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Recherches sur le pouvoir de synthèse des flagellés trypanosomidesLwoff, Marguerite. January 1940 (has links)
Issued also as thesis, Université de Paris. / "Bibliographie": p. [195]-209.
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Estudo comparativo dos perfis proteômicos de cepas selvagem e apossimbiótica de Strigomonas culicisGomes, Aline dos Santos Garcia January 2014 (has links)
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Previous issue date: 2016-01-13 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Strigomonas culicis, um tripanossomatídeo monoxênico, apresenta uma relação mutualística com uma bactéria em seu citoplasma. Esta pode ser removida por tratamento com antibiótico, sendo o cinetoplastídeo mantido em laboratório sob a forma de cepa apossimbiótica. Comparações entre as duas cepas fazem parte de uma estratégia interessante para o estudo da relação mantida pelos dois organismos. A ciência dirigida por descoberta, da qual a tecnologia proteômica faz parte, gera um volume de dados abrangente que pode posteriormente ser utilizado para retroalimentar projetos de ciência dirigida por hipótese. Desta forma, o estudo comparativo das duas cepas através da geração dos perfis bidimensionais, em distintas etapas do desenvolvimento celular, possibilitou a identificação de um número abrangente de proteínas diferencialmente abundantes entre as cepas, e entre as etapas do crescimento celular de cada cepa. As diferenças entre as cepas estão relacionadas tanto a alterações quantitativas quanto a proteínas exclusivas de cada condição analisada. Para a cepa selvagem uma maior modulação foi observada entre o meio e o fim de fase logarítmica, enquanto para a cepa apossimbiótica a modulação maior ocorre entre o início de fase log e a fase estacionária. Comparações entre as cepas indicam menores diferenças no início de fase logarítmica, sendo a maior porcentagem de spots diferenciais representada por aqueles que apresentam abundância diferencial estatisticamente significante
Após as identificações proteicas três processos foram detalhados: expressão de peptidases, síntese de heme e interação parasito-hospedeiro. Uma calpaína foi identificada sendo modulada não apenas entre as etapas de crescimento celular, como também entre cepas. Neste sistema sua função poderia estar relacionada ao remodelamento do citoesqueleto. A enzima coproporfirinogênio oxidase foi identificada em ambas as cepas, com abundância superior em cepa selvagem, assim como a subunidade IV do complexo citocromo c oxidase, ambos com maior abundância em início de fase log, um indicativo de diferenças de requerimento de heme e/ou hemeproteínas, bem como de metabolismo energético diferenciado, pelo menos em etapas de início de crescimento, entre as cepas. Proteínas relacionadas ao flagelo também foram identificadas, e poderiam contribuir para a sustentação de um panorama multifatorial que proporcionaria uma maior capacidade de interação da cepa selvagem com seus hospedeiros. O grande volume de dados gerados será ainda utilizado para a identificação de redes metabólicas influenciadas pelo simbionte permitindo, futuramente, um entendimento amplo da relação simbiontetripanossomatídeo / Strigomonas culicis, a monoxenic trypanosomatid, shares a mutualistic
relationship with a cytoplasmic bacterium. This bacterium can be removed by
antibiotic treatment, and the kinetoplastid can be maintained in laboratory as an
aposymbiotic strain. Comparisons between the strains are part of an interesting
strategy to study the relationship maintained by both organisms. Discovery-driven
science, which encompasses the proteomic technology, generates an in-depth data
volume, which can be used to feedback hypothesis-driven projects. Therefore, the
comparative study of the distinct strains through two-dimensional gel profiles, at
different stages of development, enabled the identification of a large number of
proteins differentially abundant between strains and among the cell growth stages for
each one. The differences between the strains are related to both quantitative
alterations and exclusive proteins of each analyzed condition. For the wild strain,
major modulation was observed between the mid- and late log phases, while for the
aposymbiotic strain, the major modulation occurred between early log and stationary
phases. Comparisons between the strains indicate minor differences at the early log
phase, being the major percentage of differential spots represented by those that
present statistically significant differential abundance. After protein identification three
processes were detailed: peptidases expression, heme synthesis and parasite-host
interaction. A calpain was identified being modulated not only between the stages of
cellular growth, but also between strains. This protein could be related to
cytoskeleton remodeling. Coproporphyrinogen oxidase enzyme and subunit IV of the
cytochrome c oxidase were identified in both strains, with overabundance in the wild
strain. Both proteins presented higher abundance at the early log phase, which
suggests differences in heme and/or heme proteins requirement, as well as a
differential energetic metabolism between the strains, at least for the early stages of
the growth. Flagellar-related proteins were also identified, which supports the idea of
a multifactorial process that contributes to understand the better interaction capacity
of the wild strain with its host. The vast amount of data obtained will be further
utilized for the identification of metabolic networks influenced by the symbiont,
hopefully allowing a broad understanding of the symbiotic-trypanosomatid
relationship.
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Comparação dos transcritos gênicos sob tensão físico- química entre Trypanosoma cruzi CL-Brener e um tripanossomatídeo monoxênicoSouza, Nathalia Pinho de January 2011 (has links)
Submitted by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2012-07-23T17:30:57Z
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Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / Os membros da família Trypanosomatidae são parasitos flagelados que podem
infectar vertebrados e ou invertebrados, e de acordo com o tipo e número de
hospedeiros são classificados como parasitas monoxênicos ou heteroxênicos. Neste
trabalho realizamos a comparação da detecção de transcritos entre Trypanosoma
cruzi clone CL-Brener, espécie heteroxênica, e Blastocrithidia culicis, como
representante dos tripanossomatídeos monoxênicos, ambos submetidos a tensões
físicas, químicas e nutricionais.
A questão proposta é se duas espécies de
tripanossomatídeos com estilos de vida distintos respondem à mesma pressão
ambiental (tensão em meio de cultivo) com os mesmos genes. Para tanto foi
realizado o crescimento de ambas as espécies em diferentes condições de tensão,
como alterações de temperatura, variações de pH, redução de nutrientes do meio,
adição de agentes químicos ao meio, entre outros. O perfil dos transcritos, obtidos,
através de RT-PCR com iniciador arbitrário selecionado (RNA fingerprinting), foi
comparado entre a condição padrão de crescimento (controle) e as condições
alteradas entre as duas espécies. Com isso, foram observados comportamentos
distintos dos tripanossomatídeos nas condições físicas impostas, como os extremos
de temperaturas. Com esta abordagem metodológica que deve apontar os genes
que mais respondem as condições de estresse nas células, obtivemos uma
representação do momento transcricional dos protozoários. Foram gerados 722
ESTs após o sequenciamento de fragmentos transcritos de T. cruzi e B. culicis sob
tensão, além de ESTs da condição padrão (controle) de B. culicis. Foi observada
alta transcrição de genes de proteínas de superfície (mucinas, trans-sialidades,
gp63, etc) sob tensão tanto em T. cruzi como B. culicis, além de proteínas
regulatórias da expressão gênica em menor quantidade. Ambas as espécies
apresentaram trans splicing de duas formas diferentes, através da utilização de
sítios adicionais (AG), antes da ORF, ou splicing alternativo ao gerar transcritos
internos às ORFs. Concluímos com isso que tripanossomatídeos de espécies e
estilos de vida distintos compartilham apenas poucos genes quando em condições
de estresse. Grande parte dos transcritos mostraram-se específicos para cada
espécie. / Os membros da família Trypanosomatidae são parasitos flagelados que podem
infectar vertebrados e ou invertebrados, e de acordo com o tipo e número de
hospedeiros são classificados como parasitas monoxênicos ou heteroxênicos. Neste
trabalho realizamos a comparação da detecção de transcritos entre Trypanosoma
cruzi clone CL-Brener, espécie heteroxênica, e Blastocrithidia culicis, como
representante dos tripanossomatídeos monoxênicos, ambos submetidos a tensões
físicas, químicas e nutricionais.
A questão proposta é se duas espécies de
tripanossomatídeos com estilos de vida distintos respondem à mesma pressão
ambiental (tensão em meio de cultivo) com os mesmos genes. Para tanto foi
realizado o crescimento de ambas as espécies em diferentes condições de tensão,
como alterações de temperatura, variações de pH, redução de nutrientes do meio,
adição de agentes químicos ao meio, entre outros. O perfil dos transcritos, obtidos,
através de RT-PCR com iniciador arbitrário selecionado (RNA fingerprinting), foi
comparado entre a condição padrão de crescimento (controle) e as condições
alteradas entre as duas espécies. Com isso, foram observados comportamentos
distintos dos tripanossomatídeos nas condições físicas impostas, como os extremos
de temperaturas. Com esta abordagem metodológica que deve apontar os genes
que mais respondem as condições de estresse nas células, obtivemos uma
representação do momento transcricional dos protozoários. Foram gerados 722
ESTs após o sequenciamento de fragmentos transcritos de T. cruzi e B. culicis sob
tensão, além de ESTs da condição padrão (controle) de B. culicis. Foi observada
alta transcrição de genes de proteínas de superfície (mucinas, trans-sialidades,
gp63, etc) sob tensão tanto em T. cruzi como B. culicis, além de proteínas
regulatórias da expressão gênica em menor quantidade. Ambas as espécies
apresentaram trans splicing de duas formas diferentes, através da utilização de
sítios adicionais (AG), antes da ORF, ou splicing alternativo ao gerar transcritos
internos às ORFs. Concluímos com isso que tripanossomatídeos de espécies e
estilos de vida distintos compartilham apenas poucos genes quando em condições
de estresse. Grande parte dos transcritos mostraram-se específicos para cada
espécie.
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Co-infecção HIV-1/Tripanossomatídeos em macrófagos humanos efeito da infecção pelo HIV-1 e proteína Tat do HIV-1 sobre a replicação parasitáriaSilva, Victor Barreto de Souza Brasil January 2009 (has links)
Made available in DSpace on 2014-12-05T18:41:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2
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Previous issue date: 2014-11-18 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Protozoários parasitos aparecem como co-patógenos em infecções pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV)-1, resultando em um aumento mútuo na replicação viral e parasitária, e facilitando a progressão clínica de ambas as doenças. Os mecanismos pelos quais o HIV-1 induz um aumento na replicação do protozoário são desconhecidos. Neste trabalho, nós investigamos o papel do HIV-1 e da proteína trans-ativadora (Tat) do HIV-1 no aumento da replicação parasitária em macrófagos humanos primários co-infectados ou não com HIV-1 e Leishmania amazonensis ou com HIV-1 e Blastocrithidia culicis. Em alguns experimentos, macrófagos foram infectados somente com L. amazonensis ou B. culicis e expostos à proteína Tat recombinante do HIV-1. As replicações dos protozoários e do HIV-1 foram analisadas por índice endocítico ou ensaio imunoadsorvente ligado a enzima (ELISA) para p24, respectivamente. A infecção pelo HIV-1 dobrou a replicação da Leishmania em macrófagos, e soro contra o Tat do HIV-1 reduziu significativamente a replicação exacerbada do protozoário, indicando uma importante função desta proteína, a qual é liberada pelas células infectadas com HIV-1, neste processo. Corroborando estes resultados, a exposição de macrófagos infectados somente por Leishmania ao Tat recombinante (100 ng/mL) mimetizou a infecção pelo HIV-1. A multiplicação do protozoário diminuiu quando células infectadas por Leishmania foram tratadas com Tat na presença de anticorpos neutralizantes contra o Fator de Crescimento e Transformação (TGF)-b1, demonstrando a participação desta citocina no aumento da replicação da L. amazonensis em macrófagos. O tratamento com Tat induziu a expressão da enzima Ciclo-oxigenase (COX)-2 e a secreção de Prostaglandina E2 (PGE2), e o bloqueio da produção de PGE2 aboliu o aumento da replicação da Leishmania induzida por Tat
Adição exógena de PGE2 estimulou o crescimento da Leishmania em macrófagos, e a neutralização imune de TGF-b1 abrandou este efeito. Analisados em conjunto, nós concluímos que Tat estimula a replicação da Leishmania via indução da síntese de PGE2 e conseqüentemente secreção de TGF-b1. Para avaliar se a infecção pelo HIV-1 desativa a atividade microbicida do macrófago, células infectadas com HIV-1 foram co-infectadas com um protozoário não patogênico (Blastocrithidia culicis), e nós observamos que a infecção pelo HIV-1 favoreceu a sobrevivência deste tripanossomatídeo. Por microscopia eletrônica, nós verificamos que tanto o HIV-1 quanto a B. culicis co-habitavam um mesmo macrófago, e que formas em divisão do protozoário podiam ser observadas no interior de macrófagos. De forma similar aos encontrados nos experimentos com Leishmania, o Tat ou o TGF-b1 dobraram o crescimento do protozoário em macrófagos infectados somente por Blastocrithidia. Em conclusão, nós identificamos, pela primeira vez, uma molécula do HIV-1 que promove a multiplicação de um protozoário patogênico (Leishmania), e permite a sobrevivência/crescimento em macrófagos humanos primários de um protozoário habitualmente não patogênico. Uma vez que a neutralização imune do Tat tem sido estudada como uma estratégia de vacinação contra o HIV-1, nossos resultados sugerem que a neutralização desta proteína também pode ser salutar no combate ao protozoário em casos de co-infecção / Protozoan parasites appear as human immunodeficiency virus (HIV)-1 co-pathogens, resulting in
a mutuall enhancement of viral and parasite replication, and facilitating the clinical progression of both
diseases. The mechanisms by which HIV-1 induces up-modulation of protozoan replication are unknown.
In this work, we investigated the role of HIV-1 and HIV-1 transcriptional transactivator (Tat) protein in the
enhancement of parasite replication in primary human macrophages co-infected or not with HIV-1.
Human macrophages were co-infected with HIV-1 and either with Leishmania amazonensis or
Blastocrithidia culicis. In selected assays, macrophages were infected only with L. amazonensis or B.
culicis and exposed to recombinant HIV-1 Tat protein. Protozoan and HIV-1 replication were analyzed by
endocytic index or p24 Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay (ELISA), respectively. HIV-1 infection
doubled the Leishmania replication in macrophages, and Tat antiserum significantly reduced the
exacerbated parasite replication, pointing to a direct role of Tat protein released from HIV-1-infected cells
in this process. Corroborating this finding, exposure of Leishmania-infected macrophages to recombinant
Tat (100 ng/mL) mimicked HIV-1 infection. Protozoan replication diminished when Leishmania-infected
cells were treated with Tat in the presence of neutralizing anti-Transforming Growth Factor (TGF)-b1
antibodies, showing a participation of this cytokine in the augmentation of L. amazonensis multiplication in
macrophages. Interestingly, Tat induced the expression of the enzyme Cyclooxygenase (COX-2) and
Prostaglandin E2 (PGE2) secretion, and blockage of PGE2 production abrogated the increased
Leishmania replication induced by Tat. Exogenous addition of PGE2 elicited Leishmania replication in
macrophages, and immunoneutralization of TGF-b1 blunted this effect. Taken together, we deciphered
that Tat stimulates Leishmania replication via induction of PGE2 synthesis and consequently TGF-b1
secretion. To evaluate whether HIV-1 infection deactivates the microbicidal activity of macrophages, HIV-
1-infected cells were co-infected with a non-pathogenic protozoan (Blastocrithidia culicis), and we found
that HIV-1 infection favors the survival of this trypanosomatid. By electron microscopy, we verify that both
HIV-1 and B. culicis co-habited the same macrophage, and that dividing forms of the protozoan can be
observed inside the macrophage. Similarly, Tat or TGF-b1 doubled the protozoan growth in
Blastocrithidia-infected macrophages. In conclusion, we identified, for the first time, an HIV-1 molecule
that promotes multiplication of a pathogenic protozoan (Leishmania) and permit survival of an otherwise
non-pathogenic protozoan in primary human macrophages. Because immunoneutralization of HIV-1 Tat
has been studied as a vaccination strategy against HIV-1, our results suggest that neutralization of this
protein could be salutary in the combat against the protozoan in the cases of co-infection
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Caracterização morfológica, bioquimica e molecular de Vickermania Itaguaiensis N. Gen, SP (Protozoa, Kinetoplastida)Silva Junior, Renato da January 2011 (has links)
Submitted by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2012-09-19T13:39:08Z
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Previous issue date: 2011 / Universidade Federal Fluminense. Centro de Estudos Gerais. Instituto de Biologia. Niteroi, RJ, Brasil / A família Trypanosomatidae inclui parasitas de uma grande variedade de vertebrados,
invertebrados (principalmente insetos), plantas e algumas espécies de protozoários,
sendo, depois do nematóides, os de maior distribuição de hospedeiros na natureza. No
presente trabalho, um novo isolado foi obtido por coprocultivo de trato intestinal de
Leptoglossus stigma Herb, 1784 (Hemiptera, Coreidae), capturado no município de
Itaguaí/RJ. O isolado original e três clones (obtidos por citometria de fluxo) foram
depositados na "Coleção de Flagelados do Laboratório de Transmissores de
Leishmanioses." Um clone foi caracterizado por diversas abordagens em comparação
com espécies de referência de diferentes gêneros. Foi analisado o crescimento em
meio de cultivo em intervalos de 24 h, entre 48-144 h, a diferenciação celular e a
morfometria dos principais estágios evolutivos encontrados. A análise de isoenzimas
foi realizada utilizando-se os seguintes sistemas: GPI, PGM, 6PGDH, HK, ACON, MPI,
FUM, IDH, MDH e ACON. RAPD-PCR foi realizado utilizando-se 6 iniciadores,
conjuntamente com outros tripanosomatídeos. Os dados destas análises foram
processados numericamente e submetidos à análise computacional utilizando-se o
coeficiente de associação Jaccard e o algoritmo de agrupamento UPGMA. Realizou-se
seqüenciamento do amplicon do gene de SSU rRNA e o fragmento analisado foi
alinhado com vinte e uma seqüencias depositadas no GenBank, gerando uma árvore
filogenética resultante do pareamento. O conjunto de resultados deste trabalho sugere
que a amostra obtida constitui nova espécie, pertencendo a um novo gênero, nomeada
Vickermania itaguaiensis. / The Trypanosomatidae family includes parasites of a wide variety of vertebrates,
invertebrates (mainly insects), plants and some species of protozoa, and after the
nematodes, the highest distribution of hosts in nature. In this study, an isolate was
obtained by coproculture from Leptoglossus stigma Herb, 1784 (Hemiptera, Coreidae)
intestinal tract, captured in the city of Itaguaí/RJ. The original isolate and clones
(obtained by flow cytometry) were deposited in the "Coleção de Flagelados do
Laboratório de Transmissores de Leishmaniose". One clone was characterized by
several approaches in comparison with the reference species of different genus. Growth
was analyzed in culture medium at 24 h intervals between 48-144 h, cell differentiation
and morphometric parameters of the main evolutionary stages matches. The isoenzyme
analysis was performed using the following systems: GPI, PGM, 6PGDH, HK, ACON,
MPI, FUM, IDH, MDH and ACON. RAPD-PCR was performed using 6 primers, together
with other trypanosomatids. The analysis of these data were numerically processed and
submitted to computer analysis using the Jaccard association coefficient and UPGMA
clustering algorithm. We carried out sequencing of the amplicon from SSU rRNA gene
and the fragment analyzed was aligned with twenty-one sequences deposited in
GenBank, generating a phylogenetic tree resulting from the pairing. The result set of
this work suggests that the sample obtained represents a new species belonging to a
new genus, named Vickermania itaguaiensis.
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Avaliação da ocorrência de tripanosomatídeos (protozoa: kinetoplastida) em morcegos no estado do Rio de JaneiroBarros, Juliana Helena da Silva January 2009 (has links)
Submitted by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2012-09-28T14:29:18Z
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Previous issue date: 2009 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Os morcegos são mamíferos pertencentes à ordem dos Quirópteros. São animais que
possuem hábitos alimentares bastante diversificados, apresentando espécies importantes
no equilíbrio e diversidade biológica das espécies vegetais, como também atuantes na
transmissão de doenças para o homem e para os animais. No município do Rio de Janei-
ro, pouco se conhece sobre a ocorrência de tripanosomatídeos, nem tampouco sobre a
possibilidade da participação desses animais no ciclo de transmissão de certos tripano-
somas. Este trabalho objetivou avaliar, por hemocultura, a infecção natural por flagela-
dos tripanosomatídeos em morcegos capturados em diferentes municípios do Estado do
Rio de Janeiro e caracterizar os isolados obtidos quanto à sensibilidade ao sistema com-
plemento; potencial infectivo para macrófagos murinos “in vitro”; potencial infectivo
para Triatoma infestans e análise do perfil isoenzimático (MLEE). Durante o estudo,
flagelados tripanosomatídeos foram encontrados em 29 (30,2%) dos 96 morcegos avali-
ados, dos quais 28 possuíam hábitos hematófagos (D. rotundus) e 1 hábito insetívoro
(Lonchorhina aurita), capturados em diferentes municípios do estado do Rio de Janeiro.
Das amostras isoladas, 12 foram selecionadas para estudos de caracterização, todas,
apresentando padrões biológicos semelhantes, todas sendo sensíveis ao sistema com-
plemento, apresentando 100% de lise das formas epimastigotas; não foram capazes de
infectar macrófagos murinos “in vitro” nem tampouco puderam infectar e colonizar
glândulas salivares, hemolinfa e o trato intestinal de Triatoma infestans. Na análise iso-
enzimática, avaliado por 9 loci, três zimodemas foram observados, todos, diferentes das
amostras de referências Trypanosoma cruzi, Trypansoma rangeli e Trypanosoma des-
terrrensis, empregadas nesta análise. Os resultados obtidos neste estudo demonstraram
que flagelados do gênero Trypanosoma podem ser isolados de morcegos com diferentes
hábitos alimentares no estado do Rio de Janeiro e embora nenhuma amostra tenha sido
identificada como Trypanosoma cruzi, Trypanosoma rangeli ou Trypanosoma dester-
rensis, observou-se três padrões fenotípicos distintos entre as doze amostras estudadas.
Espera-se, dessa forma, contribuir para as ações de vigilância a partir do conhecimento
das espécies de tripanosomatideos circulantes em morcegos do Estado do Rio de Janei-
ro. / Bats are mammals belonging to the order Chiroptera. These animals have very different
alimentary habits, several species being important in the balance and biological diver-
sity of plant species, as well as being active in the transmission of diseases to man and
to animals. In the state of Rio de Janeiro, little is known about the occurrence of try-
panosomatids, neither the possibility of participation of these animals in the cycle of
transmission of certain trypanosomes. This study aimed at the evaluation of the natural
infection by flagellates trypanosomatids in bats captured in different municipalities in
the state of Rio de Janeiro, by blood culture, and characterizing the obtained isolates in
relation to their sensitivity to the complement system; their infecting potential to in vitro
murine macrophages; their infecting potencial to Triatoma infestans and the analysis of
the isoenzymatic profile (MLEE). During the study, flagellated tripanosomatids were
identified in 29 (30,2%) of the 96 specimens examined, being 28 of the samples origi-
nated from bats of hematophagous habits (Desmdus rotundus) and 1 insectivorous habit
(Lonchorhina aurita), caught in different municipalities of the state of Rio de Janeiro.
From the isolated samples, 12 were selected for studies of characterization, all present-
ing similar biological standards, all were sensitive to complement, presenting 100%
lysis of epimastigote forms; they neither were capable of infecting murine macrophages
in vitro neither being able to infect and colonize salivary glands, hemolymph and the
intestinal tract of Triatoma infestans. In isoenzyme analyses, assessed for 9 loci, three
zimodemes were observed, all different of the samples of reference Trypanosoma cruzi,
Trypansoma rangeli and Trypanosoma desterrrensis, used in this study. The results of
this study showed that flagellates of the genus Trypanosoma can be isolated from bats
with different alimentary habits in the state of Rio de Janeiro and although no samples
was identified as Trypanosoma cruzi, Trypanosoma rangeli or Trypanosoma desterren-
sis, three distinct phenotypic pattern among the twelve samples were observed. It is ex-
pected that these results contribute to the surveillance activities towards the knowledge
of the occurrence of trypanosomatids in bats in the state of Rio de Janeiro.
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