Die Rheumatoide Arthritis ist die häufigste inflammatorische Arthritis mit einer Prävalenz von 0.5-1%. Pathophysiologisch spielen intrinsische Dysregulationen der Zytokinexpression insbesondere von TNF von Monozyten eine bedeutende Rolle. Die Regulation der TNF Expression ist komplex und manifestiert sich in erster Linie posttranslational. Hier steht das proteolytische Shedding durch die Metalloproteinase TACE, sowie deren Inhibierung durch TIMP-3 im Vordergrund. Ziel der Arbeit war die Aufdeckung potentieller Fehlsteuerungen der monozytären TNF Expression und der betreffenden regulatorischen Proteine, sowohl auf Ebene der mRNA Expression als auch posttranslational. Es konnte gezeigt werden, das Monozyten von RA Patienten vermehrt intrazelluläres TNF exprimieren. Der Anteil TIMP-3 positiver Monozyten scheint bei RA Patienten tendenziell vermindert zu sein.:1. Einleitung 1 1.1. Die Rheumatoide Arthritis 1 1.1.1. Epidemiologie und Klinik 1 1.1.2. Ätiologie und Pathogenese 1 1.2 Der Tumornekrosefaktor 3 1.2.1 Struktur und Signaltransduktion von TNF 4 1.2.2 Regulationsmechanismen der TNF Expression in Monozyten 5 1.3 Fragestellung und Ziele 9 2. Material und Methoden 11 2.1 Rekrutierung von Patienten und gesunden Probanden 11 2.2 Materialien 12 2.3 Methoden 15 2.3.1 Separation von PBMCs mittels Dichtegradientenzentrifugation 15 2.3.2 Separation von Monozyten mit negativer Magnetseparation 15 2.3.3 Bestimmung der monozytären Expression von TACE mittels Durchflusszytometrie 16 2.3.4 Bestimmung der intrazellulären Expression von TNF, TIMP-3 und PR-3 in Monozyten 17 2.3.5 Messung der TNF und TNF Rezeptor 2 Sekretion von Monozyten mit Hilfe eines ELISA 17 2.3.6 Bestimmung der RNA Expression von TNF, TIMP-3,TACE und PR-3 in Monozyten mittels Real Time PCR 19 2.4 Statistische Auswertung 20 3. Ergebnisse 21 3.1 Deskriptive Statistik der Kohorten 21 3.2 Expression der mRNA von TNF, TACE, TIMP-3 und PR-3 in Monozyten 22 3.3 Expression von TACE auf Monozyten 23 3.4 Expression von intrazellulärem TNF, TIMP-3 und PR-3 in Monozyten 24 3.5 Sekretion von TNF und TNFR2 von Monozyten 28 4. Diskussion 32 4.1 Expression von TNF sowie regulatorischer Moleküle auf mRNA Ebene 32 4.2 Expression von tmTNF und TACE auf der Oberfläche von Monozyten 35 4.3 Intrazelluläres Vorkommen von TNF sowie regulatorischer Moleküle in Monozyten 36 4.4 Sekretion von TNF und TNFR2 durch Monozyten 39 5. Zusammenfassung 42 6. Literaturverzeichnis 47 7. Abbildungsverzeichnis 61 8. Eigenständigkeitserklärung 63 9. Lebenslauf 63 10. Danksagung 65

La recherche contre le cancer est aujourd’hui tournée vers les thérapies ciblées. Dans ce contexte, la nucléoline et la nucléophosmine sont fortement impliquées dans la croissance tumorale et l’angiogenèse associée et surexprimées dans les cellules tumorales et endothéliales activées. Elles apparaissent donc comme des cibles de choix. Le pseudopeptide HB-19 lie la nucléoline de surface, inhibe la croissance cellulaire de nombreuses lignées de cellules tumorales et induit la mort de ces cellules tumorales par apoptose. D’autre part, il inhibe, in vitro et in vivo, plusieurs étapes de l’angiogenèse tumorale. Ces deux activités mènent, in vivo, à l’inhibition de la croissance tumorale dans de nombreux modèles de croissance tumorale chez la souris. Dans le but d’améliorer les activités observées avec HB- 19, des pseudopeptides dérivés de ce dernier ont été synthétisés. Ainsi le NucAnt 6L (N6L) montre une activité 5 à 10 fois supérieure à celle de HB-19 selon les modèles. Son activité anti-métastatique a également été démontrée. L’étude du mécanisme d’action des pseudopeptides a permis d’identifier deux nouveaux récepteurs: les héparanes sulfates et la nucléophosmine. L’importance du TIMP-3 dans son activité anti-métastatique a également été soulignée. Enfin, aucune toxicité n’a été observée chez les souris aux doses employées et la synthèse de N6L peut être effectuée à l’échelle industrielle. N6L apparaît donc comme un composé prometteur pour une thérapie anti-cancéreuse / The cancer research is nowadays interested in targeting therapies. In this context, nucleolin and nucleophosmin are proteins highly involved in tumor growth and angiogenesis and over-expressed in activated endothelial and tumor cells. So, they appear as very promising targets. The pseudopeptide HB-19 binds to cell surface-expressed nucleolin, inhibits different tumor cell growth and induces cell death by apoptosis. Furthermore, it inhibits, in vitro and in vivo, several steps of angiogenesis. These two activities lead, in vivo, to the suppression of tumor growth and angiogenesis in several mice models. In order to improve the activities observed with HB-19, new compounds derived from HB-19 were synthesized. So, NucAnt 6L (N6L) show 5 to 10 fold stronger anti-tumoral activity than HB- 19 depending of the model. Study of their action mechanism allowed us to identify two new receptors: nucleophosmin and heparan sulfates. The importance of TIMP-3 in anti-metastatic activity has also been highlighted. Finally, no toxicity has been observed in mice treated with N6L which can easily industrially be synthesized. N6L appears to be a promising compound for anti-cancer therapies

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