L’athérosclérose est un processus d’évolution lente, dont les premières étapes sont marquées par le dépôt de lipoprotéines de basse densité (LDL) dans l’intima des artères. Les études histologiques montrent que les cellules musculaires lisses (CML) sont prépondérantes dans l’intima des lésions précoces et qu’elles ont un rôle critique dans le développement des lésions. A l’inverse des CML saines de la média qui présentent un phénotype contractile, certaines CML de l'intima sont caractérisées par la synthèse de matrice extracellulaire, associée à une migration et une prolifération augmentées. Comme les macrophages, une fraction de ces CML peut internaliser les LDL et participe à la formation de cellules spumeuses.Dans ce travail, nous avons cherché à déterminer le rôle du syndécan-1 dans la modulation du phénotype de la CML. Nous avons mis en évidence une surexpression du syndécan-1 par les CML intimales lors des stades précoces de l'athérosclérose. Dans le but de déterminer l'effet de cette surexpression, nous avons élaboré un vecteur lentiviral codant le syndécan-1 afin de le surexprimer dans les CML en culture. Nos résultats montrent qu'en réponse au transforming growth factor beta (TGF-β), les CML surexprimant le syndécan-1 présentent une augmentation amplifiée des gènes du collagène de type I et de certains marqueurs de fonction contractile incluant la SM α-actine, la calponine et la smootheline.Un autre volet de l'étude s'est intéressé à l'origine des cristaux de cholestérol (CCs) dans les lésions. Fréquemment retrouvés dans les lésions avancées, les études montrent que ces CCs pourraient induire mécaniquement la rupture de la plaque. Par l'analyse de coupes d'aortes fraîches, nous avons observé que les CCs apparaissent au stade de la lésion fibrolipidique et qu'ils sont associés à la présence de CML mortes. In vitro, les CML chargées en cholestérol sont capables de produire des cristaux, un processus qui est accéléré par la présence de collagène de type I et par l'inhibition de l'autophagie et de l'estérification du cholestérol. Nous avons montré que le collagène de type I entraine une diminution de p62 et une augmentation de Niemann-Pick C1, suggérant qu'il module l'expression de gènes associés à l'autophagie et au trafic du cholestérol.L’ensemble de ce travail ouvre ainsi de nouvelles perspectives quant à l’identification des mécanismes initiant la modulation du phénotype de CML, et aux conséquences de cette modulation au niveau de la lésion. / Atherosclerosis is a chronic pathological process that is characterized, in the earliest stage, by low density lipoproteins (LDL) accumulation within the arterial intima. Evidences show that smooth muscle cells (SMCs) are preponderant in the intima of early lesions and play a major role in lesions development. Whereas medial SMCs are involved in the contractile function, intimal SMCs are characterized by increased proliferation and migration, loss of contractile markers, and extracellular matrix production. Like macrophages, these SMCs have the capacity to internalize LDL and become foam cells. In this work, we explored syndecan-1 role in SMCs phenotypic modulation. We show that syndecan-1 expression is increased in intimal SMCs of early lesions. To determine the effect of this overexpression in SMCs in vitro, we elaborated the construction of a lentiviral vector encoding syndecan-1 cDNA. Our results demonstrate that syndecan-1 amplifies the up-regulation of type I collagen, SM α-actin, calponin, and smoothelin mRNA expression, induced by TGF-β.In the second part of our work, we investigated cholesterol crystals (CCs) formation in atherosclerotic lesions. Besides to being a major component of the atheromatous core, studies have shown that CCs could promote plaque rupture by causing mechanical damage. Our observations of fresh aortas revealed that CCs first appeared at the fibroatheroma transition and are associated with the death of SMC. Cholesterol-loaded human SMCs were capable of producing CCs in vitro, a process that was enhanced by type I collagen and by inhibition of autophagy and cholesterol esterification. We found that type I collagen leads to a decrease in the expression of p62, and an increase in Niemann-Pick C1, suggesting that collagen induces changes in genes relating to regulation of intracellular cholesterol levels and localization.In conclusion, this work described a novel candidate potentially implicated in SMCs phenotypic modulation, and the important consequences of this modulation in lesions development.

Au cours de la réparation cutanée, l’étape de réépithélialisation est essentielle car son objectif est de restaurer la fonction barrière de la peau. Elle consiste en une série d’étapes coordonnées où les kératinocytes migrent, prolifèrent et se différencient jusqu’à restauration complète de l’épiderme. Régulée de façon simultanée au niveau intracellulaire mais également extracellulaire, elle dépend de la production de facteurs de croissance, de métalloprotéases matricielles (MMPs) et de protéines de la matrice extracellulaire sur lesquelles les kératinocytes adhèrent et migrent par l’intermédiaire de récepteurs de la famille des intégrines ou des syndécans. Parmi les ligands matriciels, la laminine 332 (LN332), qui est connue comme étant la protéine d’adhésion majeure des kératinocytes de l’épiderme, s’avère être également impliquée au cours de la réépithélialisation et jouer un rôle important dans les processus d’adhésion et de migration des kératinocytes, notamment par le biais de son domaine globulaire LG4/5 localisé à l’extrémité C-term de sa chaine 3. De récentes études ont montré que ce domaine LG4/5 induit la migration des kératinocytes normaux humains (NHK), impliquant des MMPs pro-migratoires MMP-1 et MMP-9. Puisque les domaines LG4/5 ont été montrés comme participant à la dynamique du cytosquelette et au mouvement cellulaire par le biais des récepteurs syndécan-1 et -4, mon laboratoire d’accueil a décidé d’étudier l’implication du récepteur syndécan-1 dans ce processus d’expression de la MMP-9. Les analyses PCR et les résultats de zymographie obtenus ont révélé que le syndécan-1 joue un rôle dans l’expression et l’activation de la MMP-9 induite par le domaine LG4/5. De plus, la déplétion de l’expression du syndécan-1 dans les NHK a confirmé ces résultats. De précédents résultats de mon laboratoire d’accueil ont montré que le domaine LG4/5 induit la formation de filopodes médiée par le syndécan-1 au niveau du front de migration des kératinocytes. De ce fait, nous avons effectué des zymographies de gélatine in situ chez des NHK en migration afin d’observer la localisation de la MMP-9 et de savoir si cette dernière était trouvée au niveau de ces structures d’adhésion protrusives. Nous avons observé des zones de digestion de gélatine sous les NHK ressemblant à des points de contact d’adhésion. Leur nombre est augmenté chez des NHK traités avec le domaine LG4/5 de la LN332. L’utilisation d’inhibiteurs spécifiques des gélatinases et de la MMP-9 ont révélé que cette dernière est responsable de la formation de ces zones de digestion de gélatine. Parce que ces structures évoquent des podosomes, nous avons décidé de révéler leurs constituants majoritaires, à savoir la cortactine, la vinculine, l’-actinine, VASP, WASP ou encore Arp2/3. Dans le même temps nous avons également révélé le syndécan-1 afin de voir si ce dernier était présent dans ces structures. Nos résultats ont montré que tous les marqueurs des podosomes étaient localisés soit sous la forme d’un point à l’intérieur des zones de digestion pour les protéines régulatrices de l’actine, soit sous la forme d’un anneau entourant les zones de digestion pour les protéines d’adhésion et de signalisation associées à la membrane, confirmant donc que les structures observées sont bien des podosomes. Le syndécan-1 apparaît également sous une forme d’anneau, entourant les protéines régulatrices de l’actine et les zones de digestion laissant penser que le syndécan-1 serait impliqué dans ces structures. La diminution de l’expression du syndécan-1, en utilisant l’approche des petits ARN interférents dans des NHK, a montré que l’absence de syndécan-1 diminue de façon drastique le nombre et la surface des zones digérées. L’ensemble de nos résultats montre que le syndécan-1 serait un constituant des podosomes des kératinocytes, participant à leur formation et jouant un rôle dans le contrôle de l’expression de la MMP-9 / During skin repair, the reepithelialization step is essential to restore the skin barrier function. lt occurs by an orderly series of events whereby keratinocyte migrate, proliferate and differentiate until complete epidermal restoration. Keratinocyte migration determines the efficiency of the overall wound repair process. The keratinocyte's migratory behavior depends on the production of growth factors, matrix metalloproteinases (MMP) and on the dynamic interactions of the cells with extracellular components. Laminin 332 (LN332), known as a major adhesion substrate for keratinocytes, was shown to contribute to skin reepithelialization through its a3 chain C-terminal domains LG4/5. Recent studies have reported that LG4/5 induces keratinocyte migration, an event that relies on the involvement of the pro-migratory MMP-1 and MMP-9. As LG4/5 domains were shown to participate in cytoskeleton dynamic and cell movement through binding of the heparan sulfate proteoglycans syndecan-1 and -4, we analyzed the potential involvement of these receptors in this process. The PCR analysis and zymography results revealed that syndecan-1 plays a role in LG4/5 induced MMP-9 expression and activation. Down regulating or overexpressing syndecan-1 expression in cells confirmed these findings. As LG4/5 was shown to induce the formation of syndecan-1-mediated filopodia at the front of migrating cells, we performed in situ zymography experiments in migrating keratinocyte to analyze whether MMP-9 is found in these protrusive adhesion structures. Very interestingly, we found areas of digested gelatin resembling adhesion contacts underneath keratinocytes. Their number was increased in LG45-treated keratinocytes, a result in line with our previous data. The use of specific MMP inhibitors revealed that MMP-9 is responsible for the formation of these digested gelatin clusters. Further confocal microscope analysis revealed, at the cellular level, the presence of actin located within the digested areas, suggesting that an adhesion receptor would be involved in this process. Because these structures resemble podosomes, we revealed major podosome components, such as cortactin, vinculin, -actinin, VASP, WASP, Arp2/3 or dynamin and integrin. Our results showed all the podosome markers either within the digested areas (regulatory actin proteins) or organized as ring encircling the digested areas (signaling and adhesion proteins associated with plasma membrane), confirming that these structures are podosomes. Syndecan-1 also appears as a ring around the digested areas and encircling the regulatory actin proteins, suggesting that this receptor could be involved in these structures. The syndecan-1 depletion in normal human keratinocytes with specific siRNAs drastically decreased the digested areas surface. Taken together, our data demonstrate that syndecan-1 is a podosome components, participating in their formation and playing a role in MMP-9 expression and deposition. These results suggest that its re-distribution at the front edge of migrating keratinocyte may have a role to play in the cleavage or degradation of extracellular matrix proteins therefore facilitating their path through the fibrin clot