Tesis para optar al Grado de Magíster en Ciencias Animales y Veterinarias mención Medicina Preventiva Animal. / La piscirickettiosis en una enfermedad bacteriana que afecta a salmónidos de cultivo causando elevadas pérdidas económicas al sector acuícola y un elevado consumo de antimicrobianos, el conocimiento científico actual de la enfermedad está enfocado mayoritariamente en el agente causal, siendo el comportamiento de la enfermedad en los centros de cultivo escasamente investigado. Este estudio realiza una descripción epidemiológica de la presentación de la enfermedad en base a las mortalidades reportadas en las regiones de Los Lagos, Aysén y Magallanes durante el año 2013. Entre los hallazgos, se registraron mayores tasas de mortalidad en verano, lo que sugiere un comportamiento estacional. En cuanto a la presentación de la enfermedad por especie, se registró mayor prevalencia en incidencia en centros cultivados con S. salar y mayores tasas de mortalidad y duración de los brotes en los centros cultivados con O. mykiss. En relación a la presentación de los brotes, un 69% de los centros que fueron categorizados como de Alta Diseminación, se encontraban en la última etapa del ciclo productivo al momento de la categorización. Se observó que a mayor tiempo de permanencia en el agua, mayor fue también la tasa de mortalidad. Al analizar ciclos productivos completos en centros cultivados con S. salar en dos agrupaciones de concesiones (ACS), se pudo observar que las primeras mortalidades ocurrieron dentro del segundo mes después de la siembra. El presente estudio es el primero que describe la presentación de la piscirickettsiosis incluyendo todos los centros de cultivo presentes en las regiones de Los Lagos, Aysén y Magallanes, así como también la estimación de prevalencias a nivel de ciclo productivo, de este modo, los resultados obtenidos son un punto de partida para establecer hipótesis que permitan dilucidar la influencia de las diferentes variables en la presentación y severidad de la enfermedad. / Piscirickettiosis is a bacterial disease that affects cultivated salmonids causing high economic losses to the aquaculture sector and a high consumption of antimicrobials, the current scientific knowledge of the disease is focused mainly on the causal agent, being the behavior of the disease rarely investigated at the salmon farms. This study provides an epidemiological description of the disease presentation based on reported mortalities in the regions of Los Lagos, Aysén and Magallanes during the 2013 year. Among the findings, higher mortality rates were recorded in summer, suggesting a seasonal behavior. As to disease presentation by species, it was registered a higher prevalence and incidence in the farm cultivated with S. salar, and higher mortality rates and duration of the outbreaks in O. mykiss farms. In relation to the outbreaks presentation, 69% of the farm that were classified as High Dissemination (CAD), were in the last stage of production cycle by the time of categorization. It was observed that the longer time in the water, the higher mortality rate. When analyzing complete productive cycles in farms with S. salar in two groups of concessions (ACS), it was observed that the first mortalities occurred in the second month after sowing. This study is the first to describe the piscirickettsiosis presentation, including all salmonids farm present in the regions of Los Lagos, Aysén and Magallanes, as well as the estimation of prevalences at the productive cycle level, in this way, the results obtained are a starting point to establish hypothesis that allow to elucidate the influence of different variables on the presentation and severity of the disease.

Tesis para optar al Grado de Magíster en Ciencias Animales y Veterinarias / La piscirickettsiosis es considerada una de las enfermedades infecciosas más importantes de la salmonicultura nacional, debido a las grandes pérdidas económicas, directas e indirectas, que genera en los centros de cultivo marinos. Una de las más importantes medidas de control para la piscirickettsiosis se basa en la aplicación de tratamientos antimicrobianos para combatir el agente causal. El objetivo de este estudio es caracterizar los tratamientos antimicrobianos utilizados para el control de la enfermedad y por otra parte, identificar los patrones de distribución en tiempo y espacio, de los tratamientos antimicrobianos utilizados para el control de la piscirickettsiosis, con el fin de determinar empíricamente la presencia de la enfermedad en las áreas de cultivo. La metodología de trabajo se divide en dos fases. La primera comprende la caracterización de los tratamientos, mediante el análisis de las diferentes variables contempladas en cada tratamiento, y en la segunda se identificaron los patrones espaciales, temporales y espacio-temporales de los tratamientos antimicrobianos, mediante el método estadístico de Bernoulli para casos y controles. Los resultados demostraron que existe una amplia variedad de estrategias de aplicación de los tratamientos antimicrobianos contra piscirickettsiosis, basados en la experiencia y/o políticas de empresas de cultivo. El análisis estadístico evidenció una amplia distribución espacial de la enfermedad en las áreas de cultivo del sur de Chile, principalmente en áreas de la región de Los Lagos y la zona central de Chiloé, y agrupación de brotes de piscirickettsiosis que responden a cierta temporalidad entre los meses de febrero a mayo y entre julio y octubre / Piscirickettsiosis is considered to be one of the most important disease in the domestic salmon industry, as a result of the significant economic losses that it causes to salmon farms. The most important control measure for piscirickettsiosis is based on the use of antimicrobials to combat the causative agent. The purpose of this study is to characterize antimicrobial treatments and identify patterns of distribution in time and space of the antimicrobial treatments used for piscirickettsiosis control, in order to empirically establish the presence of the disease in fish culture zones. The methodology is divided in two phases. The first presents a description of treatments, assessing the various variables included in each treatment, and the second phase addresses the identification of spatial, temporal and spatio-temporal patterns of antimicrobial treatments. Bernoulli statistics for cases and control was used. The results show that a large variety of treatment strategies for piscirickettsiosis control are used, on the basis of veterinarian experience and company policies. Statistical analysis shows a broad spatial distribution of the disease in fish culture zones located in southern Chile, principally in the Los Lagos and central Chiloé Provinces, and a temporal clustering of piscirickettsiosis outbreaks, displayed on a seasonal basis from February to May, and from July to October

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / La salmonicultura es una actividad que hoy reporta al país importantes beneficios tanto económicos como sociales; convirtiendo a Chile en el segundo productor mundial de salmones. De ahí la importancia de mantener la sanidad de los peces en sus distintos estados de desarrollo y así reducir al mínimo las pérdidas por enfermedades. La piscirickettsiosis cuyo agente causal corresponde a Piscirickettsia salmonis es una de las principales enfermedades que afectan la salmonicultura nacional. La presente memoria de título tuvo por objetivo caracterizar la interacción de P. salmonis con ovas de trucha arco iris (Oncorhynchus mykiss) sometidas a tratamientos con proteasas y cuya técnica de detección fue “dot blot”. La metodología “dot blot” no permitió comparar la eventual diferencia en la adhesión y/o penetración de la bacteria a la ova entre tripsina y proteinasa K. Por lo cual, esta técnica sólo se pudo utilizar como una técnica cualitativa para la detección de P. salmonis. Mediante la técnica de “dot blot” se estableció que las ovas de trucha arco iris son sensibles a la infección con la cepa SLGO-95 de P. salmonis. Esta memoria también permite establecer que la estructura proteica del corion es afectada por las enzimas proteolíticas tripsina y proteinasa K. Además, dados los resultados obtenidos post-tratamientos enzimáticos, se considera que la unión entre ovas y P. salmonis, disminuye si se degradan estructuras proteicas, por lo tanto en esta unión implicaría partes proteicas o polipéptidos. Finalmente estos resultados sugieren, pero no en forma concluyente en considerar la acción de proteínas o polipéptidos en la unión y posterior internalización de P. salmonis en el interior de la ova / Proyecto Fondecyt 1030625

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La septicemia rickettsial del salmón (SRS), también llamada síndrome rickettsial salmonídeo o piscirickettsiosis es la enfermedad mas importante que afecta a salmones en cultivo, principalmente en etapa de engorda en mar, descrita en Chile desde 1989. Su agente etiológico es una bacteria Gram negativa denominada Piscirickettsia salmonis, la cual genera un efecto citopático y lisis en varias líneas celulares. En la actualidad se han planteado múltiples medidas de control para la enfermedad, dentro de ellas la aplicación de vacunas, no obstante, aún no se tiene del todo claro la real eficiencia que poseen. En dos centros de engorda, ubicados en la costa oriente de la Isla Grande de Chiloé de una empresa productora de salmón del Atlántico, que poseían jaulas con peces vacunados contra SRS y otras con peces sin esta vacuna, se evaluó la eficiencia del producto vaccinal mediante un estudio observacional de cohortes. Uno de los centros presentó una asociación positiva entre la mortalidad por SRS y peces no vacunados contra esta enfermedad, sin embargo, los resultados obtenidos del otro centro demostraron que no existió dicha asociación. A pesar de los resultados obtenidos y mediante un análisis epidemiológico, se determinó que no existió una real asociación entre peces no vacunados y mortalidad por SRS

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / P. salmonis es la bacteria responsable de la enfermedad denominada “piscirickettsiosis”, una de las principales amenazas para la industria acuícola de salmones en Chile. La gran tasa de mortalidad que produce la enfermedad en los sistemas productivos justifica la necesidad de entender cómo el agente es capaz de diseminarse y de persistir en los peces. Es así que los métodos moleculares se presentan como una vía rápida de diagnóstico mediante el uso de sus diferentes herramientas. Mediante el uso de herramientas de alineamiento de secuencias genéticas, se logró identificar la secuencia codificante, nunca antes descrita, del gen constitutivo sdhA, ampliamente estudiado en diversos organismos y utilizado en estudios como marcador de viabilidad celular y bacteriana. El presente estudio, utilizando qPCR realizó la comparación de la expresión del gen sdhA en los tejidos hepático, renal, esplénico y cultivo celular infectado, mostrando una expresión significativamente mayor en riñón y cultivo celular infectado, y por otra parte, familias de peces Salmo salar con una susceptibilidad diferencial a la enfermedad / Financiamiento: Proyecto Fondecyt No. 1120608

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / En el presente estudio se investigó la factibilidad de establecer una fase sólida para realizar un ELISA con el fin de detectar anticuerpos contra Piscirickettsia salmonis. Se realizaron varias etapas en el protocolo de purificación, para la obtención del antígeno. Se obtuvo un antígeno soluble de P. salmonis mediante extracción salina, se realizaron centrifugaciones y se liofilizó la muestra, obteniendo 567 g de antígeno, de los cuales se detectó una cantidad de 0,1 mg de proteína. En las condiciones del ensayo se utilizaron dos tipos de placas, dos tampones de sensibilización y se realizaron incubaciones a diferentes temperaturas. Para el desarrollo de la prueba de ELISA se utilizó una mezcla de anticuerpos monoclonales específicos contra P. salmonis y un antisuero conjugado de cabra anti-ratón. Como resultados, se obtuvieron reacciones negativas en todos los casos, sin haber alcanzado la razón de adsorción mínima para darle significancia al resultado; sin embargo, existió reacción colorimétrica visible en aquellas muestras procesadas en placas NUNC 69620, incubadas a temperatura ambiente, con tampón de sensibilización carbonato-bicarbonato con pH 9,6; por lo que se podría deducir que entre todos los procedimientos, este último protocolo podría ser el de elección. Como conclusión se establece que, bajo los protocolos realizados y con las concentraciones antigénicas utilizadas, no fue posible comprobar la adhesión de antígenos de Piscirickettsia salmonis a las placas, no pudiéndose establecer una fase sólida para el diagnóstico de esta bacteria por medio de la detección de anticuerpos..

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / El inicio de la producción comercial de salmónidos en Chile, trajo consigo la emergencia de una serie de patologías que afectaron enormemente esta industria, siendo la piscirickettsiosis una de las más emblemáticas a nivel nacional. En este estudio se estimaron los principales factores de riesgo para la presentación de la septicemia rickettsial del salmón (SRS) en las regiones de Los Lagos y Aysén, y la eficacia que tiene la vacunación en condiciones productivas, en salmón coho y trucha arcoíris. Para llevar a cabo la estimación de los factores de riesgo se realizó un estudio observacional retrospectivo del período 2006 – 2007, describiéndose la relación existente entre factores ambientales y de manejo con el porcentaje de mortalidad acumulada atribuible a SRS, mediante una regresión lineal múltiple. Los factores incluidos en el modelo fueron especie cultivada, tipo de instalación de origen de los “smolts”, vacunación contra SRS, presencia de otra patología durante el ciclo de engorda, porcentaje de mortalidad acumulada atribuible a rezago, porcentaje de mortalidad acumulada atribuible a causas físicas, número de terapias antimicrobianas aplicadas y semanas de descanso de las jaulas. Como resultado del estudio se obtuvo un promedio de porcentaje mortalidad acumulada atribuible a SRS de 10,4%. Los factores asociados a un mayor porcentaje de mortalidad acumulada atribuible a SRS fueron la especie trucha arcoíris, las instalaciones de origen de los “smolts” de tipo estuario, lago y mixto, la presencia de síndrome ictérico como otra patología asociada al ciclo de engorda y las mortalidades acumuladas atribuibles a rezago y causas físicas. Se asoció a un menor porcentaje de mortalidad a causa de piscirickettsiosis sólo un mayor número de semanas de descanso de las jaulas. La variable vacunación contra SRS trajo resultados confusos y no se asoció de forma significativa a la mortalidad por esta patología

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario. Tesis para optar al Grado de Magíster en Ciencias Animales y Veterinarias mención Patología Animal. / Se realizó un desafío experimental con el objeto de dilucidar si existe variación en la susceptibilidad/resistencia frente a piscirickettsiosis entre familias de la especie salmón del Atlántico (Salmo salar). Para este fin, se emplearon 4.955 salmones del Atlántico, de edad aproximada 10 meses, en estadio de “pre-smolt” pertenecientes a 29 familias, cada una compuesta por propios hermanos. El número de peces inoculados por familia varió desde un mínimo de 80 hasta un máximo de 87 ejemplares. Los animales fueron infectados con Piscirickettsia salmonis mediante inyección intraperitoneal (0,2 x 103,8 DICT50/pez). A su vez, otros 86 individuos de cada familia fueron utilizados como control, siendo inyectados por la misma vía y en volumen equivalente, con solución “buffer” fosfato salino (PBS) pH 7,2 estéril. Los peces inoculados se mantuvieron cohabitando con los controles en dos estanques de 2,5 m3 de modo de tener una réplica experimental. El ensayo tuvo una duración de 52 días post-inoculación. Durante este período, se efectuaron registros diarios de mortalidad. Mediante el método estadístico de Kaplan-Meier, se obtuvieron los valores de supervivencia de cada familia y posteriormente estos datos fueron comparados usando la prueba de Log-rank. Hubo mortalidades atribuibles a la enfermedad en todas las familias inoculadas con la bacteria y los porcentajes finales de mortalidad acumulada, ordenados por familia, variaron entre 10,5% y 70%. Las probabilidades de supervivencia fueron significativamente diferentes entre las distintas familias (p ≤ 0,05). Los resultados muestran que hay variaciones en la susceptibilidad/resistencia a piscirickettsiosis entre familias de salmón del Atlántico y que estos rasgos dependen, al menos en parte, de las características genotípicas de estos peces / In this work, susceptibility to piscirickettsiosis among some Atlantic salmon (Salmo salar) families was compared by challenging them with Piscirickettsia salmonis. Juvenile fish belonging to 29 different full sibling families were used. Per family, a minimum of 80 and a maximum of 87 fish were infected by intraperitoneal injection with a P. salmonis suspension (0.2 x 103.8 TCID50/fish) and 86 individuals were sham-inoculated with sterile PBS. Fish were held in two identical tanks supplied with fresh water. They were pit-tagged and allotted in such a way that every family had half of its inoculated (n~43) and half of its sham- inoculated fish (n=43) cohabiting in each tank. Trial lasted 52 days after the inoculation time. Final cumulative mortalities ranged from 10.5 to 70%. Kaplan-Meier analysis and Log-rank comparison tests showed that survival likeliness was different among all the families (p≤ 0.05). Same comparison between specific pairs of families exhibited survival differences in a high number of them too. Results show that there are significant variations in the degree of susceptibility/resistance to P. salmonis among families of Atlantic salmon and strongly suggest that this outcome is in its turn associated with differences in fish genotypes / Financiamiento: Proyectos Innova N° 05CT6PPT-10 y Fondecyt N° 1080692.

Tesis para optar al Grado de Magíster en Ciencias de la Acuicultura / La acuicultura en el Perú está creciendo marcadamente en los últimos años, siendo Puno uno de los Departamentos con mayor producción en el cultivo de truchas arcoíris (Oncorhynchus mykiss). A consecuencia de este crecimiento y la falta de producción de ovas nacionales, se ha incrementado su importación desde diferentes países. Al respecto, ello constituye un alto riesgo de introducción de agentes infecciosos que se transmiten por vía vertical como es la Piscirickettsia salmonis, que actualmente es el mayor problema sanitario asociado a altas tasas de mortalidad en la salmonicultura chilena. P. salmonis es una bacteria patógena que fue aislada por primera vez en el año 1989 y es el agente etiológico de la enfermedad denominada piscirickettsiosis. Actualmente dentro del cultivo de truchas arcoíris en Perú, la principal enfermedad en truchas es la yersiniosis, que es causada por el agente infeccioso Yersinia ruckeri, que genera altas pérdidas económicas.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La piscirickettsiosis es una enfermedad causada por un agente bacteriano denominado Piscirickettsia salmonis que afecta a los salmónidos cultivados en el sur de Chile principalmente en etapas de cultivo en el mar, cuyo diagnóstico se basa comúnmente en el análisis de laboratorio de muestras de riñón, hígado y cerebro según programas de vigilancia de la autoridad sanitaria acuícola de Chile. La presente memoria de título tuvo por objetivo determinar, mediante un índice de concordancia (Kappa), la asociación estadística entre la presencia de P. salmonis en muestras de heces y la presencia del agente en muestras de riñón e hígado provenientes de 24 truchas arcoíris (Onchorynchus mykiss) adultas con signología clínica de la enfermedad y que se encuentran mantenidas en condiciones de cultivo en el mar, utilizando una técnica molecular para la detección de la bacteria en cada una de las muestras. Se determinó la presencia de P. salmonis en un 70,8%, 83,3% y 75% de las muestras de heces, riñón e hígado respectivamente, y el índice kappa calculado para evaluar la asociación entre la presencia de la bacteria en heces y riñón fue negativo indicando nula concordancia mientras que el valor de kappa para la asociación entre la presencia del agente en heces e hígado fue de 0,276, indicando una débil concordancia. Este estudio es el primero en detectar P. salmonis en muestras de heces de truchas arcoíris mantenidas en condiciones naturales de cultivo en mar pero se requieren mayores estudios para poder determinar la viabilidad de la bacteria en el contenido fecal y así establecer su mecanismo de diseminación