Made available in DSpace on 2015-10-23T12:42:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 natalia_lanzarini_ioc_mest_2014.pdf: 2473569 bytes, checksum: 3ef3e9aeef4d618351a689e2550d62e8 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-04-14 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A infecção pelo rotavírus A (RVA) é responsável por cerca de 453.000 mortes anualmente e aproximadamente 40% das hospitalizações por diarreia em crianças menores de cinco anos em todo o mundo, sendo o principal causador de gastroenterite aguda nesse grupo populacional. O desenvolvimento de um método de diagnóstico rápido, barato, sensível e específico para a detecção de RVA é importante do ponto de vista epidemiológico porque permite identificar surtos no local de ocorrência. O uso da imunoglobulina Y (IgY), anticorpo purificado a partir da gema de ovo, vem crescendo nos últimos anos, devido às características vantajosas quando comparada com a imunoglobulina G (IgG), como a obtenção de anticorpos de forma não invasiva e a produção de anticorpos em grandes concentrações. Este trabalho objetivou a adaptação de um teste de diagnóstico através da substituição do anticorpo de captura IgG pela IgY específica para o antígeno de RVA (LATEXY-ROTA). Para isto 09 frangas poedeiras foram imunizadas com o RVA, os ovos foram coletados e a IgY purificada a partir da gema do ovo por polietileno glicol 6.000, seguida da purificação adicional por cromatografia de troca iônica A IgY anti-RVA purificada foi ligada covalentemente à partículas de poliestireno e usada como insumo na adaptação de um teste de aglutinação em látex, sendo testada em um painel de amostras fecais sabidamente positivas e negativas previamente selecionadas pelo Centro Regional de Referência para Rotaviroses do Laboratório de Virologia Comparada e Ambiental (LVCA/IOC-FIOCRUZ). Foi obtida uma sensibilidade de 75% e uma especificidade de 87,5% quando o LATEXY-ROTA foi comparado com um teste imunoenzimático comercial disponível (padrão ouro). Quando comparado com dois testes comerciais de aglutinação em látex testados no painel de amostras utilizando a IgG, o LATEXY-ROTA obteve uma sensibilidade de 100% e especificidade de 88,24%. Baseado nos dados obtidos, sugerimos a viabilidade da substituição da IgG por IgY no ensaio de aglutinação pelo látex / The infection by rotavirus (RV ) is responsible for approximately 453,000 de aths annually and approximately 40 % of hospitalizations by diarrhea in children under five years worldwide , being the major cause of acute gastroent eritis in this population group . The development of a rapid method, inexpensive , sensitive and specific for rotavirus diagnosis is important from the disease because it allows the identification of outbreaks in the site of occurrence . The use of Immunoglobulin Y (IgY ) antibody purified from egg yolk, has been grow n in recent years , due to the advantageous features compared to immunoglobulin G (IgG) , as a noninvasive recovery of antibodies and production in high concentrations . The aim of t his method was to adapt a diagnostic test by replacing the IgG capture antibody by specific IgY for RVA antigen (LATEXY - ROTA). For that, 09 laying hens were immunized with RVA , the eggs were collected and IgY purified from egg yolk by polyethylene glycol 6 ,000, followed by purification by ion exchange chromatography. The purified anti - IgY RVA was covalently bound to polystyrene particles , being tested in a p anel of positive and negative fecal samples previously determined by the R otavirus Regional Reference Center of Compa rative and Environmental Virology Laboratory (LVCA / IOC - FIOCRUZ ) . A sensitivity of 75% and specificity of 85,7% was observed when the adapted test was compared to a commercial available enzyme immunoassay (golden standard). When compared to two commercial l atex agglutination tests using the IgG tested on the panel of samples , the LATEXY - ROTA had a sensitivity of 100% and specificity of 88.2 %. Based on the obtained data, we suggest the feasibility of replacing the IgG by IgY in the latex agglu tination assay.

Made available in DSpace on 2016-01-26T12:51:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 plinioluisluppino_tese.pdf: 1297185 bytes, checksum: 89ac3b7475f1bfd00a6808afd1ba661e (MD5) Previous issue date: 2007-06-04 / Dengue is the arthropod-borne transmitted viral disease of highest worldwide prevalence in mortality and morbidity. The proportion is pandemic ranging 1.6 million of infected patients yearly. Clinical presentation associated to epidemiological factors such as dengue prevalence in the patient s origin have been the only mean for early diagnosis. Laboratorial diagnosis, the conclusive, requires several days when there is viral isolation. Serological methods depend on high level of specific antibodies, and molecular methods are not available for the majority of laboratories of diagnosis and routine. The purpose of this study was to develop an agglutination method using latex to detect dengue virus, using biological samples of mice infected with dengue 1 Mochizuki strain by intracerebral via, and anti-dengue 1 specific antibodies from immunized mice. According to the results, this method was feasible for the dengue viruses diagnosis in positive samples of experimental animals. It provides further approaches for rapid detection of dengue in susceptible populations during the first days of the disease. / A dengue é a doença viral, transmitida por artrópode, de maior prevalência mundial em morbidade e mortalidade. Alcança proporções pandêmicas, estimando-se em 1,6 milhões de doentes anualmente. Manifestações clínicas características, associadas a fatores epidemiológicos, como prevalência da dengue na região de origem do paciente, têm sido os únicos instrumentos de diagnóstico precoce. O diagnóstico laboratorial, que é definitivo, demanda vários dias, quando realizado o isolamento viral. Métodos sorológicos dependem de níveis elevados de anticorpos específicos e os métodos moleculares não estão disponíveis para a maioria dos laboratórios de diagnóstico e rotina. Este estudo teve como objetivo desenvolver método de aglutinação do látex para a detecção do vírus dengue, utilizando amostras biológicas de camundongos infectados por via intracerebral com dengue 1, cepa Mochizuki e anticorpos específicos anti-dengue 1, obtidos de camundongos imunizados. Os resultados obtidos demonstraram a viabilidade deste método para diagnóstico do vírus Dengue em amostras positivas de animais de experimentação, abrindo novas perspectivas para o diagnóstico precoce da dengue na população susceptível, durante os primeiros dias de sintomas.