A DisBa-01, uma desintegrina RGD recombinante ainda não isolada do veneno de Bothrops alternatus, exibe alta afinidade pela integrina aIIbB3, contribuindo para inibição da agregação plaquetária (RAMOS, 2005). DisBa-01 possui também atividades anti-trombótica e anti-metastática comprovadas in vivo (Ramos, 2005). A fim de obter moléculas menores mantendo as atividades da DisBa-01, dois mutantes estão em estudo. Moléculas chamadas DisBa (1-32) e DisBa (1-36) apresentam 32 e 36 resíduos a menos que a DisBa-01, respectivamente, na região N-terminal. Oligonucleotídeos foram construídos e os DNAs foram amplificados por PCR utilizando o plasmídeo pET28a-DisBa-01 como o molde. Os produtos de PCR foram clonados no vetor de expressão pET32a. Análises das seqüências revelaram que os genes e sua fase de leitura estavam completamente corretos. Os plasmídeos recombinantes foram introduzidos em linhagem de E.coli BL21 (DE3). Os plasmídeos recombinantes foram induzidos com IPTG para expressar as proteínas em fusão com a tiorredoxina. As proteínas foram expressas na forma solúvel e com massa molecular coincidente com a previsão. As proteínas de fusão foram purificadas por cromatografia de afinidade em resina de níquel e clivadas com a enzima enteroquinase. As amostras clivadas foram purificadas por cromatografia de filtração a gel. Os passos de purificação e clivagem foram analisados por SDS-PAGE e reação de immunoblotting utilizando o anticorpo anti-Echistatin. Testes de inibição da adesão celular, usando células de melanoma de camundongo B16F10 ricas em integrina avb3, mostraram que a DisBa (1-32) e a DisBa (1-36) são capazes de inibir, aproximadamente, 70% da adesão celular, um resultado semelhante ao encontrado para a molécula de DisBa-01. Portanto, as duas moléculas mutantes da DisBa-01 obtidas apresentaram atividades que podem ser exploradas no desenho de novos medicamentos contra câncer. / DisBa-01, a recombinant RGD-disintegrin still not isolated from B. alternatus venom exhibits high affinity for aIIbB3 integrin, contributing for the inhibition of platelet aggregation (Ramos, 2005). DisBa-01 possesses also antithrombotic and antimetatatic activities in vivo (Ramos, 2005). In order to obtain shorter molecules maintaining activities of DisBa-01 two mutants were studied. Molecules called DisBa (1-32) and DisBa (1-36) have 32 and 36 residues unless DisBa-01, respectively, in the N-terminal region. Oligonucleotides were constructed and the DNAs were amplified by PCR using pET28a-DisBa-01 vector as the template. PCR products were cloned into expression vector pET32a. Sequence analysis showed that reading frames were completely correct. The recombinant plasmids were introduced in BL21(DE3) E.coli strain. The recombinant plasmids were induced with IPTG to express the proteins in fusion with thioredoxin. Proteins were expressed in a soluble form and with molecular mass coincident with prediction. Fusion proteins were purified by affinity chromatography in nickel resin and cleaved with enterokinase enzyme. Samples of cleavage were purified by the gel filtration chromatography. Purification and cleavage steps were analyzed by SDS-PAGE and immunoblotting reaction using anti-Echistatin antibody. Tests inhibition of cell adhesion, using cells from mice B16F10 melanoma rich in integrin avb3, showed that DisBa (1-32) and DisBa (1-36) are able to inhibit approximately 70% of cell adhesion. Therefore the two mutants molecules of the DisBa-01 obtained in this work present activities that can be explored in the design of new medicines against cancer.

A DisBa-01, uma desintegrina RGD recombinante ainda não isolada do veneno de Bothrops alternatus, exibe alta afinidade pela integrina aIIbB3, contribuindo para inibição da agregação plaquetária (RAMOS, 2005). DisBa-01 possui também atividades anti-trombótica e anti-metastática comprovadas in vivo (Ramos, 2005). A fim de obter moléculas menores mantendo as atividades da DisBa-01, dois mutantes estão em estudo. Moléculas chamadas DisBa (1-32) e DisBa (1-36) apresentam 32 e 36 resíduos a menos que a DisBa-01, respectivamente, na região N-terminal. Oligonucleotídeos foram construídos e os DNAs foram amplificados por PCR utilizando o plasmídeo pET28a-DisBa-01 como o molde. Os produtos de PCR foram clonados no vetor de expressão pET32a. Análises das seqüências revelaram que os genes e sua fase de leitura estavam completamente corretos. Os plasmídeos recombinantes foram introduzidos em linhagem de E.coli BL21 (DE3). Os plasmídeos recombinantes foram induzidos com IPTG para expressar as proteínas em fusão com a tiorredoxina. As proteínas foram expressas na forma solúvel e com massa molecular coincidente com a previsão. As proteínas de fusão foram purificadas por cromatografia de afinidade em resina de níquel e clivadas com a enzima enteroquinase. As amostras clivadas foram purificadas por cromatografia de filtração a gel. Os passos de purificação e clivagem foram analisados por SDS-PAGE e reação de immunoblotting utilizando o anticorpo anti-Echistatin. Testes de inibição da adesão celular, usando células de melanoma de camundongo B16F10 ricas em integrina avb3, mostraram que a DisBa (1-32) e a DisBa (1-36) são capazes de inibir, aproximadamente, 70% da adesão celular, um resultado semelhante ao encontrado para a molécula de DisBa-01. Portanto, as duas moléculas mutantes da DisBa-01 obtidas apresentaram atividades que podem ser exploradas no desenho de novos medicamentos contra câncer. / DisBa-01, a recombinant RGD-disintegrin still not isolated from B. alternatus venom exhibits high affinity for aIIbB3 integrin, contributing for the inhibition of platelet aggregation (Ramos, 2005). DisBa-01 possesses also antithrombotic and antimetatatic activities in vivo (Ramos, 2005). In order to obtain shorter molecules maintaining activities of DisBa-01 two mutants were studied. Molecules called DisBa (1-32) and DisBa (1-36) have 32 and 36 residues unless DisBa-01, respectively, in the N-terminal region. Oligonucleotides were constructed and the DNAs were amplified by PCR using pET28a-DisBa-01 vector as the template. PCR products were cloned into expression vector pET32a. Sequence analysis showed that reading frames were completely correct. The recombinant plasmids were introduced in BL21(DE3) E.coli strain. The recombinant plasmids were induced with IPTG to express the proteins in fusion with thioredoxin. Proteins were expressed in a soluble form and with molecular mass coincident with prediction. Fusion proteins were purified by affinity chromatography in nickel resin and cleaved with enterokinase enzyme. Samples of cleavage were purified by the gel filtration chromatography. Purification and cleavage steps were analyzed by SDS-PAGE and immunoblotting reaction using anti-Echistatin antibody. Tests inhibition of cell adhesion, using cells from mice B16F10 melanoma rich in integrin avb3, showed that DisBa (1-32) and DisBa (1-36) are able to inhibit approximately 70% of cell adhesion. Therefore the two mutants molecules of the DisBa-01 obtained in this work present activities that can be explored in the design of new medicines against cancer.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:22:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2443.pdf: 1570096 bytes, checksum: 27db268f8c997a54559bd609fc4ac9ce (MD5) Previous issue date: 2009-04-29 / INTRODUCTION: The incisional hernia (IH) is one of the most frequent complications after laparotomy, causing high rates of re-operations. Advances in suture material, in the guidelines for incisions, in the techniques of closure and use of dentures (screens), have failed in the elimination of this surgical complication. In this context, advances in the understanding of biological and structural changes of collagen may offer a new strategy in the treatment of IH, since the matrix disorders that induces the formation of primary hernia probably also affect the wound healing in laparotomies. OBJECTIVE: To investigate the effect of a recombinant desintegrin (DisBa-01) on the abdominal muscle healing process with incisional hernia (IH) regarding the fibroblasts and vessels proliferation and matrix metalopeptidase activity as well. The role of &#945;2 and anti- &#945;v&#946;3 integrins were investigated by antibody competition. METHODS: IH was induced by sectioning of the midline in 20 Wistar rats, divided into two groups: control that received the topical application of phosphate buffered saline (PBS) and DisBa-01 protein (0.5mg/Kg) dissolved in PBS. Another 10 rats were divided in two groups: one received anti-&#945;V&#946;3 antibodies and the second anti-&#945;2 subunit antibodies. At the end of 14 days, the animals were sacrificed and muscle fragments were stored in liquid nitrogen for determination of MMPs by zymography. The remaining fragments of the control and DisBa-01 groups were fixed in 10% formol in PBS (v/v). Blood vessels density, mononuclear cells, fibroblasts and collagen fibers were studied by optical microscopy in blue reticuline and Masson-trichrome. Data was analyzed by parametric tests were applied with critical level of 5%. RESULTS: All animals after surgical induction developed IH. However, after 14 days the persistence of the opened hernial ring in the controls but not in the DisBa-01 group. This protein induced the formation of a membrane that occluded the entire hernial ring. A significant increase in the number of mononuclear cells, fibroblasts, new vessels and MMP-2 activity was observed in DisBa-01 group (p<0.05). DisBa-01 group significant increased the collagen content. Anti-&#945;V&#946;3 integrin antibodies produced similar results but not anti-&#945;2 integrin blocking antibodies. CONCLUSION: These results indicate that DisBa-01 promoted vascular and fibroblastic cell proliferation and monocytic, and matrix remodeling. In addition, these results strongly indicate that &#945;V&#946;3 integrin has an important role in the control of would healing and the blocking of this integrin may be an interesting therapeutical strategy in tissue repair conditions, including IH. / INTRODUÇÃO: a hérnia incisional (HI) é uma das complicações mais freqüentes após laparotomia, causando altos índices de re-operações. Avanços nos materiais de suturas, nas orientações de incisões, nas técnicas de fechamento e do uso de próteses (telas), têm falhado para a eliminação desta complicação cirúrgica. Neste contexto, avanços no entendimento das alterações biológicas e estruturais do colágeno podem oferecer uma nova estratégia no tratamento da HI, uma vez que as desordens da matriz que induz a formação da hérnia primária provavelmente também prejudicam a cicatrização da ferida operatória nas laparotomias. OBJETIVO: Investigar os efeitos da desintegrina recombinante DisBa-01, sobre o processo de cicatrização da musculatura da parede abdominal com hérnia incisional (HI) com relação a proliferação de fibroblastos, vasos e a atividade das metalopeptidases de matriz. A função das integrinas anti-subunidade &#945;2 e anti- &#945;V&#946;3 foram investigadas pelo bloqueio de anticorpos. MÉTODOS: Foi induzida a HI por secção da linha alba em 20 ratos Wistar, distribuídos em dois grupos: controle que recebeu a aplicação tópica de solução salina tamponada com fosfato (PBS), e DisBa-01 (0,5mg/Kg) dissolvida em PBS. Outros 10 ratos foram divididos em dois grupos: um recebeu anti-&#945;V&#946;3 e outro anti-subunidade &#945;2. Ao final, de 14 dias, os animais foram sacrificados e fragmentos do músculo dos 04 grupos foram armazenados em nitrogênio liquido para determinação de MMPs por zimografia. O restante dos fragmentos dos grupos controle e DisBa-01, foram fixados em formol a 10% em PBS (v/v). A densidade de vasos sangüíneos, células mononucleares, fibroblastos e de fibras colágenas foram estudadas por microscopia óptica em reticulina e Tricromo de Masson. Para analise dos dados foram aplicados testes paramétricos com nível critico de 5%. RESULTADOS: Todos os animais após indução cirúrgica desenvolveram HI. Entretanto, após 14 dias nos animais do grupo Controle houve persistência do anel herniário aberto e nos animais do grupo DisBa-01 foi observado a formação de membrana que ocluía todo o anel herniário. Foi observado aumento significativo das células mononucleares, fibroblastos, neovascularização e da atividade da MMP-2 no grupo DisBa-01 (p<0,05). Houve aumento significativo da colagenização no grupo DisBa-01 em comparação ao controle. O grupo anti-&#945;V&#946;3 produziu resultados similares a proteína DisBa-01 mas não no grupo bloqueado anti-subunidade &#945;2. CONCLUSÃO: Estes resultados indicam que a DisBa-01 promoveu proliferação vascular, celular fibroblástica e monocítica, e remodelamento da MEC. Adicionalmente, estes resultados fortemente indicam que a integrina &#945;V&#946;3 tem importante função no controle da ferida cirúrgica e o bloqueio desta integrina pode ser uma interessante estratégia terapêutica nas condições de reparo tecidual, incluindo a HI.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:21:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2665.pdf: 1669132 bytes, checksum: dfe7f18cc9241784c82420b0409bd47e (MD5) Previous issue date: 2009-09-21 / Universidade Federal de Sao Carlos / Disintegrins are toxins commonly found in snake venoms whose biological effects occour upon interaction with surface receptors known as integrins. DisBa-01, an RGD disintegrin isolated from a cDNA library made with mRNAs from the venom gland of Bothrops alternatus, bears anti-metastatic, anti-angiogenic and anti-thrombotic activity in nude mice, partially mediated by interaction with integrin _v_3. Studies with Wistar rats also show that protein has angiogenic activity during regeneration after surgery. The objectives of this study were to evaluate the effects of DisBa-01 on adhesion, deadhesion and proliferation of C2C12 myoblasts and evaluate the electrophoretic profile of secreted proteins of DisBa-01-treated cells. Myoblasts (103 cells/well) were incubated with five concentrations of DisBa-01 under different incubation times and adhesion substracts (plastic, collagen type I or fibronectin). The supernatant was collected for 2DE analysis and the cells were quantified. Also, flow cytometry was used to evaluate the expression of integrins (_2, _4, _5, _v, _v_3, _1 and _4). DisBa-01 inhibited adhesion to fibronectin in high concentration (1000nM) and to collagen type I in all tested concentrations, but did not detach cells from collagen or fibronectina matrix nor affected myoblast proliferation. Flow cytometry showed that integrins _v and _1 were present. 2DE analysis points to an increase of secreted proteins, mainly in higher DisBa- 01 concentration (1000nM). In conclusion, C2C12 myoblasts are sensitive to DisBa-01, suggesting this protein initiates a sinalization cascade mediated by integrins, which modifies protein expression and secretion. / Desintegrinas são toxinas frequentemente encontradas em venenos de serpentes e cujos efeitos biológicos ocorrem devido à interação com receptores de superfície conhecidos como integrinas. A DisBa-01, uma desintegrina RGD isolada de mRNAs da glândula venenífera de Bothrops alternatus, possui atividade anti-metastática, anti-angiogênica e anti-trombótica em camundongos atímicos, parcialmente mediada pela interação com a integrina _v_3. Estudos in vivo com ratos Wistar também indicam que esta proteína pode ter atividade pró-angiogênica durante regeneração pós-cirúrgica. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da DisBa-01 na adesão, desadesão e proliferação celular de mioblastos C2C12, além de avaliar o perfil eletroforético das proteínas secretadas por estas células sob condições normais e tratadas. As células (103 células/poço) foram incubadas com diferentes concentrações de DisBa-01 em diferentes tempos e substratos (plástico, colágeno tipo I e fibronectina). O meio de cultura foi recolhido para análise por eletroforese bidimensional (2DE) e as células foram quantificadas. Além disso, foi realizada citometria de fluxo para avaliar a expressão de integrinas (_2, _4, _5, _v, _v_3, _1 e _4). A DisBa-01 inibiu a adesão das células à fibronectina em alta concentração (1000nM), além de inibir a adesão das células ao colágeno em todas as concentrações testadas, mas não promoveu a desadesão de células aderidas a estes dois substratos tampouco afetou significativamente a proliferação de mioblastos. A análise por citometria de fluxo identificou as integrinas _v e _1, corroborando em parte os resultados obtidos. A análise por 2DE do sobrenadante indicou que a DisBa-01 induz a um aumento no número de proteínas secretadas, principalmente na maior concentração testada (1000nM). Em conclusão, os mioblastos C2C12 são sensíveis à DisBa-01, sugerindo que esta proteína inicia uma cascata de sinalização celular mediada por integrinas que modifica a secreção protéica.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:22:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 6154.pdf: 2934811 bytes, checksum: 786860a60daf6058d2c1dbd83c1b8ce1 (MD5) Previous issue date: 2014-06-27 / Introduction: Incisional hernia (IH) is considered a connective tissue disease characterized by defective wound healing process, and it is found in high incidence after abdominal surgeries. Previous studies have shown that DisBa- 01 presents high-affinity to &#945;v&#946;3, which can have wide therapeutic application and/or laboratorial in disorders related to collagen. Hypothesis: Considering the regulatory role of the vitronectin receptor, the &#945;v&#946;3 integrin, in wound healing, we hypothesized that blocking this integrin would affect tissue repair. Objectives: To evaluate the DisBa-01 (a desintegrin RGD-recombinant by snake venom of Bothrops Alternatus) as a blockage of &#945;v&#946;3 integrin on improvement of HI healing. Methods: IH was successfully induced in rats of Sham and DisBa-01 group. DisBa-01 group were treated with different doses (0.25; 0.5 and 1.0 mg/kg). A control group without surgery was included to analyze the surgery effects. Were evaluated the histology, zymography and gene expression of MMP-2, type I and III collagen and VEGF. Type 1A collagen were analysed by Western Blotting. Results: After 14 days, the presence of IH and hernia ring were observed in all sham-operated animals; in contrast, 100% of animals treated with 0.25 and 1.0 mg/kg of Disba-01 did not present visible signals of hernia and showed closed hernia rings. The surgery procedure strongly activated MMP-2 gene expression as well as its activity (P<0.05). Up-regulation of collagen 1 (col-1) and 3 (col-3) gene expression was also observed, DisBa-01 reduced the expression of col-I, however, did not affect col-III, while VEGF expression was down regulated at day14. In contrast, DisBa-01 significantly inhibited MMP-2 gene expression and its activity. Western Blotting analysis revealed the presence of Type1A collagen in all groups, however only DisBa-01 differed statistically of Control group. The thickness of the collagen layer in each of control group presented reduced. However, Sham and DisBa-01, there was a relative increase in all studied animals (P<0.05). Conclusion: These results indicate that &#945;v&#946;3 integrin has an important role in the control of wound healing and its blockade modulate repair conditions, including IH. This information may be especially helpful for patients with recurrent IH. / Introdução: Hérnia incisional (HI) é considerada uma doença do tecido conjuntivo caracterizada pelo defeito no processo de cicatrização de feridas, e é encontrado após cirurgias abdominais em alta incidência. Estudos prévios tem mostrado que a desintegrina DisBa-01, que apresenta alta afinidade com a integrina &#945;v&#946;3, possa ter ampla aplicação terapêutica e/ou laboratorial nas desordens relacionadas ao colágeno. Hipótese do estudo: Considerando o papel regulador do receptor de vitronectina, a integrina &#945;v&#946;3, na cicatrização de feridas, a hipótese de que o bloqueio desta integrina poderia modular a reparação tecidual. Objetivos: Avaliar a DisBa-01 (uma desintegrina RGD-recombinante a partir veneno da Bothrops alternatus) como um bloqueador de integrina &#945;v&#946;3 na melhora da cicatrização da HI. Métodos: HI foi induzida nos grupos Sham e DisBa-01. No grupo DisBa-01 foi administrada 3 doses distintas (0,25, 0,5 e 1,0 mg/kg). Foram avaliados a histologia, zimografia e a expressão gênica de MMP-2, do colágeno tipo I e III, e do VEGF e Western Blotting par analise do colágeno. Resultados: A indução da HI foi observada em todos os animais operados e após 14 dias nos animais do grupo Sham e no grupo DisBa-01, não apresentaram sinais visíveis de hérnia e observou-se a oclusão do anel herniário. O procedimento da cirurgia ativou significativamente a expressão de genes da MMP-2, bem como a sua atividade (P<0.05). A regulação de expressão do gene do colágeno I (col-I) e III (col-III) também foi observada, DisBa-01 diminuiu a expressão de col-I, mas não teve nenhum efeito sobre a expressão de col-III, enquanto expressão de VEGF foi suprimida após o 14° dia da cirurgia. Em contraste, DisBa-01 inibiu significativamente a expressão do gene de MMP-2 e a sua atividade (P <0,05). As analises de Western Blotting, evidenciaram a presença de colágeno tipo I (A1), nos 3 grupos, porém somente o grupo DisBa-01 diferiu estatisticamente do Controle (P<0.05). A espessura em mm da camada de colágeno em cada um dos animais no grupo controle apresentaram espessura reduzida. No entanto, grupo Sham e DisBa-01, houve aumento relativo em praticamente todos os animais estudados (P <0,05). Conclusão: Estes resultados indicam que a integrina &#945;v&#946;3 desempenha um papel importante no controle da cicatrização de feridas e o seu bloqueio modula as condições de reparação de tecidos, incluindo HI. Esta informação pode ser especialmente útil para pacientes com recorrência de HI.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:22:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 4455.pdf: 6484329 bytes, checksum: 0fee43406bc059da2f0e202d0d04a19e (MD5) Previous issue date: 2011-08-03 / Universidade Federal de Sao Carlos / Cell migration, invasion of the surrounding tissues, blood vessels and proliferation are cellular processes involved in metastases. These events are mediated by integrins, adhesion receptors present on cell surfaces and responsible for the extracellular matrix and cells binding. Disintegrins, snake venoms polypeptides, are known to inhibit integrins action, and thus metastatic events such as cell migration. They also have influence on metallopeptidases activity, enzymes that cleave ECM components facilitating tumor cells invasion. DisBa-01 is a recombinant RGD disintegrin from Rhinocerophis alternatus (Bothrops alternatus) venom gland. In previous studies we have demonstrated that DisBa-01 binds to _v_3 integrin with high affinity and has an anti-metastatic activity. Therefore the aim of this study was to investigate the effect of DisBa-01 on migration and MMPs activities in fibroblasts and cell lines of breast cancer, MDA-MB-231, prostate, DU-145 and murine melanoma, B16F10. Transwell migration tests, wound healing and gelatin gel zymography were performed using DisBa-01 at concentrations of 10, 100, 500 and 1000 nM. Transwell migration was significantly inhibited in fibroblasts, MDA-MB-231 and DU-145 but had no effect on B16F10 cells, which had fibroblast conditioned medium as chemoattractant. In wound healing assays only DU-145 migration in a 1000nM concentration was significantly inhibited. Finally, zymography was performed using wound healing assay conditioned medium to analyze the presence of MMPs 2 and 9. In fibroblasts and B16F10 cells MMP-2 and MMPs 2 and 9 were decreased respectively. On the other hand, MDA-MB-231 cells showed increased MMP-9 activity, in all concentrations tested. Given the results, DisBa-01 can be used to build models for possible drugs rational design that may act in anti-metastatic therapy, in addition to its use as a research tool to elucidate integrins related mechanisms. / Uma série de processos celulares está envolvida na metástase, entre eles a migração e invasão celular dos tecidos vizinhos, vasos sanguíneos e proliferação. Esses eventos são mediados por integrinas, receptores de adesão, presentes nas superfícies celulares, responsáveis pela ligação das células com a matriz extracelular. As desintegrinas, polipeptídeos provenientes de venenos de serpentes, são conhecidos por inibir a ação das integrinas e, consequentemente, eventos como a migração, que ocorrem durante a metástase. Possuem ainda, influência sobre a atividade das metalopeptidases (MMPs), enzimas que clivam a MEC facilitando a invasão das células tumorais. A DisBa-01 é uma desintegrina recombinante que possui motivo RGD e é proveniente do veneno da Rhinocerophis alternatus (Bothrops alternatus). Estudos anteriores comprovaram sua alta afinidade pela integrina _v_3 e atividade anti-metastática in vivo. Portanto, o objetivo desse estudo foi investigar a ação da DisBa-01 sobre a migração e atividade das MMPs de fibroblastos e das linhagens de câncer de mama, MDA-MB-231, próstata, DU-145 e melanoma murino, B16F10. Foram realizados ensaios de migração em transwell, wound healing, e zimografia em gel de poliacrilamida acrescido de gelatina utilizando a DisBa-01 nas concentrações de 10, 100, 500 e 1000nM. A inibição da migração em transwell foi significativa nos fibroblastos, MDA-MB-231 e DU-145, porém não houve efeito sobre a linhagem B16F10, que teve como quimioatraente o meio condicionado de fibroblastos. Nos ensaios de wound healing apenas a concentração de 1000 nM da DU-145 foi inibida de forma significativa. Finalmente, a zimografia foi realizada utilizando meio condicionado de ensaios wound healing para analisar a presença das MMPs 2 e 9. Nos fibroblastos e B16F10 a atividade da MMP-2 e as MMPs 2 e 9 foram inibidas respectivamente. Enquanto a linhagem MDA-MB-231 teve a secreção da MMP-9 estimulada, em todas as concentrações, de forma significativa. Tendo em vista os resultados, a DisBa-01 pode ser utilizada na construção de modelos para o desenho racional de possíveis fármacos que atuem na terapia anti-metastática, além da sua utilização como instrumento de pesquisa para elucidação de mecanismos relacionados as integrinas.