Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2013. / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2013-06-19T13:34:03Z No. of bitstreams: 0 / Rejected by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br), reason: on 2013-06-19T13:34:41Z (GMT) / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2013-06-19T13:39:53Z No. of bitstreams: 1 2013_DanielaDamascenoXavierFerro_Parcial.pdf: 1954850 bytes, checksum: 6f8527c2a0e9d045508e774284edb0f7 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-08-01T15:54:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_DanielaDamascenoXavierFerro_Parcial.pdf: 1954850 bytes, checksum: 6f8527c2a0e9d045508e774284edb0f7 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-01T15:54:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_DanielaDamascenoXavierFerro_Parcial.pdf: 1954850 bytes, checksum: 6f8527c2a0e9d045508e774284edb0f7 (MD5) / O tomateiro (Solanum lycopersicum L.) é uma das hortaliças mais importantes no Brasil, sendo também uma das culturas que mais sofrem danos pelo ataque de diversos patógenos, com especial destaque para as diferentes espécies do gênero Begomovirus (família Geminiviridae). Um dos métodos de controle mais promissores tem sido o uso de cultivares contendo genes de resistência. O locus dominante Ty-1 (introgredido da espécie selvagem S. chilense) tem sido a principal fonte de resistência empregada nos programas de melhoramento genético no mundo. Acessos e linhagens contendo o locus Ty-1 apresentam resistência/tolerância a begomovírus monopartidos do complexo do Tomato yellow leaf curl virus (TYLCV) e para alguns vírus do complexo de espécies de genoma bipartido presente no Brasil, incluindo o Tomato severe rugose virus (ToSRV). O presente trabalho teve como objetivo avaliar o efeito na expressão fenotípica da resistência em tomateiros com distintas dosagens/configurações alélicas do locus Ty-1 (homozigotas dominantes, heterozigotas e homozigotas recessivas) após inoculação com um isolado de ToSRV (Capítulo 2) e identificar em duas populações de mapeamento marcadores RAPD ( Random Amplified Polymorphic ) ( Sequence Characterized Amplified Region ) com ampla utilização em sistemas de seleção assistida de diferentes eventos de introgressão do locus Ty-1 (Capítulo 3). As notas de severidade atribuídas às plantas que continham o locus dominante Ty-1 em dupla dosagem (homozigotas resistentes) foram significativamente mais baixas do que as que continham apenas uma cópia do locus (heterozigotas). Por sua vez, plantas heterozigotas apresentaram notas mais baixas que as plantas duplo-recessivas (ty-1/ty-1). Os resultados indicam aos programas de melhoramento do tomateiro que híbridos com uma melhor expressão fenotípica da tolerância/resistência ao ToSRV devem, sempre que possível, apresentar o alelo dominante Ty-1 em homozigose. No Capítulo 3, seis primers RAPD foram selecionados gerando polimorfismos para a região contendo o locus Ty-1 exclusivamente para população #1; quatorze foram exclusivamente polimórficos na população #2 e nove detectaram polimorfismos nas duas populações. Um marcador SCAR codominante (heteroduplex) foi gerado a partir do marcador RAPD OPC-19. A análise de sequência e sua ancoragem no genoma do tomateiro confirmaram que esse marcador está localizado na mesma região do locus Ty-1 no cromossomo 6, recomendando o seu uso em sistemas de seleção assistida. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The tomato (Solanum lycopersicum L.) is one of the most important vegetable crops in Brazil and it is also the one that suffer the most with the attack of many pathogens, especially virus species from the genus Begomovirus (Geminiviridae family). The most promising control strategy has been the employment of cultivars with resistance/tolerance genes to this group of pathogens. The dominant locus Ty-1 (introgressed from the wild species S. chilense) has been one of the most important sources of resistance in tomato breeding programs throughout the world. Accessions and inbred lines carrying this locus display high levels of resistance to monopartite begomovirus species of the Tomato yellow leaf curl virus (TYLCV) complex and also against some viruses of the bipartite species complex from Brazil, including Tomato severe rugose virus (ToSRV). The objectives of the present work were to evaluate the effect on the phenotypic expression after inoculation with one ToSRV isolate in tomato plants carrying distinct dosages/allelic states of the locus Ty-1 (homozygous resistant, heterozygous, and homozygous recessive) (Chapter 2) and to identify in two mapping populations novel and robust RAPD ( Random Amplified Polymorphic DNA ) ( Sequence Characterized Amplified Region ) Ty-1 that would be suitable for employment in distinct assisted-selection programs (Chapter 3). The group of plants with double dominant locus dosage (homozygous resistant) had a disease grade significantly lower than that of heterozygous plants in both evaluations. Heterozygous plants had also superior performance when compared with plants displaying double recessive locus dosage (ty-1/ty-1). Our results indicate to breeding programs that F1 hybrids should have, whenever possible, both parental lines with the Ty-1 locus in homozygous condition in order to have the best phenotypic expression of tolerance/resistance against ToSRV isolates. In Chapter 3, six RAPD primers were selected due to the presence of polymorphic amplicons for the genomic region encompassing the locus Ty-1 exclusively for population #1; fourteen primers were able to detect polymorphic amplicons exclusively in population #2 and nine were able to detect polymorphic markers in both populations. One SCAR amplicon (derived from RAPD OPC-19) generated a marker with a peculiar heteroduplex and codominant pattern. The sequence analysis of the SCAR allowed us to anchor this marker in the physical map that corresponds iv to a region where the Ty-1 locus resides on tomato chromosome 6. Therefore, the use of this marker can be also recommended for employment in marker-assisted selection systems.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2009. / Submitted by Larissa Ferreira dos Angelos (ferreirangelos@gmail.com) on 2010-03-22T17:18:04Z No. of bitstreams: 1 2009_EricodeCamposDianese.pdf: 2707348 bytes, checksum: 3fae2a92c0a3bd0b2ba752a7514a8f5b (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-05-05T19:22:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_EricodeCamposDianese.pdf: 2707348 bytes, checksum: 3fae2a92c0a3bd0b2ba752a7514a8f5b (MD5) / Made available in DSpace on 2010-05-05T19:22:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_EricodeCamposDianese.pdf: 2707348 bytes, checksum: 3fae2a92c0a3bd0b2ba752a7514a8f5b (MD5) Previous issue date: 2009 / Diversas doenças de etiologia viral têm sido relatadas afetando a tomaticultura em todo mundo causando importantes perdas qualitativas e quantitativas. Dentre as principais doenças viróticas estão as causadas pelo gênero Tospovirus e pelo gênero Potyvirus. Os tospovírus (família Bunyaviridae) são responsáveis pela doença conhecida como vira-cabeça que causa severas perdas anuais. Espécies desse gênero possuem distribuição mundial e apresentam grande diversidade de espécies infectando uma vasta gama de hospedeiros. O principal fator de resistência empregado no melhoramento genético do tomateiro para resistência ampla a diferentes espécies de tospovírus é o gene Sw-5. Plantas com este gene apresentam reações de hipersensibilidade nas folhas inoculadas que restringem a infecção viral sistêmica. Porém, a quebra deste gene de resistência já foi reportada em diferentes partes do mundo. Além dos tospovírus, espécies do gênero Potyvirus representam uma constante ameaça à cultura do tomate. Uma nova espécie de Potyvirus, o Pepper yellow mosaic virus (PepYMV), foi identificada inicialmente em pimentão, mas também é capaz de afetar tomateiros, hospedeiro no qual pode causar perdas de até 100%. Trabalhos de buscas de fontes de resistência a PepYMV em tomate já foram iniciadas, mas o germoplasma explorado ainda representa um número reduzido de acessos. Esta tese apresenta a avaliação de coleções de germoplasma visando identificar novas fontes de resistência tanto a PepYMV quanto às espécies neotropicais de Tospovirus. Além disso, foi desenvolvido um marcador co-dominante para o gene Sw-5, capaz de identificar indivíduos resistentes através de uma simples PCR. Foi também realizada uma análise preliminar do componente de avirulência da interação Sw-5/Tomato spotted wilt virus (TSWV) através do uso de construções contendo os genes independentes de TSWV, isolados BR-01 (avirulento ao gene Sw-5) e o isolado GRAU (capaz de quebrar a resistência conferida por Sw-5), em uma plataforma baseada em Nicotiana benthamiana transgênica expressando o gene Sw-5. Em relação à identificação de novas fontes de resistência a potyvírus e tospovírus (Capítulos 2 e 3, respectivamente), acessos de S. habrochaites se mostraram como fontes promissoras de resistência a PepYMV bem como a Potato virus Y (PVY). Por outro lado, acessos de S. peruvianum confirmaram esta espécie como a principal fornecedora de fatores de resistência a tospovírus. Observou-se que um acesso de S. chilense, bem como uma seleção de um acesso de S. lycopersicum, apresentaram bons níveis de resistência/tolerância às espécies de tospovírus testadas. Ambas as análises foram comparadas com levantamentos previamente realizados por outros grupos. O marcador específico para Sw-5 (Capítulo 4) foi avaliado em uma ampla gama de acessos, apresentando um perfil único capaz de distinguir acessos resistentes e suscetíveis em todas as situações, comprovando sua eficiência como uma nova ferramenta para sistemas de seleção assistida e, mesmo para potencial isolamento de alelos ou análogos deste gene em tomate e outras solanáceas. A análise do componente de avirulência do TSWV (Capítulo 5) apontou que nenhum dos genes virais avaliados (Nsm, os precursores das glicoproteínas, N e Nss) parece estar envolvido, de maneira independente, com o processo de indução do mecanismo de reconhecimento pelo gene Sw-5. Nenhum dos genes testados induziu a reação típica de hipersensibilidade característica da infecção causada por TSWV em genótipos contendo esse gene de resistência. A estratégia usada nesse estudo também demonstrou que o modelo biológico representado por N. benthamiana transgênica, expressando uma cópia ativa do gene Sw-5, é adequada para o estudo de mecanismos envolvidos com a resistência a tospovírus, assim como para o estudo da superação dessa resistência por isolados virulentos. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Many diseases of viral etiology have been identified affecting tomato production worldwide, causing important qualitative and quantitative losses. Among the main viral diseases, there are the ones caused by the genus Tospovirus and the genus Potyvirus. The Tospovirus (family Bunyaviridae) are responsible for the disease known as vira-cabeça, causing severe annual losses, mainly in horticultural crops. Species of this genus have a worldwide distribution and a great number of species infecting a vast array of hosts. The main resistance factor employed in tomato breeding for broad spectrum resistance to different tospovirus species is the Sw-5 gene. Plants that harbor this gene express hypersensitivity reactions that restrict the viral systemic infection. However, the breaking of this resistance gene has already been reported in different parts of the world. Apart from tospoviruses, species of the genus Potyvirus represent a constant threat to tomato culture. A new species of this genus, Pepper yellow mosaic virus (PepYMV), was initially identified in pepper but it is also capable of infecting tomatoes, causing up to 100% losses. The search for resistance sources for PepYMV on tomato have already started, but the explored germplasm still represents a reduced number of accessions. This thesis shows the evaluation of germplasm collections seeking to identify new resistance sources to PepYMV and to the neotropical species of tospoviruses. Beyond that, a co-dominant marker for the Sw-5 gene was developed, capable of identifying resistant individuals through a simple PCR. A preliminary analysis of the avirulence component of the Sw-5/Tomato spotted wilt virus (TSWV) interaction was also done, using constructions containing independent TSWV genes, isolates BR-01 (avirulent for the Sw-5 gene) and GRAU (capable of breaking the Sw-5 gene resistance), using a platform based on transgenic Nicotiana benthamiana expressing the Sw-5 gene. In relation to the identification of the new resistance sources (Chapters 2 and 3, respectively), accessions of S. habrochaites showed to be promising sources of resistance to both PepYMV and Potato virus Y (PVY). On the other hand, accessions of S. peruvianum confirmed this species as the main source of resistance factors to tospoviruses. An accession of S. chilense and a selection of an accession of S. lycopersicum, showed good resistance/tolerance levels to the tospovirus species tested. Both analyses where compared to screenings that where previously done. The Sw-5 specific marker (Chapter 4) was evaluated with a broad array of accessions, showing a profile capable of identifying resistant and susceptible accessions in all situations. Therefore, this marker represents an efficient new tool for assisted selection systems and its future potential use for isolation or detection of alleles or analogous genes in tomato and other solanaceous species. The avirulence component analysis showed that none of the viral genes that where evaluated (Nsm, the glycoprotein precursors, N and Nss) seems to be related in an independent manner with the induction process of the Sw-5 gene recognition mechanism. None of the genes tested was able to induce typical hypersensitive reaction observed when tomato genotypes containing this resistance gene are challenged by TSWV. The strategy used in this study also demonstrated that the biological model represented by transgenic N. benthamiana expressing an active copy of the Sw-5 gene is suitable for analyzing the mechanisms involved in tospovirus resistance. In addition, this system can also be used to investigate Sw-5- resistance breaking isolates.

Dissertação (mestrado)-Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2010. / Submitted by Fernanda Weschenfelder (nandaweschenfelder@gmail.com) on 2010-11-08T18:47:38Z No. of bitstreams: 1 2010_EdivanioRodriguesdeAraujo.pdf: 980854 bytes, checksum: fe7d2ce245647e86d78739fbcf79b877 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-11-11T00:37:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_EdivanioRodriguesdeAraujo.pdf: 980854 bytes, checksum: fe7d2ce245647e86d78739fbcf79b877 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-11-11T00:37:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_EdivanioRodriguesdeAraujo.pdf: 980854 bytes, checksum: fe7d2ce245647e86d78739fbcf79b877 (MD5) / Dentre as doenças que acometem a tomaticultura nacional, a mancha bacteriana é uma das mais importantes, principalmente para o segmento de processamento industrial. A mancha bacteriana é causada por quatro diferentes espécies do gênero Xanthomonas, a saber, X. euvesicatoria, X. vesicatoria, X. perforans e X. gardneri. Os objetivos desta dissertação foram avaliar o efeito da temperatura sobre componentes da patogenicidade das espécies causadoras da mancha bacteriana; observar a competitividade entre as espécies X. perforans e X. gardneri in vitro e in planta e avaliar a competitividade entre isolados de X. perforans sensíveis e resistentes ao cobre. Para a primeira etapa, isolados representantes das quatro espécies foram inoculados em plantas de tomate de variedade suscetível Yuba (CNPH 851) e submetidos a diferentes temperaturas constantes para posterior quantificação de severidade e período de incubação. Realizaram-se testes para verificação de inibição de crescimento in vitro, o que pode estar relacionado à produção de bacteriocina. Inoculações em casa de vegetação de isolados de X. perforans e X. gardneri foram realizadas para quantificação da doença e observação de competitividade entre ambas. Da mesma maneira, isolados sensíveis e resistentes a cobre foram inoculados conjuntamente no intuito de verificar a ocorrência de competitividade entre estes. Pôde-se observar que tanto a severidade, como o período de incubação, foram influenciados diretamente pela temperatura. Xanthomonas perforans mostrou-se mais agressiva sob temperaturas mais elevadas, enquanto X. gardneri foi favorecida por temperaturas menores. Xanthomonas euvesicatoria foi menos agressiva para todas as temperaturas avaliadas, enquanto X. vesicatoria apresentou uma maior constância para estas temperaturas. As inoculações 2 individuais e conjuntas demonstraram vantagem competitiva de X. perforans para causar doença, bem como uma maior frequência de recuperação, em meio de cultura, de X. perforans em relação a X. gardneri, evidenciando essa vantagem competitiva da espécie. Foi verificada a inibição no crescimento de três isolados brasileiros de X. euvesicatoria por parte de um isolado nacional de X. perforans, provavelmente relacionado com a produção de bacteriocina. Já entre os isolados de X. perforans resistentes e sensíveis a cobre, pôde-se observar, de forma geral, uma maior severidade da doença para os isolados sensíveis, indicando que isolados resistentes podem ter redução de agressividade quando na ausência do seu produto de controle. Este é o primeiro relato de isolados brasileiros de Xanthomonas associados à mancha bacteriana do tomateiro com ação específica de inibição a outros isolados de espécies correlatas, bem como o primeiro estudo sobre o efeito da temperatura sobre este patossistema no Brasil, considerando as quatro diferentes espécies que causam a doença e também a primeira constatação de perda de competitividade de X. perforans associada à aquisição de resistência ao cobre. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Bacterial spot of tomato stands out as one of the main diseases of this crop, especially for the segment of industrial processing. The disease is caused by four different species of the genus Xanthomonas, namely, X. euvesicatoria, X. vesicatoria, X. perforans and X. gardneri. The objectives of this dissertation were to evaluate the effect of temperature on pathogenic components of bacterial spot caused by each species separately, to assess the competitiveness between X. perforans and X. gardneri in vitro and in planta and to compare the fitness of strains of X. perforans sensitive and resistant to copper. In the first assay, isolates representative of all four species were inoculated on tomato plants of susceptible variety Yuba (CNPH 851) and subjected to different constant temperatures for subsequent quantification of disease severity and period of incubation. In vitro competition tests were carried out in order to check for growth inhibition, which may be related to the production of bacteriocin. A greenhouse test, with isolates of X. perforans and X. gardneri was performed to quantify the disease caused by each species, and to compare the competitiveness of the two species, when inoculated simultaneously. Similarly, X. perforans isolates sensitive and resistant to copper were inoculated either isolated or in various combinations in order to verify possible loss of fitness associated with naturally-acquired copper resistance. Both disease severity, as well as the incubation period, were directly influenced by temperature: X. perforans was more aggressive under high temperatures, while X. gardneri showed preference for lower temperatures. X. euvesicatoria was the least aggressive in all temperatures tested, whereas X. vesicatoria aggressiveness was more stable at all temperature tested. The individual and combined 4 inoculations demonstrated fitness advantage of X. perforans over X. gardneri, and also higher frequency of recovery in culture medium of X. perforans, indicating a fitness edge for that species. One single Brazilian isolate of X. perforans was found to inhibit the growth of three Brazilian isolates of X. euvesicatoria, probably related to the production of bacteriocin. Among X. perforans isolates resistant and sensitive to copper, greater disease severity was associated with sensitivity to copper, indicating that resistant isolates may have reduced aggressiveness when in the absence of Cu. This is the first account of Brazilian strains of Xanthomonas associated with bacterial spot of tomato with the specific action of inhibiting other strains of related species, the first study on the effect of temperature on this disease in Brazil, considering that four different species cause disease. This was the first report that reduced fitness of X. perforans associated with the acquisition of copper resistance.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2010. / Submitted by Luiza Moreira Camargo (luizaamc@gmail.com) on 2011-07-04T18:12:40Z No. of bitstreams: 1 2010_RobertadaCruzPereira ok.pdf: 1709311 bytes, checksum: c1bb464ecec358ca605fe0db691a07bb (MD5) / Approved for entry into archive by Elna Araújo(elna@bce.unb.br) on 2011-07-08T19:41:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_RobertadaCruzPereira ok.pdf: 1709311 bytes, checksum: c1bb464ecec358ca605fe0db691a07bb (MD5) / Made available in DSpace on 2011-07-08T19:41:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_RobertadaCruzPereira ok.pdf: 1709311 bytes, checksum: c1bb464ecec358ca605fe0db691a07bb (MD5) / A mancha bacteriana do tomateiro é causada por, pelo menos, quatro espécies de Xanthomonas (Xanthomonas euvesicatoria, X. vesicatoria, X. perforans e X. gardneri), sendo uma das doenças mais importantes tanto para o tomate de mesa, quanto para o de indústria no Brasil. Oitenta e um isolados oriundos de campos comerciais de tomate para mesa, coletados em 23 localidades nas Regiões Sul, Sudeste, Centro-Oeste e Nordeste do Brasil, entre os anos de 2005 a 2009, foram identificados para determinar a ocorrência dessas espécies. Esses isolados foram caracterizados por rep-PCR (BOX e REP), PCR com iniciadores específicos e testes de patogenicidade em genótipos suscetíveis de tomateiro e pimentão. Alta frequência de X. perforans (49,4%) e X. gardneri (40,7%) foi observada. Somente dois isolados corresponderam a X. euvesicatoria e seis a X. vesicatoria. Apenas na Região Sudeste do país foi detectada a presença das quatro espécies. Todos os isolados causaram sintomas em tomate, e somente isolados de X. euvesicatoria e 30 isolados de X. gardneri causaram sintomas em pimentão. Para determinação das raças, avaliou-se a presença/ausência dos genes avrRxv (presentes na raça T1) e avrXv3 e reação no genótipo de tomateiro CNPH 1500, portador do gene Xv3. Todos os isolados de X. perforans induziram reação de hipersensibilidade neste genótipo, indicando que pertencem à raça T3, o que foi, na maioria dos casos, confirmado por avrXv3-PCR. Isolados de X. vesicatoria e X. gardneri foram classificados como raça T2, pois nenhum produto foi detectado por PCR (genes avrRxv e avrXv3). Dentre os 81 isolados, portanto, foram identificadas as raças T1, T2 e T3, não sendo encontradas as raças T4 e T5. Avaliou-se também a sensibilidade in vitro de todos os isolados ao cobre e estreptomicina. Utilizou-se sulfato de cobre nas concentrações 50, 100 e 200 μg/mL e sulfato de estreptomicina nas concentrações 25, 50 e 100 μg/mL, considerando-se resistentes os isolados que apresentaram crescimento confluente em três repetições. Nenhum isolado foi resistente ao cobre na concentração de 200 μg/mL. Entretanto, 97,53% dos isolados foram resistentes a 100 μg/mL e 98,77% foram resistentes à concentração de 50 μg/mL. A frequência de isolados resistentes à estreptomicina foi 8,64% (100 μg/mL), 76,54% (50 μg/mL) e 83,95% (25 μg/mL). Isolados representantes das quatro espécies apresentaram resistência a ambos, cobre e estreptomicina. Este é o primeiro levantamento e caracterização de espécies de Xanthomonas em tomate de mesa no Brasil. ___________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Tomato bacterial spot is caused by at least four Xanthomonas species (Xanthomonas euvesicatoria, X. vesicatoria, X. perforans and X. gardneri), and is one of the most important diseases of both processing and fresh market tomato crops in Brazil. Eighty one isolates, collected from 23 commercial tomato fields, located in southern, southeastern, central-west and northeastern regions of the country, from 2005 to 2009, were identified to determine the occurrence of these species. These isolates were characterized through rep-PCR-based fingerprint analysis (BOX and REP-PCR), PCR with species-specific primers and pathogenicity tests on tomato and pepper susceptible varieties. Highest frequencies were observed for X. perforans (49.4%) and X. gardneri (40.7%). Only two isolates were X. euvesicatoria and six were X. vesicatoria. The occurrence of all four species was detected only in the southeast region of Brazil. All isolates were pathogenic on tomato. On pepper, only those of X. euvesicatoria and 30 isolates of X. gardneri caused bacterial spot symptoms. Isolates were also classified in races by avrRxv (present in race T1) and avrXv3-PCR amplification and by hypersensitive reaction on tomato genotype carrying the Xv3 gene. All X. perforans isolates induced hypersensitive response on this genotype, indicating that they belong to race T3, and in most cases confirmed by avrXv3-PCR. Xanthomonas vesicatoria and X. gardneri isolates were classified as race T2 since no PCR products were detected for avrRxv or avrXv3. Among the 81 isolates, races T1, T2 and T3 were identified, while races T4 and T5 of X. perforans were not detected. Sensitivity of all isolates to copper and streptomycin was evaluated by in vitro assays, with 50, 100 and 200 μg/mL of copper sulfate and 25, 50 and 100 μg/mL of streptomycin sulfate, with three replicates. Resistance was detected when bacterial growth was observed in all three replicates. None of the isolates was resistant to copper at 200 μg/mL. However, 97.53% were resistant to copper at 100 μg/mL and 98.77% were resistant to copper at 50 μg/mL. The frequencies of isolates resistant to streptomycin were 8.64% (100 μg/mL), 76.54% (50 μg/mL) and 83.95% (25 μg/mL). Isolates representing all four Xanthomonas species showed resistance, both to copper and streptomycin. This is the first survey and characterization of xanthomonads on fresh market tomatoes in Brazil.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Departamento de Fitopatologia do Instituto de Ciências Biológicas da Universidade de Brasília, Brasília, 2013. / Texto parcialmente liberado pelo autor. Conteúdo: foi restrito o capítulo 3. / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2013-08-09T15:31:10Z No. of bitstreams: 1 2013_MarianaResendeMachado_Parcial.pdf: 2324547 bytes, checksum: 8d0c6777ef4824c6ee8daf0bcf70851f (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-08-16T14:28:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_MarianaResendeMachado_Parcial.pdf: 2324547 bytes, checksum: 8d0c6777ef4824c6ee8daf0bcf70851f (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-16T14:28:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_MarianaResendeMachado_Parcial.pdf: 2324547 bytes, checksum: 8d0c6777ef4824c6ee8daf0bcf70851f (MD5) / A família Geminiviridae é caracterizada por espécies virais com partículas de morfologia geminada e genoma composto por DNA circular de fita simples, sendo o gênero Begomovirus o mais importante em termos de número de espécies e impacto econômico. Os begomovírus do Novo Mundo, em sua maioria, possuem dois componentes genômicos (DNA-A e DNA-B), são transmitidos por Bemisia tabaci (mosca-branca) e infectam plantas dicotiledôneas. A forma mais eficiente de controle tem sido o emprego de cultivares resistentes ao vírus e/ou ao vetor. No entanto, os dados referentes à eficiência e ao espectro da resposta das diferentes fontes de resistência para as espécies que compõe o complexo de begomovírus bipartidos do Brasil ainda são escassos. Os principais fatores de resistência empregados têm sido os loci Ty-1 e Ty-3 derivados de S. chilense. No entanto, a linhagem ‘TX-468-RG’ (portadora do gene recessivo tcm-1) derivada de ‘Tyking’ tem se destacado entre as diversas fontes por apresentar elevados níveis de resistência contra uma ampla gama de espécies de begomovírus de genoma bipartido do Brasil e monopartido da Europa. A estratégia de piramidização de genes de resistência aos begomovírus, para ser eficiente, requer o uso de marcadores moleculares em sistemas de melhoramento assistido para monitorar a incorporação de diferentes loci (dominantes e recessivos), especialmente por eles conferem idêntico fenótipo. No entanto, até o presente momento, não foram desenvolvidos trabalhos visando identificar a localização cromossômica ou desenvolver marcadores moleculares para monitorar a incorporação do locus tcm-1 em programas de seleção assistida. No Capítulo 2, a linhagem ‘TX-468-RG’(controle resistente) e cinco novas fontes/acessos de S. lycopersicum que se mostraram como promissoras fontes em ensaios conduzidos em telado e campo (‘LAM 100’, ‘LAM 156’, ‘LAI 132’, ‘H-24’ e ‘Ty-198’) foram inoculadas via bombardeamento de micropartículas com clones infectivos de quatro espécies do complexo de begomovírus bipartidos do Brasil: Tomato severe rugose virus (ToSRV); Tomato rugose mosaic virus (ToRMV); Tomato yellow vein streak virus (ToYVSV) e Tomato chlorotic mottle virus (ToCMoV). A cultivar ‘Viradoro’ foi utilizada como controle suscetível. A acumulação do DNA viral nos diferentes acessos foi monitorada via Southern Blot. ‘Viradoro’ apresentou sintomas severos e alto acúmulo de DNA para todos os vírus. O acesso ‘H-24’ (fonte do locus Ty-2 introgredido de S. habrochaites) se mostrou suscetível ao ToSRV e ToRMV. A linhagem ‘LAI 132’ mostrou resistência efetiva apenas contra ToCMoV. ‘TX-468-RG’ e os acessos ‘LAM 100’, ‘LAM 156’ e ‘Ty-198’ foram resistentes a todas as espécies virais, sendo, portanto, recomendados como fontes preferenciais em programas de melhoramento, para incorporar fatores de resistência de mais amplo espectro. Uma análise foi conduzida com um painel de marcadores moleculares ligados aos principais loci de resistência a begomovírus caracterizados em tomateiro (Ty-1, Ty-2, Ty-3, Ty-4 e Ty-5/ty-5). Os resultados indicaram que os acessos ‘LAI 132’, ‘LAM 100’, ‘LAM 156’ e ‘Ty-198’ representam fontes de novos genes e/ou alelos de resistência. No Capítulo 3 o objetivo foi identificar e ancorar marcadores moleculares associados com o gene/locus tcm-1 no genoma-referência do tomateiro, permitindo a localização física desse fator de resistência. Os resultados da análise de uma população F2 segregando para reação a um isolado do ToSRV e da caracterização molecular de um painel de marcadores do tipo SCAR e CAPS associados com a resistência indicaram que o gene tcm-1 está localizado no topo do cromossomo 6. O locus tcm-1 se encontra em ligação estreita com um grupamento (‘cluster’) de genes de resistência que engloba a região genômica contendo os genes Ty-1 e Mi. Recentemente, um locus recessivo no cromossomo 4 controlando resistência a isolados da espécie de genoma monopartido Tomato yellow leaf curl virus foi reportado na Flórida. Essa região genômica contem o gene dominante Ty-5 e uma provável variante alélica de natureza recessiva (também derivada do híbrido ‘Tyking’) nomeada como ty-5. Embora polimórficos na população de mapeamento utilizada no presente trabalho, os marcadores moleculares para o locus Ty-5/ty-5 não se mostraram associados com a resposta de resistência ao ToSRV. Desta forma, nossos resultados indicam que tcm-1 e Ty-5/ty-5 são fatores genéticos distintos e que o híbrido ‘Tyking’ (fonte original do locus tcm-1) pode representar uma pirâmide de diferentes genes recessivos do tipo espécie-específico que, quando em associação, se mostram efetivos contra uma ampla gama de espécies de Begomovirus de genoma monopartido e bipartido de diferentes continentes. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The Geminiviridae family is composed by virus species with geminated particles and circular, single-stranded DNA genome. The genus Begomovirus is the most important within this family in terms of number of species as well as in economic impact. The majority of begomoviruses from the New World has two genomic components (DNA-A and DNA-B), and they are transmitted to dicotyledonous plants by the whitefly Bemisia tabaci. The most efficient disease control strategy is the employment of cultivars with genetic resistance to either the virus or its vector. However, the amount of information available about the phenotypic expression, as well as the spectrum of efficiency of the distinct Solanum (section Lycopersicon) resistance sources to Brazilian begomovirus is still limited. So far, the Ty-1 and Ty-3 loci (introgressed from accessions of the wild species S. chilense) are the most employed resistance factors. The inbred line ‘TX-468-RG’ derived from the hybrid S. lycopersicum ‘Tyking’ is one of the most important sources of wide-spectrum resistance, being effective against a wide range of begomovirus isolates from both bipartite species from Brazil and monopartite species from Europe. To increase the efficiency of the pyramidization process, the establishment of a marker assisted selection system to all known (dominant and recessive) begomovirus resistance loci is necessary. However, molecular markers are still not available for the tcm-1 locus and even its genomic location is yet unknown. In Chapter 2, ‘TX-468-RG’ (resistant control due to presence of the recessive locus tcm-1) and five new accessions identified as promising sources of resistance in assays conducted under either greenhouse orfield conditions (named as ‘LAM 100’, ‘LAM 156’, ‘LAI 132’, ‘H-24’ and ‘Ty-198’), were evaluated in biolistic assays with infective clones of four begomovirus of the Brazilian complex virus: Tomato severe rugose virus (ToSRV); Tomato rugose mosaic virus (ToRMV); Tomato yellow vein streak virus (ToYVSV) and Tomato chlorotic mottle virus (ToCMoV). The tomato cultivar ‘Viradoro’ was employed as susceptible control. Virus accumulation was monitored in all accessions via Southern Blot assays using a universal probe. ‘Viradoro’ displayed severe symptoms and high viral DNA accumulation in all assays. The line ‘H-24’ (source of Ty-2 locus introgressed from S. habrochaites) displayed a susceptible reaction to ToSRV and ToRMV. The accession ‘LAI 132’ displayed a peculiar species-specific resistant reaction only to ToCMoV. The ‘TX-468-RG’ as well as the accessions ‘LAM 100’, ‘LAM 156’ and ‘Ty-198’ were resistant to all virus species, being, therefore, recommended for preferential use in breeding programs aiming to develop lines with wider spectrum of resistance. Analyses conducted with a panel of molecular markers linked to all currently characterized begomovirus resistance loci in tomato (Ty-1, Ty-2, Ty-3, Ty-4 e Ty-5/ty-5) indicated that ‘LAI 132’, ‘LAM 100’, ‘LAM 156’ and ‘Ty-198’ are sources of either new genes or alleles for begomovirus resistance. In Chapter 3, molecular markers were developed in association with tcm-1 and were anchored in the reference tomato genome, aiming to develop efficient marker-assisted selection systems for this locus. Co-segregation analyses of an F2 population inoculated with an ToSRV isolate and the molecular characterization of a panel of SCAR and CAPS markers linked to the resistant reaction indicated that tcm-1 is located on the top of the chromosome 6 in linkage with a the well-characterized cluster of resistance genes, encompassing the Ty-1 and Mi loci. More recently, a recessive resistance to Florida isolates of the monopartite Tomato yellow leaf curl virus was also was characterized in inbred lines derived from the hybrid ‘Tyking’. This gene and its putative allelic variant (located in chromosome 4) have been tentatively named as Ty-5/ty-5. Even though polymorphic in our mapping population, the molecular marker linked with the Ty-5/ty-5 genomic region segregated independently from the resistant reaction to ToSRV. Therefore, our results indicated that tcm-1 and Ty-5/ty-5 are distinct resistance factors, and that ‘Tyking’ (the original source of the locus tcm-1) might represent a pyramid of distinct Begomovirus species-specific recessive genes, that in association might confer effective reaction observed against a range of monopartite and bipartite species in distinct continents.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2010. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2011-04-26T15:32:22Z No. of bitstreams: 1 2010_AdrianaMagaliFreitasARezende.pdf: 928655 bytes, checksum: 0debcd6b5dcfb890f32d2dadf1072dca (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2011-04-29T00:16:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_AdrianaMagaliFreitasARezende.pdf: 928655 bytes, checksum: 0debcd6b5dcfb890f32d2dadf1072dca (MD5) / Made available in DSpace on 2011-04-29T00:16:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_AdrianaMagaliFreitasARezende.pdf: 928655 bytes, checksum: 0debcd6b5dcfb890f32d2dadf1072dca (MD5) / O tomateiro comum (Solanum lycopersicum L.) é uma olerícola de grande importância econômica e social, se destacando no Brasil, pelas extensas áreas agrícolas cultivadas. O Brasil é o sexto maior produtor de tomate no mundo. No entanto, a murcha bacteriana, causada pela bactéria Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi está entre as doenças de maior importância e de difícil controle, não existindo ainda medidas adequadas que possam ser recomendadas. Com objetivo de determinar um controle biológico eficaz, comparado às outras bactérias antagonistas e com comportamentos semelhantes contra muitos fitopatógenos, foi escolhido o estudo com bactérias extremófilas facultativas para verificar seu efeito na promoção do crescimento das plantas de tomate e ao mesmo tempo estudar a supressão da murcha bacteriana. Foram coletadas diferentes amostras de solos, no município de Brazlândia, em Brasília, DF, Brasil. Obteve-se um total de trinta e oito isolados os quais foram submetidos aos testes de temperaturas (45, 55, 65 e 75 ºC), pH (3, 4, 5, 9, 10 e 11) e salinidade (5, 10 e 15 % de NaCl). Onze isolados foram selecionados para caracterização bioquímica e identificação baseada nas sequências 16S DNAr. Verificou-se que em todas as amostras de solos determinaram-se quatro grupos de bactérias, sendo que em cada um observou a presença de isolados crescendo nas condições mais extremas. Dos onze isolados selecionados, todas as bactérias foram Gram negativa, podendo separá-los em três grupos distintos, com base nas reações positivas para as características bioquímicas: o primeiro grupo formado, com base no teste oxidação/fermentação da glicose, obteve-se sete isolados pertencendo à família Enterobacteriaceae; o segundo grupo com base no crescimento em meio King-B, obteve-se dois isolados de Pseudomonas sp.; e o terceiro grupo não relacionados taxonomicamente, com dois isolados, Giesbergeria sp. e Chryseobacterium sp. Estes onze isolados selecionados e identificados foram avaliados, em casa de vegetação, no estudo da promoção do crescimento das plantas de tomate. Foram montados três experimentos: (1) com aplicação individual, (2) com combinação de dois e (3) com combinação de três e com todos isolados simultaneamente, com dois sistemas orgânicos, composto (CO) e bokashi (BK). A aplicação individual dos isolados mostrou ser mais eficiente na promoção do crescimento das plantas, o isolado UnB 1327, no sistema CO apresentou maiores incrementos para altura, peso matéria fresca e seca de 233,9%, 55,9% e 24,2%, respectivamente maiores que a testemunha (100%). No estudo da supressão de R. solanacearum, no experimento 1, os isolados UnB 1321 no sistema BK e UnB 1326 e UnB 1322 no sistema CO, mostraram ser eficientes na supressão da bacteriose, destacando-se com 100% de controle. O experimento 2, mostrou ser mais eficiente na supressão da murcha bacteriana, independendo do tipo de sistemas avaliados. No experimento 3, no sistema BK, a testemunha diferenciou significativamente de todos os tratamentos, inclusive da combinação UnB 1329 + UnB 1322 + UnB 1330 apresentando 87% e 27%, respectivamente, de plantas mortas. No sistema CO, houve alta percentagem da doença em todos os tratamentos, no entanto nenhum tratamento diferenciou da testemuha que apresentou 60% de plantas mortas. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The common tomato (Solanum lycopersicum L.) is a crop of great economic importance and social, standing out in Brazil due to largest agricultural areas cultivated. Brazil is the sixth largest tomato producer in the world. However, bacterial wilt caused by the bacterium Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi is one of the most important and difficult to control disease, with no further appropriate measures as may be recommended. This work aimed to establish an effective biological control, compared to other antagonists bacteria and with similar behavior for many plant pathogens, was chosen the study with facultative extremophiles bacteria for its effect on promoting growth of tomato plants and the suppression of bacterial wilt. To this end, several soil samples were collected in the municipality of Brazlândia, near Brasília, Federal District, Brazil. A total of 38 isolates were submitted to temperature tests (45, 55, 65 and 75 ºC), pH tests (3, 4, 5, 9, 10 and 11) and salinity tests (5, 10 and 15 % of NaCl). Eleven isolates were selected for biochemical characterization and identification based on the 16S DNAr sequences. It was confirmed that in all the soil samples four groups of bacteria were categorized, and in each one the presence of isolates growing in highly extreme conditions was observed. Of the 11 selected isolates, all the bacteria were Gram-negative, and these could be separated into three distinct groups, based on their positive reactions to biochemical characteristics. From the first group, based on the glucose oxidation/fermentation test, we obtained seven isolates belonging to the family Enterobacteriaceae; from the second group, based on growth in King-B medium, we obtained two isolates of Pseudomonas sp.; the third, taxonomically unrelated group, showed two isolates, Giesbergeria sp. and Chryseobacterium sp. These eleven isolates identified were selected and evaluated in a greenhouse in the study of growth promotion of tomato plants. Three experiments were carried out: (1) with individual application, (2) with a combination of two and (3) with a combination of three and all isolates simultaneously, with both systems, compound (OC) and bokashi (BK). Applying individual isolate was more efficient in promoting plant growth, the isolate UnB 1327, on conventional treatment showed more increase for height, fresh and dry weight of 233,9%, 55,9% and 24,2% respectively higher than the control 2 (100%). In the study of suppression of R. solanacearum, in experiment 1, isolates UnB 1321 in the BK system and UnB 1326 and UnB 1322 in the CO system were seen to be efficient in the suppression of bacteriosis, at 100% difference from the control. Experiment 2 was efficient in suppressing bacterial wilt, independently of the type of system being evaluated. In experiment 3, in the BK system, the control was significantly different from all the treatments, including from the UnB 1329 + UnB 1322 + UnB 1330 combination, presenting 87% and 27% dead plants, respectively. In the CO system, there was a high percentage of the disease in all treatments, but no treatment differed from the control, which presented 60% dead plants.

O cádmio (Cd) é considerado um metal extremamente tóxico à maioria dos organismos. As plantas constituem a principal forma de entrada deste metal na cadeia alimentar. O tomate, uma espécie amplamente utilizada para consumo humano, foi recentemente identificado como hiperacumulador de Cd. Diante disso, o presente trabalho objetivou quantificar o teor de Cd nas folhas e frutos de seis cultivares de tomate, bem como caracterizar os genes possivelmente envolvidos na tolerância e na hiperacumulação de Cd nesta espécie. Para tanto, as cultivares de tomate foram cultivadas na presença da dose de Cd de 90 mg Kg-1 ou na ausência deste metal. Simultaneamente, foi procedida uma busca de genes ortólogos aos HMAs (HMA1 – HMA4) de Arabidopsis thaliana, os quais formam um grupo de transportadores de metais, incluindo o Cd. Através desta busca, foi identificado em tomate um ortólogo ao HMA1 de A. thaliana. A expressão do HMA1 e também do LeNRAMP3, LeFER, LeIRT1 e LeNRAMP1, os quais são genes envolvidos no transporte de metais em tomate, foi comparada entre as plantas cultivadas com e sem Cd. Na maioria das cultivares de tomate, todos os genes avaliados foram responsivos ao Cd, sendo verificado um aumento nas expressões em resposta a presença do metal no substrato. Todas as cultivares de tomate utilizadas foram caracterizadas como hiperacumuladoras de Cd e foram capazes de acumular o metal nos frutos. No intuito de caracterizar o papel do HMA1 durante o processo de hiperacumulação de Cd em tomate, este gene foi empregado nas etapas que compõem o silenciamento gênico induzido por vírus (VIGS). O silenciamento do HMA1 não teve efeito na acumulação de Cd na parte aérea de tomate. Por outro lado, o silenciamento deste gene resultou na redução do peso seco das raízes e no aumento da intensidade dos sintomas de clorose nas plantas cultivadas com Cd a 0,7 mM. Em conjunto, os resultados indicam que o tomate representa um organismo modelo atrativo para a elucidação dos mecanismos envolvidos na tolerância e na hiperacumulação de Cd. / Cadmium (Cd) is considered an extremely toxic metal to most organisms. Plants are the main pathways for Cd entry into the food chain. Tomato, a species widely used for human consumption, was recently identified as a Cd hyperaccumulator. Therefore, this study aimed to quantify Cd content in leaves and fruits of six tomato cultivars, as well as characterize the genes possibly involved in Cd tolerance and hyperaccumulation in this species. To this end, the tomato cultivars were grown in the presence of Cd at 90 mg kg-1 or in the absence of the metal. Simultaneously, a search for orthologous genes to HMAs (HMA1 - HMA4) from Arabidopsis thaliana was performed, these genes are a group of metal transporters, including Cd. By this search, was identified an ortholog of HMA1 from A. thaliana in tomato. The expression of HMA1 and also of the genes LeNRAMP3, LeFER, LeIRT1 LeNRAMP1, which are involved in transport of metals in tomato, was compared between plants grown with and without Cd. In most tomato cultivars, all genes were responsive to Cd, and it was verified an increase in expression in response to the metal presence. All the tomato cultivars used were characterized as Cd hyperaccumulators and were able to accumulate the metal in the fruits. In order to characterize the role of the HMA1 during the process of Cd hyperaccumulation in tomato, this gene was used in the steps that comprise the virus induced gene silencing (VIGS). The silencing of HMA1 had no effect on Cd accumulation in tomato shoot. On the other hand, this gene silencing resulted in a reduction of the roots dry weight and in an increased severity of the symptoms of chlorosis in plants grown with 0.7 mM of Cd. Taken together, these results indicate that tomato represents an attractive model organism for elucidation of the mechanisms involved in Cd tolerance and hyperaccumulation.

Made available in DSpace on 2018-08-24T12:05:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_11827_Dissertação_Wilker.pdf: 947833 bytes, checksum: 7493679906fbdfd0a73a61ba54d6007e (MD5) Previous issue date: 2018-02-23 / O tomate é a hortaliça de maior consumo no mundo, sendo uma cultura de importância econômica e social. Porém, em seu cultivo, é propício a incidência de diversas doenças, dentre elas pode-se destacar a murcha de Fusarium, causada pelo Fusarium oxysporum f.sp. lycopersici. Sendo assim, objetivou-se com este estudo avaliar a atividade in vitro dos óleos essenciais (OEs) de Thymus vulgaris e Cinnamomun zeylanicum e seus componentes majoritários. A caracterização química dos OEs foi realizada por CG/DIC e CG/EM, tendo identificado o eugenol (77,95%) como componente majoritário do OE canela, o carvacrol (23,93%) e o timol (20,23%) do OE de tomilho. No ensaio foram calculados os valores de CE50 e CE100 do crescimento micelial de cada tratamento, sendo: OE de canela (171,79 e 575,18 ppm); OE de tomilho (106,29 e 341,73 ppm); eugenol (187,46 e 374,93 ppm); timol (88,67 e 193,02 ppm) e carvacrol (52,06 e 170,92 ppm). E, para esporulação, foram calculados os valores de: OE de canela (262,20 e 342,72 ppm); OE de tomilho (67,47 e 255,42 ppm); eugenol (80,94 e 359,55 ppm); timol (97,0 e 194,02 ppm) e carvacrol (44,66 e 113,82 ppm). Com isso, os óleos essenciais e seus componentes majoritários podem ser uma alternativa para o controle do F. oxysporum f.sp. lycopersici.

Orientador: Yoko Bomura Rosato / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-21T10:08:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tahara_SandraToshico_M.pdf: 4098148 bytes, checksum: 05c9dc310c3ac4e06ee0cee4ae7e7adb (MD5) Previous issue date: 1996 / Mestrado

Orientador : Theo Guenter Kieckbusch / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-14T01:41:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jardim_DeniseCalilPereira_M.pdf: 3206923 bytes, checksum: 328cfd7200d2ecb5bfd8ddbf259ffc7c (MD5) Previous issue date: 1991 / Resumo: A atividade de água e o pH de concentrato de tomate (29ºBriX) foram alterados para avaliar A inibição ao crescimento de microrganismos selecionados de grupos deteriorantes de produtos de tomate, aplicando-se a técnica dos métodos combinados. Amostras de concentrado de tomate foram inoculadas com 105 UFC/g de fungos, leveduras e bactérias lácticas. O primeiro ensaio experimental foi preparado combinando ácido acético (0,1 a 3,0%) com cloreto de sódio (2,0 a 10,0%), benzoato de sódio e sorbato de potássio (ambos de 0 a 0,15%). As amostras foram mantidas à temperatura ambiente, não hermeticamente fechadas, em recipientes de vidro, não sofrendo deterioração durante um ano. Baseado nesses resultados o segundo experimento foi delineado com apenas dois ingredientes: ácido acético (0,1 a 2,5%) e cloreto de sódio (2,0 a 8,0%). Nove amostras diferentes foram preparadas e mantidas sob as mesmas condições do primeiro experimento, das quais 4 não deterioram após um ano de armazenamento. Os resultados indicam que há um grande potencial de uso desta técnica de preservação de concentrado de tomate, armazenado em tanques à granel. De acordo com estes resultados é proposto um modelo simples para o cálculo de tempo de vida-de-prateleira em função do conteúdo de NaCl e ácido acético do concentrado / Abstract: Water activity and ph of tomato concentrate (29ºBrix) were altered to evaluate their inhibitory effects on the growth of selected groups of microorganisms know to be spoilage agents of tomato products. The hurdle technology was applied. Samples were inoculated with 105 CFU/g of molds, yeasts and lactic acid bacteria. The first batch of tests were prepared with acetic acid (0.1 to 3.0%) combined with sodium chloride (2.0 to 10.0%), sodium benzoate and potassium sorbate (both up to 0.15%). The samples kept at room temperature in unhermetically sealed jars for one year did not deteriorate. Based on these results a second sets of experiments was designed using only two ingredients: acetic acid (0.1 to 2.5%) and sodium chloride (2.0 to 8.0%). This batch was prepared under nine different sets of additive combinations four of which did not produce deterioration after one year of storage, under similar conditions as the ones used for the first batch. The results indicate a good potential for the use of hurdle technology to preserve semi-processed tomato concentrate in bulk consequently a simple model is suggested for the prediction of the tomato concentrate shelf-life as function of NaCl and acetic acid content / Mestrado / Mestre em Engenharia de Alimentos