Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-11-20T13:17:10Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Sarah Barboza Martins - 2013.pdf: 2809487 bytes, checksum: bf21b99c3be3beb9a86f860a74b72247 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-11-20T14:32:05Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Sarah Barboza Martins - 2013.pdf: 2809487 bytes, checksum: bf21b99c3be3beb9a86f860a74b72247 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-20T14:32:05Z (GMT). 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Thirty minutes after end of instrumentation, anesthesia was again induced and maintained either with isoflurane (GI) or ketamine (10 mg/kg) and midazolam (0.2 mg / kg) (GCM) IM. After that we collected the whole blood (53mL) and replaced volume with ringer's lactate solution (20 mL / kg), and then allowed the anesthetic recovery. We analyzed the cardiac (FR) and respiratory (f) rate, the systolic (PAS), diastolic (PAD) and mean (PAM) arterial pressure with direct and oscillometric method, and PAS with Doppler ultrasound; oxyhemoglobin saturation ( SpO2) and central venous pressure (PVC). It were also collected arterial blood samples for analysis of blood gases and electrolytes. Animals were evaluated before induction to blood collection (T0), immediately after induction (Tind), immediately after blood collection (Tcol) and after volume replacement (Trep). Tha PAS, PAD and PAM obtained by oscillometric and Doppler methods were compared to invasive method in GCM when animals were awake (CONS), anesthetized (ANEST) and after collection of blood (HIPOV). All animals had PAS, PAD and PAM decreased at Tcol. There was no statistical difference between the groups in any variable evaluated. Both indirect methods of blodd pressure measurement underestimated the blood pressure at CONS e ANEST, although the Doppler method had better correlation with the direct method. We conclude that isoflurane and ketamine/midazolam anesthesia are safe and efficient for blood collection in cats. Between the two indirect methods of blood pressure evaluated, the Doppler method had the best accuracy for measurement of PAS during the blood collection process in cats. Knowing the underestimation of the blood pressure obtained, it is recommended to consider not just the values obtained, but also the clinical signs like pulse quality and membrane mucosa color, to detection of hypotension with indirect methods. / A disponibilidade de derivados sanguíneos em felinos é baixa, sendo um dos fatores determinantes a obrigatoriedade de sedação ou anestesia para a colheita de sangue. A aferição da pressão arterial é rotineira na clínica e na anestesiologia, podendo ser utilizados os métodos indiretos, de fácil execução e baixo risco para os animais, ou o método direto, mais fidedigno. Neste estudo foi avaliada a segurança de dois protocolos anestésicos e a acurácia de dois métodos indiretos de aferição da pressão arterial comparados ao método direto, para colheita de sangue em gatos. Foram utilizados cinco animais pesando 4,3±0,5 kg submetidos a dois protocolos anestésicos diferentes com intervalo de 30 dias. Para a cateterização da artéria femoral e da veia jugular, os animais foram anestesiados com isofluorano e ao final foi permitida a recuperação anestésica. Trinta minutos após o final da instrumentação, a anestesia foi induzida e mantida novamente com isofluorano (GI) ou com cetamina (10mg/kg) e midazolam (0,2mg/kg) via IM (GCM). Em seguida, realizou-se colheita de sangue total (53mL) e reposição volêmica com solução de Ringer com lactato (20 mL/kg), para então permitir a recuperação anestésica. Foram avaliadas as frequências cardíaca (FC) e respiratória (f); as pressões arteriais sistólica (PAS), diastólica (PAD) e média (PAM), pelos métodos invasivo e oscilométrico e a PAS pelo uso de Doppler vascular; a saturação periférica da oxihemoglobina (SpO2) e a pressão venosa central (PVC). Foram ainda colhidas amostras de sangue arterial para análise dos gases sanguíneos e dos eletrólitos. Os animais foram avaliados antes da indução para colheita (T0), imediatamente após a indução (Tind), imediatamente após a colheita (Tcol) e depois da reposição volêmica (Trep). A PAS, PAD e PAM obtidas pelo método oscilométrico e a PAS obtida pelo Doppler vascular foram comparadas às obtidas pelo método invasivo nos animais do GCM quando acordados (CONS), anestesiados (ANEST) e após a colheita do sangue (HIPOV). Todos os animais apresentaram diminuição da PAS, PAD e PAM em Tcol. Não houve diferença estatística entre os grupos em nenhuma variável avaliada. Os dois métodos indiretos subestimaram a pressão arterial no momento CONS e ANEST, contudo o método Doppler Vascular apresentou melhor correlação com o método direto. Concluiu-se que a anestesia com isofluorano ou cetamina-midazolam é segura e eficiente para colheita de sangue em gatos. Dos métodos indiretos avaliados o Doppler foi mais acurado para aferição da PAS durante o processo de colheita de sangue em gatos. Tendo em vista a subestimação dos valores, deve-se por tanto considerar, além do valor obtido, as variáveis clinicas como qualidade de pulso e coloração das mucosas para detecção de hipotensão pelos métodos indiretos.

A legislação brasileira obriga a realização de testes sorológicos em todas as amostras de sangue de doadores, com o objetivo de prevenir a transmissão transfusional de microorganismos causadores de doenças como hepatite B, hepatite C, síndrome da imunodeficiência adquirida (SIDA), doença de Chagas, HTLV I/II e sífilis. Este procedimento é importante, porém não é suficiente para garantir a segurança do procedimento transfusional, sendo assim durante todo o ciclo do sangue, atitudes são adotadas para minimizar sinistros no objetivo final que a transfusão. Para receptores, a mesma legislação só obriga a realização de testes imuno-hematológicos pré-transfusionais, o que não revela o perfil sorológico deles, que por vezes pode ser positivo para algum dos marcadores antes da transfusão. O objetivo do presente trabalho foi avaliar o perfil sorológico pré-transfusional para doenças infecciosas transmissíveis por transfusão sanguínea em receptores de sangue de um hospital brasileiro de referência, o Hospital Geral de Palmas (HGP), no Estado do Tocantins. Foram realizados testes sorológicos pré-transfusionais para SIDA, hepatite B, hepatite C e sífilis em 514 receptores de transfusão do HGP, no período de fevereiro de 2014 a agosto de 2014. Vinte e nove receptores (5,65%) apresentaram-se reagentes para pelo menos um dos marcadores sorológicos testados. Os receptores apresentaram sorologia positiva para hepatite B (1,57%), hepatite C (0,58%), SIDA (1,17%) e sífilis (2,33%). Dentre os receptores de sangue que apresentaram sorologia positiva para alguma das doenças infecciosas testadas, 37,93% foram atendidos no centro cirúrgico e 27,59% na unidade de tratamento intensivo do HGP. Dentre os receptores com sorologia positiva, 62% não haviam sido transfundidos anteriormente. Este estudo determinou a prevalência de doenças infecciosas em receptores de sangue de um hospital brasileiro de referência, bem como discutiu a viabilidade e importância da implementação de testes sorológicos pré-transfusionais em receptores de sangue no Brasil. A avaliação sorológica pré-transfusional tem grande relevância pois possibilita o diagnóstico precoce de infecções nos receptores de sangue, minimizando assim o risco de comorbidade. Por outro lado, confere uma maior segurança judicial para os Serviços de Hemoterapia e para o Estado, quando da necessidade de esclarecimentos sobre possíveis transmissões de doenças infecciosas por transfusão sanguínea. / Brazilian law requires serological tests in all donors of blood samples, in order to prevent transfusion transmission of disease-causing organisms such as hepatitis B, hepatitis C, acquired immunodeficiency syndrome ( AIDS), Chagas disease, HTLV I/II and syphilis. This is important, but not sufficient to ensure the safety of the transfusion procedure, so all the blood cycle, actions are taken to minimize losses in the ultimate goal that the transfusion. For receivers, the same legislation only requires the completion of pre-transfusion immuno-hematological tests, which does not reveal the serological profile of them, which can sometimes be positive for any of the markers prior to transfusion. The objective of this study was to evaluate the pre-transfusion serological profile for transfusion-transmitted infectious diseases in blood recipients from reference Brazilian hospital, Palmas General Hospital (HGP), State of Tocantins, Brazil. Pre-transfusion serological tests for HIV, HBV, HCV and syphilis were performed in 514 transfusion recipients of HGP, from February 2014 to August 2014. Twenty and nine receivers (5.65%) presented reactivity for at least one of the evaluated serological markers. The recipients were positive for hepatitis B (1.57%), hepatitis C (0.58%), AIDS (1.17%), and syphilis (2.33%). Among the blood recipients with positive serology for any of the tested infectious diseases, 37.93% were treated at the surgical center and 27.59% in the intensive care unit of the HGP, and 62% of recipients had not been previously transfused. Thus, this study determined the prevalence of infectious diseases in blood recipients from a Brazilian reference hospital, and discussed the feasibility and importance of implementing pre-transfusion serological tests for blood recipients in Brazil. The pre-transfusion serological evaluation is important because it provides both an early diagnosis of infections in blood recipients, thus minimizing the risk of comorbidity, and a greater legal certainty for Hematology Services and for the State, when clarification about possible transmissions of infectious diseases by blood transfusion are needed.

A legislação brasileira obriga a realização de testes sorológicos em todas as amostras de sangue de doadores, com o objetivo de prevenir a transmissão transfusional de microorganismos causadores de doenças como hepatite B, hepatite C, síndrome da imunodeficiência adquirida (SIDA), doença de Chagas, HTLV I/II e sífilis. Este procedimento é importante, porém não é suficiente para garantir a segurança do procedimento transfusional, sendo assim durante todo o ciclo do sangue, atitudes são adotadas para minimizar sinistros no objetivo final que a transfusão. Para receptores, a mesma legislação só obriga a realização de testes imuno-hematológicos pré-transfusionais, o que não revela o perfil sorológico deles, que por vezes pode ser positivo para algum dos marcadores antes da transfusão. O objetivo do presente trabalho foi avaliar o perfil sorológico pré-transfusional para doenças infecciosas transmissíveis por transfusão sanguínea em receptores de sangue de um hospital brasileiro de referência, o Hospital Geral de Palmas (HGP), no Estado do Tocantins. Foram realizados testes sorológicos pré-transfusionais para SIDA, hepatite B, hepatite C e sífilis em 514 receptores de transfusão do HGP, no período de fevereiro de 2014 a agosto de 2014. Vinte e nove receptores (5,65%) apresentaram-se reagentes para pelo menos um dos marcadores sorológicos testados. Os receptores apresentaram sorologia positiva para hepatite B (1,57%), hepatite C (0,58%), SIDA (1,17%) e sífilis (2,33%). Dentre os receptores de sangue que apresentaram sorologia positiva para alguma das doenças infecciosas testadas, 37,93% foram atendidos no centro cirúrgico e 27,59% na unidade de tratamento intensivo do HGP. Dentre os receptores com sorologia positiva, 62% não haviam sido transfundidos anteriormente. Este estudo determinou a prevalência de doenças infecciosas em receptores de sangue de um hospital brasileiro de referência, bem como discutiu a viabilidade e importância da implementação de testes sorológicos pré-transfusionais em receptores de sangue no Brasil. A avaliação sorológica pré-transfusional tem grande relevância pois possibilita o diagnóstico precoce de infecções nos receptores de sangue, minimizando assim o risco de comorbidade. Por outro lado, confere uma maior segurança judicial para os Serviços de Hemoterapia e para o Estado, quando da necessidade de esclarecimentos sobre possíveis transmissões de doenças infecciosas por transfusão sanguínea. / Brazilian law requires serological tests in all donors of blood samples, in order to prevent transfusion transmission of disease-causing organisms such as hepatitis B, hepatitis C, acquired immunodeficiency syndrome ( AIDS), Chagas disease, HTLV I/II and syphilis. This is important, but not sufficient to ensure the safety of the transfusion procedure, so all the blood cycle, actions are taken to minimize losses in the ultimate goal that the transfusion. For receivers, the same legislation only requires the completion of pre-transfusion immuno-hematological tests, which does not reveal the serological profile of them, which can sometimes be positive for any of the markers prior to transfusion. The objective of this study was to evaluate the pre-transfusion serological profile for transfusion-transmitted infectious diseases in blood recipients from reference Brazilian hospital, Palmas General Hospital (HGP), State of Tocantins, Brazil. Pre-transfusion serological tests for HIV, HBV, HCV and syphilis were performed in 514 transfusion recipients of HGP, from February 2014 to August 2014. Twenty and nine receivers (5.65%) presented reactivity for at least one of the evaluated serological markers. The recipients were positive for hepatitis B (1.57%), hepatitis C (0.58%), AIDS (1.17%), and syphilis (2.33%). Among the blood recipients with positive serology for any of the tested infectious diseases, 37.93% were treated at the surgical center and 27.59% in the intensive care unit of the HGP, and 62% of recipients had not been previously transfused. Thus, this study determined the prevalence of infectious diseases in blood recipients from a Brazilian reference hospital, and discussed the feasibility and importance of implementing pre-transfusion serological tests for blood recipients in Brazil. The pre-transfusion serological evaluation is important because it provides both an early diagnosis of infections in blood recipients, thus minimizing the risk of comorbidity, and a greater legal certainty for Hematology Services and for the State, when clarification about possible transmissions of infectious diseases by blood transfusion are needed.

Os eicosanoides, produtos do metabolismo do ácido araquidônico, apresentam papel importante na homeostasia e na patogênese de diversas doenças humanas. A biossíntese desses compostos pode ser estimulada por agentes farmacológicos como ionóforos e inibidores da Ca2+-ATPase, e também por agonistas naturais como o formil-metionil-leucil-fenialanina (fMLP). Considerando os interesses em avaliar e comparar o perfil de mediadores lipídicos, como os leucotrienos (LTs), as prostaglandinas (PGs), os ácidos epoxieicosatrienoicos (EETs), os ácidos dihidroxitetraenoicos (DiHETEs) e os ácidos hidroxieicosatetraenoicos (HETEs), na saúde e na doença, o objetivo deste trabalho foi padronizar um método analítico para determinar do perfil de eicosanoides em plasma humano após estimulação do sangue total, e assim observar diferenças entre indivíduos saudáveis e doentes. Dessa forma, um método por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massas sequencial (HPLC-MS/MS) foi validado para quantificação de 22 eicosanoides em plasma de indivíduos saudáveis. A análise por HPLCMS/ MS foi realizada em modo negativo pelo modo de varredura por monitoramento de reações múltiplas (MRM). A linearidade do método apresentou coeficiente de correlação (r) maior que 0,98 para todos os eicosanoides analisados. A precisão e exatidão intra e inter-ensaios tiveram desvio padrão e erro relativo menores que 15%, exceto para o limite inferior de quantificação cujos valores foram menores que 20%. Para estimulação das células do sangue total, quatro estímulos (fMLP, ionomicina, A23187 e tapsigargina) foram utilizados. A análise estatística mostrou que o A23187 e a tapsigargina foram os estímulos mais potentes na indução da produção de eicosanoides. Em seguida, comparamos o perfil de eicosanoides em amostras de plasma de indivíduos saudáveis com pacientes com anemia falciforme (AF), em tratamento com hidroxiureia (HU) ou transfusão sanguínea crônica. Os resultados demonstraram que o método é preciso para determinação de diferenças entre os pacientes e indivíduos saudáveis quanto à produção dos mediadores lipídicos 5-HETE, 12-HETE, LTB4, LTE4, TXB2 e PGE2. Portanto, nosso método analítico é sensível, específico e reprodutível para identificar e quantificar diferenças no perfil de eicosanoides em amostras de sangue estimuladas in vitro, e poderá contribuir para o estabelecimento do perfil de mediadores lipídicos em diferentes doenças inflamatórias e infecciosas. / Eicosanoids, products from arachidonic acid metabolism, play an important role in the homeostasis and in the pathogenesis of various human diseases. Pharmacological agents such as Ca2+ ionophores and Ca2+-ATPase inhibitors, as well as natural agonists such as fMet-leu-Phe (fMLP) can stimulate eicosanoid biosynthesis. Considering the interests in evaluate and compare the profile of lipid mediators, as leukotriens (LTs), prostaglandins (PGs), epoxyeicosatrienoic acids (EETs), dihydroxytetraenoic acids (DiHETEs) and hydroxyeicosatetraenoic acids (HETEs), in healthy and disease, the aim of this work was to standardize a method to determine the eicosanoid profile of human plasma samples after whole blood stimulation, and to assess differences between healthy and sick individuals. For this purpose, a liquid chromatographytandem mass spectrometry (LC-MS/MS) method was validated for the quantification of 22 eicosanoids using human plasma from healthy volunteers. In addition, we optimized a method for the stimulation of eicosanoids in human whole blood. LC-MS/MS analyses were performed by negative electrospray ionization and multiple reaction monitoring. An assumption of linearity resulted in a regression coefficient > 0.98 for all eicosanoids tested. The mean intra-assay and inter-assay accuracy and precision values had relative standard deviations and relative errors of < 15%, except for the lower limit of quantification, where these values were < 20%. For whole blood stimulation, four stimuli (fMLP, ionomycin, A23187, and thapsigargin) were used. Results of the statistical analysis showed that A23187 and thapsigargin were potent stimuli to induce the production of eicosanoids. We next compared the eicosanoid profiles of healthy volunteers to those of patients with sickle cell anemia (SCA) under treatment with hydroxyurea (HU) or after chronic red blood cell (RBC) transfusion. The results indicate that the method was sufficient to find a difference between lipid mediators released in whole blood of SCA patients compared to healthy subjects for 5-HETE, 12-HETE, LTB4, LTE4, TXB2, and PGE2. In conclusion, our analytical method is sensitive, specific and reproducible for indentify and quantify changes in eicosanoid profiles in whole blood stimulated in vitro, which can contribute to establishing the eicosanoid profiles associated with different inflammatory and infectious diseases.

Os eicosanoides, produtos do metabolismo do ácido araquidônico, apresentam papel importante na homeostasia e na patogênese de diversas doenças humanas. A biossíntese desses compostos pode ser estimulada por agentes farmacológicos como ionóforos e inibidores da Ca2+-ATPase, e também por agonistas naturais como o formil-metionil-leucil-fenialanina (fMLP). Considerando os interesses em avaliar e comparar o perfil de mediadores lipídicos, como os leucotrienos (LTs), as prostaglandinas (PGs), os ácidos epoxieicosatrienoicos (EETs), os ácidos dihidroxitetraenoicos (DiHETEs) e os ácidos hidroxieicosatetraenoicos (HETEs), na saúde e na doença, o objetivo deste trabalho foi padronizar um método analítico para determinar do perfil de eicosanoides em plasma humano após estimulação do sangue total, e assim observar diferenças entre indivíduos saudáveis e doentes. Dessa forma, um método por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massas sequencial (HPLC-MS/MS) foi validado para quantificação de 22 eicosanoides em plasma de indivíduos saudáveis. A análise por HPLCMS/ MS foi realizada em modo negativo pelo modo de varredura por monitoramento de reações múltiplas (MRM). A linearidade do método apresentou coeficiente de correlação (r) maior que 0,98 para todos os eicosanoides analisados. A precisão e exatidão intra e inter-ensaios tiveram desvio padrão e erro relativo menores que 15%, exceto para o limite inferior de quantificação cujos valores foram menores que 20%. Para estimulação das células do sangue total, quatro estímulos (fMLP, ionomicina, A23187 e tapsigargina) foram utilizados. A análise estatística mostrou que o A23187 e a tapsigargina foram os estímulos mais potentes na indução da produção de eicosanoides. Em seguida, comparamos o perfil de eicosanoides em amostras de plasma de indivíduos saudáveis com pacientes com anemia falciforme (AF), em tratamento com hidroxiureia (HU) ou transfusão sanguínea crônica. Os resultados demonstraram que o método é preciso para determinação de diferenças entre os pacientes e indivíduos saudáveis quanto à produção dos mediadores lipídicos 5-HETE, 12-HETE, LTB4, LTE4, TXB2 e PGE2. Portanto, nosso método analítico é sensível, específico e reprodutível para identificar e quantificar diferenças no perfil de eicosanoides em amostras de sangue estimuladas in vitro, e poderá contribuir para o estabelecimento do perfil de mediadores lipídicos em diferentes doenças inflamatórias e infecciosas. / Eicosanoids, products from arachidonic acid metabolism, play an important role in the homeostasis and in the pathogenesis of various human diseases. Pharmacological agents such as Ca2+ ionophores and Ca2+-ATPase inhibitors, as well as natural agonists such as fMet-leu-Phe (fMLP) can stimulate eicosanoid biosynthesis. Considering the interests in evaluate and compare the profile of lipid mediators, as leukotriens (LTs), prostaglandins (PGs), epoxyeicosatrienoic acids (EETs), dihydroxytetraenoic acids (DiHETEs) and hydroxyeicosatetraenoic acids (HETEs), in healthy and disease, the aim of this work was to standardize a method to determine the eicosanoid profile of human plasma samples after whole blood stimulation, and to assess differences between healthy and sick individuals. For this purpose, a liquid chromatographytandem mass spectrometry (LC-MS/MS) method was validated for the quantification of 22 eicosanoids using human plasma from healthy volunteers. In addition, we optimized a method for the stimulation of eicosanoids in human whole blood. LC-MS/MS analyses were performed by negative electrospray ionization and multiple reaction monitoring. An assumption of linearity resulted in a regression coefficient > 0.98 for all eicosanoids tested. The mean intra-assay and inter-assay accuracy and precision values had relative standard deviations and relative errors of < 15%, except for the lower limit of quantification, where these values were < 20%. For whole blood stimulation, four stimuli (fMLP, ionomycin, A23187, and thapsigargin) were used. Results of the statistical analysis showed that A23187 and thapsigargin were potent stimuli to induce the production of eicosanoids. We next compared the eicosanoid profiles of healthy volunteers to those of patients with sickle cell anemia (SCA) under treatment with hydroxyurea (HU) or after chronic red blood cell (RBC) transfusion. The results indicate that the method was sufficient to find a difference between lipid mediators released in whole blood of SCA patients compared to healthy subjects for 5-HETE, 12-HETE, LTB4, LTE4, TXB2, and PGE2. In conclusion, our analytical method is sensitive, specific and reproducible for indentify and quantify changes in eicosanoid profiles in whole blood stimulated in vitro, which can contribute to establishing the eicosanoid profiles associated with different inflammatory and infectious diseases.