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Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2017-02-13T13:03:08Z No. of bitstreams: 1 Luciana Cavalcanti de Arruda Coutinho.pdf: 4647135 bytes, checksum: a250b87f919a5205eb093e027264fbce (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-13T13:03:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Luciana Cavalcanti de Arruda Coutinho.pdf: 4647135 bytes, checksum: a250b87f919a5205eb093e027264fbce (MD5) Previous issue date: 2014-06-11 / Equine infectious anemia (EIA ) is a difficult control disease, characterized by a wide variety of clinical signs that appear in recurring and dynamic cycles. According with Brazilian law, positive animals in the agar gel immunodiffusion (AGID) must be sacrificed, therefore, there is a dependency relationship between diagnosis and disease control. For reasons related with peculiar characteristics of the infection and immune response EIA, this test may not be able to detect newly infected animals. Considering that the IDGA has a decisive role in the fate of the animal tested, we study the possibility of complementing the diagnostic with the ELISA. In this context, in a previous study, we developed the recombinant protein p26 (rp26) from VAIE, produced in yeast Pichia pastoris, aiming their use as antigens in immunoassays . The purpose of the current study was to test this antigen in AGID, ELISA and Western blot, standardize an indirect ELISA (iELISA) using the rp26 protein from equine infectious anemia virus (EIAV) as antigen, and also compare it with the pattern test. In all these immunoassays was identified the functionality of the RP26 antigen. After analyzing 101 AGID - positive sera from animals and 704 AGID - negative at the new iELISA, was observed excellent concordance (kappa=0,9) between tests. The cutoff point (15%) was selected by observing the distribution of the relative values of the optical densities of the samples IDGA -positive and negative. The relative sensitivity and specificity were 97 % and 97,9 %, respectively. The excellent results using the rp26 as antigen in iELISA enables the consideration of a new alternative diagnostic for EIA. / A anemia infecciosa equina (AIE) é uma doença de difícil controle, caracterizada por uma ampla variedade de sinais clínicos que surgem em ciclos recorrentes e dinâmicos. De acordo com a legislação brasileira, animais positivos no exame sorológico Imunodifusão em gel de ágar (IDGA) devem ser sacrificados, existindo, portanto, uma relação de dependência entre o diagnóstico e o controle da doença. Por questões relacionadas às características da infecção e resposta imunológica peculiar à AIE, este teste pode não ser capaz de detectar animais recém-infectados. Tendo em vista que o IDGA tem papel decisivo no destino do animal testado, estuda-se a possibilidade de complementação do diagnóstico com ELISA. Diante deste cenário, em um estudo anterior, foi desenvolvida a proteína p26 recombinante (rp26) do VAIE, produzida na levedura Pichia pastoris, vislumbrando seu uso como antígeno em imunoensaios. A finalidade do atual estudo foi testar o antígeno produzido no IDGA, ELISA e Western blot bem como padronizar um ELISA indireto (iELISA) utilizando a proteína rp26 do vírus da anemia infecciosa equina (VAIE) como antígeno, e ainda compará-lo com o teste padrão IDGA. Em todos os imunoensaios referidos foi possível identificar a funcionalidade da rp26 como antígeno. Após a análise de 101 soros de animais IDGA-positivos e 704 IDGA-negativos no novo iELISA, foi observada uma excelente concordância (kappa=0,9) entre os testes. O ponto de corte (15%) foi selecionado pela observação da distribuição dos valores relativos das densidades ópticas das amostras IDGA-positivas e IDGA-negativas. A sensibilidade e especificidade relativas foram de 97% e 97,9%, respectivamente. Os ótimos resultados encontrados com o uso da rp26 como antígeno no iELISA possibilita a consideração de uma nova alternativa de diagnóstico para AIE.

Universidade Federal do Pará, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia de Agentes Infecciosos e Parasitários. / The brazilian Amazon region maintains the largest variety of arboviruses and the state of Pará is responsible for 26% of this territory, so the major goal of this work was to determine the prevalence and distribution of HI antibodies to 19 domestic arbovirus in domestic herbivores in the state of Pará and to standardize an indirect sandwich IgG ELISA test to serum samples of equines, cattle, buffaloes and sheep. In all species studied and throughout the State of Pará a large prevalence of HI antibodies to all arbovirus analyzed was observed and SLEV, ILHV, EEEV, MAGV and WEEV, showed higher prevalence, where the SLEV was the most prevalent. Regarding the virus families HI antibodies to MAGV was the most prevalent Bunyaviridae in all species, the most prevalent Flaviviridae was SLEV in all species and in the family Togaviridae the EEEV was more prevalent in horses. In order to analyze the prevalence of HI antibodies by animal species was observed that horses did not show significant differences compared to buffaloes, however, showed significant difference compared to cattle and sheep; there was not observed significant difference between the ruminant species. Using sandwich indirect IgG ELISA a large number of crossed reactions were found. This enzymatic test can be used to detect IgG antibodies among families of arboviruses studied. / A região Amazônica brasileira mantém a maior variedade de arbovírus e o estado do Pará corresponde a 26% desse território, o presente trabalho teve como objetivo determinar a prevalência e a distribuição de anticorpos detectados por inibição de hemaglutinação (IH) para 19 arbovírus em herbívoros domésticos no estado do Pará e padronizar testes de ELISA sanduíche indireto em equinos, bovinos, bubalinos e ovinos. Em todas as espécies de animais estudadas e em todo estado do Pará ocorreu detecção de anticorpos para todos os arbovírus analisados dentre os quais os SLEV, ILHV, EEEV, MAGV e WEEV apresentaram maior prevalência de anticorpos IH, sendo o SLEV o mais prevalente. Na detecção de anticorpos para diferentes famílias de arbovírus o MAGV foi o mais prevalente da família Bunyaviridae em todas as espécies, o SLEV foi o mais prevalente da família Flaviviridae em todas as espécies, na família Togaviridae o EEEV foi mais prevalente em equinos. Ao analisar a prevalência de anticorpos IH por espécie animal foi observado que os equinos não apresentaram diferença significativa em relação aos bubalinos, porém, apresentaram diferença significativa maior em comparação aos bovinos e ovinos, não havendo diferença significativa entre as espécies de ruminantes. O uso de ELISA IgG sanduíche indireto apresentou grande frequência de reações sorológicas cruzadas entre as famílias de arbovírus estudadas.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-02-27T14:16:51Z No. of bitstreams: 1 Sebastiao Andre Barbosa Junior.pdf: 749859 bytes, checksum: e483888ecfa0c1a9815a1e63aaede716 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-27T14:17:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sebastiao Andre Barbosa Junior.pdf: 749859 bytes, checksum: e483888ecfa0c1a9815a1e63aaede716 (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Porcine circovirus (PCV) belongs to the Circoviridae family and Circovirus genus. The vírus can be subdivided into porcine circovirus-1 (PCV1) and porcine circovirus-2 (PCV2). PCV1 is non-pathogenic, where as PCV2 is one of the most important etiological agents in the pig industry today, and the cause of several diseases. The complexity of PCV2 caused by disturbances has led to a demand for laboratory techniques and a wider range of biological samples that can facilitate diagnosis and herd health monitoring. Research studies of the antibodies against PCV2 have prefered the ELISA technique to other serological methods because of its simplicity, high sensitivity and specificity. Among the molecular tools, the quantitative real-time polymerase chain reaction (qPCR) stands out since it makes it possible to measure the viral load of the sample. The oral fluid (FO) is a biological sample that has been increasingly used in pig farming as it reduces stress and improves animal welfare. Although PCV2 has been recently detected in Brazil, the North-East region has still not carried out many studies on the dynamics of the respective viruses. In view of this, the, aim of this research is to study PCV2 by means of indirect ELISA with the capture antibody and qPCR in pigs through serum and FO, respectively. The samples were obtained from the Municipal Slaughterhouse in the town of Paulista, located in the metropolitan district of Recife, Pernambuco State. Serum samples were collected during the bleeding process, and a total of 74 samples were obtained. These were assessed by means of the ELISA technique with the capture antibody. The FO samples were obtained from pigs that were housed in stalls to rest. A total of 60 samples were collected, and these were subjected to qPCR testing. The serum samples that were analyzed, had measurements in the ELISA index as follows: very low - 14 (18.92%), low - 13 (17.57%), moderate - 11 (14.86%) and high - 36 (48.65%). The FO samples showed the DNA of the virus as 13.34% (8/60). 75% (6/8) of these had a very low viral load of 4 (log) / ml of the sample and a low viral load 25% (2/8) 4 to 5 (log) / ml sample. The occurrence of antibodies and the presence of PCV2 in the FO samples suggest that the virus is spreading in the herds of Pernambuco State. This study provides a strong argument for the application of ELISA for capture antibody in serological tests and using pids to obtain biological FO samples in quantitative tests. / O Circovírus suíno (PCV) pertence à família Circoviridae e ao genêro Circovírus. O vírus subdivide-se em: Circovírus suíno-1 (PCV1) e Circovírus suíno-2 (PCV2). O PCV1 não é patogênico, ao contrário do PCV2, que é um dos mais importantes agentes etiológicos da suinocultura moderna, estando associado a várias doenças. Essa complexidade de distúrbios causados pelo PCV2 gera uma demanda por técnicas laboratoriais e mais opções de amostras biológicas que venham a facilitar o diagnóstico e monitoramento sanitário dos rebanhos. A técnica do ELISA vem destacando-se na investigação de anticorpos contra o PCV2, diante de outras técnicas sorológicas, em razão de sua simplicidade, alta sensibilidade e especificidade. Dentre as ferramentas moleculares, a Reação em Cadeia pela Polimerase quantitativa em tempo real (qPCR) destaca-se principalmente por mensurar a carga viral da amostra. O fluido oral (FO) é uma amostra biológica que vem sendo cada vez mais utilizada na suinocultura por diminuir o estresse e favorecer o bem-estar animal. O PCV2 foi identificado recentemente no Brasil, e a região Nordeste ainda apresenta poucos estudos sobre a dinâmica do respectivo vírus. Baseado nesses aspectos, objetivou-se estudar o PCV2 pelas técnicas de ELISA indireto com anticorpo de captura e de qPCR em suínos, por meio de amostras de soro e FO, respectivamente. As amostras foram oriundas do Abatedouro Municipal da cidade de Paulista, localizado na Região Metropolitana do Recife, estado de Pernambuco. As amostras de soro foram coletadas durante o processo da sangria, no qual foi obtido um total de 74 amostras. Essas foram avaliadas pela técnica do ELISA indireto com anticorpo de captura. As amostras de FO foram obtidas de suínos que estavam alojados nas baias de descanso. Foi coletado um total de 60 amostras, as quais foram submetidas ao teste do qPCR. Das amostras de soro analisadas, tiveram o índice do ELISA considerado baixíssimo 14 (18,92%), baixo 13 (17,57%), moderado 11 (14,86%) e alto 36 (48,65%). Das amostras de FO, apresentaram o DNA do vírus 13,34% (8/60). Dessas, 75% (6/8) apresentaram uma carga viral muito baixa, até 4 (log)/mL da amostra, e uma carga viral baixa 25% (2/8), de 4 a 5 (log)/mL da amostra. A ocorrência de anticorpos e a presença do PCV2 nas amostras de FO sugerem que o vírus está circulante em rebanhos do estado de Pernambuco. Este estudo traz argumentos para a aplicação do ELISA indireto por anticorpo de captura em pesquisas sorológicas e utilização do FO de suíno como amostra biológica em testes quantitativos.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-09-11T18:35:59Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_SoroconversoesVirusHepatite.pdf: 4085875 bytes, checksum: 4b44b45a4f9ce1c7775082aeab35d4c9 (MD5) / Approved for entry into archive by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2017-09-20T12:10:15Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_SoroconversoesVirusHepatite.pdf: 4085875 bytes, checksum: 4b44b45a4f9ce1c7775082aeab35d4c9 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-20T12:10:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_SoroconversoesVirusHepatite.pdf: 4085875 bytes, checksum: 4b44b45a4f9ce1c7775082aeab35d4c9 (MD5) Previous issue date: 2014 / O Vírus da hepatite C na atualidade é um dos principais causadores de cirrose hepática e de hepatocarcinoma, também constitui-se como um dos principais motivos de inaptidão para doação de sangue entre a população. A hepatite C apresenta-se como uma das principais doenças infectocontagiosa no cenário mundial. O objetivo deste trabalho foi realizar um estudo comparativo e uma análise entre as metodologias de triagem para o HCV em doadores de sangue da Fundação Centro de Hematologia e Hemoterapia do Pará (HEMOPA) antes e após a implantação do teste NAT. A metodologia utilizada teve uma abordagem quantitativa, prospectivo e com objetivos gerais de natureza descritiva, e utilizou procedimento técnico documental, com registros escritos pré-existentes na Fundação HEMOPA. Ocorreram 125 soroconversões para HCV diagnosticadas pelo teste ELISA e 176 diagnosticadas pelo NAT associado à Quimiluminescência, totalizando 301 soroconversões no período de abril de 2013 a setembro de 2014. Observou-se no estudo uma maior ocorrência da taxa de soroconversões quando utilizava-se a técnica de biologia molecular associado a um teste imunológico em detrimento a metodologia ELISA. No estudo, a maioria dos sujeitos era do sexo masculino, com idade inferior a 35 anos, solteiros e possuíam ensino médio completo; observou-se também que dentre os fatores de risco estudados o item “Cirurgia” mostrou-se estatisticamente significante. Conclui-se que há um relevante indício de que a utilização dos testes moleculares e imunológicos combinados incrementa a segurança no processo de seleção de doadores de sangue. / The Hepatitis C virus is currently one of the main causes of hepatic cirrhosis and hepatocellular carcinoma; it also constitutes one of the main reasons of unsuitability for blood donation among the population. Hepatitis C presents itself as one of the main infectious diseases in the worldwide scenario. The aim of this work was to conduct a comparative study and a analysis of the methods of screening for HCV in blood donors of the Foundation Center of Hematology and Hemotherapy of Pará (HEMOPA) before and after the implementation of NAT test. The methodology used had a quantitative, prospective, with general objectives of descriptive nature approach, and used a technical procedure with pre-existent written registrations in HEMOPA Foundation. There were 125 seroconversions to HCV diagnosed by ELISA, and 176 diagnosed by NAT, associated with chemiluminescence, totalizing 301 seroconversions from April 2013 to September 2014. It was observed in the study that there was a higher rate of seroconversions when the technique of molecular biology was used, which is associated with an immunological test, instead of the ELISA methodology. In the study most people were male, under 35 years old, unmarried, and had complete high school level. It was observed that among the risk factors studied, the “Surgery” one was statistically significant. We concluded that there is an important clue that the combined use of molecular and immunological tests improves security in the process of blood donors selection.