The objective of this study was to compare the time to final set and compressive strength of the white mineral trioxide aggregate (MTA) formulation to the original grey MTA. To test compressive strength, each MTA formulation was placed into Teflon split molds for four hours at 37° Celsius (C) and 100% humidity. Compressive strength of both MTA formulations was measured at 24 hours (n=12) and 21 days (n=19) using an Instron Testing Machine. For determination of time to final set, each MTA formulation (n=6) was placed into a metal mold and maintained at 37° C and 100% humidity while setting. At five-minute time intervals, an indenter needle was lowered onto the surface of the MTA material and allowed to remain in place for five seconds before it was removed from the specimen surface. This process was repeated until the needle failed to make a complete circular indentation in the MTA specimen. Results of a two-way ANOVA indicate that white MTA had a significantly higher compressive strength (mean=32.7 MPa) than grey MTA (mean=25.2 MPa) at 24 hours and no statistically significant differences at 21 days (white mean=38.6 MPa and grey mean=38.0 MPa). Using one-way ANOVA, results indicate that grey MTA had a significantly longer time to final setting time (mean=296 min) compared to white MTA (mean=276 min). Based on this study, the results suggest that white MTA is an effective substitute for grey MTA.

O meduloblastoma (MB) é o tumor maligno cerebral mais frequente em crianças e adolescentes. Trata-se de uma doença heterogênea sob o aspecto genético, sendo reconhecido ao menos 12 subgrupos genético-moleculares, com impacto na apresentação clínicopatológica. Pacientes do subgrupo SHH apresentam mutação somática em genes da via Hedgehog, incluindo PTCH1, SUFU, SMO e ativação dos genes GLI1 e GLI2. Mutações no gene TP53 também podem estar presentes, particularmente em crianças acima de 3 anos, e conferem um pior prognóstico. O trióxido de arsênio (ATO) possui ação inibitória sobre os genes da via SHH, mas pouco se sabe sobre sua ação no MB. O presente estudo objetivou avaliar os potenciais efeitos citotóxicos e radiossensibilizantes do ATO sobre as linhagens de MB pediátrico grupo SHH (ONS-76: TP53-selvagem; DAOY: TP53-mutado c.725G>T e UW402, TP53-mutado c.464C>A). Foram comparadas as taxas de proliferação celular, clonogenicidade e apoptose nas linhagem de MB antes e após o tratamento com ATO. Também foi avaliada a clonogenicidade da associação droga e irradiação. Foram investigadas proteínas responsáveis pelo reparo dos danos causados ao DNA (Rad51 e Ku86) através de Western Blot. Foi realizada análise da expressão gênica relativa por QPCR e estudados genes que integram a via SHH, assim como efetores finais desta via de sinalização. A viabilidade celular foi monitorada nos tempos de 24 à 120 horas pelo ensaio de resazurina. A taxa de apoptose foi mensurada por meio de marcação com anexina e iodeto de propídio e avaliada por citometria de fluxo. Os ensaios foram realizados em triplicata e analisados por One Way e Two Way ANOVA, utilizando o pós-teste Bonferroni, e sendo considerados resultados significativos valores de p<0,05. Foi possível observar uma diminuição na viabilidade celular após tratamento com ATO nas três linhagens estudadas. Além disso, houve uma diminuição significativa na capacidade clonogênica. Observou-se também um aumento nas taxas de apoptose nas linhagens, sendo acima de 70% de morte celular para a linhagem DAOY. Foi observado que o tratamento com ATO radiossensibilizou a linhagem UW402, TP53-mutado. Não foi encontrada associação com proteínas de reparo no tempo e dose estudados. O estudo de expressões relativas dos genes estudados demonstrou inibição, principalmente nas linhagens de interesse DAOY e UW402 -(SHH TP53) mutado. Estes achados in vitro apontam para um efeito citotóxico do ATO sobre as linhagens de MB pediátrico, podendo apresentar efeito radiossenssibilizante. O ATO deve ser melhor explorado como droga alvo para MB SHH+, em caráter experimental. / Medulloblastoma (MB) is the most common malignant brain tumor in children and adolescents. It is a heterogeneous disease under the genetic aspect, with at least 12 geneticmolecular subgroups being recognized, with impact on the clinical-pathological presentation. Patients of the SHH subgroup present somatic mutation in genes of the Hedgehog pathway, including PTCH1, SUFU, SMO and activation of the genes GLI1 and GLI2. Mutations in the TP53 gene may also be present, particularly in children over 3 years, and confer a worse prognosis. The arsenic trioxide (ATO) has an inhibitory action on SHH pathway genes, but little is known about its action. The present study aimed to evaluate the potential cytotoxic and radiosensitizing effects of ATO on the pediatric MB cells of SHH group (ONS-76: TP53- wild type; DAOY: TP53-mutated c.725GT and UW402 TP53-mutated c.464C>A). Cell proliferation, clonogenicity and apoptosis were compared in the MB strains following ATO treatment. The clonogenicity assay of ATO combined with irradiation was also evaluated. We investigated proteins responsible for repairing DNA damage and performed Western blotting of the Rad51 and Ku86 proteins. Gene expression analysis was performed using the real-time PCR. Selected genes integrating the SHH pathway as well as final effectors of signaling were also assesed. Cell viability was monitored at endpoints from 24 to 120h by the resazurin assay. The rate of apoptosis was measured by labeling with annexin and propidium iodide, as assessed by flow cytometry. The assays were performed in triplicate and analyzed by One Way and Two Way ANOVA, using the Bonferroni post-test, and being considered significant results a p value less than 0.05. It was possible to observe a decrease in cell viability in the three studied strains. In addition, there was a significant decrease in clonogenic capacity. There was also an increase in the apoptosis rates in the lineages, being above 70% of cell death for the DAOY lineage. It was found that the ATO treatment radiosensitized the UW402 strain - TP53-mutated. No association with time and dose of ATO and irradiation on the repair proteins was found. The study of the relative expressions of the studied genes demonstrated inhibition, mainly in the mutant line of interest DAOY and UW-402, a SHHTP53 mutated cell-line. These in vitro findings point to a cytotoxic effect of ATO on pediatric medulloblastoma lines, with a potential radiosensitizing effect. This study offers rationale for further assesment of ATO on SHH-MB, either alone or along with radiotherapy as a preclinical drug.

Ao longo dos últimos anos, têm sido expressivo o interesse pelo estudo do Agregado de Trióxido Mineral (MTA) devido às boas propriedades físico-químicas e biológicas que apresenta. Da mesma forma houve um grande interesse no cimento Portland, já que, segundo os trabalhos científicos encontrados na literatura, apresentam composição e desempenho semelhantes. Este trabalho teve como objetivo avaliar o comportamento biológico do Endo-CPM-Sealer e do clínquer do cimento Portland puro e acrescido com sulfato de cálcio (com 2% e 5% do seu peso total) no tecido subcutâneo de ratos, para analisar as possíveis alterações teciduais que possam induzir. Também foi avaliado o tempo de presa dos quatro cimentos. Empregaram-se 24 ratos machos da linhagem Wistar, divididos em três grupos para cada período experimental (15, 30 e 60 dias). Cada animal recebeu quatro tubos de polietileno (preenchidos com os cimentos experimentais e selados numa das extremidades com guta-percha que serviu como controle) no tecido subcutâneo da região dorsal. Decorridos os períodos experimentais, os animais foram mortos e os tubos foram removidos com tecido adjacente suficiente para análise microscópica. Os resultados mostraram que o Endo-CPM-Sealer, produziu a maior resposta inflamatória nos períodos de 15 e 60 dias, sendo estatisticamente significante somente no primeiro período. O clínquer do cimento Portland puro, foi o que produziu a menor resposta tecidual inflamatória, em todos os períodos. Todos os materiais avaliados apresentaram-se semelhantes no período de 60 dias e não apresentaram diferença estatisticamente significante. Com relação ao tempo de presa inicial, o clínquer do cimento Portland puro, foi o que apresentou o menor valor (5min), e o menor valor do tempo de presa final foi dado pelo Endo-CPM-Sealer (22min), seguido pelo clínquer do cimento Portland puro (55min). / During the last years, there has been considerable interest in the investigation of Mineral Trioxide Aggregate (MTA), due to its good physicochemical and biological properties. Similarly, there was great interest in Portland cement, since scientific studies in the literature reveal that these materials present similar composition and performance. This study aimed to evaluate the biological behavior of Endo-CPM-Sealer and clinker of Portland cement, either pure or combined with calcium sulfate (2% and 5% of the total weight), by implantation in subcutaneous tissue of rats, to analyze the possible tissue alterations that may be induced. The setting time of the four cements were also evaluated. The study was conducted on 24 male Wistar rats, divided into 3 groups for each study period (15, 30 and 60 days). Each animal underwent placement of four polyethylene tubes (filled with the experimental materials and sealed with gutta-percha at one end, which served as control) in the subcutaneous tissue at the dorsal region. After the study periods, the animals were killed and the tubes were removed with enough surrounding tissue for microscopic analysis. The results demonstrated that Endo-CPMSealer caused greatest inflammatory response at 15 and 60 days, with a statistically significant difference only on the first period. Pure clinker of Portland cement produced the least inflammatory response at all periods. All materials were similar at 60 days, without statistically significant difference. Concerning the initial setting time, pure clinker of Portland cement exhibited the shortest time (5min); the shortest final setting time was observed for Endo-CPM-Sealer (22min), followed by pure clinker of Portland cement (55min).

O Agregado Trióxido Mineral (MTA) por apresentar boas propriedades físico-químicas e biológicas é indicado, entre outros, como material retrobturador em cirurgias parendodônticas. O objetivo deste trabalho foi avaliar, microscopicamente, a resposta do tecido subcutâneo de ratos frente à implantação de tubos de polietileno preenchidos por clínquer do cimento Portland branco puro, clínquer do cimento Portland acrescido de 2 e 5 % de Sulfato de Cálcio e o CPM um agregado trióxido mineral e analisar possíveis alterações teciduais provocadas. Também foi avaliado o tempo de presa para os quatros materiais. Utilizou-se 24 ratos e cada animal recebeu quatro implantes de tubos de polietileno, preenchidos com os materiais recém-espatulados em uma extremidade e na outra, guta-percha (controle). Após 15, 30 e 60 dias os animais foram mortos e os espécimes foram fixados em formalina 10 % e preparados para análise microscópica. Duas regiões foram avaliadas: a cápsula, estrutura imediatamente em contato com os materiais e a subcápsula região subjacente a cápsula. As análises morfológica e morfométrica da cápsula mostraram inflamação crônica com intensidade leve tendendo a discreta e maior organização das fibras, vasos, fibroblastos, e espessamento da cápsula fibrosa com decorrer do tempo, porém sem diferença estatisticamente significante (p>0,05) entre os materiais, já que induziram respostas teciduais semelhantes. Em relação à avaliação da subcápsula a única diferença estatisticamente significante (p<0,05) entre os materiais ocorreu para o período inicial de 15 dias onde o CPM apresentou o menor valor de células inflamatórias. Quanto ao tempo de presa dos materiais avaliados, o menor tempo de presa inicial ocorreu para o clínquer puro (6 min), seguido pelo clínquer a 2% (9 min) e clínquer a 5% (10 min) e o mais longo foi o CPM (15min). Em relação à presa final o clínquer puro também obteve o menor tempo (21mim), seguido pelo clínquer a 2% (25 mim), CPM (27 min) e por último o clínquer a 5% (42 min). Considerando as limitações deste trabalho, todos os materiais estudados apresentaram boa biocompatibilidade e o CPM apresentou menor grau de resposta inflamatória na região da subcápsula. / The Mineral Trioxide Aggregate (MTA) has been showing good physicochemical and biological properties and indicated for use in endodontic apical surgery, perforation repair, and apexification treatment. The purpose of this study was to evaluate the subcutaneous connective tissue reactions of CPM and clinker of Portland cement, either pure or combined with calcium sulfate 2 and 5% of the total weight. The setting time of the four cements were also evaluated. Four subcutaneous pockets were created in dorsum of the 24 rats and implanted polyethylene tubes sealed on one side with an material and other side with gutta-percha (control group). The Animals were sacrificed at 15, 30, and 60 days after implantation, the skin containing the tubes colleted and fixated in 10% formalin. The tubes were removed and surrounding tissue histologically processed. Two regions were evaluated, the connective-tissue capsule formed around material and the subcapsular tissue opposed the capsule. The morphologic and morphometric analysis of collagen fibres, fibroblasts, vessels and inflamatory tissue showed that in the capsule did not found statistical differences between groups (p>0,05), showing low-grade chronic inflammation and increase grade of organization of fibrous connective tissue structures with the time. In the subcapsule differences were only significant (p<0,05) in the CPM group at 15 days that presented less inflammatory cells in comparison with other materials. Concerning about the initial setting time the lower time was to clinker pure (6 min), followed by clinker 2% (9 min), clinker 5% (10min) and finally the CPM (15 min). About the final setting time the clinker pure obtained the least time (21 min), followed by clinker 2% (25 min), CPM (27 min) and clinker 5% (42 min). Within the limits of this study, all studied materials showed good biocompatibility and CPM showed low-grade inflammatory response in the subcapsule.

O objetivo deste estudo foi comparar a eficácia clínica, radiográfica e microscópica do formocresol (FC) de Buckley diluído a 1/5, hidróxido de cálcio PA (HC) e Agregado Trióxido Mineral (MTA) como agentes capeadores pulpares em dentes decíduos humanos acometidos por cárie extensa. Quarenta e cinco molares decíduos inferiores de 23 crianças com idades entre 5 e 9 anos foram tratados pela técnica convencional de pulpotomia. Os dentes foram aleatoriamente divididos entre os grupos experimentais (HC e MTA) e o grupo controle (FC). Após a remoção da polpa coronária e hemostasia, o tecido pulpar remanescente foi coberto com pasta de MTA ou pó de HC nos grupos experimentais. No grupo controle, uma bolinha de algodão umedecida na solução de FC diluído foi colocada por 5 minutos sobre o remanescente pulpar e então a câmara pulpar preenchida com óxido de zinco e eugenol. Todos os dentes foram restaurados com uma base de óxido de zinco e eugenol reforçado (IRM) e cimento de ionômero de vidro modificado por resina. As avaliações clínicas e radiográficas foram realizadas nos períodos de 3, 6, 12, 18, 24 e 30 meses do pós-operatório. Durante as avaliações, os dentes que se apresentavam no período normal de esfoliação, bem como, dentes considerados fracasso ao tratamento foram extraídos e processados para análise microscópica. Os cortes foram feitos seriadamente, no sentido vestíbulo-lingual e corados pela hematoxilina e eosina. A análise microscópica foi realizada de forma descritiva dos fenômenos mais marcantes ocorridos no tecido pulpar remanescente. Pelos resultados clínicos e radiográficos obtidos foi possível observar uma taxa de sucesso para os grupos FC, HC e MTA de 100%, 35,7% e 100%, respectivamente. Diferença estatisticamente significativa foi observada quanto à presença de reabsorção interna, lesão inter- radicular, mobilidade e fístula para o grupo HC (p < 0,05). A análise microscópica para o grupo FC revelou presença de intenso infiltrado inflamatório e deposição de tecido mineralizado, irregular por todo canal radicular. Para o grupo MTA, notou-se deposição de material mineralizado de aspecto dentinóide, obliterando todo o canal radicular, além de áreas centrais preenchidas por tecido conjuntivo frouxo com inúmeros vasos sanguíneos. O grupo HC apresentou, na maioria dos cortes, extensa área de necrose tanto na câmara pulpar quanto no canal radicular. Em outros poucos cortes, presença de barreira de dentina reacional, obliterando a abertura coronária do canal radicular, com discreto infiltrado inflamatório crônico. O MTA parece ser um possível substituto do FC, no entanto, o hidróxido de cálcio mostrou ser uma técnica muito sensível e, portanto, não indicada para pulpotomias de dentes decíduos. / The aim of this study was to compare the clinical, radiographic and microscopic effectiveness of formocresol (FC), calcium hydroxide (CH) and trioxide mineral aggregate (MTA) as pulp dressing agents in carious primary teeth. Forty-five primary mandibular molars of 23 children between 5 and 9 years old were treated by conventional pulpotomy technique. The teeth were randomly assigned to the experimental (CH and MTA) or control (FC) groups. After coronal pulp removal and hemostasis, remaining pulp tissue was covered with a MTA paste or CH powder in the experimental groups. In the control group, diluted FC was placed over the pulp tissue with a cotton pellet for 5 minutes and removed; the pulp tissue was covered then with zinc oxide-eugenol (ZOE) paste. All the teeth were restored with reinforced zinc oxide-eugenol base and resin modified glass ionomer cement. Clinical and radiographic evaluations were recorded at 3, 6, 12, 18, 24 and 30-month follow-up. During the assessments, the teeth in the regular exfoliation period, as well as those considered as treatment failures were extracted and further processed for microscopic analysis. Serial sections were performed in the bucco-lingual direction and stained with hematoxylin and eosin. Microscopic analysis was performed as a description of the most remarkable phenomena in the remaining pulp tissue. Through clinical and radiographic results, success rates of 100%, 35.7% and 100% for FC, CH and MTA were found, respectively. Statistically significant differences were observed regarding to the presence of internal resorption, inter-radicular bone destruction, mobility and fistula for CH group (p < 0.05). Microscopic analysis revealed the presence of intense inflammatory infiltrate and mineralized tissue deposition, which was irregular throughout the root canal, in the FC group. As far as MTA group, dentin-like mineralized material deposition obliterating the root canal, and central areas filled by loose conjunctive tissue with several blood vessels were noticed. CH group presented, in most of the sections, extensive necrotic areas both in pulp chamber and root canal. Other sections revealed the presence of extensive reactive dentin barrier, which obliterated the coronal opening of the root canal, and a discrete chronic inflammatory infiltrate. MTA may serve as an effective substitute of FC in primary molar pulpotomies. However, CH seems to be a technique sensitive-material and therefore not indicated for pulpotomies of primary teeth.

A radiopacidade e a resposta tecidual do cimento Portland (CP) acrescido de óxido de bismuto (OB) nas concentrações de 0, 15, 20, 30 e 50%, determinadas em peso, foram avaliadas. Para a análise da radiopacidade, foi seguida a norma ISO 6876/2001. A densidade radiográfica foi mensurada em milímetros de alumínio (mmAl) e a análise estatística realizada utilizando-se os testes de ANOVA e Tukey-Kramer (p<0,05). Para a análise da resposta tecidual foram selecionados 81 ratos albinos e cada um recebeu como implante, na região dorsal, dois tubos de polietileno preenchidos com os cimentos experimentais. Os ratos foram mortos após 15, 30 e 60 dias. Na análise microscópica foram avaliados dois parâmetros: células inflamatórias e fenômeno reparatório. Os escores foram determinados e submetidos à análise estatística, utilizando-se os testes não paramétricos de Kruskal-Wallis e Dunn (p<0,05). Os resultados demonstraram que os valores representativos da radiopacidade aumentaram, gradativamente, de acordo com a concentração de óxido de bismuto. A significância estatística foi verificada entre o CP/50%OB e os demais cimentos avaliados, e entre o CP puro e o CP/30%OB (p<0,05). A radiopacidade apresentada pelo CP puro foi abaixo do mínimo (3 mmAl) recomendado pelas normas nº 57 da ADA e da ISO 6876/2001. Na análise da resposta tecidual, em relação à intensidade do infiltrado inflamatório, ocorreu diminuição de 15 para 30 dias e de 15 para 60 dias, com significância estatística (p<0,05), apenas para o grupo II nos dois intervalos de tempos. Com referência ao fenômeno reparatório ocorreu, em geral, para todos os grupos aumento do tecido fibrocelular, do período de 15 para o de 60 dias. Os resultados obtidos permitiram concluir que 15 a 20% de óxido de bismuto é suficiente para proporcionar ao CP a radiopacidade mínima recomendada pelas normas ADA e ISO. A diminuição do infiltrado inflamatório associada ao aumento do tecido fibrocelular, fundamentam a ausência de citotoxicidade do óxido de bismuto incorporado ao CP. / The aim of the study was to evaluate the radiopacity and subcutaneous tissue response of Portland cement (PC) with different concentrations of bismuth oxide (BO). PC was mixed with 0, 15, 20, 30 and 50% of BO determined in weight. The radiopacity was performed according to the ISO 6876/2001 standard for dental root canal sealing materials Statistical analysis was performed using ANOVA and Tukey-Kramer tests (p<0.05). For biocompatibility test, eighty-one albino rats (Rattus norvegicus) were selected. Two subcutaneous pockets were created in animal dorsum and polyethylene tubes filled with the cements were implanted. The rats were sacrificed at 15, 30 and 60 days after implantation. Histological evaluations were classified according to inflammatory response and repair process and scores were established. Statistical analysis was performed using the Kruskal-Wallis and Dunn tests (p<0.05). The results showed that there were statistical differences in radiopacity among PC with 50% of BO and all the other evaluated concentrations (p<0.05). Also, there was statistical difference between PC with 30% of BO and PC without BO (p<0.05). No statistical differences were found for inflammatory response in all the evaluated groups in each period (p>0.05). For repair process evaluation was observed a significant increase in fiber cellular tissue through the periods for all the groups (p<0.05). The tests suggested that 15 to 20% of BO added to PC attended ISO requirements for radiopacity. For biological response, there were decreases in the inflammatory response associated with an increase in the repair process, suggesting the lack of toxicity of BO added to PC.

A BiodentineTM, novo material composto principalmente de silicato tricálcio (Ca3SiO5), apresenta vantagens com relação ao MTA, como menor tempo de presa e uso como material restaurador temporário para esmalte e permanente para dentina. As diferenças no mecanismo de ação entre os dois materiais ainda não estão esclarecidas, assim, o objetivo deste estudo foi avaliar in vitro a viabilidade de células extraídas da polpa dental de humanos, bem como a expressão de diferentes marcadores da mineralização após o estímulo com BiodentineTM e MTA. Além disso, foi avaliada in vivo a expressão dos marcadores previamente observados após a realização de pulpotomia em dentes de cães. Nos experimentos in vitro foram utilizadas células da polpa dentária obtidas a partir de dentes extraídos por razões ortodônticas (n=6). As células foram plaqueadas na concentração de 1x105 células/poço e expostas aos materiais em diferentes concentrações (1:1, 1:10 e 1:100), por 24 e 48 horas. Ao fim dos períodos, foi realizado o Ensaio Colorimétrico MTT para verificação da viabilidade celular e o qRT-PCR para detecção de RNA mensageiro para osteopontina (SPP1), sialoproteína óssea (BSP), sialofosfoproteína dentinária (DSPP), fosfatase alcalina (ALP), proteína da matriz dentinária 1 (DMP1) e fator de transcrição relacionado ao Runt 2 (RUNX2). Os dados foram comparados por meio da análise de variância (ANOVA) de uma via seguido pelo pós-teste de Tukey ou Bonferroni (&alpha; = 0,05). Nos experimentos in vivo, foram utilizadas lâminas obtidas do banco de lâminas do Departamento de Clínica Infantil da Faculdade de Odontologia de Ribeirão Preto, nas quais foi realizada pulpotomia com MTA (n=35) e BiodentineTM (n=52) em dentes de cães. Foram realizados ensaios de imunoistoquímica para osteopontina (OPN) e fosfatase alcalina (ALP) sendo a intensidade da marcação descrita como suave, moderada e intensa. Além disso, foi realizada imunofluorescência indireta para o fator de transcrição Runx-2, na qual a porcentagem de células positivamente marcadas foi calculada pelo software Image J. Ambas as análises foram realizadas nas regiões de ponte de tecido mineralizado e tecido pulpar. Os grupos foram comparados por meio do teste exato de Fisher ou qui-quadrado ou por análise de variância (ANOVA) de uma via, seguido pelo pós-teste de Tukey (&alpha; = 0,05). No estudo in vitro, após 24 e 48 horas, a diluição 1:100 de ambos os materiais não afetou a viabilidade celular (p > 0,05) em relação ao controle. Após 48 horas, MTA e BiodentineTM induziram a expressão gênica de SPP1, ALP e RUNX2 em relação ao controle (p < 0,05). Já no estudo in vivo, na marcação da ponte de tecido mineralizado para OPN, o MTA apresentou marcações suaves em 29% dos casos e a BiodentineTM marcações suaves em 26%, moderadas em 43% e intensas em 22% (p < 0,0001). A ALP na ponte de tecido mineralizado mostrou marcações suaves para o MTA em 14% dos casos e para a BiodentineTM em 48% (p < 0,0001). A OPN no tecido pulpar radicular para o MTA apresentou 29% de marcação no terço cervical e 29% no médio, sem marcação no apical e para a BiodentineTM apresentou 52% de marcação no cervical, 26% no médio e 26% no apical (p < 0,0001). A marcação para ALP no tecido pulpar não apresentou diferença entre os materiais (p = 0,2). Não houve diferença no número de células positivamente marcadas pela imunofluorescência para Runx-2, entre os materiais estudados e o controle (p > 0,05). A BiodentineTM foi capaz de estimular marcadores da mineralização de forma semelhante ao MTA, porém mais intensamente, com maior formação de pontes de tecido mineralizado, o que poderia ser vantajoso a longo prazo nos casos de tratamentos endodônticos conservadores. / BiodentineTM, a new material composed mainly of tricalcium silicate (Ca3SiO5), shows advantages compared to the MTA, as such less setting time and use as temporary restoring material to enamel and permanent to dentine. Differences in action mechanisms between the two materials are not clarified yet, therefore, the aim of this study was to compare the cellular viability of dental pulp cells when in contact with BiodentineTM and MTA in addition to the mineralization markers expression induced by both, in vitro and in vivo. For the in vitro experiments, dental pulp cells obtained from teeth extracted for orthodontic reasons (n=6) were used. The cells were plated in a density of 1x105 cells/well and exposed to both materials in different concentrations (1:1, 1:10 and 1:100), obtained from serial dilution of an initial extract (1:1), for 24 and 48 hours. At the end of the periods, the Colorimetric MTT Assay was used for cellular viability verification and the qRT-PCR for messenger RNA detection of osteopontin (SPP1), bone sialoprotein (BSP), dentin sialophosphoprotein (DSPP), alkaline phosphatase (ALP), dentin matrix protein 1 (DMP1) and Runt-related transcription factor 2 (RUNX2) was performed. Data were compared through analysis of variance (one-way ANOVA) followed by the Tukeys or Bonferroni post-test (&alpha; = 0.05). For in vivo experiments, histological slides derived from teeth of dogs, on which it was performed pulpotomy with MTA (n=35) and BiodentineTM (n=52), were obtained from a slides bank of Departamento de Clínica Infantil da Faculdade de Odontologia de Ribeirão Preto. Immunohistochemistry for osteopontin (OPN) and alkaline phosphatase (ALP) were performed and the percentage of positively marked cells for the transcription factor Runx-2 by indirect immunofluorescence was calculated with the assistance of the software Image J. The groups were compared through the exact Fishers test or chi-square or analysis of variance (one-way ANOVA), followed by Tukeys post-test (&alpha; = 0.05). After 24 and 48 hours, the dilutions 1:100 of both materials did not affect the viability (p > 0.05) in comparison to control group. After 48 hours, MTA and BiodentineTM induced higher gene expression of SPP1, ALP and RUNX2 in comparison to control group (p < 0.05). In mineralized tissue bridge immunostaining for OPN, MTA showed mild staining in 29% of the cases and BiodentineTM mild staining in 26%, moderate staining in 43% and intense in 22% of the cases (p < 0.0001). Mineralized tissue bridge immunostaining for ALP showed mild staining for MTA in 14% of the cases and for BiodentineTM in 48% (p < 0.0001). The OPN immunostaining on radicular pulp tissue for MTA showed 29% of staining on cervical third, 29% on the middle third and no staining on the apical third, while BiodentineTM showed 52% stained on cervical third, 26% on the middle third, and 26% on the apical third (p < 0.0001). Immunostaining for ALP on the pulp tissue did not show difference between the two materials (p = 0.2). There was no difference in the number of positively marked cells by the immunofluorescence for RUNX-2, between the studied materials and the control group (p > 0.05). BiodentineTM was able to stimulate mineralization markers in a similar to MTA manner, but more intense, with greater formation of mineralized tissue bridges. These results indicate that BiodentineTM could be useful in long term in cases of conservative endodontic treatments.

O meduloblastoma (MB) é o tumor maligno cerebral mais frequente em crianças e adolescentes. Trata-se de uma doença heterogênea sob o aspecto genético, sendo reconhecido ao menos 12 subgrupos genético-moleculares, com impacto na apresentação clínicopatológica. Pacientes do subgrupo SHH apresentam mutação somática em genes da via Hedgehog, incluindo PTCH1, SUFU, SMO e ativação dos genes GLI1 e GLI2. Mutações no gene TP53 também podem estar presentes, particularmente em crianças acima de 3 anos, e conferem um pior prognóstico. O trióxido de arsênio (ATO) possui ação inibitória sobre os genes da via SHH, mas pouco se sabe sobre sua ação no MB. O presente estudo objetivou avaliar os potenciais efeitos citotóxicos e radiossensibilizantes do ATO sobre as linhagens de MB pediátrico grupo SHH (ONS-76: TP53-selvagem; DAOY: TP53-mutado c.725G>T e UW402, TP53-mutado c.464C>A). Foram comparadas as taxas de proliferação celular, clonogenicidade e apoptose nas linhagem de MB antes e após o tratamento com ATO. Também foi avaliada a clonogenicidade da associação droga e irradiação. Foram investigadas proteínas responsáveis pelo reparo dos danos causados ao DNA (Rad51 e Ku86) através de Western Blot. Foi realizada análise da expressão gênica relativa por QPCR e estudados genes que integram a via SHH, assim como efetores finais desta via de sinalização. A viabilidade celular foi monitorada nos tempos de 24 à 120 horas pelo ensaio de resazurina. A taxa de apoptose foi mensurada por meio de marcação com anexina e iodeto de propídio e avaliada por citometria de fluxo. Os ensaios foram realizados em triplicata e analisados por One Way e Two Way ANOVA, utilizando o pós-teste Bonferroni, e sendo considerados resultados significativos valores de p<0,05. Foi possível observar uma diminuição na viabilidade celular após tratamento com ATO nas três linhagens estudadas. Além disso, houve uma diminuição significativa na capacidade clonogênica. Observou-se também um aumento nas taxas de apoptose nas linhagens, sendo acima de 70% de morte celular para a linhagem DAOY. Foi observado que o tratamento com ATO radiossensibilizou a linhagem UW402, TP53-mutado. Não foi encontrada associação com proteínas de reparo no tempo e dose estudados. O estudo de expressões relativas dos genes estudados demonstrou inibição, principalmente nas linhagens de interesse DAOY e UW402 -(SHH TP53) mutado. Estes achados in vitro apontam para um efeito citotóxico do ATO sobre as linhagens de MB pediátrico, podendo apresentar efeito radiossenssibilizante. O ATO deve ser melhor explorado como droga alvo para MB SHH+, em caráter experimental. / Medulloblastoma (MB) is the most common malignant brain tumor in children and adolescents. It is a heterogeneous disease under the genetic aspect, with at least 12 geneticmolecular subgroups being recognized, with impact on the clinical-pathological presentation. Patients of the SHH subgroup present somatic mutation in genes of the Hedgehog pathway, including PTCH1, SUFU, SMO and activation of the genes GLI1 and GLI2. Mutations in the TP53 gene may also be present, particularly in children over 3 years, and confer a worse prognosis. The arsenic trioxide (ATO) has an inhibitory action on SHH pathway genes, but little is known about its action. The present study aimed to evaluate the potential cytotoxic and radiosensitizing effects of ATO on the pediatric MB cells of SHH group (ONS-76: TP53- wild type; DAOY: TP53-mutated c.725GT and UW402 TP53-mutated c.464C>A). Cell proliferation, clonogenicity and apoptosis were compared in the MB strains following ATO treatment. The clonogenicity assay of ATO combined with irradiation was also evaluated. We investigated proteins responsible for repairing DNA damage and performed Western blotting of the Rad51 and Ku86 proteins. Gene expression analysis was performed using the real-time PCR. Selected genes integrating the SHH pathway as well as final effectors of signaling were also assesed. Cell viability was monitored at endpoints from 24 to 120h by the resazurin assay. The rate of apoptosis was measured by labeling with annexin and propidium iodide, as assessed by flow cytometry. The assays were performed in triplicate and analyzed by One Way and Two Way ANOVA, using the Bonferroni post-test, and being considered significant results a p value less than 0.05. It was possible to observe a decrease in cell viability in the three studied strains. In addition, there was a significant decrease in clonogenic capacity. There was also an increase in the apoptosis rates in the lineages, being above 70% of cell death for the DAOY lineage. It was found that the ATO treatment radiosensitized the UW402 strain - TP53-mutated. No association with time and dose of ATO and irradiation on the repair proteins was found. The study of the relative expressions of the studied genes demonstrated inhibition, mainly in the mutant line of interest DAOY and UW-402, a SHHTP53 mutated cell-line. These in vitro findings point to a cytotoxic effect of ATO on pediatric medulloblastoma lines, with a potential radiosensitizing effect. This study offers rationale for further assesment of ATO on SHH-MB, either alone or along with radiotherapy as a preclinical drug.

O MTA (Agregado Trióxido Mineral) tem sido utilizado na endodontia com diferentes finalidades terapêuticas. Essencialmente ele é constituído pelo cimento Portland acrescido de um radiopacificador. Entre seus componentes, é destacada a presença do arsênico, o qual sofre variação de concentração em função da origem do calcário. A dúvida é que se diferentes concentrações de arsênico representam alguma influência na sua biocompatibilidade. O objetivo deste estudo foi avaliar, microscopicamente, a reação tecidual em subcutâneo de ratos frente a cimentos Portland contendo diferentes concentrações de arsênico. Foram utilizados 36 ratos Wistar albinos, distribuídos em 4 grupos experimentais segundo o material empregado perfazendo um total de 6 implantes por período (15, 30 e 60 dias). A lateral dos tubos serviram como grupo controle. Após 15, 30 e 60 dias, os animais foram mortos e os espécimes foram preparados histotecnicamente para análise microscópica. Os dados da avaliação morfométrica foram submetidos à análise de variância a dois critérios (ANOVA) e teste de Tukey para a comparação (p<0,05). Os resultados mostraram uma maior densidade de volume de células inflamatórias aos 15 dias, com redução dessa densidade com o passar do tempo para todos os materiais. Os resultados da análise descritiva mostraram inflamação crônica induzida pelos materiais, com intensidade de leve a moderada, e organização de uma cápsula fibrosa ao redor de todos os espécimes e em todos os períodos. Os cimentos analisados produziram respostas inflamatórias semelhantes, mesmo apresentando quantidades diferentes de arsênico na composição, apenas com diferença estatisticamente significante entre o cimento Portland cinza Votoran e os demais cimentos nos três períodos estudados. / The MTA (Mineral Trioxide Aggregate) has been used in Endodontics for different therapeutic purposes. Essentially, it is composed of Portland cement with addition of a radiopacifier. Its components include arsenic, whose concentration is variable according to the origin of the calcareous. There is doubt whether different arsenic concentrations might influence its biocompatibility. This microscopic study evaluated the reaction of subcutaneous tissue of rats to Portland cements containing different arsenic concentrations. The study was conducted on 36 albinus Wistar rats, divided in 12 animals for each study group. Each animal received two implants of polyethylene tubes, completely filled with the test cements, and the lateral aspect of the tubes was taken as control group. The animals were killed after 15, 30 and 60 days and the specimens were submitted to histotechnical preparation for microscopic analysis. Data of the morphometric analysis were submitted to two-way analysis of variance (ANOVA) and the Tukey test for comparison (p<0.05). The results evidenced greater density of volume of inflammatory cells at 15 days, which was reduced with time for all materials. The results of this descriptive analysis demonstrated chronic inflammation induced by the materials, of mild to moderate intensity, and organization of a fibrous capsule around all specimens and in all periods. The cements induced similar tissue responses, despite the different arsenic concentrations in their composition.

Os biomateriais podem ser definidos como substâncias de origem natural ou sintética que são tolerados de forma transitória ou permanente pelos diversos tecidos que constituem os órgãos dos seres vivos. Dentre esses biomateriais podemos citar o Agregado de Trióxido Mineral (ATM), que foi desenvolvido na Universidade de Loma Linda na década de 90. Desde então, não cessaram trabalhos de pesquisa envolvendo esse material e o Cimento Portland (CP); que embora não seja um material de uso odontológico direto, pode-se afirmar que possui basicamente os mesmos componentes químicos do ATM. O objetivo da presente pesquisa foi avaliar a biocompatibilidade do cimento Portland comum (CP-I) e do cimento Portland branco (CPB) não estrutural, incluídos na calvária de ratos. Foram selecionados vinte ratos, dois foram previamente utilizados como grupo piloto; os dezoito restantes foram distribuídos em três grupos de seis ratos que avaliados nos tempos experimentais de 30, 60, 90 dias foram mortos para análise histopatológica. Cada animal recebeu um implante, sendo três de Cimento Portland Comum (CP-I) e três de Cimento Portland Branco (CPB). Os resultados mostraram que não houve conseqüências de uma proliferação microbiológica em nenhum dos cimentos e tempos pesquisados. Observou-se tecido conjuntivo denso, celular e ricamente vascularizado. Também foi visualizado uma matriz óssea recém formada, adjacente aos osteoblastos ativos e que não estava ainda calcificada; apresentava-se menos mineralizada e com ausência de lamelas. Durantes os tempos histológicos de 30, 60 e 90 dias, o infiltrado inflamatório disperso no tecido apresentou-se: intenso, moderado e discreto. Sugerindo a mudança do processo inflamatório de agudo a crônico respectivamente / The biomaterials can be defined as substances of natural or synthetic origin that are tolerated on a temporary or permanent by the various tissues that make up the organs of living beings. Among these biomaterials can quote the mineral trioxide aggregate (MTA), which was developed at the University of Loma Linda, in the 90s. Since then, it stopped work on research involving this material and Portland cement (PC), which although not a dental material to use direct, one can say that basically has the same chemical components of the ATM. The purpose of this study was to evaluate the biocompatibility of common Portland cement (PC-I) and the white Portland cement (CPB) no structural, included in the skull of rats. Twenty rats were selected, two were previously used as a pilot group and the eighteen others were divided into three groups of six rats that were killed and evaluated in experimental stroke, 30, 60, and 90 days. Each animal received an implant, three of Common Portland Cement (PC-I) and three of White Portland Cement (CPB). The results show that there were no consequences of a microbial proliferation in any of cement and times searched. There was also the formation of bone tissue with characteristics of immaturity, showing gaps in some areas without osteocytes; presence of moderate and cell tissue, richly vascularized, showing characteristics of biocompatibility, and the potential for bone and cell differentiation.