Made available in DSpace on 2016-06-02T19:22:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 6154.pdf: 2934811 bytes, checksum: 786860a60daf6058d2c1dbd83c1b8ce1 (MD5) Previous issue date: 2014-06-27 / Introduction: Incisional hernia (IH) is considered a connective tissue disease characterized by defective wound healing process, and it is found in high incidence after abdominal surgeries. Previous studies have shown that DisBa- 01 presents high-affinity to &#945;v&#946;3, which can have wide therapeutic application and/or laboratorial in disorders related to collagen. Hypothesis: Considering the regulatory role of the vitronectin receptor, the &#945;v&#946;3 integrin, in wound healing, we hypothesized that blocking this integrin would affect tissue repair. Objectives: To evaluate the DisBa-01 (a desintegrin RGD-recombinant by snake venom of Bothrops Alternatus) as a blockage of &#945;v&#946;3 integrin on improvement of HI healing. Methods: IH was successfully induced in rats of Sham and DisBa-01 group. DisBa-01 group were treated with different doses (0.25; 0.5 and 1.0 mg/kg). A control group without surgery was included to analyze the surgery effects. Were evaluated the histology, zymography and gene expression of MMP-2, type I and III collagen and VEGF. Type 1A collagen were analysed by Western Blotting. Results: After 14 days, the presence of IH and hernia ring were observed in all sham-operated animals; in contrast, 100% of animals treated with 0.25 and 1.0 mg/kg of Disba-01 did not present visible signals of hernia and showed closed hernia rings. The surgery procedure strongly activated MMP-2 gene expression as well as its activity (P<0.05). Up-regulation of collagen 1 (col-1) and 3 (col-3) gene expression was also observed, DisBa-01 reduced the expression of col-I, however, did not affect col-III, while VEGF expression was down regulated at day14. In contrast, DisBa-01 significantly inhibited MMP-2 gene expression and its activity. Western Blotting analysis revealed the presence of Type1A collagen in all groups, however only DisBa-01 differed statistically of Control group. The thickness of the collagen layer in each of control group presented reduced. However, Sham and DisBa-01, there was a relative increase in all studied animals (P<0.05). Conclusion: These results indicate that &#945;v&#946;3 integrin has an important role in the control of wound healing and its blockade modulate repair conditions, including IH. This information may be especially helpful for patients with recurrent IH. / Introdução: Hérnia incisional (HI) é considerada uma doença do tecido conjuntivo caracterizada pelo defeito no processo de cicatrização de feridas, e é encontrado após cirurgias abdominais em alta incidência. Estudos prévios tem mostrado que a desintegrina DisBa-01, que apresenta alta afinidade com a integrina &#945;v&#946;3, possa ter ampla aplicação terapêutica e/ou laboratorial nas desordens relacionadas ao colágeno. Hipótese do estudo: Considerando o papel regulador do receptor de vitronectina, a integrina &#945;v&#946;3, na cicatrização de feridas, a hipótese de que o bloqueio desta integrina poderia modular a reparação tecidual. Objetivos: Avaliar a DisBa-01 (uma desintegrina RGD-recombinante a partir veneno da Bothrops alternatus) como um bloqueador de integrina &#945;v&#946;3 na melhora da cicatrização da HI. Métodos: HI foi induzida nos grupos Sham e DisBa-01. No grupo DisBa-01 foi administrada 3 doses distintas (0,25, 0,5 e 1,0 mg/kg). Foram avaliados a histologia, zimografia e a expressão gênica de MMP-2, do colágeno tipo I e III, e do VEGF e Western Blotting par analise do colágeno. Resultados: A indução da HI foi observada em todos os animais operados e após 14 dias nos animais do grupo Sham e no grupo DisBa-01, não apresentaram sinais visíveis de hérnia e observou-se a oclusão do anel herniário. O procedimento da cirurgia ativou significativamente a expressão de genes da MMP-2, bem como a sua atividade (P<0.05). A regulação de expressão do gene do colágeno I (col-I) e III (col-III) também foi observada, DisBa-01 diminuiu a expressão de col-I, mas não teve nenhum efeito sobre a expressão de col-III, enquanto expressão de VEGF foi suprimida após o 14° dia da cirurgia. Em contraste, DisBa-01 inibiu significativamente a expressão do gene de MMP-2 e a sua atividade (P <0,05). As analises de Western Blotting, evidenciaram a presença de colágeno tipo I (A1), nos 3 grupos, porém somente o grupo DisBa-01 diferiu estatisticamente do Controle (P<0.05). A espessura em mm da camada de colágeno em cada um dos animais no grupo controle apresentaram espessura reduzida. No entanto, grupo Sham e DisBa-01, houve aumento relativo em praticamente todos os animais estudados (P <0,05). Conclusão: Estes resultados indicam que a integrina &#945;v&#946;3 desempenha um papel importante no controle da cicatrização de feridas e o seu bloqueio modula as condições de reparação de tecidos, incluindo HI. Esta informação pode ser especialmente útil para pacientes com recorrência de HI.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:22:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2443.pdf: 1570096 bytes, checksum: 27db268f8c997a54559bd609fc4ac9ce (MD5) Previous issue date: 2009-04-29 / INTRODUCTION: The incisional hernia (IH) is one of the most frequent complications after laparotomy, causing high rates of re-operations. Advances in suture material, in the guidelines for incisions, in the techniques of closure and use of dentures (screens), have failed in the elimination of this surgical complication. In this context, advances in the understanding of biological and structural changes of collagen may offer a new strategy in the treatment of IH, since the matrix disorders that induces the formation of primary hernia probably also affect the wound healing in laparotomies. OBJECTIVE: To investigate the effect of a recombinant desintegrin (DisBa-01) on the abdominal muscle healing process with incisional hernia (IH) regarding the fibroblasts and vessels proliferation and matrix metalopeptidase activity as well. The role of &#945;2 and anti- &#945;v&#946;3 integrins were investigated by antibody competition. METHODS: IH was induced by sectioning of the midline in 20 Wistar rats, divided into two groups: control that received the topical application of phosphate buffered saline (PBS) and DisBa-01 protein (0.5mg/Kg) dissolved in PBS. Another 10 rats were divided in two groups: one received anti-&#945;V&#946;3 antibodies and the second anti-&#945;2 subunit antibodies. At the end of 14 days, the animals were sacrificed and muscle fragments were stored in liquid nitrogen for determination of MMPs by zymography. The remaining fragments of the control and DisBa-01 groups were fixed in 10% formol in PBS (v/v). Blood vessels density, mononuclear cells, fibroblasts and collagen fibers were studied by optical microscopy in blue reticuline and Masson-trichrome. Data was analyzed by parametric tests were applied with critical level of 5%. RESULTS: All animals after surgical induction developed IH. However, after 14 days the persistence of the opened hernial ring in the controls but not in the DisBa-01 group. This protein induced the formation of a membrane that occluded the entire hernial ring. A significant increase in the number of mononuclear cells, fibroblasts, new vessels and MMP-2 activity was observed in DisBa-01 group (p<0.05). DisBa-01 group significant increased the collagen content. Anti-&#945;V&#946;3 integrin antibodies produced similar results but not anti-&#945;2 integrin blocking antibodies. CONCLUSION: These results indicate that DisBa-01 promoted vascular and fibroblastic cell proliferation and monocytic, and matrix remodeling. In addition, these results strongly indicate that &#945;V&#946;3 integrin has an important role in the control of would healing and the blocking of this integrin may be an interesting therapeutical strategy in tissue repair conditions, including IH. / INTRODUÇÃO: a hérnia incisional (HI) é uma das complicações mais freqüentes após laparotomia, causando altos índices de re-operações. Avanços nos materiais de suturas, nas orientações de incisões, nas técnicas de fechamento e do uso de próteses (telas), têm falhado para a eliminação desta complicação cirúrgica. Neste contexto, avanços no entendimento das alterações biológicas e estruturais do colágeno podem oferecer uma nova estratégia no tratamento da HI, uma vez que as desordens da matriz que induz a formação da hérnia primária provavelmente também prejudicam a cicatrização da ferida operatória nas laparotomias. OBJETIVO: Investigar os efeitos da desintegrina recombinante DisBa-01, sobre o processo de cicatrização da musculatura da parede abdominal com hérnia incisional (HI) com relação a proliferação de fibroblastos, vasos e a atividade das metalopeptidases de matriz. A função das integrinas anti-subunidade &#945;2 e anti- &#945;V&#946;3 foram investigadas pelo bloqueio de anticorpos. MÉTODOS: Foi induzida a HI por secção da linha alba em 20 ratos Wistar, distribuídos em dois grupos: controle que recebeu a aplicação tópica de solução salina tamponada com fosfato (PBS), e DisBa-01 (0,5mg/Kg) dissolvida em PBS. Outros 10 ratos foram divididos em dois grupos: um recebeu anti-&#945;V&#946;3 e outro anti-subunidade &#945;2. Ao final, de 14 dias, os animais foram sacrificados e fragmentos do músculo dos 04 grupos foram armazenados em nitrogênio liquido para determinação de MMPs por zimografia. O restante dos fragmentos dos grupos controle e DisBa-01, foram fixados em formol a 10% em PBS (v/v). A densidade de vasos sangüíneos, células mononucleares, fibroblastos e de fibras colágenas foram estudadas por microscopia óptica em reticulina e Tricromo de Masson. Para analise dos dados foram aplicados testes paramétricos com nível critico de 5%. RESULTADOS: Todos os animais após indução cirúrgica desenvolveram HI. Entretanto, após 14 dias nos animais do grupo Controle houve persistência do anel herniário aberto e nos animais do grupo DisBa-01 foi observado a formação de membrana que ocluía todo o anel herniário. Foi observado aumento significativo das células mononucleares, fibroblastos, neovascularização e da atividade da MMP-2 no grupo DisBa-01 (p<0,05). Houve aumento significativo da colagenização no grupo DisBa-01 em comparação ao controle. O grupo anti-&#945;V&#946;3 produziu resultados similares a proteína DisBa-01 mas não no grupo bloqueado anti-subunidade &#945;2. CONCLUSÃO: Estes resultados indicam que a DisBa-01 promoveu proliferação vascular, celular fibroblástica e monocítica, e remodelamento da MEC. Adicionalmente, estes resultados fortemente indicam que a integrina &#945;V&#946;3 tem importante função no controle da ferida cirúrgica e o bloqueio desta integrina pode ser uma interessante estratégia terapêutica nas condições de reparo tecidual, incluindo a HI.