Les monocytes jouent un rôle procoagulant majeur au cours du Syndrome Coronaire Aigu (SCA). Ils expriment à leur surface le Facteur Tissulaire (FT), initiateur majeur de la génération de la thrombine et sont à l’origine de la génération de icroparticules (MPs) procoagulantes exprimant également le FT. L’inhibition de la génération de thrombine et/ou de la génération des MPs monocytaires est ainsi d’un grand intérêt dans le contexte coronaire. Dans la première partie de ce travail, nous avons effectué une étude fondamentale évaluant, in vitro, l’effet d’anticoagulants utilisés dans le SCA, particulièrement le fondaparinux, ainsi que l’effet de l’interleukine-10 (IL-10), une cytokine anti-inflammatoire dotée des propriétés anti-athéromateuses. Ces deux types de molécules ont été analysées seules ou de façon combinée dans des modèles de génération de thrombine et de microvésiculation monocytaire. Ainsi, nous démontrons 1- que l’IL-10 inhibe lamicrovésiculation monocytaire, 2- que les molécules anticoagulantes inhibent d’avantage la génération de thrombine médiée par la MP monocytaire que celle médiée par le monocyte activé 3- que l’IL-10 potentialise l’effet anticoagulant du fondaparinux. Dans la mesure où la production de l’IL-10 est contrôlée génétiquement, nous avons évalué, dans la seconde partie de ce travail, l’association possible entre 5 polymorphismes génétiques de l’IL-10 et lerisque de pathologie coronaire aigue, et ce, dans une population tunisienne (291 patients/291témoins sains). Nous rapportons une association positive entre les variants polymorphes, IL-10 -592A (Odds ratio : 1,82) et IL-10R3 (Odds ratio : 1,46), et la pathologie coronaire. De façon intéressante, la littérature rapporte que ces deux variants polymorphes sont associés à une synthèse faible d’IL-10. En conclusion, nos résultats ne nous autorisent pas à proposer l’étude systématique des polymorphismes de l’IL-10 dans l’appréciation du risque coronaire aigu chez le patient. En revanche, nos résultats suggèrent que l’IL-10 pourrait constituer une molécule prometteuse dans l’arsenal des thérapeutiques anti-thrombotiques. / Procoagulant monocytes play a major role in the pathogeny of the acute coronary syndrome(ACS). Indeed, they express Tissue Factor (TF), the main trigger of thrombin generation, and generate highly procoagulant TF-bearing microparticles (MPs). It is therefore a major issue to control MPassociated thrombin generation in SCA. This led us to evaluate, in the first part of this work, the effect of anticoagulant molecules used in the management of ACS (including fondaparinux) but also of IL-10, an anti-inflammatory cytokine, which can modulate the progression of atheroma. Both types of molecules were evaluated separately or incombination, in a in vitro model of thrombin generation and monocytic MP generation. Ours results show that: 1- IL-10 inhibits monocytic-MP generation; 2- anticoagulants inhibit more potently MP-induced thrombin generation than activated monocyte-induced thrombin generation; 3- IL-10 potentiates fondaparinux inhibitory effect on thrombin generation.As IL-10 production is genetically controlled, we evaluated the possible influence of 5 well-described IL- 10 polymorphisms on the risk of ACS among Tunisians (291 patients/291 healthy controls). Results show that two polymorphic variants of IL-10 i.e. SNP-592A (Odds ratio: 1,82) and microsatellite IL-10R3 Odds ratio: 1,46) are significantly associated with the risk of SCA. Interestingly, the literature reports that these two polymorphic variants are associated with low levels of IL-10 production. In conclusion: Our results do not allow us to recommend the analysis of IL-10 polymorphisms in the assessment of ACS risk. However, our data suggest that IL-10 is a promising antithrombotic pharmacological agent, in this clinical situation.

La grippe est une maladie respiratoire aigüe, due à une infection par des virus influenza et qui représente un problème important de santé publique. Une meilleure compréhension des interactions entre le virus influenza et son hôte nous permettra de mieux comprendre la physiopathologie de l'infection grippale, et donc, à terme, de mieux se protéger contre la maladie. La morbidité et la mortalité, causées par les infections grippales sévères, sont associées à une dérégulation de la réponse immunitaire, au niveau pulmonaire. Cette inflammation délétère serait à l'origine de dommages collatéraux du poumon, entrainant une diminution de la capacité respiratoire du patient. Bien que les mécanismes impliqués ne soient pas totalement élucidés, de récents travaux mettent en évidence un rôle central des cellules endothéliales dans la dérégulation de la réponse de l'hôte face à l'infection grippale. Lors d'une agression de l'endothélium, le processus physiologique de l'hémostase (activation plaquettaire, coagulation et fibrinolyse) s'active afin de permettre la cicatrisation de la plaie et de maintenir l'intégrité des vaisseaux sanguins. Dans de nombreuses maladies inflammatoires, la seule dérégulation de l'hémostase est directement liée à une réponse inflammatoire délétère. Lors de ma thèse, nous avons émis l'hypothèse que l'hémostase pouvait être à l'origine de la dérégulation inflammatoire durant les infections grippales. Nos données montrent le rôle de deux facteurs fortement impliqués dans l'hémostase : le récepteur activé par la thrombine, PAR-1 (Protease Activated Receptor J) ainsi que le plasminogène, dans l'inflammation délétère des poumons et dans la pathogénicité des virus influenza. Outre le rôle de l'hémostase, nous avons également pu mettre en évidence que le virus influenza incorpore des protéines cellulaires dans l'enveloppe virale, lui permettant d'échapper au système immunitaire, ce qui pourrait aussi contribuer à la dérégulation de la réponse de l'hôte. L'ensemble des résultats obtenus ont permis de mieux comprendre les mécanismes à l'origine d'une réponse immunitaire dérégulée dans les infections grippales et de proposer de nouvelles cibles thérapeutiques pour lutter contre la maladie / Influenza is an acute respiratory disease caused by infection with influenza virus and is a major public health problem. A better understanding of the interaction between influenza virus and host allow us to better understand the pathophysiology of influenza infection, and thus, ultimately, to better protect themselves against the disease. Morbidity and mortality caused by severe influenza infections are associated with dysregulation of the immune response in the lung. This deleterious inflammation is the cause of lung collateral damage, causing a decrease in the patient's breathing capacity. Although the mechanisms involved are not fully understood, recent studies point to a central role of endothelial cells in the deregulation of the host response to influenza infection. During endothelium aggression, the physiological process of hemostasis (platelet activation, coagulation and fibrinolysis) is activated in order to allow wound healing and to maintain the integrity of blood vessels. In many inflammatory diseases, the only dysregulation of hemostasis is directly linked to a deleterious inflammatory response. During my thesis, we hypothesized that hemostasis could be the cause of the inflammatory dysregulation during influenza infections. Our data show the role of two factors strongly involved in hemostasis: the thrombin activated receptor, PAR-1 (protease activated receptor 1) and plasminogen, in the deleterious lung inflammation and in the pathogenicity of influenza virus. Besides the role of hemostasis, we have also been able to show that the influenza virus incorporates cellular proteins in the viral envelope, allowing it to evade the immune system, which could also contribute to the deregulation of the host response. All the results obtained allowed to better understand the mechanisms involved in immune response dysregulation during influenza infection and suggest new therapeutic targets to fight against the disease

Cette étude avait comme objectif d’évaluer la coagulation par l’utilisation de la thrombélastographie (TEG®) et de la génération de thrombine (GT) chez des beagles en santé recevant de la prednisone ainsi que chez des chiens atteints d’hyperadrénocorticisme (HAC). Dans un premier temps, six beagles adultes en santé ont été évalués dans une étude prospective longitudinale au courant de laquelle chaque individu recevait 1 mg/kg/jour de prednisone par la voie orale pendant 2 semaines. Après un arrêt de traitement d’une durée de 6 semaines, ils ont finalement reçu 4 mg/kg/jour de prednisone pour encore 2 semaines. Les tracés TEG® et les mesures de la GT ont été obtenus au temps 0, à la fin des 6 semaines d’interruption de traitement, ainsi qu’à la suite des 2 dosages de prednisone. Suite aux 2 traitements avec la prednisone, des résultats significatifs,lorsque comparés aux valeurs de base, ont été obtenus pour la cinétique du caillot (« clot kinetics » ou K), l’angle alpha (α) et l’amplitude maximale (« maximal amplitude » ou MA). La GT avait augmenté de manière significative mais seulement après la dose de 1 mg/kg/jour de prednisone. Dans un deuxième temps, 16 chiens atteints d’HAC ont été évalués avant l’initiation d’un traitement pour leur condition. Quinze chiens ont été évalués par TEG® et 15 par GT. Les données obtenues ont ensuite été comparées aux valeurs normales. L’analyse par TEG® a démontré que 12/15 chiens avaient au moins un paramètre suggérant un état d’hypercoagulabilité. L’analyse par GT a démontré que 4/15 chiens avaient des changements compatibles avec un état d’hypercoagulabilité. Un test t-pairé pour des valeurs de variance inégales a démontré que le groupe de chiens atteints d’HAC avait des tracés hypercoagulables et un potentiel endogène de thrombine (« endogenous thrombin potential » ou ETP) plus élevé, lorsque comparé à la population de référence. / The purpose of this study was to use thrombelastography (TEG®) and thrombin generation (TG) to evaluate coagulation in healthy beagles receiving oral prednisone as well as client-owned dogs diagnosed with hyperadrenocorticism (HAC).Six healthy adult beagles were used in a prospective ongitudinal study whereby all dogs received 1 mg/kg of prednisone orally once daily for two weeks, followed by a 6-week washout period and then 4 mg/kg of prednisone orally once daily for two weeks. TEG® tracings and TG measurements were obtained at baseline, at the end of the washout period and at the end of both corticosteroid trials. Significant results as compared to baseline were obtained for clot kinetics (K), alpha angle (α)and maximum amplitude (MA), with tracings compatible with a hypercoagulable profile following both corticosteroid trials. Thrombin generation resulted in a significant increase in endogenous thrombin potential (ETP) after the 1 mg/kg/day trial only. Secondly, sixteen dogs affected by HAC were evaluated. Fifteen dogs were evaluated by TEG® and 15 dogs were evaluated by TG before treatment and compared to the normal reference values. For the TEG® analysis, 12/15 dogs had at least one parameter that suggested hypercoagulability. A paired t test for values with unequal variance was used to compare the HAC dogs to the healthy dogs and found that HAC dogs have hypercoagulable TEG® tracings. The same results were found when TG was used with the ETP elevated in the HAC dogs. However, when dogs were evaluated individually, only 4/15 had hypercoagulable TG results.

Mémoire numérisé par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.

Les fonctions vasculaires sont régulées par diverses stimulations biochimiques ou mécaniques qui activent les différentes cellules composant les vaisseaux sanguins.Les réponses cellulaires qui en résultent peuvent impliquer une réorganisation du cytosquelette, des changements morphologiques, l'expression de protéines membranaires ou la libération de nombreux médiateurs. Tous ces événements sont susceptibles d'influencer les propriétés mécaniques des cellules. Ainsi, le but de la présente étude est de déterminer l'impact de l'activation de certains récepteurs au niveau des propriétés mécaniques des cellules, des modifications qui pourraient avoir de fortes implications au niveau vasculaire. Pour ce faire, nous avons utilisé deux approches expérimentales permettant d'évaluer des changements morphologiques et mécaniques de très faible amplitude : la microscopie à force atomique (AFM) et la résonance des plasmons de surface (SPR). Nous avons ainsi étudié les effets de l'activation des récepteurs de l'angiotensine II, la thrombine et la bradykinine sur la morphologie et les propriétés mécaniques de modèles cellulaires importants dans l'étude des fonctions vasculaires. Nous avons observé que l'activation du récepteur AT[indice inférieur 1] pour l'angiotensine II induit une réponse mécanique transitoire qui se traduit par une contraction du corps cellulaire, une augmentation du module d'élasticité de la cellule et une diminution de l'intégrité de l'épithélium. Quant à l'activation du récepteur PAR-1 pour la thrombine et du récepteur B[indice inférieur 2] pour la bradykinine, celle-ci provoque aussi une modification de la rigidité des cellules, mais de façon soutenue dans le temps. Ces deux agonistes augmentent aussi l'interaction entre la membrane et le cytosquelette, un phénomène observé par l'augmentation des forces requises pour l'étirement de la membrane cellulaire. Ainsi, la présente étude montre qu'une cellule peut subir des modifications importantes au niveau de ses propriétés mécaniques suivant son activation par différents agonistes, ce qui peut avoir des conséquences directes sur certaines fonctions physiologiques dépendantes des propriétés mécaniques des vaisseaux. En effet, ces changements observés au niveau de la cellule pourraient, entre autres, contribuer au contrôle du diamètre et de la compliance des capillaires, à l'adhésion des cellules inflammatoires ainsi que modifier la perception de stimuli mécaniques par les cellules endothéliales.

Mémoire numérisé par la Division de la gestion de documents et des archives de l'Université de Montréal.

Chez le chien, la daltéparine est un anticoagulant utilisé pour la prévention et le traitement de la thrombose. La surveillance thérapeutique de la daltéparine par l’activité anti-facteur Xa (FXa) n’est pas un test fonctionnel. Cette étude avait pour but d’étudier l’emploi de la génération de thrombine (GT) pour évaluer les effets in vitro de la daltéparine sur du plasma canin, ainsi que pour détecter les effets pharmacodynamiques de la daltéparine administrée chez des chiens sains. Premièrement, les paramètres normaux de la GT ont été établis à partir du plasma de 25 beagles et 11 chiens sains de clients. Ensuite, des pools de plasma canin fortifié avec de la daltéparine, à dose croissante, ont été analysés selon la GT, l’activité anti-FXa et selon le temps de thromboplastine partielle activée (aPTT). Finalement, 24 beagles sains répartis au hasard dans 4 groupes on reçu soit une dose sous-cutanée (SC) de 50U/kg, 100U/kg ou 150U/kg de daltéparine ou un placebo. Du plasma pauvre en plaquettes (PPP) a été récolté pendant 24 heures et analysé selon la GT, l’anti-FXa et l’aPPT. In vitro, la daltéparine a démontré un effet anticoagulant sur la GT qui était concentration-dépendant. Les tests de GT et anti-FXa étaient plus sensibles aux effets de la daltéparine que l’aPPT. L’étude pharmacodynamique a démontré que le temps, la dose ainsi qu’une interaction temps*dose avaient un effet significatif sur les paramètres de GT et anti-FXa. La GT peut mesurer les effets pharmacodynamiques de la daltéparine à des doses variées chez des chiens sains. / Dalteparin is an anticoagulant used to prevent and treat thrombotic disorders in dogs. Measurement of anti-factor Xa (FXa) activity is currently used for monitoring therapy, but remains a non-functional test. The aim of this study was to investigate if a thrombin generation (TG) assay could be used for the in vitro evaluation of the effects of dalteparin on canine plasma, as well as for monitoring the pharmacodynamic effects of dalteparin administration in healthy dogs. Normal TG parameters were assessed in plasma from 25 adult beagles and 11 client-owned healthy dogs. Pooled plasma was spiked with dalteparin to obtain 9 final increasing concentrations. TG, anti-FXa activity and activated partial thromboplastin time (aPTT) were measured for each concentration. 24 healthy beagles were randomized across four equal groups. À single SC dose of 50 U/kg, 100 U/kg or 150 U/kg of dalteparin was given and compared to a placebo group. Platelet poor plasma (PPP) was collected over 24 hours and assed by TG, anti-FXa activity and aPTT. In vitro results showed that dalteparin exerted a concentration-dependent anticoagulant effect on TG parameters and TG and anti-FXa activity were more sensitive than aPTT to detect these effects. The pharmacodynamics study showed a time, dose and time*dose interaction that significantly affected TG and anti-FXa parameters. TG can be employed to measure the pharmacodynamics effects of dalteparin at different doses in healthy dogs.

Les cellules musculaires lisses (CML) vasculaires les composants cellulaires principaux de la paroi artérielle, sont exposées constamment aux contraintes mécaniques. Les contraintes mécaniques cycliques régulent de nombreuses fonctions des CML vasculaires via les intégrines. Parmi les intégrines, l'[alpha]v[gamma]3 est non seulement un mécano-transducteur mais aussi le récepteur de la prothrombine à la surface des CML. L?activation de l'intégrine [alpha]v[gamma]3 par les contraintes mécaniques pourrait favoriser l'adhésion des CML à la prothrombine et aussi accélérer la génération de thrombine à la surface des CML. Pour vérifier cette hypothèse, nous avons étudié l'effet des contraintes mécaniques sur la génération de thrombine par les CML et identifié les voies de la signalisation impliquées. Nous avons utilisé un modèle de Flexcell utilisant les CML aortiques de rat, soumises à un étirement cyclique (10%, 1Hz). L'exposition à l'étirement cyclique pendant 1h et 6h induit un phénotype de différenciation et non-apoptotique des CML et une augmentation de l'expression de l'intégrine [alpha]v[gamma]3. Il y a aussi une augmentation de la phosphorylation de Src, FAK, AKT de façon temps dépendant et une augmentation de la phosphorylation de l'ILK à 15 min et du clivage de taline de 5 à 60 min. L'étirement cyclique augmente l'adhésion des CML à la prothrombine et la génération de thrombine avec un effet maximum à 6h de 67% et 30% respectivement. Le peptide mimétique de l'intégrine [alpha]v[gamma]3 (cRGDPV) et le siARN [alpha]v bloquent tous les effets de l'étirement cyclique sur les CML. Le siARN taline inhibe l'expression de la sous-unité [alpha]v et également la phosphorylation de Src, AKT et ILK. Le siARN ILK n'a pas d'effet sur l'expression de l'[alpha]v mais inhibe la phosphorylation d'AKT et le clivage de taline à 6h de l'étirement cyclique. Ainsi, l'étirement cyclique induit une plus forte génération de thrombine par les CML vasculaires via l'activation des voies de signalisation dépendante de l'[alpha]v[gamma]3. Cette étude suggère que la génération de thrombine intravasculaire peut être régulée par des antagonistes de l'intégrine [alpha]v[gamma]3 et peut devenir une nouvelle cible thérapeutique chez les patients avec une pression pulsée élevée / Vascular smooth muscle cells (SMC), the main cellular components of the arterial wall, are constantly exposed to mechanical stretch. Cyclic mechanical stress regulates many functions of vascular SMC via integrins. Among the integrins, [alpha]v[gamma]3 is not only a mechanotransducer but also the receptor of prothrombin in the vascular SMC. Activation of integrin [alpha]v[gamma]3 by mechanical stretch may promote SMC adhesion to prothrombin and also accelerate thrombin generation on the surface of SMC. To test this hypothesis, we have studied the effect of mechanical stretch on the generation of thrombin by SMC and identified possible signaling pathway involved. We used a Flexcell model using rat aortic SMC subjected to cyclic stretch (10%, 1Hz). Exposure to cyclic stretch for 1h and 6h induced a phenotype of differentiation and non-apoptosis of SMC and an increased expression of integrin [alpha]v[gamma]3. There was also an increase in phosphorylation of Src, FAK, and AKT in a time dependent manner, increased phosphorylation of ILK at 15min and the cleavage of talin from 5 to 60min. Cyclic stretch increased the adhesion of prothrombin to the SMC, and thrombin generation with a maximum effect of 67% and 30% respectively. A peptide mimetic of integrin [alpha]v[gamma]3 (cRGDPV) and [alpha]v siRNA both blocked all the effects of cyclic stretch on SMC. A talin siRNA inhibited the expression of [alpha]v and the phosphorylation of Src, AKT and ILK. An ILK siRNA has no effect on the expression of [alpha]v but inhibited the phosphorylation of AKT and the cleavage of talin at 6h of stretch. Thus, cyclic stretch induced a higher thrombin generation by vascular SMC via activation of signaling pathways dependant on [alpha]v[gamma]3. This study suggests that intravascular thrombin generation can be regulated by antagonists of integrin [alpha]v[gamma]3 and can become a new therapeutic target for the patients with a high pulse pressure

De nombreuses études soulignent une relation directe entre la prévalence de la fibrillation auriculaire (FA) et le vieillissement. La senescence cellulaire et le phénotype sécrétoire associé semblent jouer un rôle central dans le développement de l'inflammation auriculaire. Cette inflammation est à l’origine d’un remodelage auriculaire délétère (stress oxydant, fibrose) favorable à la perpétuation et au maintien de la FA. Par ailleurs, il est connu que la FA favorise la coagulation locale et systémique. Cependant, l'impact des facteurs de la coagulation, notamment la thrombine, sur la FA est peu connu. L’objectif de cette étude était de déterminer le lien entre la sénescence des cellules endothéliales atriales et le phénotype pro-inflammatoire et pro-adhésif, la fibrose et le remodelage auriculaire tout en évaluant l’impact de la coagulation, et en particulier le rôle de la thrombine. / Many studies documented strong relationship between ageing and development of atrial fibrillation (AF). Moreover, it has been found that senescence and senescence-associated- secretory-phenotype play an important role in development of overall atrial inflammation which can ultimately ends up in atrial structural remodeling paving the way to AF perpetuation and maintenance. Moreover, it has been known for decades that AF has been associated with the activation of local and circulating coagulation factors. However, little is known about the impact of coagulation-derived factors, in particular thrombin, on the onset of AF. The aim of the present study was to determine the link between atrial endothelial cells (AECs) senescence and the induction of pro-inflammatory, pro-adhesive, pro-fibrotic and pro-remodelling AECs patterns and also to evaluate the contribution of coagulation derived-factors such as thrombin.

Cette étude avait comme objectif d’évaluer la coagulation par l’utilisation de la thrombélastographie (TEG®) et de la génération de thrombine (GT) chez des beagles en santé recevant de la prednisone ainsi que chez des chiens atteints d’hyperadrénocorticisme (HAC). Dans un premier temps, six beagles adultes en santé ont été évalués dans une étude prospective longitudinale au courant de laquelle chaque individu recevait 1 mg/kg/jour de prednisone par la voie orale pendant 2 semaines. Après un arrêt de traitement d’une durée de 6 semaines, ils ont finalement reçu 4 mg/kg/jour de prednisone pour encore 2 semaines. Les tracés TEG® et les mesures de la GT ont été obtenus au temps 0, à la fin des 6 semaines d’interruption de traitement, ainsi qu’à la suite des 2 dosages de prednisone. Suite aux 2 traitements avec la prednisone, des résultats significatifs,lorsque comparés aux valeurs de base, ont été obtenus pour la cinétique du caillot (« clot kinetics » ou K), l’angle alpha (α) et l’amplitude maximale (« maximal amplitude » ou MA). La GT avait augmenté de manière significative mais seulement après la dose de 1 mg/kg/jour de prednisone. Dans un deuxième temps, 16 chiens atteints d’HAC ont été évalués avant l’initiation d’un traitement pour leur condition. Quinze chiens ont été évalués par TEG® et 15 par GT. Les données obtenues ont ensuite été comparées aux valeurs normales. L’analyse par TEG® a démontré que 12/15 chiens avaient au moins un paramètre suggérant un état d’hypercoagulabilité. L’analyse par GT a démontré que 4/15 chiens avaient des changements compatibles avec un état d’hypercoagulabilité. Un test t-pairé pour des valeurs de variance inégales a démontré que le groupe de chiens atteints d’HAC avait des tracés hypercoagulables et un potentiel endogène de thrombine (« endogenous thrombin potential » ou ETP) plus élevé, lorsque comparé à la population de référence. / The purpose of this study was to use thrombelastography (TEG®) and thrombin generation (TG) to evaluate coagulation in healthy beagles receiving oral prednisone as well as client-owned dogs diagnosed with hyperadrenocorticism (HAC).Six healthy adult beagles were used in a prospective ongitudinal study whereby all dogs received 1 mg/kg of prednisone orally once daily for two weeks, followed by a 6-week washout period and then 4 mg/kg of prednisone orally once daily for two weeks. TEG® tracings and TG measurements were obtained at baseline, at the end of the washout period and at the end of both corticosteroid trials. Significant results as compared to baseline were obtained for clot kinetics (K), alpha angle (α)and maximum amplitude (MA), with tracings compatible with a hypercoagulable profile following both corticosteroid trials. Thrombin generation resulted in a significant increase in endogenous thrombin potential (ETP) after the 1 mg/kg/day trial only. Secondly, sixteen dogs affected by HAC were evaluated. Fifteen dogs were evaluated by TEG® and 15 dogs were evaluated by TG before treatment and compared to the normal reference values. For the TEG® analysis, 12/15 dogs had at least one parameter that suggested hypercoagulability. A paired t test for values with unequal variance was used to compare the HAC dogs to the healthy dogs and found that HAC dogs have hypercoagulable TEG® tracings. The same results were found when TG was used with the ETP elevated in the HAC dogs. However, when dogs were evaluated individually, only 4/15 had hypercoagulable TG results.