El objetivo de este trabajo fue determinar el incremento de la precipitación pluvial sobre la prevalencia de Renibacterium salmoninarum detectado a partir de muestras de tejido (riñón y bazo) de truchas arcoíris en una piscigranja ubicada en la cuenca del valle del Mantaro. El trabajo se realizó en una piscigranja del departamento de Junín, en la provincias de Huancayo, en los meses de agosto, setiembre noviembre y febrero, durante el periodo de ciclo de lluvias 2011-2012. La fuente hídrica de la piscigranja es el rio Chiapuquio, perteneciente a la cuenca del Valle del Mantaro. Las truchas fueron colectadas al azar y provenían de ovas nacionales y americanas. Se colectaron 60 animales por muestreo, 240 truchas en total por piscigranja, considerando una prevalencia de 5%. Los peces se recolectaron en relación al ciclo de lluvias en el valle del Mantaro. Agosto (Temporada seca), Setiembre, Noviembre (Temporada de inicio de lluvias), y Febrero (Temporada de lluvias).Se extrajo el ADN de riñón y bazo mediante la técnica de fenol-cloroformo y se realizó el PCR tiempo real, no obteniéndose genoma de Renibacterium salmoninarum en ninguna de las muestras, en ninguno de las temporadas del ciclo de lluvias. Se concluye que la prevalencia de Renibacterium salmoninarum en la piscigranja de estudio es 0%, por tanto no se pudo establecer asociación entre el ciclo de lluvias y la prevalencia de Renibacterium salmoninarum. Palabras Claves: Ciclo de lluvias, cambio climático, BKD, Renibacterium salmoninarum, PCR tiempo real, Oncorhynchus mykiss / --- The aim of this study was to determine the increase in rainfall on the prevalence of Renibacterium salmoninarum detected from tissue samples (kidney and spleen) of rainbow trout in a fish farm located in the Mantaro Valley basin. The study was conducted at a fish farm in the department of Junín, in the province of Huancayo, in the months of August, September, November and February, during the rain cycle 2011-2012. The water source for the fish farm is Chiapuquio river belongs to the basin of the Mantaro Valley. The trout were randomly collected and eggs were from National and American. 60 animals were collected per sample, 240 total trout fish farm, considering a prevalence of 5%. Fish were collected in relation to the cycle of rainfall in the Mantaro Valley. August (dry season), September, November (rainy season start), and February (rainy season). DNA was extracted from kidney and spleen by phenol-chloroform technique and performed the real time PCR, yielding no Renibacterium salmoninarum genome in any of the samples, none of the rainy season cycle. We conclude that the prevalence of Renibacterium salmoninarum in fish farm study is 0%, so could not be established association between the rain cycle and prevalence of Renibacterium salmoninarum. Keywords: rain cycle, climate change, BKD, Renibacterium salmoninarum, real-time PCR, Oncorhynchus mykiss

El objetivo del presente estudio fue determinar la frecuencia de lesiones anatomohistopatológicas compatibles con alteraciones metabólicas relacionadas a energía y/o proteínas en la dieta de truchas arcoiris (Oncorhynchus mykiss) de fase juvenil. Se colectaron aleatoriamente 40 peces de una piscigranja ubicada en las provincia de Huancayo-Junín, tomándose principalmente muestras de hígado, riñón, branquias, estómago y bazo. Entre los hallazgos macroscópicos compatibles con alteraciones metabólicas observados con mayor frecuencia fue el hígado graso, caracterizado por una coloración marrón pálida en un 67.5% (27/40). En cuanto, a las lesiones histopatológicas compatibles con las alteraciones metabólicas se encontró degeneración grasa 97.5% (39/40), predominantemente en grado IV y la degeneración hialina en túbulos renales, 62.5% (25/40) y tan sólo 7.5% en glándulas gástricas de estómago. En branquias, los cambios de crecimiento como la hiperplasia (30/40), fusión (29/40) y atrofia lamelar (29/40) en un 75% y 72.5%, respectivamente, representando las lesiones de más alta frecuencia. En base a los hallazgos, se concluye que las lesiones compatibles con alteraciones metabólicas se observaron en una alta frecuencia, principalmente las relacionadas a exceso de proteína como la degeneración hialina en riñón y estómago, y la degeneración grasa en hígado por desbalance de energía. Finalmente, las lesiones en branquias sugieren una asociación entre alteraciones metabólicas y su efecto contaminante en el medio acuático. / --- The purpose of this study was to determine frequency the presentation of anothomohistopathologycal lesions compatibles with metabolic disorders related to energy and proteins in the diet of juvenile Rainbow Trout (Oncorhynchus mykiss ). Forty fish were collected randomly from the one trout hatchery, located in Huancayo-Junín, mainly taking samples of liver, kidney, gill, stomach and spleen. Between the macroscopic findings compatible with metabolic alterations observed with major frequency it was the fatty liver characterized by a brown pale coloration in 67.5% (27/40). As soon as, to the lesions histopatológicas compatible the metabolic alterations were found fat degeneration 97.5% (39/40), predominantly in grade IV and hyaline degeneration in renal tubules, 62.5% (25/40) and only 7.5% in glands gastric stomach. In gills, changes in growth such as hyperplasia (30/40), fusion (29/40) and lamellar atrophy (29/40) by 75% and 72.5% respectively, representing the highest frequency of lesions. Based on the findings, concluded that the lesions compatible the metabolic disorders were observed in a high frequency, principally related to excessive protein as hyaline degeneration in the kidney and stomach, and fatty degeneration in liver for balancing energy. Finally, the lesions on gills suggest an association between metabolic disorders and their polluting effect on the aquatic environment.

El objetivo del presente estudio fue determinar la frecuencia de lesiones anatomohistopatológicas compatibles con alteraciones metabólicas relacionadas a energía y/o proteínas en la dieta de truchas arcoiris (Oncorhynchus mykiss) de fase juvenil. Se colectaron aleatoriamente 40 peces de una piscigranja ubicada en las provincia de Huancayo-Junín, tomándose principalmente muestras de hígado, riñón, branquias, estómago y bazo. Entre los hallazgos macroscópicos compatibles con alteraciones metabólicas observados con mayor frecuencia fue el hígado graso, caracterizado por una coloración marrón pálida en un 67.5% (27/40). En cuanto, a las lesiones histopatológicas compatibles con las alteraciones metabólicas se encontró degeneración grasa 97.5% (39/40), predominantemente en grado IV y la degeneración hialina en túbulos renales, 62.5% (25/40) y tan sólo 7.5% en glándulas gástricas de estómago. En branquias, los cambios de crecimiento como la hiperplasia (30/40), fusión (29/40) y atrofia lamelar (29/40) en un 75% y 72.5%, respectivamente, representando las lesiones de más alta frecuencia. En base a los hallazgos, se concluye que las lesiones compatibles con alteraciones metabólicas se observaron en una alta frecuencia, principalmente las relacionadas a exceso de proteína como la degeneración hialina en riñón y estómago, y la degeneración grasa en hígado por desbalance de energía. Finalmente, las lesiones en branquias sugieren una asociación entre alteraciones metabólicas y su efecto contaminante en el medio acuático. / The purpose of this study was to determine frequency the presentation of anothomohistopathologycal lesions compatibles with metabolic disorders related to energy and proteins in the diet of juvenile Rainbow Trout (Oncorhynchus mykiss ). Forty fish were collected randomly from the one trout hatchery, located in Huancayo-Junín, mainly taking samples of liver, kidney, gill, stomach and spleen. Between the macroscopic findings compatible with metabolic alterations observed with major frequency it was the fatty liver characterized by a brown pale coloration in 67.5% (27/40). As soon as, to the lesions histopatológicas compatible the metabolic alterations were found fat degeneration 97.5% (39/40), predominantly in grade IV and hyaline degeneration in renal tubules, 62.5% (25/40) and only 7.5% in glands gastric stomach. In gills, changes in growth such as hyperplasia (30/40), fusion (29/40) and lamellar atrophy (29/40) by 75% and 72.5% respectively, representing the highest frequency of lesions. Based on the findings, concluded that the lesions compatible the metabolic disorders were observed in a high frequency, principally related to excessive protein as hyaline degeneration in the kidney and stomach, and fatty degeneration in liver for balancing energy. Finally, the lesions on gills suggest an association between metabolic disorders and their polluting effect on the aquatic environment.

Memoria para optar al título de Ingeniero en Alimentos / Chile es el segundo país productor de salmónidos más importante a nivel mundial. De ahí que, se convierte en el principal generador de coproductos, por sobre Noruega. Siendo el belly de la trucha arcoiris (Oncorhynchus mykiss) un coproducto desconocido, contando con escasos antecedentes de su comportamiento al conservarse refrigerado. El objetivo del presente trabajo fue determinar la pérdida de calidad funcional, química, sensorial y microbiológica del belly de trucha arcoiris (Oncorhynchus mykiss) durante su conservación en refrigeración (0º a 2º C). Se determinó la evolución de los parámetros funcionales, mediante los cuales se observó un deterioro en la funcionalidad de las proteínas presentes en el belly. También se observó el cambio de color que sufrió el belly a través del tiempo, comportándose de forma constante y sin variaciones significativas (p≥0,05). Se determinó la composición centesimal y su variación en el tiempo, obteniéndose resultados similares a aquellos presentes en la literatura. Además, el estudio contempló la determinación de pH que disminuyó en el tiempo, observándose valores de 6,62 y 6,29, al inicio y final del estudio, respectivamente. El índice de anisidina, mostró que el belly sufrió oxidación lipídica secundaria, sin embargo, este valor no superó los límites admitidos. Durante este estudio no hubo presencia de microorganismos patógenos, ni indicadores de contaminación fecal (Salmonella sp., Listeria Monocytogenes, Staphylococcus aureus), sin embargo, el recuento de aerobios mesófilos y de enterobacterias, arrojaron valores fuera de lo permitido a partir del día 10 y 24 de estudio, respectivamente. Los atributos sensoriales más sensibles para estimar el deterioro en la calidad oxidativa y textural del belly de trucha arcoiris fueron el olor típico, rancio y pútrido (crudo), elasticidad, firmeza, cohesividad y goteo. Atributos que, en conjunto con el recuento de aerobios mesófilos, sirvieron para estimar la vida útil del belly de trucha arcoiris conservado refrigerado (0º a 2º C), que fue de 12 días. De acuerdo a los resultados obtenidos mediante el análisis estadístico de los datos, se pudo determinar que existió una fuerte correlación entre los parámetros y el tiempo, y entre ellos mismos, viéndose afectada la calidad funcional, química, sensorial y microbiológica del belly de trucha arcoiris durante su conservación en refrigeración (0º a 2º C) / Chile is the second most important producer country of salmonids at worlwide level. For this reason, it turns in to the main coproducer generator, over Norway. Belly of Rainbow trout (Oncorhynchus mykiss), is an unknown coproduct, and there are very limited precedents of its behavior during chilled storaged. The aim of this study was to determined the loss of functional, chemical, sensorial and microbiology quality, during chilled storage (0ºC- 2ºC) of rainbow trout belly. Functional evolution parameters were studied, which show a deterioration in the functionality of belly proteins. Also, the belly color variation was observed trough time, behaving in a constant way and presenting no significants variations (p≥0,05) Centesimal composition and its variation in time was observed, obtaining similar results at those present in literature. The study also, contemplated pH determination, that decreased in time, being observed values from 6,62 and 6,29 at beginning and ending time of study, respectively. Anisidine index showed that belly suffered secondary lipidic oxidation, however, this value did not exceed allowed limits. During this study, neither patogens microorganisms nor faecal contamination indicators, (Salmonella sp., Listeria Monocytogenes, Staphylococcus aureus) were found in belly. Nevertheless, mesophyllic aerobic and enterobacters counts, showed values over the limits, from 10 and 24 day of study, respectively. The most sensitive sensory attributes to estimate the deterioration in the oxidating and textural quality of rainbow trout belly were typical, rancid and putrid odour (raw), elasticity, firmness, cohesiveness and dripping. Attributes that, in addition to the mesophyllic aerobic count, helped to estimate the shelf life of chilled storaged rainbow trout belly (0º to 2º C), that was 12 days. According to obtained results from statistycal analysis of data, it was possible to determine that a strong correlation existed within parameters and time, and between themselves, affecting functional, chemical, sensory and microbiologycal quality of rainbow trout belly during chilled storage (0º to 2º C)

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / La salmonicultura es una actividad que hoy reporta al país importantes beneficios tanto económicos como sociales; convirtiendo a Chile en el segundo productor mundial de salmones. De ahí la importancia de mantener la sanidad de los peces en sus distintos estados de desarrollo y así reducir al mínimo las pérdidas por enfermedades. La piscirickettsiosis cuyo agente causal corresponde a Piscirickettsia salmonis es una de las principales enfermedades que afectan la salmonicultura nacional. La presente memoria de título tuvo por objetivo caracterizar la interacción de P. salmonis con ovas de trucha arco iris (Oncorhynchus mykiss) sometidas a tratamientos con proteasas y cuya técnica de detección fue “dot blot”. La metodología “dot blot” no permitió comparar la eventual diferencia en la adhesión y/o penetración de la bacteria a la ova entre tripsina y proteinasa K. Por lo cual, esta técnica sólo se pudo utilizar como una técnica cualitativa para la detección de P. salmonis. Mediante la técnica de “dot blot” se estableció que las ovas de trucha arco iris son sensibles a la infección con la cepa SLGO-95 de P. salmonis. Esta memoria también permite establecer que la estructura proteica del corion es afectada por las enzimas proteolíticas tripsina y proteinasa K. Además, dados los resultados obtenidos post-tratamientos enzimáticos, se considera que la unión entre ovas y P. salmonis, disminuye si se degradan estructuras proteicas, por lo tanto en esta unión implicaría partes proteicas o polipéptidos. Finalmente estos resultados sugieren, pero no en forma concluyente en considerar la acción de proteínas o polipéptidos en la unión y posterior internalización de P. salmonis en el interior de la ova / Proyecto Fondecyt 1030625

Busca la detección del EHNv en truchas de piscigranjas de las regiones de Áncash, Junín y Huancavelica. Se muestrearon 111 peces enfermos con sintomatologías del proceso viral, tomando la estimación del tamaño muestral en función de la prevalencia a detectar y el tamaño del lote de la OIE estimando una prevalencia del 5%. Se tomaron muestras de hígado, bazo y riñón anterior, los cuales fueron conservados a -196°C. Las muestras de cada tejido fueron procesadas para la extracción del ADN viral, el cual sirvió de molde para realizar el PCR utilizando los cebadores MCP-1 en la metodología propuesta por la OIE y con el kit comercial “Vet PCR TM EHNV Detection Kit”. No se detectó el ADN viral en las muestras trabajadas, indicando que la prevalencia del virus es menor al 5% o no está presente en las piscigranjas muestreadas. Si bien no se encontró la presencia del agente en las piscigranjas estudiadas, esta investigación ha significado el inicio de investigaciones que buscan establecer las epidemiologías de los agentes virales reportables a nivel internacional y que afectan el comercio internacional de los peces y sus productos. / Tesis

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / En la presente Memoria de Título se utilizó el método "dot-blot" asociado a quimioluminiscencia para determinar la cinética de infección de dos cepas de Piscirickettsia salmonis en ovas de trucha arco iris (Oncorhynchus mykiss). Debido a que no existía información bibliográfica acerca de la utilización del método "dot blot" para detectar la infección de las ovas con P. salmonis, fue necesario estandarizar la técnica, por lo cual se realizaron distintos experimentos para ver la especificidad de los anticuerpos, la sensibilidad del método, el efecto de la desnaturalización de las muestras y la dilución más adecuada de los anticuerpos. Se realizó el experimento de cinética en ovas de trucha arco iris (O. mykiss) utilizando los tiempos de 1, 3, 5, 10, 30 y 60 minutos. Las ovas se depositaron individualmente en tubos Eppendorf, a los cuales se les agregó 400 micro L de inóculo bacteriano (sobrenadante de cultivo celular con aproximadamente 100% de efecto citopático). Se utilizaron 2 grupos de ovas por cada tiempo, uno de ellos se cultivó con la cepa LF-89 y el otro con la cepa SLGO-95. La reacción fue detenida mediante la eliminación del inóculo y dos lavados con solución "buffer" PBS pH 7,2. Posteriormente las ovas fueron congeladas a -70 grados C hasta su procesamiento. Se utilizaron además dos grupos controles (5 y 60 min), que corresponden a ovas que se incubaron con 500 micro L de MEM. Las ovas fueron homogeneizadas para realizar la metodología "dot-blot". Las películas obtenidas fueron escaneadas y evaluadas mediante densitometría por un "software" computacional. Los resultados indican reacción positiva a partir del primer tiempo estudiado para ambas cepas, la que se mantiene hasta el último tiempo estudiado. El análisis densitométrico señala que la reacción aumenta a medida que transcurre el tiempo, entregando una señal proporcionalmente más alta para SLGO-95 que para LF-89, lo que es concordante con estudios de virulencia en peces que señalan que esta cepa produce mortalidades más altas y más tempranas. Además los resultados apoyan la vía vertical de transmisión

En los teleósteos, la hormona luteinizante inicia la maduración final de los ovocitos, etapa previa a la ovulación. El objetivo de esta tesis fue evaluar la eficiencia de la hormona gonadotrofina coriónica humana (hCG), análoga a la hormona luteinizante, para inducir la maduración final in Vitro e in Vivo de los ovocitos de Oncorhynchus mykiss “Trucha arco iris”, a partir del estadío de vesícula germinal en migración. En la maduración final in Vitro, los cultivos realizados sólo en medio Leibovitz L-15 (control) produjeron una muy reducida cantidad de ovocitos maduros. En los cultivos problema, los medios de cultivo que contenían 5UI/ml de hCG sólo con medio Leibovitz L-15 o con Leibovitz L-15 más 2% (v/v) de suero de Oncorhynchus mykiss y 5mg/ml de insulina produjeron la totalidad de ovocitos maduros a las 90 horas de cultivo, pero cuando se usó 10UI/ml de hCG en los mismos medios anteriores sólo fueron necesarias 48 horas para obtener la totalidad de ovocitos maduros. Asimismo, el análisis comparativo entre los diferentes medios problema utilizados demostró que la insulina y el suero son importantes para alcanzar el estadío de desaparición de la vesícula germinal (marcador utilizado para la maduración del ovocito in Vitro) en este pez. La ovulación mediante la maduración in Vivo fue alcanzada a las 103.2 horas con el primer tratamiento (dos dosis: 20 y 80UI de hCG/Kg de peso), mientras que los peces en los cuales fue aplicado el segundo tratamiento (dos dosis: 30 y 120UI de hCG/Kg de peso) ovularon a las 43.8 horas. Los peces control alcanzaron la maduración 31 días después de su confinamiento en el estanque de experimentación. Estos resultados demuestran la efectividad dependiente de la dosis de la gonadotrofina coriónica humana en la maduración final de los ovocitos de Oncorhynchus mykiss. / --- In teleosts, the luteinizing hormone begins the final oocyte maturation previous stage of ovulation. The goal of this thesis was to evaluate the efficiency of the human Chorionic Gonadotropin (hCG), luteinizing hormone analogous, to induce in Vitro and in Vivo final oocyte maturation of Oncorhynchus mykiss “Rainbow trout” come from germinal vesicle migration stage. in Vitro final oocyte maturation, the cultures achieved only into Leibovitz L-15 medium (control) showed a very less quantity of mature oocytes. In problem cultures, the culture media that only had 5IU/ml hCG into Leibovitz medium or with Leibovitz L-15 plus 2% (v/v) Oncorhynchus mykiss serum and 5mg/ml insulin produced totality of mature oocytes at 90 hours but when it was used 10UI/ml hCG with the former media were only needed 48 hours to get the totality of mature oocytes. Although the comparative analysis between the different problem media used it showed both the serum and the insulin are important to reach the germinal vesicle breakdown stage (marker used to evaluate in Vitro oocyte maturation) in this fish. The ovulation by means in Vivo maturation was reached at 103.2 hours with first treatment (two doses: 20 and 80 IU hCG/Kg body weight), while the fishes tried with second treatment (two doses: 30 and 120 IU hCG/Kg body weight) ovulated at 43.8 hours. The control fishes reached the maturation at 31 days after their confinement into experimentation pond. These results show the dose-dependent effectiveness for human Chorionic Gonadotropin in the final oocyte maturation of Oncorhynchus mykiss.

El objetivo de este estudio fue determinar la presencia del agente Piscirickettsia salmonis en truchas de cultivo (Oncorhynchus mykiss) en la cuenca del río Mantaro en el departamento de Junín mediante la prueba de Inmunofluorescencia Indirecta. Se escogieron 180 truchas arco iris de manera aleatoria de tres piscigranjas de la cuenca (60 animales en cada una), las cuales fueron beneficiadas y necropsiadas, se colectaron asepticamente muestras de riñón y bazo. Los tejidos fueron sometidos a la prueba de Inmunofluorescencia Indirecta (IFI) para determinar la presencia de la bacteria. Los signos clínicos más saltantes fueron úlceras en la piel, melanosis, nado irregular y en la superficie del agua, abultamiento del abdomen y exoftalmia. Las lesiones mas resaltantes fueron hemorragias petequiales en hígado, ciegos pilóricos y grasa abdominal, úlceras en la piel además de esplenomegalia y palidez hepática. El 100% de las muestras de truchas arcoíris resultaron negativas a la bacteria Piscirickettsia salmonis. El resultado indica que este agente no esta presente en las piscigranjas evaluadas o su prevalencia fue muy baja y no pudo ser detectada. Palabras clave: Piscirickettsia salmonis, Oncorhynchus mykiss, Junín, Inmunofluorescencia Indirecta. / --- This study aimed to determinate the presence of Piscirickettsia salmonis agent in culture rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) in the Mantaro river basin in the region of Junin by Indirect Inmunofluorescence test. Kidney and spleen samples at random of 180 culture rainbow trout from three fish farms of the basin (60 animals in each) were taken. The most outstanding clinical signs were sores on the skin, melanosis, irregular swimming in the water surface, swelling of the abdomen and exophthalmoses. The most outstanding lesions were petechial hemorrhage in liver, pyloric caeca and spleen, in addition to splenomegaly and pale liver. 100% of rainbow trout samples were negative for Piscirickettsia salmonis. The result indicates that this agent is not present in fish farms evaluated or the prevalence was very low and could not be detected. Keywords: Piscirickettsia salmonis, Oncorhynchus mykiss, Junin, Indirect Inmunofluorescence.

Publicación a texto completo no autorizada por el autor / Manifiesta que el objetivo es detectar la presencia de Renibacterium salmoninarum (R. salmoninarum) en ovas fertilizadas importadas para el cultivo de trucha arco iris (Oncorhynchus mykiss) y la evaluación de la técnica de PCR a Tiempo Real como técnica diagnóstica. Se colectaron 60 ovas embrionadas de trucha arcoíris de Origen Norteamericano y se dividieron en 12 pooles de 5 ovas cada uno. Las muestras se procesaron con el método de extracción de fenolcloroformo seguido de la técnica de PCR a tiempo real. Los resultados obtenidos mostraron que, 2 pooles dieron positivo a R. salmoninarum de los 12 evaluados. En ambas muestras positivas se generó un producto específico con una Temperatura de Disociación (Tm) de 84.2°C. Estos resultados indican que existen ovas portadoras de R. salmoninarum y que la prueba PCR tiempo real puede ser usada para detectar la presencia del patógeno en muestras de ovas embrionadas. / Tesis