Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2015. / A incidência e a prevalência de sobrepeso e obesidade têm aumentado bastante nas últimas décadas, em quase todos os países. Este fenômeno não é explicado apenas por mudanças do estilo de vida, o que levou a considerar a influência de outros fatores, como os chamados desreguladores endócrinos, e mais especificamente os obesogênicos ambientais. O tributilestanho (TBT) é um produto químico tóxico utilizado para vários fins industriais, tais como desinfecção de águas de refrigeração industrial, preservação de madeira, agentes anti-incrustantes em tintas de barcos e, portanto, está amplamente presente, e em níveis consideráveis, no ecossitema marinho e na água doce. O cloreto de TBT já é conhecido por desempenhar atividade desreguladora endócrina e influencia, inclusive, a diferenciação de adipócitos ex vivo e in vivo; no entanto, os demais compostos da família dos organoestânicos são pouco estudados. Diante disso, a proposta deste trabalho foi investigar a ação do benzoato e do iodeto de TBT nos receptores nucleares mais relevantemente envolvidos na adipogênese, o PPARγ, o RXRα e o GRα, e também sobre a diferenciação de adipócitos em cultura, com a utilização de pré-adipócitos murinos 3T3-L1 e células mesenquimais murinas C3H10T1/2. A influência do benzoato e iodeto de TBT sobre sobre a atividade transcricional dos receptores nucleares estudados foi investigada por meio de ensaios de gene repórter em células HeLa. Para a investigação de seu efeito sobre a adipogênese, células 3T3-L1 foram induzidas a diferenciar-se em adipócitos com insulina e tratadas por 10 dias com veículo, rosiglitazona ou os DEs testados, e as células C3H10T1/2 foram induzidas a diferenciar-se em adipócitos com isometilbutilxantina, insulina e dexametasona e tratadas por 10 dias com veículo, rosiglitazona ou com os DEs testados. A diferenciação em adipócitos foi determinada pela coloração de lipídeos intracelular com óleo vermelho O e pela expressão do RNAm do gene que codifica a proteína ligadora de ácidos graxos adipocitária (Fabpa). Foi observado que o benzoato e iodeto de TBT induziram a atividade transcricional do PPARγ e do RXRα nas maiores concentrações testadas, de forma comparável ao organoestânico já descrito como agonista destes receptores, o cloreto de TBT. Não houve indução da atividade transcricional do GRα por nenhum dos TBTs testados. Consistentemente com sua atividade agonista parcial em PPARγ e RXRα, o benzoato e iodeto de TBT induziram aumento do acúmulo lipídico intracelular e da expressão de Fabpa nos pré-adipócitos 3T3-L1, nas menores concentrações testadas, em comparação com as células tratadas com veículo, porém menos acentuado em relação ao observado nas células tratadas com rosiglitazona. Nas células mesenquimais C3H10T1/2, foi observado aumento do acúmulo lipidico intracelular e da expressão de Fapba em resposta às maiores concentrações testadas de benzoato e iodeto de TBT, também menos acentuado em comparação com o observado nas células tratadas com rosiglitazona. Em conjunto, os resultados sugerem que o benzoato e o iodeto de TBT apresentam potencial adipogênico fraco, por mecanismos dependentes de PPARγ e RXRα. / The incidence and prevalence of overweight and obesity have increased dramatically over the last decades, almost in every country. Because this is not solely explained by chanes in lifestyle, it is considered that other factors, such as endocrine disrupters that act as environmental obesogens may play arole. Tributyltin (TBT) is a toxic chemical used for varied industrial purposes, such as disinfection of industrial refrigeration water, wood preservation, as anti-incrusting agents in boats and is therefore widely present in the marine ecosystem and sweet water at significant levels. TBT chloride is know for its endocrine disrupting activity and has been shown to influence adipocyte differentiation both ex vivo and in vivo. However, other organostannic compounds have been poorly studied. Therefore, the aim of this work was to investigate the activity of TBT benzoate and iodide on nuclear receptors which play a major role on adipocyte differentiation, PPARγ, RXRα and GRα, and also on adipocyte differentiation in culture, by using murine 3T3-L1 preadipocytes and murine C3H10T1/2 mesenchymal cells. The influence of TBT benzoate and iodide on the transcriptional activity of nuclear receptors was investigated with reporter gene assays in HeLa cells. For the investigation of their effect on adipogenesis, 3T3-L1 were induced to differentiate in adipocytes with insulin and treated for 10 days with vehicle, rosiglitazone and the endocrine disrupters. C3H10T1/2 cells were induced to differentiate with isomethylbutylxanthine, insulin and dexamethasone and treated for 10 days with vehicle, rosiglitazone and the endocrine disrupters. Adipocyte differentiation was assessed by oil red O staining of intracellular lipid and by the expression of adipocyte fatty acid binding protein mRNA (Fabpa). Both TBT benzoate and iodide induced the transcritptional activity of PPARγ and RXRα at the higher concentrations tested, comparably to TBT chloride, the organostannic compound that was previously described as a partial PPARγ and RXRα agonist. Neither compounds induced GRα transcriptional activity. In keeping with their partial agonist activity on PPARγ e RXRα, TBT benzoate and iodide increased intracellular lipid accumulation and Fabpa expression in 3T3-L1 preadipocytes, at the smaller concentrations tested, when compared to vehicle-treated cells, although to a lesser extent than in rosiglitazone-treated cells. In C3H10T1/2 mesenchymal cells, both endocrine disrupters induced an increase in intracellular lipid accumulation and Fapba at the higher concentrations tested, also to a lesser extent that in rosiglitazone-treated cells. Taken together, these findings suggeste that TBT benzoate and iodide have a weak adipogenic potential, possibly by PPARγ and RXRα-dependent mechanisms.

Submitted by Amanda Silva (amanda.osilva2@ufpe.br) on 2015-03-05T12:31:13Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Bruno Varella Motta da Costa.pdf: 1233385 bytes, checksum: e9a0de64646f49732066a46b40d5a527 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-05T12:31:13Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Bruno Varella Motta da Costa.pdf: 1233385 bytes, checksum: e9a0de64646f49732066a46b40d5a527 (MD5) Previous issue date: 2013 / CNPq / O tributilestanho (TBT) é muito tóxico para organismos marinhos e tem sido reportado como interferente endócrino para moluscos e crustáceos. Os objetivos deste trabalho foram revisar a toxicidade aguda do TBT para crustáceos e avaliar a toxicidade deste contaminante na água e no sedimento para o copépodo Tisbe biminiensis. A revisão da toxicidade foi realizada a partir de dados extraídos da base de dados da Pesticide Action Network (PAN). Os dados foram agrupados por critérios taxonômicos, experimentais e químicos. A revisão indicou que as espécies de copépodos são mais sensíveis ao TBT em relação a outros grupos de crustáceos. Não há diferenças significativas entre os resultados de testes estático, semi-estático e de fluxo contínuo. Também não há diferença de toxicidade entre os compostos mais empregados em bioensaios: óxido, fluoreto e cloreto de TBT. A toxicidade aguda do TBT na água para fêmeas ovígeras de T. biminiensis foi avaliada em exposições de 48 h. As CL50-24h e CL50-48h médias foram 37 e 36 μg TBT L-1, respectivamente. A razão entre essas CL50 em torno de 1 é menor do que aquelas obtidas para cromo e amônia em bioensaios com T. biminiensis, sugerindo que esta espécie absorve o TBT mais rapidamente que o cromo e amônia. T. biminiensis foi menos sensível ao TBT relativamente a outras espécies de copépodos bentônicos. Entretanto, copépodos bentônicos são menos sensíveis ao TBT do que copépodos planctônicos. Nos bioensaios com sedimento, avaliou-se a toxicidade letal (CL50) e sub-letal (CE50, efeito sobre a fecundidade) do TBT em exposições de 96 h. Foi também avaliado o efeito da liofilização sobre estes parâmetros de toxicidade. A CL50- 96h média do TBT foi de 31 μg g-1 peso úmido (p.u.), enquanto a CE50-96h média sobre a fecundidade total foi de 5,2 μg g-1 p.u. Os bioensaios revelaram que T. biminiensis é mais sensível ao TBT do que outros organismos (anfípodo, poliqueta e peixe). A CL50- 96h no sedimento se ajustou à predição feita a partir da teoria de equilíbrio de partição água-sedimento, sugerindo que o TBT atingiu equilíbrio dinâmico durante os bioensaios. A manipulação do sedimento através da liofilização aumentou a toxicidade aguda do mesmo quando comparado aos bioensaios com sedimento úmido. Por outro lado, houve uma atenuação na toxicidade aguda do sedimento liofilizado ao longo de 30 dias de estocagem em freezer. Apesar disso, a liofilização não teve efeito sobre a toxicidade sub-letal do sedimento. A liofilização foi vantajosa porque reduziu a variabilidade das CL50-96h e isto pode ser resultado da eliminação de micro-gradientes físico-químicos no sedimento. Como desvantagem da liofilização, destaca-se a eliminação dos micro-gradientes físico-químicos do sedimento, que pode dificultar a caracterização da toxicidade in situ de amostras coletadas no campo. Novos estudos devem considerar o efeito da liofilização sobre amostras fortificadas com metais e outros contaminantes orgânicos a fim de melhor avaliar essa técnica de manipulação.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2017. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2017-08-08T19:05:49Z No. of bitstreams: 1 2017_SimoneBatistaPiresSinoti_PARCIAL (2).pdf: 2462859 bytes, checksum: 39e1c4881cdc7de4274ac75c5279b0d9 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-10-06T20:34:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_SimoneBatistaPiresSinoti_PARCIAL (2).pdf: 2462859 bytes, checksum: 39e1c4881cdc7de4274ac75c5279b0d9 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-06T20:34:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_SimoneBatistaPiresSinoti_PARCIAL (2).pdf: 2462859 bytes, checksum: 39e1c4881cdc7de4274ac75c5279b0d9 (MD5) Previous issue date: 2017-10-06 / A obesidade afeta grande parte da população mundial, tornando-se um fator de risco para doenças como hipertensão, doenças cardiovasculares e diabetes tipo 2. Além da alimentação, fatores genéticos e estilo de vida, a obesidade pode estar associada à exposição de poluentes químicos capazes de funcionar como desreguladores endócrinos (DE). O cloreto de tributilestanho (TBTC) caracterizado como DE é capaz de ativar os receptores nucleares PPARy e RXR, promovendo a adipogênese. Neste contexto, este estudo investigou os efeitos diretos do TBTC no metabolismo de camundongos C57Bl/6 submetidos à dieta normolipídica ou dieta hiperlipídica. Os camundongos alimentados com dieta normolipídica foram tratados com TBTC – diluído na água de beber, nas concentrações de 1, 5, ou 25 μg/Kg, e apresentaram tendência de maior ganho de massa corporal com o tratamento de TBTC na concentração de 5 μg/kg. Os animais alimentados com a dieta hiperlipídica e induzidos à hiperglicemia foram tratados com rosiglitazona 10 mg/Kg ou GQ-16 40 mg/Kg (ambos compostos sensibilizantes de insulina), ou TBTC nas concentrações de 1 ou 5 μg/kg. Os animais tratados com rosiglitazona e GQ-16 apresentaram os níveis glicêmicos reduzidos, porém o mesmo não foi observado para os animais tratados com TBTC. Não houve diferença estatística significante entre os grupos no que se refere às massas do tecido adiposo branco e ao consumo de água e dieta, tanto nos animais alimentados com a dieta normolipídica quanto hiperlipídica. No tecido adiposo marrom dos animais alimentados com a dieta hiperlipídica, o grupo tratado com rosiglitazona apresentou um aumento na massa enquanto o grupo tratado com GQ-16 apresentou uma redução na massa quando comparados ao controle. Neste mesmo tecido, rosiglitazona e TBTC 5 μg/kg, na análise morfológica, mostraram um maior acúmulo de lipídios. Também foi observado no tecido hepático dos animais alimentados com dieta hiperlipídica, uma maior quantidade de gotas lipídicas nos hepatócitos dos grupos tratados com rosiglitazona e TBTC 5 μg/Kg. Estes resultados sugerem que o TBTC na concentração de 5 μg/kg pode induzir esteatose hepática em camundongos C57Bl/6. / Obesity affects large part of the world's population, becoming a risk factor for diseases such as hypertension, cardiovascular disease and type 2 diabetes. In addition to diet, genetic factors and lifestyle, obesity may be associated with exposure of chemical pollutants, capable of functioning as endocrine disrupters (ED). Tributyltin chloride (TBTC) characterized as ED can activate nuclear receptors PPARy and RXR, promoting adipogenesis. In this context, this study investigated the direct effects of TBTC on the metabolism of C57Bl/6 mice submitted to the normolipid diet or hyperlipidic diet. The mice fed a normolipid diet were treated with TBTC - diluted in the drinking water - at concentrations 1, 5, or 25 μg/Kg, showing a trend of greater body mass gain with TBTC treatment at 5 μg/Kg. Animals fed with hyperlipidemic diet and hyperglycemia-induced were treated with rosiglitazone 10 mg / kg or GQ-16 40 mg/Kg (both insulin sensitizing compounds), or TBTC at concentrations of 1 or 5 μg / kg. Animals treated with rosiglitazone and GQ-16 had reduced glycemic levels, but this was not observed for the animals treated with TBTC. There was no statistically significant difference between the groups related with the masses of white adipose tissue and the consumption of water and diet, both in animals fed with normolipid diet and hyperlipid. In brown adipose tissue of the animals fed with hyperlipid diet, the rosiglitazone group showed a mass increase while the group treated with GQ-16 presented a mass reduction when compared to the control. In this same tissue, rosiglitazone and TBTC 5 μg / kg in the morphological analysis, showed a greater lipid accumulation. A higher amount of lipid droplets in the hepatocytes of the rosiglitazone and TBTC 5 μg / kg treated groups, was also observed in the hepatic tissue of the animals fed with hyperlipid diet. These results suggest that TBTC at 5 μg / kg concentration may induce hepatic steatosis in C57Bl / 6 mice.