Inaug.--diss.--Bern. / Plates printed on both sides. "Literartur": p. 99-103.

Thesis--Universidad Nacional de Buenos Aires, 1911. / Includes bibliographical references (p. 171-172) and index.

Thesis--Universidad Nacional de Buenos Aires, 1911. / Includes bibliographical references (p. 171-172) and index.

Orientadores: Vanderlei Rodrigues, Marlene Tiduko Ueta / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T21:22:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Paula_FabianaMartinsde_D.pdf: 4232239 bytes, checksum: 7f4299766a3d13a21cf8ba1f768d36e3 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: As proteases, sobretudo os complexos enzimáticos como o proteassoma 26S, têm sido relacionadas com diferentes processos biológicos em parasitas. O presente trabalho, teve como objetivo realizar um estudo inicial do proteassoma 26S no nematódeo Strongyloides venezuelensis, por meio de ensaios bioquímicos e da caracterização de alguns componentes deste complexo multienzimático. Este nematódeo é utilizado como modelo experimental para o estudo da estrongiloidíase humana, uma helmintíase com alta prevalência em regiões tropicais e subtropicais. Para tanto, foram obtidos dois estágios de desenvolvimento de S. venezuelensis a partir de infecções experimentais em Rattus norvegicus, o estágio infectante de vida-livre (larva filarioíde, L3) e o parasitário (fêmea partenogenética, F). Para os ensaios bioquímicos foram obtidos os extratos brutos de ambos estágios, os quais foram submetidos aos ensaios de atividades (quimiotripsina e tripsina-símile), utilizando substratos sintéticos fluorogênicos, na presença e na ausência de inibidores específicos do proteassoma 26S (MG132 e PSI). Além disso, o extrato foi submetido ao SDS-PAGE, seguido pela técnica de ¿Western-blot¿ utilizando anticorpos específicos para o proteassoma 20S e para ubiquitina. Para os experimentos moleculares foram obtidos RNA de ambos os estágios, os quais foram submetidos a amplificações utilizando oligonucleotídeos iniciadores específicos para as subunidades alfa 6 e beta 6 do proteassoma 20S (¿core¿ proteolítico) e as subunidades ATPase 3 e S5a do complexo regulatório 19S do proteassoma 26S. O DNA genômico foi amplificado para todas as subunidades com exceção da S5a. Os produtos de amplificação obtidos foram submetidos à busca de homologia no banco de dados, após sequenciamento dos mesmos. Os resultados confirmaram a presença do proteassoma 26S no nematódeo S. venezuelensis, através da atividade específica de quimiotripsina e tripsina-símile e a presença de bandas protéicas características reveladas pelos anticorpos específicos, bem como pela análise molecular das subunidades. No entanto, novos estudos serão necessários para inferir a importância deste complexo multienzimático neste parasita / Abstract: Protease is an important biological process in different parasites, especially in enzymatic complex like 26S proteasome. The objective of the present work was to initiate the study of the 26S proteasome in the nematode Strongyloides venezuelensis using biochemical experiments and identifying some components of this multienzymatic complex. This nematode has been used as a model and tool for the studies on strongyloidiasis, a helminthiasis of high prevalence in tropical and subtropical regions. In this study, two development stages of S. venezuelensis, namely infective larvae (third-stage larvae) and parasitic stages, were used for experimental infections in Rattus norvegicus. In biochemical experiments the crude extracts of the both stages were submitted at proteolytic activities (chymotrypsin-like and trypsin-like) using fluorogenic peptides in presence and absence of proteasome inhibitors (MG132 and PSI). Moreover, the crude extracts were submitted at SDS-PAGE and western-blot methods using specifics antibodies. In molecular experiments, RNA of both stages were amplifed with specific oligonucleotides to alfa 6 and beta 6 subunits of the 20S proteasome (proteolytic core) and ATPase 3 and S5a of the regulatory particle (19S). The genomic DNA was amplifed to all subunits, excepting of S5a subunit. Results show the presence of the 26S proteasome in proteolytic activities from S. venezulensis of the chymotrypsin-like and trypsin-like and the presence of the labeled bands by the antibodies, as well as molecular analysis of the subunits. However, new studies will be necessary to define the importance of these multienzymatic complex on the parasite biology / Doutorado / Parasitologia / Doutor em Parasitologia

Orientador: Marlene Tiduko Ueta / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T00:24:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MercadoPedraza_RubenAngel_D.pdf: 277205 bytes, checksum: 50eae8f1c0d734a4a5b2f303a19c02a2 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Entre os anos 2000 e 2003 foram coletadas no Chile 2.390 amostras de sangue humano para obtencão de soros e 600 amostras de fezes de cães de 13 diferentes cidades para estudo soroepidemiológico de infecções causadas por Strongyloides stercoralis e avaliar a importância dos cães na transmissão da infecção ao homem. As amostras de soros humanos corresponderam a: a) 10 indivíduos infectados por S. stercoralis com confirmação parasitológica; b) 66 pacientes com outras helmintíases (24 toxocaríase, 15 triquinose , 11 hidatidose , 12 fasciolíase e 4 cisticercose); c) 13 com outras enfermidades autoimunes; d) 49 indivíduos aparentemente sadios, com contagem de eosinófilos nos limites normais; e) 206 alunos de escola básica; f) 674 pacientes internos em dois hospitais psiquiátricos; g) 172 servidores da área de saúde de dois hospitais psiquiátricos e h) 1.200 doadores de sangue. Foi padronizado, pela primeira vez no Chile, o método de ELISA, utilizando antígeno preparado a partir de larvas filarióides de S. venezuelensis. Pelo ELISA pôde-se determinar a presença de anticorpos anti S. stercoralis em: a) 90%, e) 0,5%, f) 12,2%, h) 0,25%. Nos grupos b, c, d, g não foram detectados anticorpos específicos. Entre os doadores de sangue de 5 cidades (Arica e Antofagasta na Região Norte; Valparaiso e Santiago na Região Central; e La Unión na Região Sul), foram detectados anticorpos somente naqueles de Arica e La Union, o que sugere que a estrongiloidíase no país pode estar restrita a determinadas áreas. Em pacientes internos nos dois hospitais psiquiátricos do Chile foram observadas frequências de infecção 48,8 vezes maiores que em doadores de sangue, sugerindo a fácil transmissão nestes recintos. Os funcionários da área de saúde destes hospitais apresentaram ELISA negativo para S. stercoralis. Não foram constatadas presença de S. stercoralis na totalidade das amostras de fezes de cães. Estes resultados, obtidos de coletas em 13 cidades, número que abrangeu quase todo o território chileno, indicam que os cães não estariam interferindo na transmissão da parasitose. O resultado da soroepidemiologia, obtido no presente trabalho, sugere que no Chile as infecções por S. stercoralis são endêmicas, de baixa. frequência, localizadas em determinadas áreas geográficas, afetando, com maior frequência, grupos de risco, como os internos em hospitais psiquiátricos / Abstract: From 2000 to 2003, human serum samples of 2390 individuals and 600 dog fecal samples recovered in 13 squares and public parks in Chile were studied to determine the seroepidemiology of the Strongyloides stercoralis infection and the role of dogs on the transmission of this parasitose. Human serum samples were as follows: a) 10 S. stercoralis infected patients with parasitologically confirmed infection; b) 66 patients with other helmintiasis (24 toxocariasis, 15 trichinellosis, 11 hydatidosis, 12 fascioliasis, 4 cysticercosis); c) 13 patients with other immunological disorders; 49 apparently healthy individuals with normal eosinophil count; e) 206 school children; f) 674 patients hospitalized in two psychiatric institutions, g) 172 health personnel working in two psychiatric institutions and h) 1200 blood donors. For the first time in Chile it was standardized an ELISA test by using an antigen of S. venezuelensis filariform larvae. By means of ELISA antibodies against S. stercoralis were detected in: a) 90%, e) 0.5%, f) 12.2% and h) 0.25%. In groups b, c, d and g no specific antibodies were present. In blood donors from five cities (Northern region: Arica and Antofagasta, Central region: Valparaiso and Santiago, and Southern region: La Union) only in Arica and La Union antibodies against S. stercoralis were detected. This result suggests that strongyloidiasis in Chile could be localized in determinate areas of the country. The frequency of antibodies detected in interned patients in two psychiatric institutions was 48.8 greater than the frequency observed in blood donors, suggesting the transmission of S. stercoralis was facilitated in these institutions. ELISA for strongyloidiasis was negative in all the health personnel studied. S. stercoralis larvae were not detected in 600 fecal samples of dogs collected in public parks and squares of 13 cities of Chile. Dogs probably do not participate in the transmission of strongyloidiasis in Chile. The seroepidemiology of the S. stercoralis infections in Chile showed this parasitose is endemic, with low transmission rates and localized in determinate geographical areas, affecting with a high frequency some risk groups such as the psychiatric interned patients / Doutorado / Parasitologia / Doutor em Parasitologia

Orientador: Marlene Tiduko Ueta / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-20T14:31:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Guitti_MariaAngelicaCeroneRosa_M.pdf: 6533438 bytes, checksum: 7920dbc128cc47758758e995869e70b0 (MD5) Previous issue date: 1995 / Resumo: Este trabalho sobre poliparasitismo, baseou-se em parâmetros parasitológicos, fornecendo dados quantitativos sobre a interação de Schistosoma mansoni com Strongyloides venezuelensis. Foram formados três grupos experimentais, replicados três vezes, de maneira a obter uma infecção simultânea (grupo JUNT) e outras duas alternando a infecção prévia de um dos parasitas (grupos SVSM e SMSV). Mais dois grupos foram formados, um com infecção de S. venezuelensis (SVSV) e outro com infecção de S. mansoni (SMSM). Os cinco grupos experimentais foram compostos de 21 animais cada um, sendo cada réplica constituida por 05, totalizando 315 camundongos. Em cada um dos grupos foram avaliados os seguintes parâmetros: número de ovos eliminados nas fezes e fecundidade das fêmeas; número de larvas e adultos recuperados nas necropsias; morfometria dos vermes adultos. As infecções foram feitas por injeções subcutâneas em camundongos Swiss fêmeas, SPF, de aproximadamente com 30 dias de idade, com 100 cercárias de S. mansoni e 1300 larvas filarióides de S. venezuelensi. As larvas de S. venezuelensis foram recuperadas dos pulmões dos animais necropsiados no 2° DAI (dia após infecção), após fragmentação e incubação em estufa a 37° C. As fêmeas partenogenéticas foram recuperadas dos animais necropsiados no 5° , 7° e 10° DAI, após incubação, em estufa a 37° C, do intestino delgado seccionado longitudinalmente e raspado em solução salina. A contagem dos ovos foi feita pelo método de ComeU McMaster. Os adultos de S. mansoni foram recuperados dos animais necropsiados no 40°, 50° e 60° DAI, através da perfusão do sistema porta-hepático e a contagem dos ovos eliminados nas fezes foi feita pelo método de Kato- Katz. Os vermes adultos de S. venezuelensis foram fIxados em TAF e os de S. mansoni em alcool para estudo morfométrico. Estes vermes foram desenhados em câmara clara e medidos com auxílio de curvímetro e mesa digitalizadora acoplada a microcomputador. No grupo com infecção simultânea (JUNT), observamos uma interação sinérgica. Houve aumento na recuperação de fêmeas de S. venezuelensis, que apresentam maior fecundidade e maior eliminação de ovos nas fezes, além da infecção persistir por mais tempo. A carga de vermes de S. mansoni. também aumenta, apesar da diminuição na fecundidade das fêmeas e na eliminação de ovos. Nos grupos onde se alternou a infecção prévia de S. venezuelensis e S. mansoni, (SVSM e SMSV) o parasita inoculado, posteriormente, sofreu efeito desfavoravel, com diminuição tanto da carga de vermes como da eliminação de ovos nas fezes Nestes grupos as fêmeas de S. venezuelensis se mostraram mais fecundas que as S. mansoni e foram eliminadas precocemente. O parasita inoculado previamente apresentou aumento na carga de vermes, mas diminuição na fecundidade das fêmeas e na eliminação de ovos nas fezes. Quanto a morfometria dos vermes adultos, as variações das medidas observadas foram pequenas, não caracterizando efeito da interação entre parasitas / Abstract: This work is based on parasitological parameters, giving quantitative data about interaction between Schistosoma mansoni and Strongyloides venezuelensis foccusing on poliparasitism. Three experimental groups were formed, replicated three times, in order to obtain a simultaneous infection (group JUNT). Other two groups alternating the previous infection of one of the parasites (SVSM and SMSV groups). Two more groups were formed, one with S. venezuelensis (SVSV) infection and other with S. mansoni (SMSM) infection. Five experimental groups were composed of 21 animaIs each, being each replicated composed of 105 individuaIs, totalizing 315 mice. In each groups, the following parameters were evaluated: number of eggs eliminated in faeces and female fecundity; number of larva and adults recovered in necropsies; morphometry of adult worms. Swiss female mice SPF with approximately 30 days were infected by subcutaneous injection with 100 cercaria of S. mansoni and 1300 filariform larvae of S. venezuelensis. S. venezuelensis larvae were recovered from lungs of necropsied animaIs in 2nd DAI (day after infections), after fragmentation and incubation in incubator, 37° C. The parthenogenetic female were recovered from small intestine sectioned longitudinally of necropsied animaIs at the 5th, 7th ,10th DAI, after incubation, at 37° C, and scraped in saline solution. The score of eggs eliminated in faeces was done by Kato-Katz method. For morphometric study, the adult worms of S. venezuelensis were fixed in T AF and of S. mansoni in a1cohol. These worms were drawn in camara lucida and measured with curvimeter and digitizing table coupled to a microcomputer. In group with simultaneous infection (JUNT), we observed a synergetic interaction. There was a increase recuperation of S. venezuelensis females which showed high fecundity and high rate of egg elimination in addition to the fact that the infection persists for a long time. The worms burden of S. mansoni also increased, in spite a decrease of female fecundity and egg elimination. In those groups were an altemation took place the parasite of inoculated latter suffered an unfavourable effect, with decrease both in worm burden and in egg elimination. In these groups, S. venezuelensis females were more fertile than S. mansoni females and they were precociously eliminated. The parasite previously inoculated showed a increase in worms burden, but a decrease in female fecundity and in egg elimination. In relation to morphometry of adults worms, the observed measurement variations were small, therefore not characterizing interaction effect between the parasites / Mestrado / Parasitologia / Mestre em Ciências Biológicas

Diss. (sammanfattning) Uppsala : Sveriges lantbruksuniversitet, 2005. / Härtill 5 uppsatser.