first time in MS . The most frequent species in total of collections were An. darlingi (63.1%), main vector of malaria in Brazil, and An. triannulatus s.l. (19.7%). All species presented predominantly exophagic behavior and were abundantly caught on horse . However, they were also caught biting huma n in the peridomicile and on the inner walls of the house. T he highest peak frequency of all anophelines occurs in the morning and around peri - crepuscular hours, although peaks at dusk, and especially at dawn, are also observed, especially regarding An. darlingi . The epidemiological survey showed that autochthonous and imported malaria cases occur annually in MS, and some occur in Pantanal. More than 66% of cases were male indivi duals, aged 18 - 52 years, whose occupation s such as mining, agriculture and wood extraction, increase exposure to the bite of anopheline s in the extradomicile, during dawn and dusk, as it has been observed in Salobra. We conclude that Salobra and the Mirand a Pantanal are pretty receptive and vulnerable to malaria transmission. Therefore, surveillance should be intensified in this area, in order to prevent the occurrence of outbreaks and the reestablishment of endemic malaria.

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