Orientadores: Francesco Langone, Jose Francisco Figueiredo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-24T03:18:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carone_AntonioLuiz_M.pdf: 4209839 bytes, checksum: ac2812f726b8c72d34dcd65a44645cb7 (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: As lesões traumáticas incidem com grande freqüência sobre o sistema nervoso periférico, apresentando prognóstico reservado principalmente quando ocorre transecção completa do nervo. Todavia, com o melhor conhecimento dos fenômenos celulares e moleculares envolvidos na regeneração axonal e das técnicas microcirúrgicas, tem-se buscado melhorar esse quadro. Neste sentido, tem sido objeto de investigação nos últimos anos a criação de um banco de nervos que viria facilitar o reparo de lesões nervosas com extensa perda de substância. Assim, diversos métodos vem sendo testados para a conservação dos segmentos de nervos para posterior transplante. Neste estudo foram analisados os aspectos morfológicos e quantitativos de enxertos autólogos previamente mantidos em dois tipos de solução conservadora. Foram utilizados quarenta ratos machos da linhagem Wistar, sendo que 16 deles foram subdivididos em grupos de 4 animais, que tiveram os nervos tibial esquerdo e direito removidos e mantidos em solução conservadora de Wisconsin/Belzer (4°C), por 24 ou 72 horas, ou em solução conservadora de Collins (4°C), por 24 ou 72 horas, respectivamente. Após os períodos de conservação previstos, estes nervos foram processados para análise histológica, conforme descrito a seguir. Outros 4 animais, controles, tiveram os nervos tibial direito e esquerdo removidos e imediatamente processados para histologia. Por sua vez, um grupo de 15 animais teve o nervo tibial esquerdo removido e conservado por 24 horas ou 72 horas em solução de Wisconsin/Belzer (4°C) ou solução de Collins (4°C), e posteriormente transplantado no mesmo animal para o lado direito. Outros' 5 animais, tiveram o nervo tibial esquerdo retirado e imediatamente transplantado para o lado direito. A conduta cirúrgica foi precedida sempre de anestesia profunda com pentobarbital sódico (50mg/Kg/peso) para todos os animais. Após 50 dias do transplante, os animais que receberam os enxertos nervosos foram anestesiados para exposição do respectivo enxerto e para sua fixação "in situ" com uma solução de glutaraldeído 2% e formaldeído 1 %, em tampão fosfato de sódio 0,1 M. Após serem mantidos por 24 horas nesta solução, os segmentos do enxerto foram pós-fixados em OS04 e incluídos em resina. A seguir, de cada' espécime foram obtidos cortes semi-finos da porção média do enxerto, os quais foram corados com azul de Toluidina e analisados em microscópio de luz convencional. Para a análise quantitativa dos axônios regenerados no enxerto, foram amostrados cinco campos diferentes e fotografados sob objetiva de imersão (100x). Os negativos foram copiados em papel fotográfico com o aumento final de 1625 vezes e procedeu-se a contagem dos axônios mielínicos com o auxílio de contador eletrônico. A análise histológica mostrou que a regeneração axonal, após 50 dias do transplante, estava mais avançada nos enxertos previamente mantidos nas solução de Wisconsin/Belzer, em relação aos enxertos mantidos na solução de Collins, e era semelhante à observada nos enxertos frescos. A análise da densidade de axônios mielínicos regenerados nas diferentes condições experimentais confirmou os resultados histológicos. Assim, o número de axônios mielínicos regenerados em 104µm2 de área nos enxertos previamente mantidos em solução Wisconsin/Belzer, por 24 ou 72 horas, foram, respectivamente, 433±12 e 430±32. Sendo estes resultados significamente superiores aos observados nos enxertos mantidos em solução de Collins por 24 horas (344±20b) e 72 horas (327±29 b) e semelhante aos computados nos enxertos frescos (407±1±13a). Estes resultados mostraram que a composição da solução conservadora de Wisconsin/Belzer é capaz de manter a viabilidade dos enxertos de nervos, nos períodos de tempo estudados, de maneira superior à da solução de Collins, podendo ser proposta como um meio adequado para a preservação dos nervos até o seu transplante / Abstract: Traumatic lesions are very often on peripheral nervous system, and have reserved prognostic when a loss important nerve segment occurs. However, the knowledge about the cellular and the molecular events promoting the nerve regeneration, besides the use of microsurgical techniques, gives a better perceptive to improve the peripheral nerve repair nowadays. In this scenario, several assays were done to develop a nerve bank that would be used for surgery when a graft is necessary to repair a nerve gap. In this study we investigate the morphological and quantitative aspects of the nerve regeneration across autologous nerve grafts previously stored in two types of preserve solutions. Forty Wistar male rats were used and 16 of them had the left and right tibial nerves removed and stored during 24 or 72 hours in Wisconsin/Belzer solution or in Collins solution (4°C). Following previous stórage period those nerves are processed for histology. Other 4 animals had the left and the right tibial nerve removed and immediately processed for histology. A group of 15 animals had the left tibial nerve removed and stored during 24 and 72 hours in Wisconsin/Belzer solution or in Collins solution and subsequently transplanted in the right side. Other 5 animals had the left tibial nerve removed and immediately transplanted to the right side. After 50 days of the transplant, the animals were reoperated to remove the nerve graft. It was exposed, dissected, fixed "in situ" using a fixative solution (2% paraformaldehyde, 1 % glutaraldehyde, in PBS 0,1 M, pH 7,4) and removed. Following, the nerve graft was postfixed in OS04 and embedded in resin. Semi-thin (1,0 µm) cross sections of the middle region of the nerve graft were obtained, stained in toluidine blue and observed in light microscopy. To perform the quantitative analysis the cross section of the graft was sampled in 5 different fields and the density of mielinated nerve fibers on 1 0 / Mestrado / Neurologia / Mestre em Ciências Médicas

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Neste estudo, avaliamos quantitativamente, pela técnica de PCR em tempo real, a transcrição do mRNA dos genes CTGF, TGF-β e KIM-1, em biópsias de pacientes transplantados renais com disfunção do enxerto. Testamos a hipótese de que, em pacientes com doença crônica do transplante renal, essas moléculas estão envolvidas no desenvolvimento de fibrose desses enxertos, apresentando aumento da sua expressão gênica, e que essa expressão aumenta na medida em que o grau de fibrose tecidual é mais intenso. Setenta e sete pacientes transplantados renais que foram submetidos a biópsia renal por disfunção do enxerto entre janeiro de 2008 e dezembro de 2009 foram incluídos no estudo. Pacientes e biópsias foram classificados em quatro grandes grupos de diagnóstico, de acordo com a classificação Banff-2007: necrose tubular aguda (NTA; n = 9), rejeição aguda (RA, n = 49), nefrotoxicidade aguda por inibidor da calcineurina (NIC; n = 10) e fibrose intersticial e atrofia tubular (IF/TA; n = 29). Para os genes CTGF e TGF-β, os níveis de mRNA foram significativamente maiores em IF/TA em comparação com NIC e RA. Para o gene KIM-1, os níveis de mRNA no grupo IF/TA foram maiores do que no grupo NIC. Além disso, verificamos que a expressão dos genes CTGF, TGF-β e KIM-1 aumenta com a intensidade da fibrose observada nos exames patológicos. A avaliação molecular do tecido do enxerto renal pode ser usada para aprimorar o diagnóstico patológico e para o possível desenvolvimento de biomarcadores.

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Orientador: Idelmo Rangel Garcia Júnior / Banca: Marco Antonio Brandão Pontual / Banca: Martha Alayde Alcântara Salim / Resumo: Devido à oferta limitada e morbidade associadas ao uso de enxertos autógenos, substitutos ósseos têm sido desenvolvidos e estudados. Implantes homógenos de matriz óssea desmineralizada (MOD) têm sido utilizados como material clínico de enxerto devido à sua suposta capacidade de osseoindução e osseocondução. Este estudo teve por objetivo comparar os resultados histológicos da utilização da matriz óssea homógena conservada em glicerina a 98% e em glutaraldeído 4% em defeitos ósseos cirurgicamente criados em tíbias de rato. Foram selecionados 18 ratos machos, destes, seis como grupo doador de matriz óssea (MOD). Os doze animais restantes foram operados, recebendo a matriz óssea desmineralizada em defeitos cirúrgicos criados em suas tíbias, onde, na direita foi implantado MOD armazenada em glicerina a 98% e na tíbia esquerda MOD armazenada em glutaraldeído a 4%. Foram sacrificados seis animais em cada tempo pós-operatório de 30 e 60 dias. Para análise microscópica, as lâminas foram coradas pelos métodos da hematoxilina e eosina e tricrômio de Masson. Após análise microscópica das peças, foi constatado áreas da implantação da MOD claramente visíveis e constituídas em ambas as amostras, contudo os implantes conservados em glutaraldeído induziram um tecido conjuntivo de uma forma mais desorganizada e fragmentada, quando comparados com os tratados com glicerina, que mostraram maior quantidade de áreas de neoformação óssea em sua periferia. Este estudo mostrou que a glicerina a 98% foi um meio de conservação mais favorável à neoformação óssea da MOD, quando comparado ao glutaraldeído a 4% / Abstract: This study compared the histological results of allogeneic demineralized bone matrix (DBM) preserved in 98% glycerin and 4% glutaraldehyde in experimental bone defects. We selected 18 male rats, of these, six were used as donor of DBM. The remaining twelve animals received in the right tibia DBM stored in 98% glycerin and DBM in 4% glutaraldehyde in the left tibia. Six animals were sacrificed at each postoperative time of 30 and 60 days. For microscopic analysis, slides were stained by the methods of hematoxylin and eosin and Masson Tricomium. Microscopic analysis found areas of deployment of MOD in both samples, but the implants preserved by glutaraldehyde presented themselves in a more disorganized and fragmented compared to those treated with glycerin, which showed a larger amount of bone formation. This study showed that 98% glycerin was a more favorable medium of preservation for bone formation when compared to 4% glutaraldehyde / Mestre

Neste estudo, avaliamos quantitativamente, pela técnica de PCR em tempo real, a transcrição do mRNA dos genes CTGF, TGF-β e KIM-1, em biópsias de pacientes transplantados renais com disfunção do enxerto. Testamos a hipótese de que, em pacientes com doença crônica do transplante renal, essas moléculas estão envolvidas no desenvolvimento de fibrose desses enxertos, apresentando aumento da sua expressão gênica, e que essa expressão aumenta na medida em que o grau de fibrose tecidual é mais intenso. Setenta e sete pacientes transplantados renais que foram submetidos a biópsia renal por disfunção do enxerto entre janeiro de 2008 e dezembro de 2009 foram incluídos no estudo. Pacientes e biópsias foram classificados em quatro grandes grupos de diagnóstico, de acordo com a classificação Banff-2007: necrose tubular aguda (NTA; n = 9), rejeição aguda (RA, n = 49), nefrotoxicidade aguda por inibidor da calcineurina (NIC; n = 10) e fibrose intersticial e atrofia tubular (IF/TA; n = 29). Para os genes CTGF e TGF-β, os níveis de mRNA foram significativamente maiores em IF/TA em comparação com NIC e RA. Para o gene KIM-1, os níveis de mRNA no grupo IF/TA foram maiores do que no grupo NIC. Além disso, verificamos que a expressão dos genes CTGF, TGF-β e KIM-1 aumenta com a intensidade da fibrose observada nos exames patológicos. A avaliação molecular do tecido do enxerto renal pode ser usada para aprimorar o diagnóstico patológico e para o possível desenvolvimento de biomarcadores.

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Neste estudo, avaliamos quantitativamente, pela técnica de PCR em tempo real, a transcrição do mRNA dos genes CTGF, TGF-β e KIM-1, em biópsias de pacientes transplantados renais com disfunção do enxerto. Testamos a hipótese de que, em pacientes com doença crônica do transplante renal, essas moléculas estão envolvidas no desenvolvimento de fibrose desses enxertos, apresentando aumento da sua expressão gênica, e que essa expressão aumenta na medida em que o grau de fibrose tecidual é mais intenso. Setenta e sete pacientes transplantados renais que foram submetidos a biópsia renal por disfunção do enxerto entre janeiro de 2008 e dezembro de 2009 foram incluídos no estudo. Pacientes e biópsias foram classificados em quatro grandes grupos de diagnóstico, de acordo com a classificação Banff-2007: necrose tubular aguda (NTA; n = 9), rejeição aguda (RA, n = 49), nefrotoxicidade aguda por inibidor da calcineurina (NIC; n = 10) e fibrose intersticial e atrofia tubular (IF/TA; n = 29). Para os genes CTGF e TGF-β, os níveis de mRNA foram significativamente maiores em IF/TA em comparação com NIC e RA. Para o gene KIM-1, os níveis de mRNA no grupo IF/TA foram maiores do que no grupo NIC. Além disso, verificamos que a expressão dos genes CTGF, TGF-β e KIM-1 aumenta com a intensidade da fibrose observada nos exames patológicos. A avaliação molecular do tecido do enxerto renal pode ser usada para aprimorar o diagnóstico patológico e para o possível desenvolvimento de biomarcadores.

Orientador: Ricardo Fonseca Ribeiro / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-21T18:02:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Miranda_JoaoBatistade_D.pdf: 8566322 bytes, checksum: 7d32a8587302e7f4014f9390cdcf3ccc (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: Estudou-se, do ponto de vista histológico, em 25 cães machos, adultos, a regeneração óssea que ocorreu na metáfise distai dos fêmures quando se produz um orifício nesta região e o mesmo é preenchido com auto-enxerto fragmentado ou aloenxerto fragmentado e congelado. Como controle, usou-se perfuração semelhante na metáfise proximal das tíbias, sem uso de enxerto. Realizou-se este estudo na segunda, quarta, sexta, oitava e décima segunda semanas de pós-operatório. Verificou-se que a regeneração com os dois tipos de enxertos foi muito semelhante, porém ocorreu em ritmos diferentes e mais rápida com auto-enxerto. O padrão de regeneração óssea com uso de enxertos foi de melhor qualidade do que a ocorrida espontaneamente / Abstract: Bone regeneration was studied, from a hystological point of view, in 25 male, adult, mongrel dogs. A standard hole, of 5.55 milemeters was made in the distal metaphysis of both femura and fild up with fresh crushed autografts or frozen crushed allografts. A similar hole was made in the proximal metaphysis of the tibiae and left empty, as a control. Groups of five animals were sacrified at the 2nd, 4th, 6th, 8th and 12th week postoperatively. After hystological analysis of the implanted area it was concluded that bone regeneration with both grafts was very similar, but the rythm of the return to the normal bone structure was faster with crushed autografts. Analising the fraction of volume occupied by the newly formed trabeculae, it was found to be the same at the 12th week with both grafts and there was more than in the controls / Doutorado / Doutor em Ciências Médicas

Orientador: Irene Lorand-Metze / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T09:37:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Delamain_MarciaTorresan_M.pdf: 3944857 bytes, checksum: 3a7a67439a8b8496098468fa900b5967 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: As Células Progenitoras Periféricas Hemopoiética(CPPH) são hábeis para restaurar a hemopoiese após tratamento quimioterápico mieloablativo. O tratamento com megaquimioterapiaacompanhadopor resgate de CPPH é uma importante abordagem terapêutica utilizada hoje em pacientes com neoplasias hematológicas como Linfoma Não-Hodgkin (LNH),Doença de Hodgkin (LH) e Mieloma Múltiplo (MM). O regime quimioterápicomais efetivo e de intensidademais adequada ainda deve ser definido e pode ser claramente demonstrado que a Célula Progenitora Hemopoiética pode ser influenciada por tratamentos prévios. Vários outros parâmetros também podem influenciar na coleta de CPPH após a quimioterapia de mobilização. A proposta do nosso estudo foi estabelecerparâmetros que possam melhor predizer o dia para iniciar a coleta de CPPH com o objetivo de coletar mais células CD34+ com um menornúmero de procedimentos de leucoaféreses. Nós analisamos,retrospectivamente,pacientes com neoplasias hematológicas tratados em nosso Serviço,que foram submetidos à mobilizaçãopara obter CPPH a fim de realizar o transplante autólogo de medula óssea. Os pacientes foram mobilizados com Ciclofosfamida (4 ou 7g/m2)e G-CSF na dose de 300/lg, sub-cutâneo, diariamente, com o propósito de coletar 5 x 106 células CD34+/Kg. Nós investigamos a influência da idade, sexo, diagnóstico,número de linhas quimioterápicasprévias, hemograma do sangue periférico no dia da mobilização, dia quando os neutrófilos < Ix I09/L e o dia do nadir (incluindo o intervalo de dias destes dois dias - delta). Foi elaboradoum modelo matemático utilizando a correlação linear multivariada com o objetivo de predizer o melhor dia da coleta. Nós analisamos 134pacientes: 36 com DH, 65 LNH, 33 MM. A mediana de idade foi de 28 , 40 e 48 anos respectivamente. O teste de Pearson mostrou uma correlação para o dia dos leucócitos > 1 x 109/L com os valores de hemoglobina no dia O,dia dos neutrófiolos < 1 xl 09/L,dia do nadir e doses de quimioterapia de mobilização utilizada. Para cada grupo de doença,um modelo foi desenvolvido: DH: dia da aférese = delta x 1.5 + 6.8 LNH: dia da aférese =delta x 0.88 +10.1 MM: dia da coleta =delta x 1.35 + 8.8. Em 54 casos foi realizada a determinação seriada do número de células CD34 + no sangue periférico no dia quando os leucócitos atingiram> 1 x1O9/L.Nestes pacientes, a correlação encontrada entre o dia da coleta e hemoglobina,dia dos neutrófilos < 1 x 109/L e o dia do nadir. foi estatisticamente significativa e possibilitou desenvolver um modelo matemáticoseparando os pacientes conforme a doença de base: DH: dia da aférese = delta x 1.5 + 9.1 LNH: dia da aférese = delta x 0.66 + 10.8 MM: dia da aférese = delta x 1.6+ 8.8 De acordo com nosso estudo, cada doença apresenta sua dinâmica de mobilização, possivelmente relacionada com o número de linhas quimioterápicas prévias ou pelo status do microambiente medular. O parâmetro mais importante encontrado e comum a todos os pacientes foi a velocidade de queda dos neutrófilos após a quimioterapia de mobilização / Abstract: Mobilized peripheral blood progenitor cells (PBPC) are able to engraft and restore hemopoiesis after myeloablative therapy. Intense chemotherapy with PBPC rescue is currently an important therapeutic approach in hematological malignancies such as non- Hodgkin's lymphoma(NHL),Hodgkin's disease (HD) and multiple myeloma (MM). The most effective regimen and the adequate intensity of mobilization chemotherapy still remains to be defined and it has been c1earlyshown that the progenitor cell yield can be influenced by intensity of previous treatments. Several other parameters may affect the harvesting of PBPC after mobilizationchemotherapy. The purpose of our study was to establish the parameters that best predict the day to start harvesting of PBPC in order to collect most CD34+ cells with few aphereses. We analysed retrospective data ofpatients with hematological malignancies treated in our Institution,who underwent mobilizationto obtain PBPC in order to perforrn autologous bone marrow transplantation. Patients were mobilized with Cyc1ophosphamide(4 or 7g1m2) and G-CSF 300Jlg,sc,dai1y,aiming to collect 5x1O6cells/Kg. We investigated the influence of age, sex, diagnosis, number of previous chemotherapy lines (nCHT), peripheral blood counts on day of mobilization, day of neutrophils < 1 xl09/L and day of nadir (inc1uding the interval between these two days) on harvesting. Multivariate linear correlation models were built in order to predict the day of best harvesting. We analysed 134 patients: 36HL, 65 NHL and 33 MM. Median age: 28,40 and 48 respectively. The Pearson's test showed a correlation for day of leucocytes > 1 xl 09/L with hemoglobin value of day O, day of neutrophils < Ix1O9/L,day ofnadir and dosis ofmobilization therapy. However, for each disease group a different model could be established: HL: day of apheresis = delta x 1.5+6.8 NHL: day of aphereis =delta x 0.88+ 10.1 MM: day of apheresis = delta x 1.35 +8.8. In 54 cases a serial deterrninationof the number of CD34 + cells in peripheral blood was performed starting on day of peripheral leucocytes > 1 xl 09/L. In these patients, a correlation was found between the day of harvesting and hemoglobin, day of neutrophils <lx1O9/L and day ofnadir. Separating the patients for disease: HL: day of apheresis =delta x 1.5 +9.1 NHL: day of apheresis = delta x 0.66 + 10.8 MM:day of apheresis=deltax 1.6+8.8. According to this study, each disease has its own pattem of mobilization dynamics, possibly related to the amount of previous chemotherapy or the status of bone marrow microenviroment. The most important parameter, cornrnonto alI patients, was the velocity of decline of the neutrophil count afier mobilization chemotherapy / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Clinica Medica