Orientador: Gustavo Orlando Bonilla Rodriguez / Coorientador: Carlos Roberto Ceron / Banca: Eduardo Alves Almeida / Banca: Lucilene Regina Maschio / Banca: Lilian Castiglione / Banca: Rogério Pincela Mateus / Resumo: A cada ano, milhares de novos compostos químicos entram no mercado, e um volume enorme de resíduos é gerado pela atividade humana, existindo uma grande preocupação com relação aos seus efeitos a curto e longo prazo sobre a saúde e o ambiente. Um grande número dessas substâncias químicas é potencialmente perigoso e pode acarretar efeitos biológicos deletérios, sendo que mudanças a nível molecular são usualmente as primeiras respostas detectáveis da perturbação ambiental. Para avaliar os efeitos em sistemas biológicos, são utilizados bioindicadores, organismos sensíveis a agentes tóxicos. O presente trabalho teve por objetivo analisar os efeitos do Brometo de Etídio (BE), substância potencialmente mutagênica, na mosca da fruta (Drosophila melanogaster), realizando-se sempre comparações com o controle positivo, etilmetanosulfonato (EMS). Escolhemos o brometo de etídio por se tratar de uma substância usada frequentemente em métodos de biologia molecular, sendo tida como mutagênica, apesar de não constar como carcinogênico nas listagens da Agência Internacional para Pesquisa de Câncer (IARC). A pesquisa foi feita ao longo de 25 gerações, e em seis gerações (1ª, 5ª, 10ª, 15ª, 20ª, 25ª gerações) foram analisados: (1) os efeitos sobre padrões morfológicos, (2) a produtividade diária ao longo de 15 dias. Além disso, foram analisadas também: (3) alterações bioquímicas em enzimas do sistema oxidativo, acarretadas pela exposição a diferentes concentrações de brometo de etídio e EMS, (4) alterações gênicas: em nível de transposição do elemento transponível Bari-1 e na expressão dos genes que codificam as proteínas catalase, hsp 70 (heat shock protein), superóxido dismutase... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Each year thousands of new chemicals enter the market, and an enormous volume of waste is generated by human activity. Accordingly, there is a great concern regarding their short and long term health and environmental effects. A large number of these chemicals is potentially dangerous and can cause harmful biological effects, and changes at the molecular level are usually the first detectable responses of environmental disturbance. To evaluate the effects on biological systems, are used bioindicators, organisms sensitive to toxic agents. This study aimed to analyze the effects of Ethidium Bromide (EB), a potentially mutagenic substance, in the fruit fly (Drosophila melanogaster), comparing with a positive control, ethylmethanesulfonate (EMS). We chose ethidium bromide because it is a chemical frequently used in molecular biology techniques, and considered as a mutagenic although it is not included in the lists of the International Agency for Research on Cancer (IARC). The survey was conducted over 25 generations, and in six generations (1st, 5th, 10th, 15th, 20th, 25th generations) were analyzed: (1) the effects on morphological patterns, (2) the daily productivity over 15 days. In addition, we also analyzed: (3) biochemical changes in enzymes of the oxidative system brought about by exposure to different concentrations of ethidium bromide and EMS, (4) genetic alterations: level of transposition of the transposable element Bari-1 and expression genes that encode proteins catalase, hsp 70 (heat shock protein), superoxide dismutase 1 and esterase-6 and (5) longevity. Concerning daily productivity, five replicates were done, involving negative and positive controls (not exposed to any mutagen and with EMS, respectively), and three groups exposed to 1, 5 and 30 µM of EB. The results show that there were... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Resumo: As abelhas contribuem para a manutenção das espécies vegetais no nicho ecológico onde vivem. Alguns compostos químicos encontrados em inseticidas utilizados na agricultura (fipronil), ou lançados no meio com resíduos industriais (ácido bórico) são tóxicos para as abelhas. Assim, objetivou-se avaliar a atividade tóxica desses compostos em doses subletais, bem como, analisar as alterações morfológicas (citoplasmáticas e nucleares) do corpo gorduroso e túbulos de Malpighi. As análises estatísticas para o experimento realizado com ácido bórico (0,75% m/m) e fipronil (0,1 ng/abelha/dia) mostraram que os perfis de sobrevivência das abelhas que ingeriram a dieta contaminada foram significativamente diferentes ao perfil de sobrevivência apresentado pelo grupo controle (p<0,0001). As análises morfologicas confirmam que os inseticidas fipronil e ácido bórico, apresentam citotoxicidade em doses subletais, dentre essas alterações, destaca-se: nos túbulos de Malpighi aparente liberação de material celular para o lúmen, alguns núcleos picnóticos e bordo em escova que em alguns casos bloquearam o lúmen do órgão, em algumas células notou-se características morfológicas de degeneração. No corpo gorduroso de abelhas destacam-se intensa atividade de coalescência vacuolar, núcleos picnóticos e alguns núcleos dos trofócitos com aparente ramificação. Ultraestruturalmente destaca-se o aumento da porção apical das microvilosidades, dilatações das cisternas dos retículos endoplasmáticos rugoso, presença de vesículas e acúmulo de polirribossomos no citoplasma para os túbulos de Malpighi dos grupos experimentais tratados com fipronil e ácido bórico. As análises do corpo gorduroso mostram o aumento da quantidade, coalescência, depósitos lipídicos e protéicos nos vacúolos nos trofócitos do corpo gorduroso. Os resultados apresentados mostram que as doses... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Bees help to maintain the plant species in the ecological niche where they live. Some chemicals found in pesticides used in agriculture (fipronil), or thrown in the ambient with industrial waste (boric acid) are toxic to bees. The objective was to evaluate the toxic activity of these compounds at sublethal doses, as well as analyze the morphological (cytoplasmic and nuclear) of the fat body and Malpighian tubules. In the experimental groups, the compounds were added to the diet (Candi). The concentration of fipronil used in the experiment was 0.1 g/kg of candi and the concentration of boric acid was 0.75% (m/m). Statistical analysis for the experiment conducted with fipronil and boric acid profiles showed that the survival of bees that ingested the contaminated diet were significantly different to the profile of survival made by the control group (p <0.0001). Morphologically, in control group, changes found in Malpighian tubules of bees treated with boric acid and fipronil were subtle, showing apparent release of cellular material into the lumen, some pyknotic nuclei and, in some cases, brush border blocking the lumen organ, in some cells we observed morphological features of degeneration. Morphological changes are evident in the fat body of bees treated with fipronil and boric acid compared to control group. Among these changes, stand out intense activity of vacuolar coalescence, pyknotic nuclei and some nuclei of trophocytes with apparent branching. Histochemically, the cells of the Malpighian tubules showed, by the reaction of Bromophenol Blue, proteic activity more apparent in the treated groups compared to controls. The reaction of the PAS-Alcian Blue revealed the presence of glycoproteins in the apical portion of the cells of the Malpighian tubules of the treated groups. For the Feulgen reaction, we observed a high degree of chromatin compaction... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Osmar Malaspina / Coorientador: Elaine C.M. da Silva Zacarin / Banca: Hélio Conte / Banca: Carmem Silvia Fontaneti Christofoletti / Mestre

Orientador: Michiko Sakate / Banca: Noeme Sousa Rocha / Banca: Manoel Lima de Menezes / Banca: Mara Regina Stipp Balarin / Banca: Silvana Lima Gorniak / Resumo: O monofluoroacetato de sodio (MFAS) ou composto 1080 e um rodenticida que foi amplamente utilizado para o controle de roedores e predadores domesticos, apos sua descoberta em 1945. Este potente rodenticida age bloqueando o ciclo de Krebs por acao do seu metabolito toxico, o fluorocitrato, e como consequencia, inibe a resposta celular e a producao de ATP. O MFAS foi proibido por lei no Brasil e em diversos paises, mas seu uso indiscriminado continua causando diversos casos de intoxicacoes potencialmente fatais no homem e animais domesticos, principalmente em caes e gatos, representadas por alteracoes neurologicas e cardiacas. Pretendeu-se com este estudo caracterizar o perfil hematologico e bioquimico, as alteracoes histopatologicas e toxicologicas de gatos intoxicados experimentalmente com MFAS, com o objetivo de determinar metodos diagnosticos eficazes. Para tanto, foram utilizadas amostras de sangue de 16 gatos intoxicados experimentalmente com 0,45mg/kg de MFAS, por via oral. Estas amostras foram colhidas por puncao jugular e analisadas quanto ao perfil hematologico, bioquimica serica e analises toxicologicas em cromatografia liquida de alta eficiencia (CLAE), para deteccao e quantificacao do MFAS no soro dos animais. Avaliaram-se tambem as lesoes macro e microscopicas dos animais intoxicados que vieram a obito. Observaram-se leucopenia e trombocitopenia transitorias; hiperglicemia, aumento das enzimas musculares creatinoquinase (CK) e creatinoquinase fracao cardiaca (CK-MB); observaram-se tambem hipocalemia, hipofosfatemia e hipomagnesemia. Os achados macroscopicos e histopatologicos demonstraram lesoes caracteristicas de processos isquemicos e as analises toxicologicas demonstraram um metodo diagnostico simples e eficiente...(Resumo completo, clicar acesso eletrõnico abaixo) / Abstract: Sodium monofluoroacetate (SMFAC) or 1080 compound is a potent rodenticide, largely used since 1945 for rodent and domestic pest control. The toxic effects of SMFAC are caused by fluorocitrato, a toxic metabolite, which has a competitive action with aconitase enzyme, leading to citrate accumulation and interferes in energy production by Krebs cycle blockade. In Brazil, although prohibited by law, there is illegal use, keep causing intoxication in children and domestic animals, specially dogs and cats. The most common intoxication clinical signs are from the cardiac and neurological alterations. In the present study, 16 domestic cats were intoxicated with oral doses of monofluoroacetate (0.45mg/kg). The hematologic and biochemical profiles, and histophatological and blood serum toxicological analysis by high performance liquid chromatography (HPLC) were made to looking for a efficient diagnosis methods. The hematologic profile showed transitory leucopenia and trombocitopenia; the biochemical profile presented hiperglycemia, increase of creatinoquinase enzyme (CK) and creatinoquinase cardiac fraction (CK-MB), hypokalemia and hypophosfatemia were observed. The macrocospic and histopathological findings showed lesions characteristic of degenerative and ischemic processes. The toxicological analysis was shown to be a simple and efficient diagnostic method. SMFAC was detected in 75% of the serum samples analysed, and it was verified an average concentration of 0.32 ìg/mL in them; 4.81% of the serum samples did not show metabolized SMFAC six hours after the induced intoxication of the animals used in this study. / Doutor

Orientador: Fernando Bastos / Banca: Álvaro Lorencini Junior / Banca: Jair Lopes Junior / Banca: Sérgio Mello Arruda / Banca: Luciana Maria Lunardi Campos / Resumo: A atuação dos professores de Ciências e Biologia na prevenção educacional do abuso de substâncias psicoativas (SPA) recorre necessariamente a um processo de aquisição de saberes relacionados com psicofarmacologia e toxicologia, disciplinas atualmente não disponibilizadas na formação inicial desses docentes. Estuda-se o papel desenhado para o sistema educacional no que se refere às metas de prevenção ao abuso de drogas pela nova estrutura legislativa e pelos recentes posicionamentos dos tribunais nos casos que envolvem esta problemática orientando-o fortemente a ser tratado sob a ótica da educação onde um dos atores principais é o professor. Incumbidos dessa especial responsabilidade, de elevada complexidade, se despreparados, esses professores serão obstatos de realizá-la com eficiência e eficácia. As questões respondidas nesta tese fixaram-se em elucidar os aspectos da necessidade e de como capacitar professores daquelas disciplinas para atuarem dentro das escolas como profissionais da prevenção ao uso abusivo de substâncias psicoativas (SPA). Concebeu-se um corpo de conhecimentos comportando os saberes científico e da educação para a saúde, cuidando-se que os docentes devam contemplar os aspectos emocional e racional que a abordagem do tema exige. A pesquisa de abordagem qualitativa foi aplicada junto a duas turmas de licenciandos concluintes do Curso de Ciências Biológicas da Faculdade de Ciência da UNESP-Bauru, durante dois semestres, aferindo-se os conhecimentos e concepções pré-existentes e os apropriados após a implementação da capacitação. A capacitação incluiu conhecimentos dos aspectos legais aplicáveis ao setor educacional e de Direito Penal, Processual Penal, práticos e relacionados com questões polêmicas passíveis de confrontação pelos docentes, em sala de aula. Estudou-se... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The performing of teachers of science and biology in the educational prevention of psychoactive substances (SPA) abuse necessarily uses a process of acquiring knowledge related to psychopharmacology, toxicoloy, subjects not currently available in the initial formation of teachers. This study reveals the role designed for the educational system with regard to the goals of prevention of drug abuse by the new legislative structure and the placement of the courts in recent cases involving this issue, advising it strongly to be treated from the perspective of education where one of the main actors is the teacher. Taking in consideration that this is a task of special responsibility and high complexity, if unprepared, these teachers will be hindered to do so with efficiency and effectiveness. The questions answered in this thesis were set up to elucidate the necessity's aspects to teacher's formations to work as professionals within the schools to prevent the abuse of psychoactive substances (SPA). It was conceive a knowledge's frame including scientific knowledge and health education, taking care to that teachers contemplate the emotional and rational aspects required by the subject approaching. The search of qualitative approach was applied among two classes of ending degree students of Biological Sciences, College of Sciences, UNESP-Bauru, for two semesters, checking up their knowledge and pre-existing conceptions and acquired after the implementation of training. The enable proceeding included applicable knowledge of legal aspects for the education, Criminal Law, Criminal Proceeding, and practical issues related to controversial subject of possible confrontation by teachers in the classroom. Was studied the Federal Act Nº 11343 of 8/23/2006, the current drug law. The formation's effectiveness was evaluated along the lines investigated in five state high schools... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Geraldo Papa / Banca: Sérgio Luis de Carvalho / Banca: Luiz Roberto Pimentel Trevizan / Resumo: A exposição dérmica de amostradores foi avaliada na reentrada em lavoura de algodão após pulverização com o inseticida deltametrina. Aos 3 minutos após a aplicação quatro pessoas vestiram um conjunto de roupas (calça, camisa e luvas), entrando e permanecendo na área tratada por 30 minutos, simulando uma amostragem de pragas. O procedimento foi repetido aos 60 e 300 minutos e aos 1, 3, e 7 dias após a aplicação. Partes do tecido, correspondentes ao local de contato com várias partes do corpo, foram recortadas e analisadas quanto à quantidade de resíduos presentes. O inseticida foi extraído das roupas com acetato de etila e a determinação quantitativa foi feita por cromatografia gasosa. As exposições foram extrapoladas para uma jornada de trabalho de oito horas. Para classificar a segurança das condições de trabalho foram estimadas a margem de segurança (MS), dose tóxica (%DT/dia), dose tolerável dérmica e o tempo de trabalho seguro. O conjunto correspondente aos antebraços/braços/mãos concentrou 61,27% dos resíduos presentes na roupa. Partes correspondentes ao peitoral, pernas, coxas e costas alcançaram 13,40; 9,33; 9,32; e 6,65% dos resíduos totais encontrados nas roupas, respectivamente. Pela análise dos dados constatou-se que o intervalo de reentrada estabelecido para o produto comercial Decis 25 CE (deltametrina) que é de 24 h está superestimado. / Abstract: The objective of this work was to study the dermal exposure of workers to residues of the deltamethrin, applied in cotton. After 3 minutes of application four people dressed a group with cotton clothes (pant, shirt and gloves), entered and stayed in the treated area by 30 minutes, simulating a sampling. The procedure was repeated after 60 and 300 minutes and 1, 3, and 7 days of the application. The clothes were cut and put in plastic bags, and stored cold at -18º until analyses was performed. The analytical method consisted on the extraction of deltamethrin residues with a ethyl acetate and the quantitative determination was done by gas chromatograph. Exposure was extrapolated to a work day of 8 hours. To evaluate safety's conditions at work was estimated the Working Condition Unsafe (margin of safety - MOS <1), Poisonous Dose (%PD/day), Dermal Dose Tolerable and the estimate of Safe Work Duration (SWD). The corresponding group for the forearms/arms/hands concentrated 61.27% of present residues in the clothes. The residues found on the clothes, chest, legs, lame and back, were 13.40, 9.33, 9.32, and 6.65%, respectively. Results of deltamethrins amounts trapped on cotton clothes showed that 24h as a reentry interval for Decis 25 EC is overestimated. / Mestre

Resumo: Recentemente as abelhas têm sido devidamente valorizadas como importantes polinizadoras de flores silvestres e cultivadas. A densidade populacional de muitos polinizadores tem diminuído devido, principalmente, à intensificação agrícola e ao uso de pesticidas, prejudicando os serviços de polinização. A metodologia clássica para estimar a toxicidade dos produtos químicos para insetos é determinar a dose letal média (DL50) ou a concentração letal média (CL50), podendo então estabelecer doses que sejam mais seguras aos organismos não-alvo ou benéficos. Além dos efeitos de toxicidade aguda, levando a morte das abelhas, doses subletais dos inseticidas podem provocar alterações comportamentais e fisiológicas nos indivíduos, que ao longo do tempo acarretarão em sérios prejuízos na manutenção da colônia. Um dos inseticidas amplamente utilizado é o fipronil, este atua ligando-se aos receptores do ácido gama-aminobutírico (GABA), interrompendo os canais de cloro, resultando na perda de sinalização inibitória neural. Na literatura pode-se encontrar diversos trabalhos que utilizam como modelo principal a abelha Apis mellifera, porém, é importante ressaltar a diversidade existente entre as abelhas nativas no Brasil, os meliponíneos, e sua participação na conservação da biodiversidade, assim como na polinização de áreas de cultivo, o que torna extremamente importante estudos com essa abelha. Com a finalidade de entender como o fipronil interfere morfo e fisiologicamente em abelhas sem ferrão, a região de interesse deste estudo foram os corpos pedunculados, já que estes são centros cerebrais complexos e tidos como local de convergência multisensorial. Para auxiliar no mapeamento metabólico, utilizou-se como marcador a enzima citocromo oxidase e a enzima caspase-3, técnicas utilizadas na observação de atividade neural... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: A few decades the bees are considered an important indicator of high environmental sensitivity, and appreciated as important pollinators of wildflowers and cultivated. The population density of many pollinators have declined to harmful levels to pollination services manly due to agricultural intensification and the use of pesticides. The classic methodology of estimating the effects of chemicals for insects is to determine the median lethal dose (LD50) or median lethal concentration (LC50) that can then establish doses that do not harm non-target organisms or beneficial. Besides the effects of acute toxicity, leading to death bees, sublethal doses of insecticides can cause physiological and behavior changes of individuals over time, resulting in serious harm to maintain the colony. One of the widely used insecticides is fipronil, its acts by binding to gamma-aminobutyric acid (GABA) disrupting chloride channels, resulting in loss of inhibitory neural signaling. In the literature one can find several works using as main bee model Apis mellifera, however, it is important to highlight the diversity of Brazilian native bees, the stingless bees, and their participation in biodiversity conversation, as well as in the pollination of cultivated land. In order to understand how fipronil affect morpho and physiologically the stingless bee S. postica, the region of interest in this study were the mushroom bodies, since these are complex brain centers and used as a place of multisensory convergence. This work established the contact LD50 and Ingestion LC50 to the fipronil insecticide for foragers workers stingless bee Scaptotrigona postica in 0.54ng/bee and 0.24ng/μL of the food after 24 hours, respectively, confirming the high toxicity of this phenylpyrazole, in the groups submitted to contact contamination, were identify morphological... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Osmar Malaspina / Coorientador: Roberta Cornélio Ferreira Nocelli / Banca: Elaine Cristina Mathias da Silva Zacarin / Banca: Thaisa Cristina Roat / Mestre