Orientadores ; Pilar Rodrigues de Massaguer, Salvador Massaguer Roig / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-18T22:21:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Schmidt_FlavioLuis_M.pdf: 3706872 bytes, checksum: 7bfb1b72a78262375f49a9fe76f41d46 (MD5) Previous issue date: 1994 / Resumo: O objetivo deste trabalho foi determinar o efeito de extratos naturais vegetais na germinação, crescimento vegetativo e resistência térmica de esporos de Desulfotomaculum nigrificans, um microrganismo contaminante de açúcar e vegetais. A metodologia descrita por Donnelly e Busta (1980) foi utilizada para preparar e ativar 40min/97ºC) um lote de esporos de D.nigrificans em Caldo Soytone (CS) e Caldo de Cana (CC), A contagem dos esporas foi realizada em Sulfite Agar em tubos de rosca, ou em Caldo Tioglicalato Fluido com neutralizante pelo método do NMP-3; em tubos exaustados, se lados com vaspar e incubados a 55 °C. Dos 29 extratos naturais vegetais ensaiados contra 102esporos/ml, gengibre, angelica, alecrim e eucalipto (EFE) inibiram o crescimento vegetativo a concentrações de 0,01%v/v ou maiores, e extrato de sementes cítricas (ESC) inibiu o crescimento vegetativa a concentrações de 0,001%v/v ou maiores. Quando a concentração de esporos de D. nigrificans foi de 105/ml, CSE e EFE mostraram os melhores resultados: 0,1 e l%v/v, respectivamente inibiram o crescimento vegetativa. Somente ESC a 0,001 e 0,0001 %v/v, e EFE a 0,1 e 1 %v/v foram ensaiados na germinação dos esporos de D.nigrificans em CS e CC pelo método da perda da resistência térmica; nas concentrações ensaiadas nenhum destes extratos demonstraram efeito inibidor sobre a germinação nestes meios. O efeito de tratamentos termo-químicos na resistência dos esporos de D. nigrificans foi avaliado pela adição de ESC a concentração de 0,05%v/v em CS (pH 7,6) e CC (pH 5,15) usando a método do tubo TDT. ESC diminuiu a resistência térmica dos esporos de D. nigrificans em aproximadamente 5%, 25% e 30%, respectivamente para tratamentos térmicos a 115, 120 e 125°C, usando tanto CS como CC. Os valores de D(min) obtidos em CS foram maiores que aqueles obtidos em CC, provavelmente devido ao baixo pH do CC. Os valores de Z(°C) obtidos são equivalentes aos observados na literatura (8-10°C) para este microrganismo / Abstract: This research aimed to determine the effect of natural plant and spice extracts on the germination, vegetative growth and heat resistance of Desulfotomaculum nigrificans spores, a contaminant of sugar and vegetables. The method of Donnelly and Busta (1980) was used to prepare and activate (40min/97°C) a lot of spores of D. nigrificans in Soytone Broth (SB) and Sugar Cane Juice (SC). Spore counts were determined in Sulphite Agar by colony counts in screw cap tubes, or in Tiaglycolate Fluid Broth with neutralizer by the NMP-3 method, exhausted, sealed with Vaspar and incubated at 55 °C, Among 29 natural plant and spice extracts tested against 102spores/ml, ginger root, angelica, rosemary and eucalyptus (EFE) inhibited the vegetative growth at 0,01%v/v or higher, and citric seeds extract (CSE) inhibited the vegetative growth at 0,001%v/v or higher. When the concentration of D. nigrificans spares was 105/ml, CSE and EFE showed the best results: 0.1 and 1%v/v, respectively inhibited the vegetative growth. Only CSE at 0.001 and 0.0001%v/v, and EFE at 0,1 and 1%v/v were tested on the germination of D. nigrificans spares in SC and SB broth by the heat resistance loss method: at the tested concentrations, none of them showed inhibitory effect upon germination in these media. The effect of thermo-chemical treatments on the resistance of D.nigrificans spores was evaluated by the addition of CSE at 0,05%v/v in SB (pH 7,6) and SC (pH 5,15) broths using TDT tube method. CSE decreased the heat resistance of D. nigrificans spares at approximately 5%, 25%, and 30%, respectively on thermal treatments at 115, 120 and 125°C, using either SB or SC. The D(min) values obtained in SB were greater than those on SC, probably due the lower pH of the SC. The Z(ºC) values observed agree with those reported in the literature (8-10 °C) for this microorganism / Mestrado / Mestre em Tecnologia de Alimentos

Orientador: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Juliana Campos Junqueira / Banca: Martha Simões Ribeiro / Resumo: Os esporos de Bacillus spp. são encontrados amplamente distribuídos na natureza, podendo ocasionar contaminação do meio ambiente e, eventualmente, doenças ao homem e animais. Em resposta a crescente resistência microbiana, a terapia fotodinâmica (PDT) surge para atuar como um tratamento alternativo e eficaz. O presente estudo teve como objetivo comparar e avaliar a ação exercida pelo LASER de baixa intensidade (vermelho visível) e pelo diodo emissor de luz verde (LED) em esporos de Bacillus atrophaeus e Bacillus subtilis na PDT, com o uso dos fotossensibilizadores azul de metileno (37,5 M), rosa bengala (12,5 M) e verde malaquita (300 M). Utilizou-se cepa padrão de Bacillus atrophaeus (ATCC 9372) e Bacillus subtilis (ATCC 19659). As cepas foram cultivadas, durante 7 dias, em Ágar Nutriente acrescidas de 0,003% de sulfato de manganês e analisadas quanto a formação de esporos (coloração de Wirtz-Conklin). Os esporos foram suspensos em água destilada esterilizada e centrifugados por 10 min a 653 Xg. As suspensões receberam choque térmico de 70 °C por 30 min. As suspensões foram padronizadas com 106 células/mL. Em placas de 96 poços adicionou-se 0,1 mL de suspensão dos esporos de Bacillus atrophaeus ou de Bacillus subtilis e 0,1 mL do fotossensibilizador ou de solução de NaCl a 0,9%, sendo agitadas durante 5, 10 e 30 minutos e irradiadas. Realizaram-se diluições seriadas. Alíquotas de 0,1 mL das diluições foram semeadas em placas com Ágar Infusão Cérebro-Coração e incubadas a 37 °C por 48 horas. Os resultados foram analisados estatisticamente (ANOVA, teste de Tukey, p<0,05). As maiores reduções observadas em UFC/mL (Log10) para os esporos de Bacillus atrophaeus foram 0,71 Log10 para azul de metileno (10 min); 2,49 Log10 para rosa bengala (30 min) e 0,42 Log10 para verde... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The spores of Bacillus spp. are found widely distributed in nature, which may cause contamination of the environment and eventually diseases to humans and animals. In response to increasing microbial resistance, photodynamic therapy (PDT) appears to act as an alternative treatment and effective. The present study aimed to compare and evaluate the action exerted by low intensity laser and green light emitting diode (LED) in spores of Bacillus atrophaeus and Bacillus subtilis in PDT, with the use of photosensitizers blue methylene (37.5 M), rose bengal (12.5 M) and malachite green (300 M). It was used a standard strain of Bacillus atrophaeus (ATCC 9372) and Bacillus subtilis (ATCC 19659). The strains were cultivated for 7 days in Nutrient Agar added to 0.003% of manganese sulphate and analyzed for the formation of spores (Wirtz-Conklin staining). The spores were suspended in sterile distilled water and centrifuged for 10 min at 653 Xg. The suspensions were heat shock at 70 °C for 30 min. The suspensions were standardized to 106 cells / mL. In 96-well plates were added 0.1 ml of Bacillus subtilis or Bacillus atrophaeus and 0.1 ml of the photosensitizer or NaCl 0.9%, stirred for 5, 10 and 30 minutes and irradiated. Serial dilutions were performed. Aliquots of 0.1 mL of the dilutions were plated on Brain Heart Infusion Agar and incubated at 37 °C for 48 hours. The results were analyzed statistically (ANOVA, Tukey test, p<0.05). The highest observed reductions in CFU/ml (Log10) for Bacillus atrophaeus were 0.71 Log10 for methylene blue (10 minutes), 2.49 Log10 for rose bengal (30 min) and 0.42 Log10 for malachite green (10 min). In relation to Bacillus subtilis the largest reductions were 0.82 Log10 for methylene blue (10 minutes), 3.86 Log10 for rose bengal (30 min) and 0.63 Log10 for malachite green (10 min). The conclusion... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-07-30Bitstream added on 2014-06-13T19:55:55Z : No. of bitstreams: 1 silva_mp_me_sjc.pdf: 341135 bytes, checksum: c1cf076e5afe186773e297342c5b5bdc (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os esporos de Bacillus spp. são encontrados amplamente distribuídos na natureza, podendo ocasionar contaminação do meio ambiente e, eventualmente, doenças ao homem e animais. Em resposta a crescente resistência microbiana, a terapia fotodinâmica (PDT) surge para atuar como um tratamento alternativo e eficaz. O presente estudo teve como objetivo comparar e avaliar a ação exercida pelo LASER de baixa intensidade (vermelho visível) e pelo diodo emissor de luz verde (LED) em esporos de Bacillus atrophaeus e Bacillus subtilis na PDT, com o uso dos fotossensibilizadores azul de metileno (37,5 M), rosa bengala (12,5 M) e verde malaquita (300 M). Utilizou-se cepa padrão de Bacillus atrophaeus (ATCC 9372) e Bacillus subtilis (ATCC 19659). As cepas foram cultivadas, durante 7 dias, em Ágar Nutriente acrescidas de 0,003% de sulfato de manganês e analisadas quanto a formação de esporos (coloração de Wirtz-Conklin). Os esporos foram suspensos em água destilada esterilizada e centrifugados por 10 min a 653 Xg. As suspensões receberam choque térmico de 70 °C por 30 min. As suspensões foram padronizadas com 106 células/mL. Em placas de 96 poços adicionou-se 0,1 mL de suspensão dos esporos de Bacillus atrophaeus ou de Bacillus subtilis e 0,1 mL do fotossensibilizador ou de solução de NaCl a 0,9%, sendo agitadas durante 5, 10 e 30 minutos e irradiadas. Realizaram-se diluições seriadas. Alíquotas de 0,1 mL das diluições foram semeadas em placas com Ágar Infusão Cérebro-Coração e incubadas a 37 °C por 48 horas. Os resultados foram analisados estatisticamente (ANOVA, teste de Tukey, p<0,05). As maiores reduções observadas em UFC/mL (Log10) para os esporos de Bacillus atrophaeus foram 0,71 Log10 para azul de metileno (10 min); 2,49 Log10 para rosa bengala (30 min) e 0,42 Log10 para verde... / The spores of Bacillus spp. are found widely distributed in nature, which may cause contamination of the environment and eventually diseases to humans and animals. In response to increasing microbial resistance, photodynamic therapy (PDT) appears to act as an alternative treatment and effective. The present study aimed to compare and evaluate the action exerted by low intensity laser and green light emitting diode (LED) in spores of Bacillus atrophaeus and Bacillus subtilis in PDT, with the use of photosensitizers blue methylene (37.5 M), rose bengal (12.5 M) and malachite green (300 M). It was used a standard strain of Bacillus atrophaeus (ATCC 9372) and Bacillus subtilis (ATCC 19659). The strains were cultivated for 7 days in Nutrient Agar added to 0.003% of manganese sulphate and analyzed for the formation of spores (Wirtz-Conklin staining). The spores were suspended in sterile distilled water and centrifuged for 10 min at 653 Xg. The suspensions were heat shock at 70 °C for 30 min. The suspensions were standardized to 106 cells / mL. In 96-well plates were added 0.1 ml of Bacillus subtilis or Bacillus atrophaeus and 0.1 ml of the photosensitizer or NaCl 0.9%, stirred for 5, 10 and 30 minutes and irradiated. Serial dilutions were performed. Aliquots of 0.1 mL of the dilutions were plated on Brain Heart Infusion Agar and incubated at 37 °C for 48 hours. The results were analyzed statistically (ANOVA, Tukey test, p<0.05). The highest observed reductions in CFU/ml (Log10) for Bacillus atrophaeus were 0.71 Log10 for methylene blue (10 minutes), 2.49 Log10 for rose bengal (30 min) and 0.42 Log10 for malachite green (10 min). In relation to Bacillus subtilis the largest reductions were 0.82 Log10 for methylene blue (10 minutes), 3.86 Log10 for rose bengal (30 min) and 0.63 Log10 for malachite green (10 min). The conclusion... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador : Fumio Yokoya / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos e Agricola / Made available in DSpace on 2018-07-16T22:24:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RodriguezDeMassaguer_Pilar_M.pdf: 18942674 bytes, checksum: d2a1f007b2c7334faf9215e3e2c960c8 (MD5) Previous issue date: 1977 / Resumo: O resumo poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The abstract is available with the full electronic document / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

Made available in DSpace on 2012-09-05T18:24:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 315.pdf: 2607034 bytes, checksum: 837d3d9859302e028197ebb6c62ccde4 (MD5) Previous issue date: 2008 / Com base na idéia de que esporos bacterianos são estruturas extremamente resistentes, fomos capazes a partir da utilização de várias técnicas de cultivar e identificar de coprólitos humanos e animais, datados entre 3490 ± 120 a 430 ± 70 anos, recuperados de escavações arqueológicas no Brasil, bactérias da família Bacillaceae. Os coprólitos inicialmente foram tratados com radiação ultravioleta com o objetivo de eliminar possíveis contaminantes externos e posteriormente perfurados assepticamente para retirada de material da porção mais interna. Esse material foi então cultivado emdiferentes meios de cultura, possibilitando o isolamento de bastonetes Gram positivos. Esses microorganismos foram então submetidos a reações bioquímicas clássicas e a técnicas moleculares, como a reação em cadeia da polimerase (PCR), a clonagem e o seqüenciamento gênico. A análise de todos os dados possibilitou não somente concluir que se tratavam de representantes da família Bacillaceae, mas em alguns casos definir ogênero e a espécie mais provável, demonstrando que estas metodologias conjugadas permitem este grau de definição e que será possível no futuro um estudo mais minucioso da microbiota antiga associada a este material.

Orientador: Pilar Rodriguez de Massaguer / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-19T12:22:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_AlbaValeriados_M.pdf: 3650164 bytes, checksum: 441c92341459b833b0467d9ef53a4c5e (MD5) Previous issue date: 1994 / Resumo: Entre os poucos métodos de esterilização conhecidos para produtos e materiais termo-senslveis, o óxido de Etileno é bastante difundido, especialmente no ambiente hospitalar. Além dos cuidados que devem ser tomados no uso deste gás, são estudados vários parâmetros (concentração de gás, temperatura, umidade relativa, tempo de exposição e material de suporte) que influenciam sua atividade antimicrobiana. Além destes fatores, há a variabilidade inerente a microrganismos que deve ser considerada quando se estuda Indicador Biológico para processos de esterilização. Neste trabalho avaliou-se a resistência ao óxido de Etileno (em mistura com nitrogênio - 45%EO/55%N2 ) de esporos de Bacillus subtilis var. niger (globigii) fixados em tiras de papel ( fitas carregadoras ) produzidos a partir de Indicador Biológico americano (AMSCO) e a partir de esporos liofilizados de Coleção de Culturas alemã (DSM). Verificou-se que não há diferença significativa ( com 95% de nível de confiança ) entre estas duas fontes de esporos. Os Indicadores Biológicos produzidos pela metodologia deste experimento estão padronizados ( dentro dos limites dado pela USP XXII, 1990 e AAMI, 1986 ), porém com diferença significativa ( 95% de nível de confiança ) e resistência menor (16-37% ) quando comparados ao Indicador Biológico AMSCO. Este resultado levou ã avaliação do papel suporte, substituindo o utilizado por papel de menor gramatura e higroscopicidade, não sendo observado diferença significativa entre os dois tipos de papel testados. Sendo a umidade dos esporos fator importante na definição da resistência de Indicadores Biológicos, estudou-se ainda a influência do armazenamento dos Indicadores Biológicos , comparando a refrigeração ( 5-7°C ) e refrigeração + umidade relativa controlada ( 5-7°C, 75,7% UR ), não sendo observada diferença significativa ( com 95% de nível de confiança ) entre estes armazenamentos. Na avaliação dos resultados, comparou-se duas metodologias de cálculo de resistência de Indicador Biológico ( método de Stumbo, Murphy and Cochran, 1950 - Ds e Epstein-Hachigian , 1991 - )não sendo verificado diferença significativa ( com 95% de nível de confiança ) entre os métodos. Os valores de redução decimal ( valor D ) obtidos para os Indicadores Biológicos produzidos variaram de 16 a 24 minutos, enquanto que os Indicadores Biológicos AMSCO forneceram resultados de 25 a 29 minutos. Para as características de processo aqui estudadas, as condições de esterilização definidas foram: T = 27-32 °C UR = 67-81 % C = 694-720 mg/L t = 6 h / Abstract: Within the few known sterilization methods for therraosensitive materials and products, the use of Ethylene Oxide has been widespread, mainly in the hospital environment. Besides Ethylene Oxide carefull handling requirements, several parameters that may influence antimicrobic activities are being studied (gas concentration, temperature, relative humidity, exposure time and support material). In addition to these factors, variability must also be considered when biological indicators for sterilization processes are studied. In this study it was evaluated resistance to Ethylene Oxide (mixed to nitrogen - 45%E0/55%N2 ) of Bacillus subtilis var.niger (globigii) spores in strips of paper (carrier strips) produced from American Biological Indicator (AMSCO) and from lyophilized spores of german culture collection (DSM). There were no significative differences (95% accuracy) observed between these two spores sources. The Biological Indicators produced by the methodology of 'this experiment are standardized (within the limits stated by USP XXII 1990 and AAMI, 1986) but have a significative difference (95% accuracy) and lower resistance (16-37%) if compared to AMSCO Biological Indicator. This conclusion has led to an evaluation of support paper, substituting the one used by another one of less gramature and hygroscopicity. No significative differences were found between them. Since spore humidity is very important to define resistance of biological indicators, further studies were made about influence of Biological Indicators storage by comparing refrigeration conditions ( 5-7ºC and controlled refrigeration + relative humidity (5-7°C, 75,7% RH. No significative differences (95% accuracy) were found. Comparing the two calculation methodologies of biological indicators resistance (Stumbo, Murphy and Cochran, 1950 and Epstein-Hachigian, 1991 methods) no significative differences (95% accuracy) were found in the results evaluation. The decimal reduction ( D value ) for the produced Biological Indicator varied from 16 to 24 minutes, while AMSCO Biological Indicators had values from 25 to 29 minutes. For the process, subject to this study, the defined sterilization conditions were: T = 27- 32 °C UR = 67- 81 % C = 694-720 mg/L t = 6 h / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

Esporos de Bacillus subtilis podem ser utilizados como veículos vacinais capazes de expressar ou adsorver proteínas heterólogas em sua superfície. Estudos recentes indicaram que esporos de B. subtilis também conferem um forte efeito adjuvante para vacinas baseadas em proteínas purificadas administradas por via parenteral. Nesse cenário, o objetivo do presente projeto foi avaliar o papel adjuvante dos esporos de B. subtilis e viabilizar sua utilização como carregadores de vacinas de DNA pelo método da biobalística (gene gun). Nesta metodologia, os esporos foram utilizados como substitutos das micropartículas de ouro usualmente empregadas, mantendo a capacidade de transfecção de células eucarióticas in vitro, e produção de anticorpos específicos em camundongos C57BL/6 imunizados com o plasmídeo vacinal pgDE7h (que codifica para uma forma atóxica da oncoproteína E7 do HPV-16). Além disso, esporos de B. subtilis foram capazes de ativar células dendríticas in vitro e, quando coadministrados a pgDE7h pela via intramuscular, conferiram um aumento de 50% na proteção anti-tumoral de animais previamente transplantados com a linhagem tumoral TC-1 (que expressa a proteína E7 do HPV-16), em uma relação dose-dependente. / Bacillus subtilis spores can be used as vaccine vehicles capable of to display or adsorb heterologous proteins in its surface. Recent studies have indicated that spores of B. subtilis confer a strong adjuvant effect for vaccines based on purified proteins administered by the parenteral route. In this scenario, the objective of this project is to evaluate the adjuvant role of B. subtilis spores e viabilize its use as DNA vaccine carriers of biolistic method (gene gun). In this methodology, the spores are used as gold microparticles substitutes usually employed, maintaining the ability to transfect eukaryotic cells in vitro and production of specific antibodies in C57BL / 6 mice immunized with the vaccine plasmid pgDE7h (encoding a non-toxic form of the E7oncoprotein of HPV-16). Additionally, spores of B. subtilis were able to activate dendritic cells in vitro when co-administered intramuscularly to pgDE7h, conferring an increase of 50% of anti-tumor protection in animals previously transplanted with the TC-1 tumor cell line (expressing the E7 protein of HPV-16) in a dose-dependent manner.

O S. mutans é o agente etiológico da cárie dental humana, uma doença com ampla distribuição mundial. A adesão à superfície dental depende da interação entre a proteína de superfície P1 e a aglutinina salivar (SAG) adsorvida ao dente. A região N-terminal da P1 é um alvo vacinal importante que está diretamente associada às funções de adesão e agregação. Este trabalho teve o objetivo de avaliar estratégias vacinais contra o S. mutans baseadas na proteína P1 usando linhagens recombinantes de B. subtilis. O B. subtilis é uma bactéria gram positiva, formadora de esporos, não patogênica, empregada como sistema de expressão de proteínas heterólogas e como veículo vacinal administrado por vias de mucosas. Empregamos o B. subtilis para expressar e purificar a proteína P139-512 derivada da proteína P1 de S. mutans UA159. O antígeno P139-512 apresentou epítopos lineares e conformacionais semelhantes aos presentes na proteína P1 nativa. O sítio de ligação à SAG está preservado nessa proteína assim como suas propriedades imunogênicas. A coadministração parenteral do antígeno com adjuvantes vacinais promoveu resposta sistêmica específica com anticorpos eficazes no bloqueio da adesão de S. mutans. Por fim, usamos esporos de B. subtilis como veículo de entrega de mucosa para o antígeno alvo de S. mutans. Esporos de B. subtilis foram modificados para expressar na superfície adesinas bacterianas (SlpA, InvA ou Inv600) com capacidade de ligação ao epitélio intestinal e, quando no estágio de célula vegetativa, expressar intracelularmente o antígeno P139-512. A imunização oral com os esporos adesivos induziu altas concentrações de anticorpos sistêmicos e de mucosa. A imunização nasal ou sublingual com os esporos recombinantes induziu níveis de anticorpos sistêmicos maiores do que aqueles obtidos após a imunização oral. Além disso, esses anticorpos foram mais eficientes em bloquear a adesão de S. mutans à SAG imobilizada, sem interferir com a agregação. Em conclusão, os resultados obtidos abrem perspectivas interessantes para o desenvolvimento de vacinas anti-cárie baseadas em linhagens de B. subtilis. / S. mutans is the major etiologic agent of human dental caries, a disease with worldwide distribution. The adhesion to the tooth surface is dependent on the interaction of the P1 surface protein and salivary agglutinin (SAG) adsorbed to the tooth. The N-terminal region of P1 is an important vaccine target that is directly associated with adhesion and aggregation functions. This study aimed to evaluate vaccination strategies against S. mutans based on the P1 protein using recombinant B. subtilis strains. B. subtilis is a gram positive, spore-forming, non-pathogenic bacterium used as expression system for heterologous proteins and as a vaccine vehicle administered by mucosal routes. Inicially, we employed a recombinant B. subtilis strain to express and purify the P139-512 protein derived from the S. mutans UA159 P1 protein. The P139-512 antigen showed important conformational and linear epitopes similar to those present in the native P1 protein. The SAG-binding site is preserved in P139-512 as well as immunological properties. The parenteral co-administration of antigen with vaccine adjuvants stimulated systemic antibodies effective in blocking adhesion of S. mutans to SAG. Lastly, we used B. subtilis spores as a mucosal delivery vehicle for antigen targeting. B. subtilis endospores were modified to display bacterial adhesins (SlpA, InvA or Inv600), capable to bind to the intestinal epithelium, on the spore surface and to express intracellularly the P139-512 antigen during the vegetative cell stage. Oral immunization with adhesives spores induced high systemic and mucosal specific antibodies levels. The nasal or sublingual immunization with B. subtilis recombinant spores induced higher amounts of systemic antibodies than the oral immunization. Furthermore, the specific antibodies were highly effective in blocking the adherence of S. mutans to immobilized SAG, without interfering with aggregation. In conclusion, the results open interesting perspectives for the development of anti-caries vaccines based on B. subtilis strains.

A análise microbiológica atua como ferramenta fundamental para a obtenção de dados sobre a qualidade, sanidade, higiene e segurança na produção de alimentos; desta forma, tem sido adotada na indústria alimentícia para o controle de qualidade. Por sua composição completa e balanceada, o leite é um substrato ideal para o desenvolvimento de diversos grupos de microrganismos. Com o objetivo de pesquisar bactérias da espécie Bacillus cereus em amostras de leite fluido, bem como a capacidade de germinação de esporos e a multiplicação dessa bactéria após processo de fervura, com manutenção das amostras à temperatura ambiente e à temperatura de refrigeração por períodos de 1, 2, 4, 6, 8, 10 e 12 horas, foram analisadas 75 amostras de leite, conforme as metodologias recomendadas por Silva et al. (2007). Destas, 46 amostras (61,3%) mostraram-se com algum grau de contaminação pela bactéria antes de serem submetidas à fervura. Por sua vez, as amostras mantidas à temperatura ambiente após a fervura, tiveram suas contagens bacterianas, principalmente a partir da 8a hora, superiores à contagem inicial, inclusive atingindo níveis capazes de desencadear uma toxinfecção alimentar, demonstrando a ocorrência da germinação dos esporos e a multiplicação das células vegetativas. Por outro lado, alíquotas dessas mesmas amostras mantidas sob refrigeração (7ºC) não atingiram populações preocupantes, enfatizando, desse modo, a importância da necessidade da refrigeração do leite após a fervura. / The microbiological analysis acts as basic tool for the attainment of data on the quality, health, hygiene and security in the food production, in such a way, she has been adopted in the nourishing industry for the quality control. For its complete and balanced composition, milk is an ideal substratum for the development of diverse groups of microorganisms. With the objective to search cereus bacteria of the Bacillus species in fluid milk samples, as well as the capacity of germination of spores and the multiplication of this bacterium after boil process, with maintenance of the samples to the ambient temperature and the temperature of refrigeration for periods of 1, 2, 4, 6, 8, 10 and 12 hours, 75 milk samples had been analyzed, as the methodologies recommended for Silva et al. (2007). Of these, 46 samples (61.3%) had revealed with some degree of contamination for the bacterium before being submitted to the boil. In turn, the samples kept to the ambient temperature after the boil, had its bacterial countings, mainly from 8a hour, superiors to the initial counting, also reaching levels capable to unchain an alimentary toxinfection, demonstrating to the occurrence of the germination of the spores and the multiplication of the vegetative cells. On the other hand, aliquot of these same samples kept under refrigeration (7ºC) had not reached preoccupying populations, emphasizing, in this manner, the importance of the necessity of the refrigeration of milk after the boil.

O leite produzido a ultra alta temperatura denominado oficiamente como UHT é o leite de maior aceitação no mercado consumidor brasileiro. Com a finalidade de ampliar o conhecimento sobre a segurança microbiológica do leite UHT, objetivou-se estudar tanto os Bacillus spp, que vêm sendo relatados como contaminantes do leite UHT no Brasil, como os eventuais esporos sobreviventes ao processamento. A partir de 65 análises de leite UHT para a determinação de microrganismos mesófilos aeróbios estritos e facultativos viáveis, no leite UHT procedente das indústrias sob Inspeção Federal no estado de São Paulo, 7 apresentaram contagens acima de 100 UFC/ml, indicando um percentual de 10,76 % de provas fora dos padrões para essa determinação, no período de jul a nov de 2003. Entretanto por atuação dos controles de qualidade das indústrias partidas foram inutilizadas e o leite que foi ao consumo apresentou 7,69% de microrganismos mesofílicos aeróbios acima dos padrões, sendo que 6.15% destes microrganismos foram considerados como Bacillus sporothermodurans. Dos isolamentos das contagens de microrganismos mesófilos acima dos padrões, foram efetuados estudos de seis cepas de Bacillus spp do leite UHT das indústrias, além de três cepas isoladas do leite UHT alvo de reclamações de consumidores procedente do Instituto Adolfo Lutz da capital de São Paulo. O objetivo do presente projeto foi, após a identificação cultural, microscópica, bioquímica e genética de culturas do Bacillus spp, estudar a patogenicidade das amostras em diversos modelos experimentais como: Teste do camundongo neonatos, alça ligada de coelho, inoculação intraperitoneal em camundongo BALB C e culturas celulares (Vero, HEp2 e Fibroblastos de Embrião de Galinha). As 3 amostras isoladas de leite de reclamações dos consumidores do Instituto Adolfo Lutz de São Paulo foram tipificadas preliminarmente pela técnica de Espectroscopia Infra-Vermelho a Transformada Fourier (FT- IR) como Bacillus flexus, enquanto que as amostras isoladas do leite procedente de três indústrias de São Paulo apresentaram presença de B. flexus e B.oleronius e Bacillus sporothermodurans. Exemplares de B.flexus testados quanto a patogenicidade apresentaram efeito citopático nas culturas celulares Vero, HEP2 e Fibroblastos de Embrião de Galinha e morbidade em camundongo BALB C. O Bacillus sporothermodurans não apresentou patogenicidade a nenhum dos modelos biológicos citados. / The milk produced at ultra high temperature, denominated UHT, is the most popular milk in the Brazilian market. With the intention of increasing the knowledge of microbiologic safety in UHT milk, we concentrated our study on the Bacillus spp, described as the most important contaminants of UHT milk in Brazil, and on possible survivors of the processing procedures. From the 65 analysis of UHT milk collected to determine the presence of strict, aerobe, mesophile microorganisms and viable options, coming from industries under Federal Inspection in São Paulo state, 7 presented a microbial count higher than 100CFU/ml, indicating a percentage of 10.76% samples outside the standard for this determination, in the period between July and November 2003. However, due to the quality control in industries, batches were rendered useless and the milk that went for consumption presented 7.69% mesophile microorganisms above standard, being these organisms 6.15% was considered Bacillus sporothermodurans. From the isolation of mesophile Bacillus counts above average, 5 strains Bacillus spp species from UHT industries were studied, as well as 3 strains isolated from UHT milk denounced by consumers of São Paulo city\'s Adolfo Lutz Institute. The aim of the project, following cultural, microscopic, biochemical and genetic identification of the Bacillus spp, was to study pathogenicity in samples from several experimental models, such as: neonatal mice; rabbit ileum loops, intraperitoneal inoculation of BALB C mice and cell cultures: Vero, Hep2 and Chick Embryo Fibroblasts. The three isolated samples of milk denounced by São Paulo consumers were typified as Bacillus flexus by the Fourier Infrared Transformed Espectroscopy (IF-FR) technique, while isolated samples of milk from 3 industries in São Paulo, accused the presence of the B. flexus, B. oleronius and Bacillus sporothermodurans. Samples of the B. flexus tested in terms of pathogenicity presented a citopatic effect upon cell cultures Vero, HeP2 and Chick Embryo Fibroblasts and a morbidity in mice BalbC. The Bacillus Sporothermodurans did not present pathogenicity in any of the biological models mentioned.