Graduation date: 1994

Texte remanié de: Th.--Sci. nat.--Université d'Aix-Marseille I, 1985. / Bibliogr. p. 171-186. Résumé en espagnol, anglais et français.

Thesis (Ph. D., Soil and Land Resources)--University of Idaho, May 2007. / Major professor: Guy R. Knudsen. Includes bibliographical references. Also available online (PDF file) by subscription or by purchasing the individual file.

Thesis (M.S.)--University of Wisconsin--Madison. / Typescript. eContent provider-neutral record in process. Description based on print version record. Includes bibliographical references (leaves 57-60).

Thesis (M.A.)--Kutztown State College, 1980. / Source: Masters Abstracts International, Volume: 45-06, page: 3057. Typescript (Xerox copy). Abstract precedes thesis as preliminary leaf vi. Includes bibliographical references (leaves 33-36).

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Agroecossistemas, Florianópolis, 2009 / Made available in DSpace on 2012-10-24T11:13:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 269681.pdf: 3789010 bytes, checksum: 60affac6165ae4b0cd8a951d7c84b15a (MD5) / A compostagem é um processo que garante o retorno da matéria orgânica e nutrientes ao solo. Estudos apontam o composto como um meio naturalmente supressivo a patógenos de plantas, o que pode estar relacionado com a presença de Trichoderma spp. no meio. Os objetivos do presente trabalho foram: comparar três métodos de isolamento de Trichoderma spp. do composto; compreender a colonização do composto com uma semana, um e dois anos de maturação comparado com o solo de áreas adjacentes ao pátio de compostagem; e verificar características úteis de Trichoderma spp. para a utilização no controle biológico de fitopatógenos. Método de iscas; diluição em série de soluções do solo e plaqueamento direto de fragmentos de composto, foram os métodos utilizados para o isolamento de Trichoderma spp. O método de plaqueamento direto foi considerado o mais viável para verificar a presença de Trichoderma spp. Esse método foi utilizado para selecionar oito isolados de Trichoderma spp.; três do composto de um ano (N1, N2 e N3), três do composto de dois anos (M1, M2 e M3), e dois do solo da mata adjacente ao pátio (S2 e S3). Os isolados M1 e M2 foram identificados, respectivamente, como Trichoderma asperellum e Hypocrea lixii. Todos os isolados foram comparados com Trichoderma asperellum de formulação comercial (TC) quanto ao crescimento micelial, esporulação em BDA (batata-dextrose-ágar) e confrontados com Sclerotinia sclerotiorum. Em seguida, apenas um dos isolados (M2) do composto de dois anos e o TC foram confrontados com S. sclerotiorum, Rhizoctonia sp. e Fusarium solani. O crescimento micelial entre isolados do composto e do solo foram semelhantes. Isolados do composto de um ano apresentaram a maior esporulação. Isolados do composto de dois anos competiram melhor frente aos patógenos, por espaço e nutrientes, um dos possíveis mecanismos para a supressividade natural do composto.

Made available in DSpace on 2015-04-11T13:38:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Laryssa da Silva Melo.pdf: 834446 bytes, checksum: 1dbffe1130e351818bfc66f05b6077ae (MD5) Previous issue date: 2009-10-14 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Trichoderma are anamorphic fungi belonging to the class of Hifomicetos, also called imperfect fungi, or asexual conidial and whose gender Hypocrea teleomorph. They are free-living fungi, distributed throughout the world and found in different soil temperatures, especially those containing organic matter. Usually are not considered important human pathogens, but there are some reports indicating occasional pathogenicity of some species. Its easy handling and in vitro, stability and viability of colonies preserved this kind are a big target for biotechnology research. Because of these characteristics were isolated Trichoderma from plant Victoria amazonica, Rollinia sp. Murraya paniculata and Strychnos cogens; wood Scleronema micranthum, known as cardeiro; jatoba (Hymenaea courbaril), land of cubiu culture (Solanum sessiliflorum) and Indian black earth, in order to identify the molecular biology, the species level, such isolates and to assess their ability to produce cellulolytic enzymes. Of the 30 lines obtained were cultured spore, which were preserved in mineral oil, Castellani and method in 10% glycerol. From the suspension in glycerol, each sample was inoculated in 20ml of 10μL BD and cultivated 26oC, 100 rpm for 40:00 h. Next was extracted genomic DNA, performed PCR of specific regions of the ITS-1 and ITS-2 ribosomal DNA sequencing and subsequently. For the production of enzymes, the isolates were first grown in induction medium. Were inoculated 10μL of spore solution (glycerol 10%) in 50 mL of solution Manachini where the substratum was used to carboxymethylcellulose. The fungi were incubated at 27 ° C, 120 rpm for 120 hours. The dosage of CMCase was performed using the method of acid Dinitrosalicílico. For the determination of β-glucosidase was used p-nitrophenyl-β-D-glucopyranoside (PNPG) as substrate for the enzyme. The total protein concentration was determined by the Bradford method, using the reagent concentrate commercial Bio-RadTM and bovine serum albumin (ASB) as standard. The result of molecular identification of the first 13 samples revealed the species: T. harzianum, T. koningii, T. asperellum, T. viride, T. ovaslisporum, T. hamatum, T. piluliferum and T. koningiopsis, with a percentage between 96 and 99% identity and 100% reliability. The results indicated CMCase enzyme to low values, less than 0.100 U / mL with the exception of T. koningii (MPCE 10 3.2), T. harzianum (MPCE 2 2.2a), both isolates of M. paniculata, and isolate 1437 identified as Trichoderma sp., from Indian black earth, which showed slightly higher levels of 0.112 and 0.103 and 0.105 U / mL, respectively. For β-glucosidase, the results showed high activity in the vast majority of isolates with emphasis on T. harzianum MPCE 3 3.1 (10.45 U / mL) and T. piluliferum Vrc 2 3.2 (9.71 U / mL). All isolates produced protein in culture medium containing carboxymethylcellulose as substrate inducer / Trichoderma são fungos anamórficos pertencentes à classe dos hifomicetos, também chamados fungos imperfeitos, assexuais ou conidiais e que têm como teleomorfo o gênero Hypocrea. São fungos de vida livre, distribuídos em todo o mundo e encontrados em solos de diversas temperaturas, especialmente naqueles que contém matéria orgânica. Geralmente não são considerados importantes patógenos humanos, mas existem alguns relatos indicando patogenicidade ocasional em algumas espécies. Sua fácil manipulação e cultivo in vitro, estabilidade e viabilidade das colônias preservadas, fazem desse gênero um grande alvo para as pesquisas biotecnológicas. Por tais características, foram isolados Trichoderma das plantas Victoria amazonica, Rollinia sp., Murraya paniculata e Strychnos cogens; da madeira Scleronema micranthum, conhecida como cardeiro; de jatobá (Hymenaea courbaril), do solo de cultura de cubiu (Solanum sessiliflorum) e de terra preta de índio, com o objetivo de identificar, pela biologia molecular, em nível de espécie, tais isolados, bem como avaliar sua capacidade de produção de enzimas celulolíticas. Das 30 linhagens obtidas foram realizadas culturas monospóricas, as quais foram preservadas em óleo mineral, método Castellani e em glicerol 10%. A partir da suspensão em glicerol, de cada amostra foi inoculado 10μL em 20mL de BD e cultivado a 26oC, a 100 rpm por 40:00h. Em seguida foi extraído o DNA genômico, deste realizada a PCR específica para as regiões ITS-1 e ITS-2 do DNA ribossômico e posteriormente o sequenciamento. Para a produção de enzimas, os isolados foram previamente cultivados em meio indutor. Foram inoculados 10μL da solução de esporos (Glicerol 10%) em 50mL de solução de Manachini onde o substrato indutor utilizado foi a carboximetilcelulose. Os fungos foram incubados a 27°C, 120 rpm durante 120 horas. A dosagem de CMCase foi efetuada com base no método do Ácido Dinitrosalicílico. Para a dosagem de β-glucosidase foi utilizado o pnitrofenil- β-D-Glucopiranosídeo (pNPG) como substrato para a enzima. A concentração de proteínas totais foi determinada pelo método de Bradford, utilizando-se o reagente concentrado comercial da Bio-RadTM e albumina de soro bovino (ASB), como padrão. O resultado da identificação molecular das primeiras 13 amostras nos revelaram as espécies: T. harzianum, T. koningii, T. asperellum, T. viride, T. ovaslisporum, T. hamatum, T. piluliferum e T. koningiopsis, com um percentual entre 96 e 99% de identidade e 100% de confiabilidade. Os resultados enzimáticos para CMCase indicaram valores baixos, inferiores a 0,100 U/mL com exceção de T. koningii (MPCe 10 3.2), T. harzianum (MPCe 2 2.2a), ambos isolados de M. paniculata, e o isolado 1437 identificado como Trichoderma sp., proveniente de terra preta de índio, que apresentaram valores um pouco mais altos de 0,112 e 0,103 e 0,105 U/mL, respectivamente. Para β-glucosidase, os resultados apresentados mostraram alta atividade na grande maioria dos isolados com destaque para T. harzianum MPCe 3 3.1(10,45U/mL) e T. piluliferum Vrc 2 3.2 (9,71 U/mL). Todos os isolados produziram proteínas em meio de cultura contendo carboximetilcelulose como substrato indutor

O estudo de fungos celulolíticos tem-se mostrado relevante, tendo em vista o interesse econômico do complexo celulases, especialmente na indústria têxtil e, mais recentemente, para propósitos energéticos. No presente trabalho, a fusão de protoplastos foi utilizada para combinar genótipos de mutantes parcialmente desreprimidos para produção de celulases de Penicillium echinulatum (9A02S1B9) e richoderma harzianum (AS5CH3), utilizando a técnica do doador morto, buscando-se obter recombinantes com maior produção de celulases. Nesta estratégia, ambas as linhagens tiveram seu micélio tratado com Glucanex 0,01 g/mL, para quebra da parede celular. Os protoplastos resultantes da linhagem portadora de marca de resistência ao benomil (9A02S1B9) foram inativados por calor (técnica do doador morto) de 60oC antes da etapa de fusão, a qual após foi induzida por PEG4000 e Ca2+, com protoplastos da linhagem sensível ao benomil (AS5CH3). A partir de um produto de fusão, foram selecionados 24 sub-clones, após estratégias de estabilização e seleção para precocidade e eficiência na formação de halo de hidrólise de celulose em placas de Petri. Os produtos de fusão apresentaram morfologia e esporulação semelhantes a um dos parentais, sendo treze semelhantes à Penicillium, nove semelhantes à Trichoderma e dois mostrando formas alteradas. Os produtos de fusão que segregaram para morfologia de T. harzianum apresentaram a característica de resistência ao benomil, sendo capazes de crescer e esporular em meios contendo até 100 μg/mL deste inibidor. A morfologia, o perfil de bandas, obtidos por RAPD, e o padrão de secreção de celulases dos produtos de fusão foram sempre mais semelhantes a um dos parentais. Os clones apresentaram variação quanto ao halo de hidrólise de celulose em placas de Petri e na atividade sobre papel filtro FPAases, -glicosidase ou endoglicanase, quando crescidas em cultivo submerso ou em estado sólido. Desta variabilidade, verificaram-se aumentos significativos para algumas das linhagens em relação aos parentais. A aplicação da metodologia de fusão de protoplastos para obter recombinantes entre P. echinulatum e T. harzianum, empregando a técnica do doador morto, mostrou-se adequada na geração de variabilidade para produção de celulases. / Submitted by Ana Guimarães Pereira (agpereir@ucs.br) on 2015-02-12T12:22:13Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Barbara Lizandra Perini de Souza.pdf: 2248330 bytes, checksum: 2a20339f50d031a74d2a889ddbe2435e (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-12T12:22:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Barbara Lizandra Perini de Souza.pdf: 2248330 bytes, checksum: 2a20339f50d031a74d2a889ddbe2435e (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The study of cellulolytic fungi has proved to be important, considering economic interest of the cellulase complex, especially in the textile industry and, more recently, for energy purposes. In this work, the protoplast fusion was used to combine genotypes of mutants partially non repressed for cellulases production of Penicillium echinulatum (9A02S1B9) and Trichoderma harzianum (AS5CH3) using the technique dead donor, intending to obtain recombinants with higher cellulases production. In this strategy, both strains had their mycelium treated with Glucanex  0,01 g/mL, to lyse the cell wall. The protoplast obtained from the benomyl-resistant (9A02S1B9) were heat-inactivated (technique of dead donor) at 60ºC, before the step of fusion, induced by PEG4000 and Ca2+, with protoplast of the sensitive-benomyl strain (AS5CH3). Twenty four sub-clones were selected from one fusion product, after stabilization and selection strategies for precocity and efficiency in the formation clearing zones of by cellulose hydrolysis in Petri plates. The fusion products showed similar morphology and sporulation to one of parents, thirteen similar to Penicillium, nine similar to Trichoderma and two showed altered forms. The fusion products which segregate to the morphology of T. harzianum resistance to benomyl, being able to grow and sporulate in media containing up to 100 μg/mL of this inhibitor. The morphology, the profile of bands, obtained by RAPD, and the pattern of cellulase secretion by fusion products were ever more similar to one of parents. The fusants presented variation in the halo of cellulose hydrolysis in Petri plates, and in the activity on filter paper (FPAases), - glicosidase or endoglicanase, when grown submerged cultivation or solid state. From this variability, significant improvement was verified for some of the parental strains. The application of the protoplast fusion methodology to obtain recombinant between P. echinulatum and T. harzianum, using the technique of dead donor, has proved to be adequate to generate variability in the production of cellulases.

O estudo de fungos celulolíticos tem-se mostrado relevante, tendo em vista o interesse econômico do complexo celulases, especialmente na indústria têxtil e, mais recentemente, para propósitos energéticos. No presente trabalho, a fusão de protoplastos foi utilizada para combinar genótipos de mutantes parcialmente desreprimidos para produção de celulases de Penicillium echinulatum (9A02S1B9) e richoderma harzianum (AS5CH3), utilizando a técnica do doador morto, buscando-se obter recombinantes com maior produção de celulases. Nesta estratégia, ambas as linhagens tiveram seu micélio tratado com Glucanex 0,01 g/mL, para quebra da parede celular. Os protoplastos resultantes da linhagem portadora de marca de resistência ao benomil (9A02S1B9) foram inativados por calor (técnica do doador morto) de 60oC antes da etapa de fusão, a qual após foi induzida por PEG4000 e Ca2+, com protoplastos da linhagem sensível ao benomil (AS5CH3). A partir de um produto de fusão, foram selecionados 24 sub-clones, após estratégias de estabilização e seleção para precocidade e eficiência na formação de halo de hidrólise de celulose em placas de Petri. Os produtos de fusão apresentaram morfologia e esporulação semelhantes a um dos parentais, sendo treze semelhantes à Penicillium, nove semelhantes à Trichoderma e dois mostrando formas alteradas. Os produtos de fusão que segregaram para morfologia de T. harzianum apresentaram a característica de resistência ao benomil, sendo capazes de crescer e esporular em meios contendo até 100 μg/mL deste inibidor. A morfologia, o perfil de bandas, obtidos por RAPD, e o padrão de secreção de celulases dos produtos de fusão foram sempre mais semelhantes a um dos parentais. Os clones apresentaram variação quanto ao halo de hidrólise de celulose em placas de Petri e na atividade sobre papel filtro FPAases, -glicosidase ou endoglicanase, quando crescidas em cultivo submerso ou em estado sólido. Desta variabilidade, verificaram-se aumentos significativos para algumas das linhagens em relação aos parentais. A aplicação da metodologia de fusão de protoplastos para obter recombinantes entre P. echinulatum e T. harzianum, empregando a técnica do doador morto, mostrou-se adequada na geração de variabilidade para produção de celulases. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The study of cellulolytic fungi has proved to be important, considering economic interest of the cellulase complex, especially in the textile industry and, more recently, for energy purposes. In this work, the protoplast fusion was used to combine genotypes of mutants partially non repressed for cellulases production of Penicillium echinulatum (9A02S1B9) and Trichoderma harzianum (AS5CH3) using the technique dead donor, intending to obtain recombinants with higher cellulases production. In this strategy, both strains had their mycelium treated with Glucanex  0,01 g/mL, to lyse the cell wall. The protoplast obtained from the benomyl-resistant (9A02S1B9) were heat-inactivated (technique of dead donor) at 60ºC, before the step of fusion, induced by PEG4000 and Ca2+, with protoplast of the sensitive-benomyl strain (AS5CH3). Twenty four sub-clones were selected from one fusion product, after stabilization and selection strategies for precocity and efficiency in the formation clearing zones of by cellulose hydrolysis in Petri plates. The fusion products showed similar morphology and sporulation to one of parents, thirteen similar to Penicillium, nine similar to Trichoderma and two showed altered forms. The fusion products which segregate to the morphology of T. harzianum resistance to benomyl, being able to grow and sporulate in media containing up to 100 μg/mL of this inhibitor. The morphology, the profile of bands, obtained by RAPD, and the pattern of cellulase secretion by fusion products were ever more similar to one of parents. The fusants presented variation in the halo of cellulose hydrolysis in Petri plates, and in the activity on filter paper (FPAases), - glicosidase or endoglicanase, when grown submerged cultivation or solid state. From this variability, significant improvement was verified for some of the parental strains. The application of the protoplast fusion methodology to obtain recombinant between P. echinulatum and T. harzianum, using the technique of dead donor, has proved to be adequate to generate variability in the production of cellulases.

Orientadores: Aline Carvalho da Costa, José Geraldo da Cruz Pradella / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campoinas, Faculdade de Engenharia Química / Made available in DSpace on 2018-08-21T13:46:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira_BeatrizMerchelPiovesan_M.pdf: 1535419 bytes, checksum: fa059ca3da52ab10581615a140f2bc82 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A produção de enzimas lignocelulolíticas por Trichoderma reesei RUT-C30 foi otimizada em frascos agitados e bioreatores de 0,5 e 3L visando maximizar os títulos enzimáticos e produtividade volumétrica. Para isso, foram testadas como fontes de carbono (1% m/v) bagaço de cana-de-açúcar pré-tratado por processo hidrotérmico (BH) ou por explosão a vapor, com (BED) e sem (BEX) deslignificação, em meio contendo proteose peptona, tween 80 e solução salina. Celulose comercial Celufloc200 (CE) foi testada para comparação. Maior produção de enzimas celulolíticas foi obtida com a utilização de BED (1,38 ± 0,11 FPU/mL) quando em comparação com CE (0,78 ± 0,14 FPU/mL) em frascos agitados, sendo esse material utilizado como fonte de carbono nos demais ensaios. A produção de hemicelulases (xilanases) foi similar para os dois meios (em U/mL): 18,03 ± 1,56 para BED e 20,04 ± 1,50 para CE. A variação da concentração da solução salina, da fonte de carbono e dos nutrientes permitiu aumento da produção de enzimas celulolíticas para 1,89 ± 0,12 (meio com o dobro de solução salina) e 2,73 ± 0,09 (meio com 2% m/v de BED e nutrientes proporcionais) em frascos agitados. A suplementação da fonte de carbono com farelo de soja, sacarose, licor de pré-tratamento, lactose e glicerol foi estudada e farelo de soja foi selecionado como suplemento do meio. A elaboração de um meio de mistura contendo o dobro de solução salina, farelo de soja e nutrientes proporcionais à concentração da fonte de carbono (meio MIX) permitiu o aumento da produção de enzimas para, em FPU/mL: 3,33 ± 0,10 (MIX15: contém 1,5% m/v de BED), 3,78 ± 0,33 (MIX20) e 3,67 ± 0,34 (MIX30) em frascos agitados. As atividades de xilanases foram superiores a 130 U/Ml utilizando os meios de mistura. Em bioreator de 3L a produção de enzimas celulolíticas utilizando o meio MIX15 atingiu 2,29 ± 0,20 FPU/mL. Para o meio padrão (BED 1% m/v) o pico de atividade obtido foi de 1,14 ± 0,32 FPU/mL. O aumento da concentração da fonte de carbono em bioreator para 3% (m/v) a partir do meio MIX15 resultou no aumento da atividade celulolítica para 4,20 ± 0,34 FPU/mL. Os picos de atividade de xilanases atingiram valores superiores a 180 U/mL em bioreator. O desempenho do coquetel enzimático produzido no meio MIX15 foi avaliado na hidrólise de BED e BH, e comparado ao coquetel produzido no meio padrão e a um coquetel comercialmente disponível (Sigma). Os valores de conversão de celulose em glicose foram superiores para o coquetel MIX15 em relação aos demais coquetéis ao se utilizar 3 ou 5% de sólidos, com ou sem adição de beta-glucosidase comercial (Novozym 188) / Abstract: The production of lignocellulolytic enzymes by Trichoderma reesei RUT-C30 was optimized in shake flasks and 0.5 and 3L bioreactors to maximize the enzymatic titles and volumetric productivity. The carbon sources considered were sugar cane bagasse (1% w/v) pretreated by the hydrothermal process (BH) or steam explosion, with (BED) and without (BEX) delignification. The medium contained proteose peptone, Tween 80 and saline solution. Commercial cellulose Celufloc200 (CE) was used for comparison. Increased production of cellulolytic enzymes in flasks was obtained with BED as carbon source (1.38 ± 0.11 FPU / ml) when compared to CE (0.78 ± 0.14 FPU / ml), and this material was selected as carbon source for further studies. The production of hemicellulases (xylanases) was similar for the two carbon sources (U / mL): 18.03 ± 1.56 with BED and 20.04 ± 1.50 with CE. Variation of the concentration of the salt solution, carbon source and nutrients led to an increased production of cellulolytic enzymes: 1.89 ± 0.12 (medium with doubled saline solution concentration) and 2.73 ± 0.09 (medium with 2% w/v BED and nutrients proportional to the carbon source) in shake flasks. Supplementation of the carbon source with soybean meal, sucrose, pretreatment liquor, lactose and glycerol was studied and soybean meal has been selected as supplement. The preparation of a mixture medium containing doubled saline solution, soybean meal and nutrients proportional to the concentration of the carbon source allowed increasing the production of enzymes for (in FPU / ml): 3.33 ± 0.10 (MIX15 - containing 1.5% w/v BED) , 3.78 ± 0.33 (MIX20) and 3.67 ± 0.34 (MIX30) in shake flasks. Xylanase activities were higher than 130 U/mL. In a 3L bioreactor, production of cellulolytic enzymes using MIX15 medium reached 2.29 ± 0.20 FPU / mL. For the standard medium (BED 1% w/v) the peak activity was 1.14 ± 0.32 FPU / mL. Increasing the concentration of the carbon source in the bioreactor to 3% w/v starting from MIX15 resulted in a cellulolytic activity of 4.20 ± 0.34 FPU / mL. Xylanase activity reached values higher than 180 U/mL in the bioreactor. The performance of the enzyme cocktail produced in MIX15 medium was evaluated for the hydrolysis of BED and BH, and compared to the cocktail produced in the standard medium and to a cocktail commercially available (Sigma). The values of conversion of cellulose to glucose were higher for the cocktail MIX15 compared to the other cocktails when using 3 or 5% solids, with or without adding commercial beta-glucosidase (Novozym 188) / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Químicos / Mestra em Engenharia Química