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Isolamento, sele??o e avalia??o do potencial de biodegrada??o de glifosato (n-(Fosfonometil)glicina) por microrganismos isolados de solo de lavoura, em Laranjeiras do Sul, PR.Demichelli, Fernanda Natal? 07 March 2016 (has links)
Submitted by Maria Rosa Moraes Maximiano (maria.maximiano@uffs.edu.br) on 2017-05-26T19:48:03Z
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Previous issue date: 2016-03-07 / O uso abusivo de glifosato, um dos agrot?xicos mais utilizados no Brasil, est? relacionado a problemas de sa?de e ao ambiente. Diante disso, o presente trabalho teve como objetivo isolar, avaliar a capacidade de crescimento ou degrada??o e posteriormente identificar microrganismos aut?ctones degradadores de glifosato de um solo com uso intensivo deste agrot?xico. Foram coletadas 12 amostras de solo aleatoriamente (0-10 cm de profundidade), homogeneizadas e ap?s transferido 1 g da amostra para erlenmeyer contendo 50 mL de meio mineral (MM) (g/L, KCl 0,7; KH2PO4 2,0; Na2HPO4 3,0; NH4NO3 1,0; MgSO4 1,0; FeSO4 4,0; MnCl2 0,2; CaCl2 0,2; pH 7,2) com 100 mg/L de glifosato (?nica fonte de carbono) com 3 transfer?ncias subsequentes (1 mL) a cada cinco dias, incubando a 28 ?C. Ap?s, foi realizada a contagem em placas e as bact?rias e fungos morfologicamente diferentes foram isolados em ?gar nutriente e sabouraud com 300 mg/L de glifosato, respectivamente. A seguir, os fungos foram incubados em ?gar MM s?lido com 300 mg/L de glifosato, como ?nica fonte de carbono, a 28 ?C/14 dias. Foi realizada a medida di?ria do crescimento micelial radial e calculada a velocidade de crescimento por meio de regress?o linear dos raios das col?nias. Do total de 18 fungos isolados, 11 utilizaram o glifosato como fonte de carbono. Foram identificados oito g?neros de fungos filamentosos e dois falsos fungos, que apresentaram as maiores velocidades de crescimento radial. Os g?neros que mais se destacaram foram: Aspergillus sp., Fusarium sp., Penicillium sp. e Geotrichum sp. Foram isoladas 25 bact?rias (47% bacilos gram negativas), destas, seis permaneceram vi?veis at? o experimento de degrada??o de glifosato. Para o preparo do in?culo bacteriano, uma al?ada foi transferida para erlenmeyers com 100 mL de caldo nutriente e 300 mg/L de glifosato, incubado a 150 rpm/48 h. Ap?s tr?s lavagens (MM), o in?culo foi padronizado (escala de McFarland). O ensaio do potencial de degrada??o das bact?rias isoladas foi realizado com a incuba??o do in?culo (5x106 UFC/mL) em MM na aus?ncia/presen?a de diferentes concentra??es de glifosato (300, 500 e 700 mg/L) utilizando o indicador redox 2,6-diclorofenol-indofenol (DCPIP), incubadas em estufa (28 ?C) e realizadas medidas espectrofotom?tricas a 600 nm no per?odo de 0-120h. As 6 bact?rias testadas apresentaram velocidade degrada??o de DCPIP nas concentra??es testadas, indicando que possivelmente utilizaram o glifosato como fonte de carbono. A bact?ria B8, relativamente ?s demais, foi a que mais reduziu a quantidade de DPCIP. Os resultados sugerem que os microrganismos isolados s?o tolerantes e apresentam alto potencial de degrada??o de glifosato, podendo ser utilizados em futuros estudos de biorremedia??o de solos contaminados com este agrot?xico. / The abusive use of glyphosate, one of the most widely used pesticides in Brazil is related to health issues and the environment. Therefore, this study aimed to isolate, evaluate the growth capacity or degradation and subsequently identify indigenous microorganisms degrading glyphosate in a soil with intensive use of this pesticide. The 12 samples were collected randomly soil (0-10 cm depth), homogenized and them 1 g of the sample was transferred in a flask containing 50 ml of mineral medium (MM) (g/L KCl 0.7; KH2PO4 2.0; Na2HPO4, 3.0; NH4NO3 1.0; MgSO4 1.0; FeSO4 4.0; MnCl2, 0.2; CaCl2 0.2; pH 7.2) with 100 mg/L glyphosate (as sole carbon source) 3 subsequent transfers (1 ml) every five days and incubation at 28 ? C. Bacteria and fungi morphologically different were isolated on nutrient agar, and Sabouraud with 300 mg/L of glyphosate, respectively. The following fungi were incubated on solid MM agar with 300 mg/l glyphosate as sole carbon source at 28 ? C by 14 days. The radial mycelial growth was daily measured and the growth rate were calculated by linear regression using the colonies rays. Of the total of 18 fungal isolates, 11 used glyphosate as a carbon source. eight genera of filamentous fungi and two false fungi, with the highest rates of radial growth were identified. The genres that stood out were: Aspergillus, Fusarium sp, Penicillium sp... and Geotrichum sp. 25 Bacteria were isolated (47% gram-negative bacilli), these six remained viable by the experiment of glyphosate degradation. To prepare the inoculum, was transferred to a Erlenmeyer flasks with 100 ml of nutrient broth and 300 mg/L of glyphosate, incubated at 150 rpm by 48 h. After three washes (MM), the inoculum was standardized using McFarland scale. The potential for degradation of the test isolates was performed with incubation inoculum (5x106 CFU/ml) in MM in the absence or presence of different concentrations of glyphosate (300, 500 and 700 mg/L) using redox indicator 2,6-dichlorophenol-indophenol (DCPIP), incubated in a greenhouse (28 ?C) and spectrometric measured at 600 nm in 0-120h period. The 6 bacterial strains tested showed DCPIP degradation rate at the concentrations tested, indicating that possibly used glyphosate as a carbon source. The B8 bacteria in relation to the others, was the most reduced the amount of DPCIP. The results suggest that microorganisms are tolerant and have a high potential for glyphosate degradation and can be used in future studies of bioremediation of soils contaminated with this pesticide.
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Curvas de crescimento de Eucalyptus spp em plantios de diferentes espaçamentos / Eucalyptus spp growth curves in different densitiesCaterina, Giulia Lembo [UNESP] 02 February 2017 (has links)
Submitted by GIULIA LEMBO CATERINA null (giucaterina@hotmail.com) on 2017-04-03T21:59:24Z
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Previous issue date: 2017-02-02 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Modelos de crescimento podem servir como ferramenta de planejamento de plantios florestais para o serviço público, produtores e investidores. O presente trabalho utilizou o modelo de crescimento Gompertz para analisar e comparar curvas médias de crescimento em volume de madeira com casca e sem casca por árvore de dois clones distintos de Eucalyptus grandis x Eucalyptus urophylla em diferentes densidades de plantio: 1,5m x 1,5m, 3,0m x 0,75m, 3,0m x 1,0m, e 3,0m x 1,9m. Os dados foram coletados a partir de parcelas permanentes localizadas em plantios da empresa Duratex Florestal LTDA no município de Estrela do Sul - MG em quatro idades: 24, 36, 48 e 60 meses. As análises seguiram duas abordagens. A primeira abordagem foi pela curva de crescimento utilizando o modelo Gompertz, do qual foram ajustadas as curvas médias de crescimento. Os parâmetros estimados de interesse foram a velocidade máxima de crescimento no ponto de inflexão e a abscissa da inflexão. A segunda abordagem foi pela modelagem do máximo volume com e sem casca amostrais através de modelos lineares generalizados. O efeito de clone e espaçamento foi avaliado e as médias dos maiores volumes amostrais foram, também, comparadas entre tratamentos. Os dados observados de volume com e sem casca por árvore permitiram bons ajustes do modelo de Gompertz, com o objetivo de descrever o crescimento destas variáveis ao longo do tempo. Foi possível identificar as fases juvenil, que vai até o ponto de inflexão da curva e de maturidade, que vai do ponto de inflexão até o ponto de máxima tangência nas curvas projetadas para quase todos os tratamentos. Porém, o período de dados coletados não foi o suficiente para se modelar a curva de crescimento por árvore até a senescência da curva, mesmo para os espaçamentos mais adensados. As maiores médias de velocidade máxima de crescimento individual foram encontradas no espaçamento mais amplo, 3,0m x 1,9m, para ambos os clones, assim como as maiores médias dos volumes individuais máximos com e sem casca. O clone c1 apresentou maiores médias dos volumes individuais máximos com e sem casca por árvore observados que o clone c2. A idade do plantio se mostrou essencial na discussão sobre a produtividade de diferentes arranjos de plantio. Portanto, este estudo confirma a importância do uso de curvas de crescimentos em estudos na área florestal. / Growth models can serve as a tool for forest management plans for public service, producers and investors. The present work used the Gompertz growth model to analyze and compare individual volume growth curves of three distinct clones of Eucalyptus grandis x Eucalyptus urophylla at different planting densities. Four different spacings densities were evaluated, 3.0m x 0.75m, 1.5m x 1.5m, 3.0m x 1.9m and 3.0m x 1.0m, for each clone at two different sites, São Paulo and Minas Gerais General. The data were collected from permanent plots at four ages: 24, 36, 48 and 60 months. The analyzes followed two approaches. The first approach was to adjust the growth curve using the Gompertz model to the volume data. The estimated parameters of interest, analyzed later, were the maximum velocity of growth at the inflection point and the abscissa of the inflection point. For each estimated parameter, generalized linear models were adjusted to detect the effect of location, clone and spacing. Thus, the adjustment was made for each portion of the treatments and the means of the estimated parameters were compared. The second approach was the modeling of the largest volume observed through generalized linear models. The effect of site, clone and spacing were evaluated and the means of the largest sample volumes were compared between treatments. The observed data of volume with and without bark per tree allowed good adjustments of the Gompertz model, in order to describe the growth of these variables over time. It was possible to identify the juvenile phase, which goes from first years to the point of inflection, and the maturity phase, which goes from the point of inflection to the point of maximum tangency, for almost all treatments. However, the period of data collection was not sufficient to get the curves to the senescence phase, even for the denser spaces. The spacing density 3.0m x 1.9m resulted on the higher averages of maximum individual growth velocity and on the higher mean values of the observed volumes with and without bark. Clone c1 presented higher mean values of the observed volumes with and without bark per tree than clone c2. The stand age was shown to be essential in the discussion of a productivity of different densities arrangements. Therefore, this study confirms the importance of the use of growth curves in studies in forestry.
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Interação entre Cylindrospermopsis raciborskii e Microcystis aeruginosa: implicações no crescimento de culturas e na produção de microcistinas / Interaction between Cylindrospermopsis raciborskii and Microcystis aeruginosa: implications in cultures growth and microcystins productionSantos, Paulo Vagner dos 18 June 2009 (has links)
Cianobactérias desempenham importante papel ecológico em diversos ecossistemas terrestres e aquáticos. Contudo, tornam-se problema de saúde pública quando biossintetizam compostos secundários tóxicos, denominados cianotoxinas, as quais podem atuar sobre diversos organismos. Sistemas aquáticos impactados favorecem o desenvolvimento destes microrganismos, que podem tornar-se dominantes em função dos diversos mecanismos que lhes conferem vantagens adaptativas em relação aos demais grupos fitoplanctônicos. Muitas vezes, elas apresentam-se sob forma de florescimento, cuja toxicidade varia de acordo com espécies e cepas que o compõem. Apesar das cianobactérias Cylindrospermopsis raciborskii e Microcystis aeruginosa formarem florações, terem potencial tóxico, serem competitivas e estarem presentes em diversos reservatórios, é desconhecido o efeito da interação entre elas na produção de microcistina. Para esclarecer esta questão, nesta pesquisa, foi estudada a interação entre cepas de C. raciborskii e M. aeruginosa visando: caracterizar o cultivo das espécies em monocultura e cultura mista; verificar se o caráter tóxico das cepas favoreceu a competição; mensurar a microcistina de M. aeruginosa e avaliar o efeito da interação sobre esta variável. Em salas climatizadas de cultivo (22ºC, fotoperíodo 12h, 60 \'mü\'mol photon/\'M POT.2\'.s) experimentos de interação foram realizados em culturas batch compostas por três tratamentos: (1) monocultura de M. aeruginosa, (2) monocultura de C. raciborskii, (3) cultura mista de M. aeruginosa e C. raciborskii. Foram realizadas análises da densidade e biovolume dos organismos, da velocidade específica de crescimento (\'mü\') e tempo de duplicação (Td) e da concentração de microcistinas, clorofila-a e nutrientes. A interação reduziu em até 22% a \'mü\' das linhagens estudadas. Tanto C. raciborskii quanto M. aeruginosa apresentaram vantagem competitiva em pelo menos um dos ensaios e, no caso de linhagem tóxica de M. aeruginosa, verificou-se que o seu caráter tóxico favoreceu a competição da espécie com linhagem atóxica de C. raciborskii. Além disso, M. aeruginosa elevou em até 53% a síntese de microcistina ao interagir com C. raciborskii. Este processo poderia se relacionar a três principais mecanismos: competição por interferência, produção de alelopáticos e comunicação química. Estudos de balanços genéticos dos florescimentos bem como da possível comunicação química existente entre cianobactérias são ferramentas investigativas importantes que poderão ajudar no aprimoramento da prevenção e manejo de florações tóxicas. / Cyanobacteria play important ecological role in many terrestrial and aquatic ecosystems. However, they become a public health problem when synthesize secondary toxic compounds, known as cyanotoxins, which may act on several organisms. Impacted aquatic systems favor their growth and these microorganisms can become dominant due to mechanisms that confer them adaptive advantages in relation to other phytoplanktonic groups. Frequently, cyanobacteria can form water blooms, whose toxicity varies according to their species and strains composition. Although the cyanobacteria Cylindrospermopsis raciborskii and Microcystis aeruginosa can form blooms, have toxic potential, are competitive and present in several reservoirs, it is unknown the interaction effect between them in the production of microcystins. To solve this question, the interaction among strains of C. raciborskii and M. aeruginosa was studied to: characterize the culture of the species in monoculture and mixed culture; check whether the character of toxic strains favored the competition; measure microcystin concentration produced by M. aeruginosa and evaluate interaction effect on this variable. In climatized growth room (22°C, 12h photoperiod, 60 \'mü\'mol photon/\'M POT.2\'.s) four interaction experiments composed by three treatments were performed in batch cultures: (1) monoculture of M. aeruginosa, (2) monoculture of C. raciborskii, (3) mixed culture of M. aeruginosa and C. raciborskii. Density and biovolume, specific growth rate (\'mü\'), doubling time (Td) and concentration of microcystin, chlorophyll-a and nutrients analyses were performed. The interaction reduced up to 22% the of studied strains. Both C. raciborskii and M. aeruginosa presented competitive advantage in at least one of the tests. In the case of toxic strain of M. aeruginosa, it was found that its toxic character favored the competition with non-toxic strain of C. raciborskii. Furthermore, M. aeruginosa increased by 53% the synthesis of microcystin while interacting with C. raciborskii. This process could be related to three main mechanisms: interference competition, communication and production of allelopathic chemicals. Genetical balance studies of blooms as the possible chemical communication existing among cyanobacteria are important investigative tools that might help prevention and management improvement of toxic blooms.
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Interação entre Cylindrospermopsis raciborskii e Microcystis aeruginosa: implicações no crescimento de culturas e na produção de microcistinas / Interaction between Cylindrospermopsis raciborskii and Microcystis aeruginosa: implications in cultures growth and microcystins productionPaulo Vagner dos Santos 18 June 2009 (has links)
Cianobactérias desempenham importante papel ecológico em diversos ecossistemas terrestres e aquáticos. Contudo, tornam-se problema de saúde pública quando biossintetizam compostos secundários tóxicos, denominados cianotoxinas, as quais podem atuar sobre diversos organismos. Sistemas aquáticos impactados favorecem o desenvolvimento destes microrganismos, que podem tornar-se dominantes em função dos diversos mecanismos que lhes conferem vantagens adaptativas em relação aos demais grupos fitoplanctônicos. Muitas vezes, elas apresentam-se sob forma de florescimento, cuja toxicidade varia de acordo com espécies e cepas que o compõem. Apesar das cianobactérias Cylindrospermopsis raciborskii e Microcystis aeruginosa formarem florações, terem potencial tóxico, serem competitivas e estarem presentes em diversos reservatórios, é desconhecido o efeito da interação entre elas na produção de microcistina. Para esclarecer esta questão, nesta pesquisa, foi estudada a interação entre cepas de C. raciborskii e M. aeruginosa visando: caracterizar o cultivo das espécies em monocultura e cultura mista; verificar se o caráter tóxico das cepas favoreceu a competição; mensurar a microcistina de M. aeruginosa e avaliar o efeito da interação sobre esta variável. Em salas climatizadas de cultivo (22ºC, fotoperíodo 12h, 60 \'mü\'mol photon/\'M POT.2\'.s) experimentos de interação foram realizados em culturas batch compostas por três tratamentos: (1) monocultura de M. aeruginosa, (2) monocultura de C. raciborskii, (3) cultura mista de M. aeruginosa e C. raciborskii. Foram realizadas análises da densidade e biovolume dos organismos, da velocidade específica de crescimento (\'mü\') e tempo de duplicação (Td) e da concentração de microcistinas, clorofila-a e nutrientes. A interação reduziu em até 22% a \'mü\' das linhagens estudadas. Tanto C. raciborskii quanto M. aeruginosa apresentaram vantagem competitiva em pelo menos um dos ensaios e, no caso de linhagem tóxica de M. aeruginosa, verificou-se que o seu caráter tóxico favoreceu a competição da espécie com linhagem atóxica de C. raciborskii. Além disso, M. aeruginosa elevou em até 53% a síntese de microcistina ao interagir com C. raciborskii. Este processo poderia se relacionar a três principais mecanismos: competição por interferência, produção de alelopáticos e comunicação química. Estudos de balanços genéticos dos florescimentos bem como da possível comunicação química existente entre cianobactérias são ferramentas investigativas importantes que poderão ajudar no aprimoramento da prevenção e manejo de florações tóxicas. / Cyanobacteria play important ecological role in many terrestrial and aquatic ecosystems. However, they become a public health problem when synthesize secondary toxic compounds, known as cyanotoxins, which may act on several organisms. Impacted aquatic systems favor their growth and these microorganisms can become dominant due to mechanisms that confer them adaptive advantages in relation to other phytoplanktonic groups. Frequently, cyanobacteria can form water blooms, whose toxicity varies according to their species and strains composition. Although the cyanobacteria Cylindrospermopsis raciborskii and Microcystis aeruginosa can form blooms, have toxic potential, are competitive and present in several reservoirs, it is unknown the interaction effect between them in the production of microcystins. To solve this question, the interaction among strains of C. raciborskii and M. aeruginosa was studied to: characterize the culture of the species in monoculture and mixed culture; check whether the character of toxic strains favored the competition; measure microcystin concentration produced by M. aeruginosa and evaluate interaction effect on this variable. In climatized growth room (22°C, 12h photoperiod, 60 \'mü\'mol photon/\'M POT.2\'.s) four interaction experiments composed by three treatments were performed in batch cultures: (1) monoculture of M. aeruginosa, (2) monoculture of C. raciborskii, (3) mixed culture of M. aeruginosa and C. raciborskii. Density and biovolume, specific growth rate (\'mü\'), doubling time (Td) and concentration of microcystin, chlorophyll-a and nutrients analyses were performed. The interaction reduced up to 22% the of studied strains. Both C. raciborskii and M. aeruginosa presented competitive advantage in at least one of the tests. In the case of toxic strain of M. aeruginosa, it was found that its toxic character favored the competition with non-toxic strain of C. raciborskii. Furthermore, M. aeruginosa increased by 53% the synthesis of microcystin while interacting with C. raciborskii. This process could be related to three main mechanisms: interference competition, communication and production of allelopathic chemicals. Genetical balance studies of blooms as the possible chemical communication existing among cyanobacteria are important investigative tools that might help prevention and management improvement of toxic blooms.
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Condições fisiológicas e ambientais que favorecem a produção de carotenoides por Rhodotorula mucilaginosa / Physiological and environmental conditions that enhance the production of carotenoids by Rhodotorula mucilaginosaYuyama, Kamila Tomoko 22 October 2013 (has links)
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Previous issue date: 2013-10-22 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / In pigmented microorganisms, carotenoids are pigments, precursors of vitamin A that provide protective effects against oxidative damage. Extrinsic environmental factors such as temperature, specific carbon sources and inducers of reactive oxygen species (ROS) such as hydrogen peroxide and light associated with physiological conditions (maximum exponential growth phase, early and late stationary phase) influence the accumulation of carotenoids in microbial cells. A pigmented yeast was isolated from an orchard in Universidade Federal de Viçosa, Minas Gerais, Brazil. The main aims were to identify the isolated yeast and analyze the influence of environmental (light, temperature and arabinose) and physiological conditions (log phase, early and late stationary phase) on the production of carotenoids and the growth rate of the yeast. The taxonomical identification of the yeast strain was accomplished through analysis of 5.8S and 26S rRNA by the Centraalbureau voor Schimmelcultures (CBS) and biochemical and molecular approaches. The yeast was identified as Rhodotorula mucilaginosa. In order to analyze the influence of factors on production of carotenoids and growth rate we used a methodology of response surface (RSM), and a central composite factorial design (CCD) with three factors and six replicates of central point was applied. The 20 experiments were done in batch in 91h and samples were collected at different physiological stages of the culture, at maximum growth rate (log phase), at deceleration growth phase (2h initial at the entrance of the stationary phase) and at stationary phase (60h after reaching the maximum cell mass). It implicates that carotenogenesis is not associated with cellular growth. The maximum carotenoid yield per cell mass (μg/g) occurred at deceleration growth phase. The growth rate (μ) and total carotenoid yield (μg/g) calculations well- adjusted to the mathematical model, with R2 of 0.96 and 0.91, respectively, and the lack of fit was not significant (p>0.05). The levels of light (μmol m-2s-1), arabinose (%w/v) and temperature (°C) that created a maximum answer of total carotenoid yield (93.92 μg/g) were 100 μmol m-2s-1; 5% and 18 °C and growth rate (0.31h-1) were 63.6 μmol m-2s-1; 3.7% and 24.6 °C. / Em micro-organismos produtores, carotenoides são pigmentos, precursores de vitamina A, que os protegem contra o estresse oxidativo. Fatores ambientais extrínsecos tais como temperatura, fontes específicas de carbono e indutores de espécies reativas de oxigênio (ROS) como luz e peróxido de hidrogênio associados a condições fisiológicas (fase de crescimento exponencial máxima, fase estacionária inicial e tardia) influenciam no acúmulo de carotenoides pelas células microbianas. Uma levedura pigmentada foi isolada do horto da Universidade Federal de Viçosa, Minas Gerais, Brasil. Os objetivos desse trabalho foram identificar esta levedura isolada no horto da UFV e analisar a influência dos fatores ambientais (temperatura, intensidade de luz e concentração de arabinose) e das diferentes condições fisiológicas (fase log, estacionária inicial e tardia) na produção de carotenoides e na velocidade de crescimento da levedura. A identificação taxonômica da levedura foi feita pelo Centraalbureau voor Schimmelcultures (CBS) por meio das análises das sequências 5,8S e 26S do rRNA e por ferramentas moleculares e bioquímicas, resultando na identificação da espécie como Rhodotorula mucilaginosa. A influência das condições ambientais e fisiológicas na produção de carotenoides e na taxa de crescimento foi verificada pela metodologia de superfície de resposta (RSM) por meio de um delineamento composto central (CCD) com três fatores e seis replicatas do ponto central. Os 20 experimentos foram feitos em 91h de batelada e as amostras foram coletadas em diferentes estados fisiológicos da cultura, isto é na fase de crescimento máximo (fase log), fase de desaceleração do crescimento (2h iniciais na entrada da fase estacionária) e fase estacionária (60h após alcançar a massa celular máxima). Demonstrou-se que a formação de carotenoides pela levedura não é associada ao crescimento. O rendimento máximo de carotenoides por massa celular (μg/g) ocorreu na fase de desaceleração do crescimento. A velocidade específica máxima de crescimento (μmax) e o rendimento em carotenóide total por massa celular (μg/g) foram ajustados ao modelo matemático, com R2 de 0,96 e 0,91 respectivamente, e o desajuste não foi significante (p>0,05). Os níveis de intensidade de luz (μmol m-2s-1), arabinose (%p/v) e temperatura (°C) que criaram a resposta máxima de rendimento de carotenóides totais (93,92 μg/g) foram 100 μmol m-2s-1; 5%; 18 °C e da velocidade de crescimento (0,31h-1) foram 63,6 μmol m-2s-1; 3,7% e 24,6 °C.
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