Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La enfermedad de Chagas constituye un problema de salud pública en el continente americano. De acuerdo a la OMS existirían 18.000.000 personas con esta parasitosis. Brasil con 5.000.000 y Argentina con 2.200.000 infectados, son los países más afectados. En Chile se estiman que existen actualmente 200.000 chagásicos crónicos. Existen características clínicas regionales de la Enfermedad de Chagas, siendo la cardiopatía y las megaformaciones las principales manifestaciones en la etapa crónica. El diagnóstico es abordado desde el punto de vista clínico-epidemiológico y se orienta en función de la etapa de la infección. En los casos agudos, debido a la elevada parasitemia, los métodos de elección son parasitológicos y en la etapa crónica, por las fluctuantes y bajas parasitemias, la detección de T. cruzi es más compleja. La Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) en sangre periférica de individuos chagásicos, ha permitido aumentar la sensibilidad diagnóstica. Recientemente, se ha aplicado PCR en deyecciones de triatominos alimentados mediante xenodiagnóstico (XD) en chagásicos crónicos sometidos a tratamiento quimioterapéutico. Con el fin de conocer la sensibilidad y precocidad de la detección de kDNA de T. cruzi en deyecciones de triatominos alimentados mediante XD en pacientes con enfermedad de Chagas crónica, a 25 infectados con XD (+) (Grupo I) y 25 infectados con XD (-) (Grupo II), se aplicó PCR al pool de deyecciones de triatominos incubados durante 30, 60 y 90 días. En todos los casos con XD (+) se detectó la banda específica de 330 pb. Mientras a los 60 días el XD era positivo en el 84% de los casos, PCR tuvo un 100% de positividad. En el Grupo II, de chagásicos con XD (-) a los 30, 60 y 90 días, 9 casos (36%) tuvieron PCR positivo. Los resultados permiten concluir que PCR aplicado en deyecciones de triatominos es una herramienta más precoz para detectar T. cruzi que el XD, ya que a los 30 días, XD y PCR tienen un 44% y un 92% de positividad, respectivamente. El 100% de los casos es pesquisado mediante PCR a los 60 días, mientras que el XD necesita 90 días para obtener el mismo resultado. El XD actúa como un medio de cultivo biológico para amplificar T. cruzi, lo que permite aplicar PCR en las deyecciones, por esta razón, ambas técnicas son complementarias / Financiamiento: Proyectos DI SAL 03/06-2 y Fondecyt 1040731

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Conocer el perfil de alimentación de triatominos silvestres puede ayudar a identificar sus posibles hábitats peridomésticos y su incursión en hábitats humanos para así generar estrategias preventivas y de control para la Enfermedad de Chagas. El objetivo del estudio fue determinar la dieta de Mepraia spinolai, vector de mayor relevancia en el ciclo de transmisión silvestre de Trypanosoma cruzi en Chile, mediante la técnica High Resolution Melting (HRM). Se trabajó con un banco de ADN de 1.462 individuos de M. spinolai capturados en ocho localidades rurales de la Región de Coquimbo; los controles de referencia de este estudio correspondieron a 17 especies de vertebrados. Para verificar la presencia del ADN de las fuentes de alimentación se realizó una amplificación previa a través de qPCR con partidores específicos para vertebrados. Aquellas muestras que no amplificaron fueron descartadas. Para el análisis HRM se amplificó un fragmento de 383 pb del gen Citocromo b mediante qPCR y luego se aumentó la temperatura de 72 °C a 92 °C. Se identificó el 73,4% de las fuentes de alimentación con un predominio de especies silvestres (60,5%) siendo el ratón oliváceo la especie más detectada (17,4%). El 11, 1% de las muestras fueron positivas a humano. Se encontraron diferencias estadísticamente significativas en la dieta de este vector entre estados de desarrollo y lugares de muestreo. Esta especie seguiría siendo generalista en sus preferencias alimentarias, pues se alimenta de especies comunes en la región, por lo que constituiría un riesgo cuando se encuentra cercana a asentamientos humanos. / Knowing the feeding profile of wild triatomines can help to identify their possible peridomestic habitats and their incursion into human habitats in order to generate preventive and control strategies for Chagas’ disease. The objective of this study was to determine the diet of Mepraia spinolai, the most relevant vector in the wild transmission cycle of Trypanosoma cruzi in Chile, using High Resolution Melting (HRM) analysis. We worked with a DNA bank of 1,462 individuals of M. spinolai captured in eight rural locations of the Coquimbo region; the reference controls of this study corresponded to 17 vertebrate species. To verify the presence of DNA from the feeding sources, a previous amplification was carried out through qPCR with specific primers for vertebrates. Those samples that did not amplify were discarded. For the HRM analysis, a 383 bp fragment of the Cytochrome b gene was amplified by qPCR and then the temperature was increased from 72 ° C to 92 ° C. We identified 73.4% of total food sources, the predominance of which were wild species (60.5%), with the olive mouse being the most detected species (17.4%). From the total, 11.1% of the samples were positive to human. Statistically significant differences were found in the diet of this vector between developmental stages and sampling sites. This species would continue being generalist in its food preferences, since it is fed on common species in the region, so it would be a risk when it is close to human settlements / Proyecto Fondecyt: 1140650/ 3170799

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La tripanosomiasis americana es una enfermedad crónica transmitida principalmente por vectores. Estos vectores triatominos hematófagos transmiten Trypanosoma cruzi a una amplia variedad de mamíferos, que por lo general son su fuente de alimento. Esta Memoria de Título tuvo como objetivo determinar el perfil de la alimentación de Mepraia spinolai, un vector triatomino silvestre, presente en zonas endémicas de Chile. Los insectos fueron capturados en las regiones de Coquimbo, Valparaíso y Metropolitana. Las muestras de contenido intestinal fueron analizadas por un ensayo de inmunoabsorción ligado a una enzima (ELISA) estandarizado en este estudio, que identifica y discrimina la presencia de antígenos séricos de Homo sapiens sapiens y nueve especies de animales (Canis familiaris, Felis catus, Capra hircus, Mus musculus, Gallus gallus, Octodon degus, Thylamys elegans, Phyllotis darwini y Oryctolagus cuniculus). Los anti-sueros contra estas especies se utilizaron a diluciones de 1: 40.000 a 1: 800.000, seguido de una IgG de cabra anti-conejo (anticuerpo secundario) diluido 1: 2000, y la adición del sustrato azino-bis 3-etilbenzotiazolin- 6-ácidosulfónico (ABTS). Las absorbancias se leyeron a 405 nm de longitud de onda en un lector de ELISA (Bio-Rad ®). Los resultados se expresaron en forma descriptiva en frecuencias. Nuestros resultados indican que la fuente de alimentación más frecuente en esta área fue P. darwini, seguido de O. degus, O. cuniculus, M. musculus, G. gallus, T. elegans, C. familiaris, F. catus y C. hircus. También se identificaron las fuentes de alimentación mixtas. / American trypanosomiasis is a chronic disease transmitted mainly by vectors. The hematophagous triatomine vectors transmit Trypanosoma cruzi to a wide variety of mammals, which usually are their food source. This Undergraduate Thesis aimed to determine the feeding profile of Mepraia spinolai, a sylvatic triatomine vector, present in endemic areas of Chile. The insects were captured in the regions of Coquimbo, Valparaiso and Metropolitana. Samples of intestinal contents were analyzed by an Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) standardized in this study, that identifies and discriminates the presence of serum antigens from Homo sapiens sapiens and nine animal species (Canis familiaris, Felis catus, Capra hircus, Mus musculus, Gallus gallus, Octodon degus, Thylamys elegans, Phyllotis darwini and Oryctolagus cuniculus). Anti-sera against these animals were used at dilutions of 1: 40,000 to 1: 800,000, followed by a secondary goat anti-rabbit IgG diluted 1: 2000, and the addition of azino-bis substrate 3-etilbenzotiazolin- 6-ácidosulfónico (ABTS). The absorbances were read at 405 nm wavelength on an ELISA reader (Bio-Rad ®). The results were descriptively expressed in frequencies. Our data indicate the most frequent feeding source in this area was P. darwini, followed by O. degus, O. cuniculus, M. musculus, G. gallus, T. elegans, C. familiaris, F. catus and C. hircus. Mixed food sources were also identified. / Financiamiento: Proyecto Fondecyt No. 1100339 y Proyecto Fondecyt Iniciación No. 11110251.