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Aprimoramento de método com náuplios de Tisbe biminiensis (Copepoda: Hartacticoida) e sua utilização no estudo de Avaliação e Identificação da Toxicidade das águas do complexo estuarino de SuapeLAVORANTE, Beatriz Regina Brito de Oliveira 29 August 2014 (has links)
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Previous issue date: 2014-08-29 / O Complexo Industrial Portuário-SUAPE, localizado no complexo estuarino de Suape
(Pernambuco, Brasil), conta com grandes empresas das mais diversas atividades produtivas. A região
possui grande importância ecológica e econômica e estudos relatam a ocorrência de modificações
fisiográficas, hidrológicas e ecológicas desde a implantação de SUAPE. Segundo estudos
ecotoxicológicos realizados, a área apresenta contaminação moderada e variável. Contudo, ainda não
foi possível indicar quais substâncias poderiam estar relacionadas com a toxicidade das amostras
ambientais. Neste sentido, o teste de Avaliação e Identificação da Toxicidade – AIT surge como uma
importante ferramenta, pois permite a identificação de contaminantes potencialmente causadores da
toxicidade. O emprego de um ensaio ecotoxicológico rápido com um organismo-teste sensível antes e
após as manipulações de AIT é necessário para este tipo de análise. Os náuplios de copépodos, dentre
estes o da espécie Tisbe biminiensis, têm sido indicados para avaliação de amostras de água marinha
devido a maior sensibilidade dos estágios larvais, porém o teste normalmente é realizado em
microplacas o que o torna bastante laborioso. Este trabalho teve como objetivos aprimorar um
protocolo para realização de bioensaios com náuplios de T. biminiensis e avaliar sua sensibilidade
usando uma substância de referência, no caso o sulfato de zinco. Posteriormente, o teste foi empregado
na avaliação da toxicidade de amostras de água superficial coletadas em diferentes pontos de Suape
entre os anos de 2011 e 2013. Visando aumentar a sensibilidade do método, além dos parâmetros de
mortalidade, desenvolvimento e inibição, também foram avaliados tamanho e estágio de
desenvolvimento dos copepoditos. Para AIT foram estudadas amostras de água superficial coletadas
em Abril e Setembro de 2013, sendo realizadas análises químicas de metais, amônia, hidrocarbonetos
e agrotóxicos neste último mês. O tempo de duração do teste foi definido em 72 horas. Os testes de
alimentação utilizando as microalgas Chaetoceros gracilis e Thalassiosira fluviatilis com e sem adição
de ração para peixe demonstraram o pior desempenho de T. fluviatilis sem adição de ração como
alimento. Foi verificado que o desenvolvimento nas concentrações de C. gracilis superiores a 2,5 x 105
células mL-1
foram estatisticamente maiores do que controle (água do mar sem adição de alimento)
quando na temperatura de 28°C após 72 h. Entretanto a 25°C após 72 horas, apenas a partir da
concentração de 5,5 x 105
células mL-1
de C. gracilis, o desenvolvimento dos náuplios para
copepoditos foi superior ao controle, indicando que a temperatura de 28°C promove maior
desenvolvimento. Logo, foram definidas as seguintes condições para o teste: concentração de C.
gracilis de 2,5 x 105
células mL-1
, temperatura de 28°C e um tempo de 72 h. Após os sete testes de
sensibilidade foram estimadas as CE50/72h, CL50/72h e a CENO em 3,25 ± 0.59; 3,46 ± 0.72 e 2,0 mg L-
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para o ZnSO4.7H2O, indicando que os náuplios de T. biminiensis são tão sensíveis quanto outros
copépodos frequentemente empregados em estudos ecotoxicológicos. Avaliando-se amostras de água
superficial coletadas na região de Suape verificou-se a presença de toxicidade sub-letal para os
náuplios de T. biminiensis, mais associada ao mês de Setembro, início do período seco. Dentre os
parâmetros avaliados, a inibição foi o que mais indicou toxicidade, seguido pelo desenvolvimento.
Apesar da obtenção das medidas dos comprimentos total e da cabeça (geral e por estágio de
copepoditos) e da frequência de estágios reduzirem a praticidade do método, em um dos pontos de
coleta elas aumentaram a detecção de efeitos tóxicos. O estudo de AIT indicou que os compostos
orgânicos, os metais e a amônia seriam os principais agentes causadores da toxicidade das águas de
Suape, sendo os resultados da caracterização da fase I do AIT considerados bastante complexos. Nas
análises químicas, os Hidrocarbonetos Aromáticos de Petróleo Dissolvidos ou Dispersos estavam em
níveis subletais, os agrotóxicos não foram detectados e houve diminuição das concentrações de Fe
após a macroalga Ulva sp. A adição de novos parâmetros no teste com náuplios T. biminiensis foi
importante para confirmação dos resultados obtidos. A variedade de agentes tóxicos indicados pode
ser atribuída à diversidade de atividades realizadas na área, às diferentes influências sofridas pelos
pontos estudados e ao regime de chuvas, marés e correntes, indicando a necessidade de monitoramento
e avaliação constantes das condições ambientais da região. / The Suape estuarine complex (Pernambuco, Brazil) is located close to the industrial port
complex-SUAPE which includes major companies from various productive activities. The region has
great ecological and economic importance, and studies have reported the occurrence of physiographic,
hydrological and ecological changes since the implementation of SUAPE. According ecotoxicological
studies, the area has moderate and variable contamination. However, has not yet been possible to
indicate which substances could be related to the toxicity of environmental samples. In this sense, the
test for Toxicity Identification and Evaluation - TIE emerges as an important tool because it allows the
identification of possible toxic agents. The use of a fast ecotoxicological test with a sensitive test
organism before and after the manipulations of TIE is required for this type of analysis. The copepod
nauplii, among these the species Tisbe biminiensis, have been indicated for evaluation of samples of
estuarine and sea water due to increased sensitivity of the larval stages, but the test is usually
performed in microplates which makes it very laborious. This study aimed to improve a protocol for
conducting bioassays with nauplii of T. biminiensis and evaluate their sensitivity to zinc sulphate, a
reference substance. Subsequently, the test was used to evaluate the toxicity of surface water samples
collected at different points of Suape between the years 2011 and 2013. Aiming to increase the
sensitivity of the method, beyond the parameters of mortality, development and inhibition, size and
stage of development of copepodites were also evaluated. For AIT were studied samples collected in
April and September 2013, chemical analysis of metals, ammonia, hydrocarbons and pesticides were
performed in the last month. The duration of the test was 72 h. The feeding test using microalgae
Chaetoceros gracilis and Thalassiosira fluviatilis with and without addition of fish ration showed the
worst performance of T. fluviatilis as food. It was observed that the development C. gracilis
concentrations above 2.5 x 105
cells mL-1
were significantly higher than control (sea water without the
addition of food) when the temperature of 28 °C after 72 h. However, at 25 °C after 72 h, only at
concentrations of 5.5 x 105
cells mL-1 C. gracilis, the development nauplii to copepodites were higher
than the control, indicating that the temperature of 28 °C promotes further development. Then, the
following conditions were established for the protocol: C. gracilis at 2.5 x 105
cells mL-1 as food,
incubation at 28 °C and 72h duration. After the seven sensitivity tests were estimated CE50/72h, CL50/72h
and NOEC of 3.25 ± 0:59; 3.46 ± 0.72 and 2.0 mg L
-1
for ZnSO4.7H2O, indicating that the nauplii of
T. biminiensis are as sensitive as other copepods employed in ecotoxicological studies. Was detected
sub-lethal toxicity of surface water samples for the nauplii of T. biminiensis, more associated to
September, early dry season. Among the parameters evaluated, inhibition was the most indicated
toxicity, followed by the development. Despite obtaining measurements of the total length and head
(general and by stage of copepodites) and the frequency of stages reduce the practicality of the
method, one of the points, they increased the detection of toxic effects. The TIE study indicated that
mainly organic compounds, metals and ammonia would be the toxicity agents of Suape waters, this
characterization is considered complex. In chemical analysis, the HAPDDs were at sublethal levels,
the pesticides were not detected and concentrations of Fe decreased after Ulva sp. The addition of new
parameters in the test Nauplii T. biminiensis was important to confirm the results obtained. The variety
of toxic agents can be attributed to the diversity of activities in the area, the different influences
suffered by points studied and rainfall, tides and currents, indicating the need for constant monitoring
and evaluation of environmental conditions in the region.
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