Thesis (Ph.D.)--University of Florida, 2005. / Title from title page of source document. Document formatted into pages; contains 122 pages. Includes vita. Includes bibliographical references.

Dissertation (Ph.D.).--University of Texas Graduate School of Biomedical Sciences at San Antonio, 2007. / Vita. Includes bibliographical references.

Thesis (Ph.D.) OGI School of Science & Engineering at OHSU, September 2007. / Includes bibliographical references (leaves 186-211).

Th. 3e cycle--Biochim.--Lille 1, 1977. N°: 137. / Rés. de la th.

Th. doct.-ing.--Nancy, I.N.P.L., 1981.

Haemophilus parasuis é uma das primeiras e mais prevalentes bactérias colonizadoras de leitões, que afetam a população de suínos, entre 2 semanas a 4 meses de idade, causando a doença de Glässer. O objetivo deste trabalho foi purificar, caracterizar e avaliar a toxicidade de um peptídeo com atividade antimicrobiana frente a H. parasuis produzido por Bacillus subtilis subsp. spizezinii. A substância antimicrobiana foi purificada por precipitação com sulfato de amônio, cromatografia de filtração em gel (Sephadex G-50) e cromatografia de troca iônica (DEAE-celulose). A taxa de purificação foi cerca de 100 vezes com um rendimento de 0,33%. O peptídeo apresentou massa molecular de 1.083 Da e sua sequência foi determinada por espectrometria de massa (NRWCFAGDD). A inibição completa do crescimento de H. parasuis foi observada quando testada com concentração de 20 Gg/mL do peptídeo antimicrobiano (AMP) após 20 min de exposição. O peptídeo foi testado para determinar a concentração inibitória mínima (MIC) e concentração fungicida mínima (MFC) contra diferentes isolados clínicos de leveduras susceptíveis. O peptídeo inibiu Candida glabrata, C. tropicalis, C. parapsilosis e C. krusei, mas não foi capaz de inibir Trichosporon asahii e Cryptococcus neoformans. O AMP foi testado em relação ao potencial citotóxico em tecido de suínos, sendo que o resultado da avaliação histopatológica do músculo esquelético, fígado, coração, rim e cérebro incubados com esta substância e também incubados com nisina não mostraram lesões microscópicas. Células suínas tratadas com as diferentes frações purificadas resultaram em aumento dos níveis de liberação de lactato desidrogenase e hemoglobina em comparação com a nisina. Tendo em vista a relevância desta pesquisa, estudos complementares devem ser realizados para avaliar o potencial biotecnológico deste composto químico. / Haemophilus parasuis is one of the earliest and most prevalent bacteria colonizing piglets, affecting the population of pigs from 2 weeks to 4 months of age, causing disease Glasser. The aim of this study was to purify, characterize and evaluate the toxicity of a peptide with antimicrobial activity against H. parasuis produced by Bacillus subtilis subsp. spizezinii. The antimicrobial substance was purified by ammonium sulfate precipitation, gel filtration chromatography (Sephadex G-50) and ion exchange chromatography (DEAE-cellulose). The purification rate was about 100 fold with a yield of 0.33%. The peptide had a molecular mass of 1,083 Da and its sequence was determined by mass spectrometry (NRWCFAGDD). The complete inhibition of H. parasuis growth was observed when tested at 20 μg/mL concentration of the antimicrobial peptide (AMP) after 20 min of exposure. The peptide was tested to determine the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum fungicidal concentration (MFC) against different yeast strains susceptible. The peptide inhibited Candida glabrata, C. tropicalis, C. krusei and C. parapsilosis, but was not able to inhibit Trichosporon asahii and Cryptococcus neoformans. The AMP was tested against the cytotoxic potential in tissue of pigs, and the result of the histopathological evaluation of skeletal muscle, liver, heart, kidney and brain incubated with this substance and also incubated with nisin showed no microscopic lesions. Pig cells treated with the different purified fractions resulted in increased levels of lactate dehydrogenase release and hemoglobin and compared to nisin. Given the relevance of this research, further studies should be conducted to evaluate the biotechnological potential of this chemical compound.

Haemophilus parasuis é uma das primeiras e mais prevalentes bactérias colonizadoras de leitões, que afetam a população de suínos, entre 2 semanas a 4 meses de idade, causando a doença de Glässer. O objetivo deste trabalho foi purificar, caracterizar e avaliar a toxicidade de um peptídeo com atividade antimicrobiana frente a H. parasuis produzido por Bacillus subtilis subsp. spizezinii. A substância antimicrobiana foi purificada por precipitação com sulfato de amônio, cromatografia de filtração em gel (Sephadex G-50) e cromatografia de troca iônica (DEAE-celulose). A taxa de purificação foi cerca de 100 vezes com um rendimento de 0,33%. O peptídeo apresentou massa molecular de 1.083 Da e sua sequência foi determinada por espectrometria de massa (NRWCFAGDD). A inibição completa do crescimento de H. parasuis foi observada quando testada com concentração de 20 Gg/mL do peptídeo antimicrobiano (AMP) após 20 min de exposição. O peptídeo foi testado para determinar a concentração inibitória mínima (MIC) e concentração fungicida mínima (MFC) contra diferentes isolados clínicos de leveduras susceptíveis. O peptídeo inibiu Candida glabrata, C. tropicalis, C. parapsilosis e C. krusei, mas não foi capaz de inibir Trichosporon asahii e Cryptococcus neoformans. O AMP foi testado em relação ao potencial citotóxico em tecido de suínos, sendo que o resultado da avaliação histopatológica do músculo esquelético, fígado, coração, rim e cérebro incubados com esta substância e também incubados com nisina não mostraram lesões microscópicas. Células suínas tratadas com as diferentes frações purificadas resultaram em aumento dos níveis de liberação de lactato desidrogenase e hemoglobina em comparação com a nisina. Tendo em vista a relevância desta pesquisa, estudos complementares devem ser realizados para avaliar o potencial biotecnológico deste composto químico. / Haemophilus parasuis is one of the earliest and most prevalent bacteria colonizing piglets, affecting the population of pigs from 2 weeks to 4 months of age, causing disease Glasser. The aim of this study was to purify, characterize and evaluate the toxicity of a peptide with antimicrobial activity against H. parasuis produced by Bacillus subtilis subsp. spizezinii. The antimicrobial substance was purified by ammonium sulfate precipitation, gel filtration chromatography (Sephadex G-50) and ion exchange chromatography (DEAE-cellulose). The purification rate was about 100 fold with a yield of 0.33%. The peptide had a molecular mass of 1,083 Da and its sequence was determined by mass spectrometry (NRWCFAGDD). The complete inhibition of H. parasuis growth was observed when tested at 20 μg/mL concentration of the antimicrobial peptide (AMP) after 20 min of exposure. The peptide was tested to determine the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum fungicidal concentration (MFC) against different yeast strains susceptible. The peptide inhibited Candida glabrata, C. tropicalis, C. krusei and C. parapsilosis, but was not able to inhibit Trichosporon asahii and Cryptococcus neoformans. The AMP was tested against the cytotoxic potential in tissue of pigs, and the result of the histopathological evaluation of skeletal muscle, liver, heart, kidney and brain incubated with this substance and also incubated with nisin showed no microscopic lesions. Pig cells treated with the different purified fractions resulted in increased levels of lactate dehydrogenase release and hemoglobin and compared to nisin. Given the relevance of this research, further studies should be conducted to evaluate the biotechnological potential of this chemical compound.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:34:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-10-03Bitstream added on 2014-06-13T19:24:05Z : No. of bitstreams: 1 medice_r_dr_botfca.pdf: 984264 bytes, checksum: b5831b11097c60d7d06d78ad03fd0d61 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O presente trabalho teve por objetivos avaliar o produto comercial Kalegreen®, à base de bicarbonato de potássio, e óleos fixos de café para o controle do oídio da soja; e Bacillus subtilis e Bacillus licheniformes, em tratamento de sementes, como promotores de crescimento de plantas, associado ou não a Bradyrhizobium elkanii. Para avaliar a eficiência de bicarbonato de potássio (Kaligreen®) no controle do oídio da soja cultivar MGBR-46 (Conquista), as pulverizações do bicarbonato, nas concentrações de 0; 0,25%, 0,5%, 0,75% e 1,0%, e do fungicida (piraclostrobina e epoxiconazole) e as avaliações foram semanais. Folhas foram coletadas para análise ultraestrutural através da microscopia eletrônica de varredura. O bicarbonato de potássio controlou a doença em todas as concentrações, mas causou fitotoxicidade a partir de 0,5%. O produto apresentou ação direta sobre o patógeno ocasionando murchamento e redução na germinação dos conídios. O produto apresenta potencial para controlar a doença, porém deve ser adequada a concentração a ser recomenda, bem como a frequência de aplicação para evitar os problemas de fitotoxicidade. Nos estudos com óleos extraídos de grãos de café torrado e cru no controle do oídio da soja, as metodologias e os materiais foram semelhantes, sendo que os óleos foram pulverizados semanalmente nas concentrações de 0%, 0,5%, 1% e 2%. Os óleos controlaram a doença na faixa de 84,8% a 99,8%, sendo superior ao fungicida padrão. Nas observações em MEV, constatou-se a presença de uma camada protetora na superfície das folhas, impedindo a ação do patógeno. Com isso, pode-se inferir que os produtos utilizados neste trabalho apresentam potencial para proteção de plantas de soja contra oídio. Os experimentos para avaliar o efeito de Bacillus subtilis e... / This study aimed to evaluate the commercial product Kalegreen ®, based on potassium bicarbonate, and fixed oils of coffee for the control of powdery mildew of soybeans, and Bacillus subtilis and Bacillus licheniformes in seed treatment, as growth promoters in plants, with or without Bradyrhizobium elkanii. To evaluate the efficiency of potassium bicarbonate to control powdery mildew of soybean cultivar MGBR-46 (Conquest), the bicarbonate sprays, at concentrations of 0, 0.25%, 0.5%, 0.75% and 1.0%, and the fungicide (pyraclostrobin and epoxiconazole) and ratings were weekly. Leaves were collected for ultrastructural analysis by scanning electron microscopy. The potassium bicarbonate controlled the disease in all concentrations, but caused phytotoxicity from 0.5%. The product has a direct effect on the pathogen causing wilting and reduction in spore germination. The product has the potential to control the disease, but should be adequate concentration to be recommended, and the frequency of application to avoid phytotoxicity problems. With the same methodology we evaluate the potential of coffee oils to control soybean powdery mildew. The oils were weekly sprayed at concentrations of 0%, 0.5%, 1% and 2%. For four weeks we evaluated the severity of the disease in a pair of clover in the middle third of the plants, using diagrammatic scale of notes. Oils controlled the disease in the range of 84.8% to... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-07-30Bitstream added on 2014-06-13T19:55:55Z : No. of bitstreams: 1 silva_mp_me_sjc.pdf: 341135 bytes, checksum: c1cf076e5afe186773e297342c5b5bdc (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os esporos de Bacillus spp. são encontrados amplamente distribuídos na natureza, podendo ocasionar contaminação do meio ambiente e, eventualmente, doenças ao homem e animais. Em resposta a crescente resistência microbiana, a terapia fotodinâmica (PDT) surge para atuar como um tratamento alternativo e eficaz. O presente estudo teve como objetivo comparar e avaliar a ação exercida pelo LASER de baixa intensidade (vermelho visível) e pelo diodo emissor de luz verde (LED) em esporos de Bacillus atrophaeus e Bacillus subtilis na PDT, com o uso dos fotossensibilizadores azul de metileno (37,5 M), rosa bengala (12,5 M) e verde malaquita (300 M). Utilizou-se cepa padrão de Bacillus atrophaeus (ATCC 9372) e Bacillus subtilis (ATCC 19659). As cepas foram cultivadas, durante 7 dias, em Ágar Nutriente acrescidas de 0,003% de sulfato de manganês e analisadas quanto a formação de esporos (coloração de Wirtz-Conklin). Os esporos foram suspensos em água destilada esterilizada e centrifugados por 10 min a 653 Xg. As suspensões receberam choque térmico de 70 °C por 30 min. As suspensões foram padronizadas com 106 células/mL. Em placas de 96 poços adicionou-se 0,1 mL de suspensão dos esporos de Bacillus atrophaeus ou de Bacillus subtilis e 0,1 mL do fotossensibilizador ou de solução de NaCl a 0,9%, sendo agitadas durante 5, 10 e 30 minutos e irradiadas. Realizaram-se diluições seriadas. Alíquotas de 0,1 mL das diluições foram semeadas em placas com Ágar Infusão Cérebro-Coração e incubadas a 37 °C por 48 horas. Os resultados foram analisados estatisticamente (ANOVA, teste de Tukey, p<0,05). As maiores reduções observadas em UFC/mL (Log10) para os esporos de Bacillus atrophaeus foram 0,71 Log10 para azul de metileno (10 min); 2,49 Log10 para rosa bengala (30 min) e 0,42 Log10 para verde... / The spores of Bacillus spp. are found widely distributed in nature, which may cause contamination of the environment and eventually diseases to humans and animals. In response to increasing microbial resistance, photodynamic therapy (PDT) appears to act as an alternative treatment and effective. The present study aimed to compare and evaluate the action exerted by low intensity laser and green light emitting diode (LED) in spores of Bacillus atrophaeus and Bacillus subtilis in PDT, with the use of photosensitizers blue methylene (37.5 M), rose bengal (12.5 M) and malachite green (300 M). It was used a standard strain of Bacillus atrophaeus (ATCC 9372) and Bacillus subtilis (ATCC 19659). The strains were cultivated for 7 days in Nutrient Agar added to 0.003% of manganese sulphate and analyzed for the formation of spores (Wirtz-Conklin staining). The spores were suspended in sterile distilled water and centrifuged for 10 min at 653 Xg. The suspensions were heat shock at 70 °C for 30 min. The suspensions were standardized to 106 cells / mL. In 96-well plates were added 0.1 ml of Bacillus subtilis or Bacillus atrophaeus and 0.1 ml of the photosensitizer or NaCl 0.9%, stirred for 5, 10 and 30 minutes and irradiated. Serial dilutions were performed. Aliquots of 0.1 mL of the dilutions were plated on Brain Heart Infusion Agar and incubated at 37 °C for 48 hours. The results were analyzed statistically (ANOVA, Tukey test, p<0.05). The highest observed reductions in CFU/ml (Log10) for Bacillus atrophaeus were 0.71 Log10 for methylene blue (10 minutes), 2.49 Log10 for rose bengal (30 min) and 0.42 Log10 for malachite green (10 min). In relation to Bacillus subtilis the largest reductions were 0.82 Log10 for methylene blue (10 minutes), 3.86 Log10 for rose bengal (30 min) and 0.63 Log10 for malachite green (10 min). The conclusion... (Complete abstract click electronic access below)

Haemophilus parasuis é uma das primeiras e mais prevalentes bactérias colonizadoras de leitões, que afetam a população de suínos, entre 2 semanas a 4 meses de idade, causando a doença de Glässer. O objetivo deste trabalho foi purificar, caracterizar e avaliar a toxicidade de um peptídeo com atividade antimicrobiana frente a H. parasuis produzido por Bacillus subtilis subsp. spizezinii. A substância antimicrobiana foi purificada por precipitação com sulfato de amônio, cromatografia de filtração em gel (Sephadex G-50) e cromatografia de troca iônica (DEAE-celulose). A taxa de purificação foi cerca de 100 vezes com um rendimento de 0,33%. O peptídeo apresentou massa molecular de 1.083 Da e sua sequência foi determinada por espectrometria de massa (NRWCFAGDD). A inibição completa do crescimento de H. parasuis foi observada quando testada com concentração de 20 Gg/mL do peptídeo antimicrobiano (AMP) após 20 min de exposição. O peptídeo foi testado para determinar a concentração inibitória mínima (MIC) e concentração fungicida mínima (MFC) contra diferentes isolados clínicos de leveduras susceptíveis. O peptídeo inibiu Candida glabrata, C. tropicalis, C. parapsilosis e C. krusei, mas não foi capaz de inibir Trichosporon asahii e Cryptococcus neoformans. O AMP foi testado em relação ao potencial citotóxico em tecido de suínos, sendo que o resultado da avaliação histopatológica do músculo esquelético, fígado, coração, rim e cérebro incubados com esta substância e também incubados com nisina não mostraram lesões microscópicas. Células suínas tratadas com as diferentes frações purificadas resultaram em aumento dos níveis de liberação de lactato desidrogenase e hemoglobina em comparação com a nisina. Tendo em vista a relevância desta pesquisa, estudos complementares devem ser realizados para avaliar o potencial biotecnológico deste composto químico. / Haemophilus parasuis is one of the earliest and most prevalent bacteria colonizing piglets, affecting the population of pigs from 2 weeks to 4 months of age, causing disease Glasser. The aim of this study was to purify, characterize and evaluate the toxicity of a peptide with antimicrobial activity against H. parasuis produced by Bacillus subtilis subsp. spizezinii. The antimicrobial substance was purified by ammonium sulfate precipitation, gel filtration chromatography (Sephadex G-50) and ion exchange chromatography (DEAE-cellulose). The purification rate was about 100 fold with a yield of 0.33%. The peptide had a molecular mass of 1,083 Da and its sequence was determined by mass spectrometry (NRWCFAGDD). The complete inhibition of H. parasuis growth was observed when tested at 20 μg/mL concentration of the antimicrobial peptide (AMP) after 20 min of exposure. The peptide was tested to determine the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum fungicidal concentration (MFC) against different yeast strains susceptible. The peptide inhibited Candida glabrata, C. tropicalis, C. krusei and C. parapsilosis, but was not able to inhibit Trichosporon asahii and Cryptococcus neoformans. The AMP was tested against the cytotoxic potential in tissue of pigs, and the result of the histopathological evaluation of skeletal muscle, liver, heart, kidney and brain incubated with this substance and also incubated with nisin showed no microscopic lesions. Pig cells treated with the different purified fractions resulted in increased levels of lactate dehydrogenase release and hemoglobin and compared to nisin. Given the relevance of this research, further studies should be conducted to evaluate the biotechnological potential of this chemical compound.