La contaminación del medio ambiente, principalmente de ríos, lagos, playas y agua subterránea, que habitualmente se utilizan para actividades recreacionales, cultivos de moluscos, sistemas riego en la agricultura o como fuentes de agua para el consumo humano, es un tema de gran preocupación en términos de salud pública y de gran importancia económica y de legislación. Si se considera la distribución de la población humana, especialmente en zonas cercanas a estos tipos de agua, es indiscutible que estos ecosistemas tienen un considerable riesgo de contaminación que proviene de agua residual de origen humano e incluso de mataderos de animales y de fertilizantes de origen animal empleados en la agricultura. La mayoría de los estudios y datos disponibles sobre contaminación y calidad microbiológica del agua, hacen especial referencia a la contaminación de origen fecal, es bien conocido que una gran cantidad de microorganismos son excretados en la orina y la heces, entre éstos, los virus. Definitivamente la ruta fecal-oral es la vía responsable de la mayoría de las infecciones víricas asociadas al agua. Existen importantes patógenos transmitidos por el agua contaminada, sin embargo, en la actualidad la calidad microbiológica del agua es controlada mediante estándares bacterianos. Actualmente no existe un protocolo estandarizado en las legislaciones para el estudio de virus en muestras ambientales, ni protocolos estándar para el estudio de la infectividad de estos virus. El presente trabajo de Tesis Doctoral describe el desarrollo de nuevas metodologías para la concentración y detección de virus en agua, la utilización de indicadores víricos para evaluar la contaminación fecal, así como también datos sobre la presencia de virus emergentes y virus potencialmente nuevos. El trabajo consta de tres Capítulos que engloban cinco Estudios diferentes. / Fecal contamination in the environment is a public health concern and a serious economical problem. This situation is mainly in rivers, lakes and seawater that frequently are used in recreational activities, shellfish industry, and irrigation in the agriculture and as sources for drinking water. If we consider the high distribution of human population, especially in coastal areas, certainly these ecosystems have a risk of fecal contamination by waste water from humans, agriculture and animals. Most of the studies and available data about contamination and microbiological quality of water have a special interest in the fecal contamination, it is well know that a numerous microorganisms are shed by humans in feaces and urine, among these the viruses. The fecal-oral transmission route is definitely the responsible of most of viral infections related to water. There are important pathogens transmitted by fecal contaminated water, however, currently the microbiological quality of water is monitored using bacterial standards. At the moment there are not standard protocols to study viruses in the legislations for the environment. The present Doctoral Thesis describes the development of new methodologies for the concentration and detection of viruses in water, the use of viral indicators to monitor the fecal contamination of water, as well as data about the emerging viruses and potential new viruses in the environment.

Cultivos celulares podem ser utilizados para isolamento viral, caracterização de novas amostras virais e produção de imunobiológicos. Podem ser empregados cultivos celulares primários, secundários ou de linha. Estes últimos podem ser obtidos pela transformação física, química ou biológica de cultivos primários ou secundários. Para verificar a interação entre células transformadas com o Ag T do vírus símio 40 (SV40) e os Lentivírus de Pequenos Ruminantes (SRLV), amostras brasileiras de SRLV foram utilizadas para inoculação em cultivos celulares de membrana sinovial ovina transformados pelo Ag T e comparadas à amostras inoculadas em cultivos não transformados. Inicialmente, as células transformadas pelo Ag T foram caracterizadas e observou-se um aumento na cinética de crescimento e alterações no cariótipo, provavelmente induzidas pela presença do Ag T. Este foi detectado por PCR no núcleo e no citoplasma das células transformadas e sua expressão, confirmada através de RT-PCR. A fim de avaliar a permissividade e a possível seleção de populações virais em células transformadas, dois isolados, um de maedi-visna dos ovinos e um de artrite-encefalite caprina, foram inoculados em células MSO e TMSOpSV1. Através da análise de sequências dos genes gag e env e LTR obtidos por PCR, procurou-se avaliar a variabilidade viral em função do tipo de célula utilizada. Analisando-se as seqüências obtidas pelo método de Maximum Likelihood, embora tenha sido observada variabilidade viral, esta não estava associada ao tipo celular utilizado para inoculação viral.

Levando-se em conta que a eficiência reprodutiva é sumamente importante para uma maior produtividade em rebanhos de cria, foram pesquisados alguns tópicos correlacionados com o assunto em quatro artigos. Neles, estudou-se as variações de cortisol sérico frente a diferentes situações de manejo, a soroprevalência e dinâmica do BHV-1 em diferentes categorias animais em gado de corte e taxas de prenhez e abortos em rebanhos comerciais de gado de corte. O artigo 1 avaliou os níveis de cortisol sérico de bovinos de corte, em diferentes idades, frente a situações de manejo em um sistema de produção no Rio Grande do Sul. As concentrações de cortisol sérico foram determinadas por radioimunoensaio. Os níveis de cortisol sérico nas terneiras de 80 dias de idade (0,22±0,25 ug/dl) diferiram significativamente de todas as categorias (P<0,001), com exceção das terneiras de 180 dias (P=0,81). As terneiras com 180 dias (0,91±0,43 ug/dl) não diferiram das novilhas de um ano e dois anos (1,97±1,40 ug/dl e 2,15±1,41 ug/dl, respectivamente), mas diferiram das vacas. As novilhas nas duas idades não diferiram das vacas de três até oito anos de idade (3,25±1,89 ug/dl; 2,62±1,27 ug/dl; 2,42±0,93 ud/dl; 3,12±0,69 ug/dl; 2,89±0,41 ug/dl; 2,12±1,22 ug/dl, respectivamente). Os touros de um ano (1,00±0,73 ug/dl), de dois anos (0,89±0,43 ug/dl) e três anos (1,44±0,60 ug/dl) diferiram estatisticamente das terneiras de 80 dias de idade e das vacas. Ao aplicar para as fêmeas, o coeficiente de correlação de Pearson, determinou-se um valor entre as diferentes idades de r=0,48 ug/dl, indicando que o cortisol sérico eleva-se, nelas cerca de 0,48 ug/dl para cada acréscimo de um ano na idade. Frente a uma situação evidente de estresse (castração), o cortisol sérico variou cinco vezes, indo de 0,66 ug/dl para 3,36 ug/dl.Estes resultados indicam que há uma variação de cortisol sérico com a idade em bovinos de corte, e que este hormônio pode elevar-se diante de uma situação de estresse. O artigo 2 determinou as taxas fisiológicas do cortisol sérico em terneiras aberdeen angus e examinou as variações que ocorreram em função de dois diferentes tipos de desmame. Utilizou-se dois grupos de terneiras, um deles (n=24) submetido ao desmame com 90 dias pós-parto (desmame precoce) e o outro (n=24) submetido ao desmame com 210 dias (tradicional). Para avaliar as variações do cortisol sérico pós-desmame, foram feitas coletas 24, 48, 72 e 168 horas pós-desmame. As determinações foram feitas por radioimunoensaio. Os animais foram pesados aos 90, 210, 365 e 730 dias para avaliar o ganho de peso nos dois grupos. O desempenho reprodutivo dos animais foi acompanhado pela análise das taxas de prenhez e de perdas de conceptos até o primeiro parto previsto. Os resultados mostraram que os valores de cortisol sérico no grupo precoce, elevaram-se de 0,22±0,25 ug/dl em níveis basais antes do desmame para 0,71±0,64 ug/dl nas 24 horas pós-desmame, baixando para 0,26±0,30 ug/dl em uma semana. No grupo tradicional elevaram-se de 0,91±0,43 ug/dl em níveis basais antes do desmame para 1,94±0,89 ug/dl nas 24 horas, baixando para 0,99±0,46 ug/dl em uma semana. O trabalho mostrou que: houve elevação nos níveis séricos de cortisol nas primeiras 24 horas pós-desmame, os quais retornaram aos níveis fisiológicos após uma semana em ambos os grupos; o grupo desmamado tradicionalmente teve um ganho de peso significativamente superior (P<0,001) ao grupo desmamado precocemente; no desempenho reprodutivo não houve diferenças significativas nas taxas de prenhez e de perdas. O artigo 3 estimou a soroprevalência de anticorpos contra o BHV-1 em animais não vacinados e determinou a chance de apresentarem a infecção, em diversas categorias, de um rebanho de cria em uma propriedade de criação extensiva no Rio Grande do Sul. Amostras sorológicas de 1.516 animais, de um total de 2.600, foram coletadas. A pesquisa de anticorpos foi realizada através de soroneutralização. Os dados dos animais foram registrados e analisados com o auxílio do programa SPSS 12.0. Em todas as categorias ocorreram animais soropositivos e a soroprevalência nesta propriedade foi de 29,22%. Nos bovinos com mais de três anos chegou a 62,38%. Cabe salientar que, após o primeiro serviço, nas novilhas de dois anos, a soroprevalência para o BHV-1 aumentou dez vezes indo de 3,85% para 38,5%. A soroprevalência aumenta conforme a idade de forma significativa (P<0,001) após os dois anos, e o período reprodutivo aumenta as chances que os bovinos têm de apresentarem a infecção.No artigo 4 foram avaliadas as taxas de prenhez e de perdas, até o parto, em propriedades rurais que utilizam ou não, uma vacina que protege para doenças reprodutivas no Rio Grande do Sul. Foram selecionadas onze propriedades em seis municípios do litoral norte. Foi utilizada vacina em quatro propriedades. Acompanhou-se 27.774 vacas (13.477 vacinadas e 14.297 não vacinadas) por quatro temporadas reprodutivas (2001-2004). Na reprodução, utilizou-se inseminação artificial e repasse com touros. Os dados foram coletados nas propriedades e analisados com o auxílio do programa SPSS, versão 12.0. O índice geral de prenhez das vacas vacinadas foi de 72,7% e das vacas não vacinadas foi de 70,4%. Esta diferença considerando as 27.774 foi estatisticamente significativa (P<0,001). A taxa de perdas (abortos) das vacas vacinadas foi de 2,38% e das vacas não vacinadas, de 2,98%. Esta diferença, considerando um total de 19.865 vacas prenhas foi estatisticamente significativa (P=0,004). / Once reproductive efficiency is extremely important to a higher productivity in breedings herds, some issues related to this subjet were discussed in four articles. Variation on serum cortisol levels under stressful situations, seroprevalence and dynamics of BHV-1 in different animal categories of beef cattle, pregnancy and abortion rates in commercial herds were the topics studied in the articles. The first study evaluated levels of serum cortisol in animals of different ages, submitted to stressful conditions. Serum cortisol levels were evaluated in 80 and 180 days calves, 1 and two year old heifers, cows ranging from 3 to 8 years , and in bulls of 1, 2 and 3 years, as well as in 3 year males submitted to castration. Blood samples were collected always in the mornings, because hormones like cortisol have cicardian variation. Cortisol levels were determinated by radioimmunoassay. Calves with 80 days of age (22μg/dl±0,25μ/dl) had serum levels statistic different (p<0,001) from all the other categories, except for 180 days calves (P=0,81); 180 days calves( 0,91±0,43 ug/dl)did not differ from the one and two year heifers ( 1,97±1,40 ug/dl and 2,15±1,41 ug/dl, respectively), but had levels statistically different from all the other cows .Heifers in both ages did not differ from cows from 3 to 8 years (3,25±1,89 ug/dl; 2,62±1,27 ug/dl; 2,42±0,93 ud/dl; 3,12±0,69 ug/dl; 2,89±0,41 ug/dl; 2,12±1,22 ug/dl, respectivelly). The bulls at one ( 1,00±0,73 ug/dl), two ( 0,89±0,43 ug/d), and three years old (1,44μg/dl±0,60 ug/dl) had levels statistically different from the 80 days calves and cows. Using Pearson correlation for the females, the value for different ages was r=0,48μg/dl, indicating that serum cortisol enhances 0,48μg/dl for each year of age. In a stressful situation, serum cortisol enhanced five times, ranging from 0,66 μg/dl to 3,36 μg/dl. These results suggest that serum cortisol changes with age, and that this hormone may be useful to demonstrate an stressful situation in beef cattle. The second study aimed to determine physiologic values for serum cortisol in Aberdeen angus calves and to examine whether different weaning schedules would have any effect on such values. Two groups of calves were studied: the first group (n=24) comprised calves submitted to weaning at 90 days of age (early weaning); the second group (n=24) comprised calves submitted to weaning at 210 days of age (traditional weaning).Serum samples were colleted before weaning on day 80 (calves on early weaning) and on day 180 (calves on traditional weaning) to determine basal cortisol levels. To evaluate serum cortisol levels after weaning, blood samples were collected at 24, 48, 72 and 168 hours after weaning, always in the mornings, because of cicardian rhythm. Serum cortisol concentration was measured by radioimmunoassay method. Average daily gain at 90, 210, 365 and 730 days was measures in both groups.Pregnancy rate and losses until parturition were the parameters used to evaluate reproductive performance. Data showed that basal serum cortisol (0,22±0,25 ug/dl) in the early weaning group enhanced to 0,71±0,64 ug/dl in the first 24 hours after weaning, reducing to 0,26±0,30 ug/dl after a week. In the traditional weaning group, basal leves (0,91±0,43 ug/dl) enhanced to1,94±0,89 ug/dl in the first 24 hours, and reduced to 0,99±0,46 ug/dl in a week. This study showed that serum cortisol levels enhanced in the first 24 hours after weaning for both groups, returning to basal levels in a week The traditional weaning group had higher average daily gain (P<0,001).No significant differences were observed for pregnancy rates and losses until parturition. The third study had the objective of estimating antibody presence against BHV- 1 in non vaccinated animals, and evaluate the chance of animal developing infection in several categories in beef cattle herd in Rio Grande do Sul. Sorologic samples of 1516 animals, from a total of 2600, were collected between March 2003 and October 2005. Antibody presence was determinated by seroneutralization. Data was registered and analysed with SPSS 12.0. For comparative analysis, Fisher test was used and odds ratio was determinated with 95% confidence. Antibody presence in the herd was 29,22%, with seropositive animals in all categories. Serum prevalence was of 62,38% in three year old cows. Antibody prevalence inhanced 10 times after first service in the 2 yr heifers, turning from 3,85 % to 38,5%. Antibody presence enhances with age (P<0,001), specially after two years old, and chances of developing infection is higher after breeding season. The fourth study was conducted to evaluate pregnancy rates and losses until parturition (abortion) in farms, that either use a reproductive vaccine or not. In the vaccinated herds, a commercial vaccine was used. Eleven herds were selected, and vaccination was done in four of these herds. A total of 27774 cows were analysed, with 13477 cows routinely vaccinated and the other 14297 cows not vaccinated, for four breeding seasons (2001-2004). The cows were bred AI and exposed to a fertile bull. Data was collected in the farms, and analysed with SPSS 12.0. Total pregnancy rate was 72,7% in the group of vaccinated cows and 70,4% in the non vaccinated. This diference, considering the total 27774 cows was statiscally significant (p<0,001). Abortion rate was 2,38% in the vaccinated vs 2,98% in the non vaccinated group, and was statistically different (p=0,004). These results indicate that vaccinated herds had higher pregnancy rates and less losses by abortion.

Os herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) e tipo 5 (BoHV-5) são responsáveis por uma série de patologias em bovinos. A diferenciação entre tipos e subtipos desses vírus é importante para a compreensão da epidemiologia das infecções associadas a eles, assim como para permitir a tomada de medidas de controle adequadas. No presente estudo foram efetuadas análises antigênicas utilizando anticorpos monoclonais (AcMs) preparados contra antígenos específicos de herpesvírus bovinos. Quarenta e cinco amostras virais foram examinadas com um painel de 36 AcMs previamente preparados, em testes de imunoperoxidase em monocamada. Quatro amostras virais, sendo três BoHV-1 e uma BoHV-5, não apresentaram reatividade frente a nenhum dos AcMs avaliados. Oito dos 36 AcMs reagiram com todas as demais 41 amostras de herpesvírus bovinos. Por outro lado, oito amostras virais (três BoHV-5 e cinco BoHV-1) reagiram com todos os AcMs testados. Um AcM foi capaz de diferenciar o subtipo “c” do BoHV- 5 das demais amostras. Os demais resultados obtidos sugerem que não há uma clara correlação entre tipos e subtipos genomicamente determinados de herpesvírus bovinos e os AcMs aqui avaliados. / Bovine herpesvirus 1(BoHV-1) and 5 (BoHV-5) are associated to different clinical conditions of cattle. The differentiation between types and subtypes of these viruses maybe important for a better understanding of the epidemiology of bovine herpesvirus infections, as well as to provide support for adequate control measures. In the present study, antigenic analyses were performed with monoclonal antibodies (Mabs) prepared to bovine herpesviruses specific antigens. Fourty five virus isolates/strains were examined with a panel of 36 previously prepared Mabs, immunoperoxidase monolayer assays. Four virus isolates, of which three BoHV-1 and one BoHV-5, did not react with any of the Mabs tested. Eight of the 36 Mabs reacted with all other 41 bovine herpeviruses. On the other hand, eight viruses (three BoHV-5 and five BoHV-1) reacted with all Mabs tested. One Mab was capable of distinguishing BoHV-5 subtype “c” from the other subtypes. Additional results revealed that no clearcut correlation could be established between bovine herpesviruses types and subtypes determinated by molecular methods and the Mabs here evaluated.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-24T11:15:46Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 389658 bytes, checksum: d01e4f8e75c1bc6e7531f77722009e37 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-24T11:15:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 389658 bytes, checksum: d01e4f8e75c1bc6e7531f77722009e37 (MD5) Previous issue date: 2003-05-15 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O Tomato rugose mosaic virus (ToRMV) é um begomovírus descrito como parte de um complexo viral causando mosaico dourado e deformação (rugosidade) foliar em tomateiro na região do Triângulo Mineiro, Minas Gerais. Os dois componentes genômicos encontram-se completamente sequenciados, e a análise das seqüências de nucleotídeos do DNA-A indicou a presença de uma ORF adicional denominada AC5, presente apenas em algumas espécies de begomovírus. Esta ORF está quase totalmente inserida na sequência do gene cp, porém em orientação inversa e em outra fase de leitura. A ORF AC5 do ToRMV tem o potencial de codificar uma proteína com aproximadamente 27 kDa. A função do produto potencial da ORF AC5 foi estudada apenas para o Watermelon chlorotic stunt virus (WmCSV), não sendo encontrado nenhum indício da expressão da ORF. Entretanto, a seqüência de aminoácidos da proteína potencialmente codificada pela ORF AC5 do ToRMV possui apenas 41% de identidade com a AC5 do WmCSV. É possível que a ORF AC5 do ToRMV seja expressa, e que a proteína desempenhe alguma função no ciclo de infecção viral. Este trabalho teve por objetivo a clonagem e a expressão in vitro da ORF AC5 do ToRMV e a producão de anti-soro específico. Oligonucleotídeos específicos foram utilizados para a amplificação da região codificadora da ORF AC5 via PCR. O fragmento amplificado foi clonado no vetor de expressão pRSET-C. Plasmídeos recombinantes foram utilizados para a expressão da proteína AC5 em E. coli BL21::DE3. A proteína foi purificada a partir das células de E. coli e utilizada para a produção de anti-soro policlonal em coelhos. A especificidade do anti-soro policlonal obtido foi confirmada por Western blot. Esse anti-soro poderá ser utilizado em ensaios de imunolocalização da proteína AC5 em tecidos infectados pelo ToRMV. / Tomato rugose mosaic virus (ToRMV) is a typical bipartite begomovirus described as part of a viral complex inducing golden mosaic and leaf distortion (rugosity) in tomatoes at Triângulo Mineiro, Minas Gerais. Both genomic components have been completely sequenced, and the DNA-A sequence analysis indicated the presence of an additional open ready frame (ORF), named AC5, present in only a number of begomovirus species. This ORF is almost fully inserted into the cp gene, but in opposite orientation and in a different reading frame. The AC5 ORF of ToRMV has the potential to encode for a 27 kDa protein. The function of a putative AC5 protein has only been studied for Watermelon chlorotic stunt virus (WmCSV), but no evidence of its expression was found. However, the amino acid sequence of the putative AC5 protein from ToRMV is only 41% identical to the WmCSV AC5. It is thus conceivable that the ToRMV AC5 is expressed and plays a role in the viral infection cycle. The objective of this work was to clone and express the ToRMV AC5 ORF in vitro, and to raise an AC5-specific antiserum. Specific primers were used to direct the PCR-based amplification of the ToRMV AC5 ORF. The amplified fragment was cloned into the expression vector pRSET-C. Recombinant plasmids were used for protein expression in E. coli BL21::DE3. The AC5 protein was purified from E. coli cells by affinity chromatography and used for the immunization of rabbits. The specificity of the polyclonal antiserum obtained was assayed by Western blot. This antiserum can now be used in immunolocalization studies attempting to detect the AC5 protein in ToRMV-infected tissues. / Dissertação importada do Alexandria

Doenças infecciosas veiculadas pela água são causa comum de enfermidades em seres humanos no mundo inteiro. Dentre os patógenos causadores destas doenças, os vírus merecem destaque, pois possuem a capacidade de sobreviver em ambientes aquáticos e de permanecer infectantes por meses. A avaliação da balneabilidade das águas brasileiras é monitorada através da densidade de coliformes termotolerantes (CT), classificando as águas de recreação em próprias ou impróprias. Este trabalho tem como objetivo detectar e quantificar genomas de Adenovirus (AdV) e Enterovirus (EV) em amostras de água das praias de Ipanema e do Lami em Porto Alegre – RS e avaliar as condições de balneabilidade através da quantificação de CT. A metodologia utilizada foi reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) para os vírus e o método de tubos múltiplos para quantificação de CT. Entre os meses de novembro de 2011 e abril de 2012, foram coletadas 36 amostras de água: 18 amostras de Ipanema e 18 da praia do Lami. Em 30 (83,3%) das 36 amostras coletadas foi detectada a presença de genomas virais. Genoma de AdV foi detectado em 28 (77,8%) amostras, enquanto de EV foi detectado apenas em 8 amostras (22,2%). Em contraste com as baixas concentrações de CT, a pesquisa de AdV e EV demonstrou alta positividade (83,3%), o que demonstra a baixa correlação entre os micro-organismos utilizados como marcadores fecais e a presença de genomas virais em amostras de água. / Waterborne diseases are a common cause of illness in humans worldwide. Among the pathogens causing these diseases, the viruses are noteworthy because they have the ability to survive in aquatic environments and remain infective for months. In Brazil the evaluation of recreational waters is made by monitoring the density of fecal coliform (FC), classifying recreational waters in appropriate or inappropriate. This work aims to detect and quantify genomes of Adenovirus (AdV) and Enterovirus (EV) in water samples from Ipanema and Lami beaches in Porto Alegre - RS and assess the conditions of bathing by quantifying FC. The methodology used was real time polymerase chain reaction (qPCR) for virus and multiple tube technique for FC. Between the months of November 2011 and April 2012 were collected 36 water samples: 18 samples in Ipanema and 18 in Lami. In 30 (83.3%) of the 36 samples the presence of viral genomes was detected. AdV genome was detected in 28 (77.8%) samples, while the EV was only detected in 8 samples (22.2%). In contrast to the low concentrations of FC, research of EV and AdV showed a high positivity (83.3%), which demonstrates the low correlation between micro-organisms used as fecal markers and the presence of viral genomes in water samples.

Levando-se em conta que a eficiência reprodutiva é sumamente importante para uma maior produtividade em rebanhos de cria, foram pesquisados alguns tópicos correlacionados com o assunto em quatro artigos. Neles, estudou-se as variações de cortisol sérico frente a diferentes situações de manejo, a soroprevalência e dinâmica do BHV-1 em diferentes categorias animais em gado de corte e taxas de prenhez e abortos em rebanhos comerciais de gado de corte. O artigo 1 avaliou os níveis de cortisol sérico de bovinos de corte, em diferentes idades, frente a situações de manejo em um sistema de produção no Rio Grande do Sul. As concentrações de cortisol sérico foram determinadas por radioimunoensaio. Os níveis de cortisol sérico nas terneiras de 80 dias de idade (0,22±0,25 ug/dl) diferiram significativamente de todas as categorias (P<0,001), com exceção das terneiras de 180 dias (P=0,81). As terneiras com 180 dias (0,91±0,43 ug/dl) não diferiram das novilhas de um ano e dois anos (1,97±1,40 ug/dl e 2,15±1,41 ug/dl, respectivamente), mas diferiram das vacas. As novilhas nas duas idades não diferiram das vacas de três até oito anos de idade (3,25±1,89 ug/dl; 2,62±1,27 ug/dl; 2,42±0,93 ud/dl; 3,12±0,69 ug/dl; 2,89±0,41 ug/dl; 2,12±1,22 ug/dl, respectivamente). Os touros de um ano (1,00±0,73 ug/dl), de dois anos (0,89±0,43 ug/dl) e três anos (1,44±0,60 ug/dl) diferiram estatisticamente das terneiras de 80 dias de idade e das vacas. Ao aplicar para as fêmeas, o coeficiente de correlação de Pearson, determinou-se um valor entre as diferentes idades de r=0,48 ug/dl, indicando que o cortisol sérico eleva-se, nelas cerca de 0,48 ug/dl para cada acréscimo de um ano na idade. Frente a uma situação evidente de estresse (castração), o cortisol sérico variou cinco vezes, indo de 0,66 ug/dl para 3,36 ug/dl.Estes resultados indicam que há uma variação de cortisol sérico com a idade em bovinos de corte, e que este hormônio pode elevar-se diante de uma situação de estresse. O artigo 2 determinou as taxas fisiológicas do cortisol sérico em terneiras aberdeen angus e examinou as variações que ocorreram em função de dois diferentes tipos de desmame. Utilizou-se dois grupos de terneiras, um deles (n=24) submetido ao desmame com 90 dias pós-parto (desmame precoce) e o outro (n=24) submetido ao desmame com 210 dias (tradicional). Para avaliar as variações do cortisol sérico pós-desmame, foram feitas coletas 24, 48, 72 e 168 horas pós-desmame. As determinações foram feitas por radioimunoensaio. Os animais foram pesados aos 90, 210, 365 e 730 dias para avaliar o ganho de peso nos dois grupos. O desempenho reprodutivo dos animais foi acompanhado pela análise das taxas de prenhez e de perdas de conceptos até o primeiro parto previsto. Os resultados mostraram que os valores de cortisol sérico no grupo precoce, elevaram-se de 0,22±0,25 ug/dl em níveis basais antes do desmame para 0,71±0,64 ug/dl nas 24 horas pós-desmame, baixando para 0,26±0,30 ug/dl em uma semana. No grupo tradicional elevaram-se de 0,91±0,43 ug/dl em níveis basais antes do desmame para 1,94±0,89 ug/dl nas 24 horas, baixando para 0,99±0,46 ug/dl em uma semana. O trabalho mostrou que: houve elevação nos níveis séricos de cortisol nas primeiras 24 horas pós-desmame, os quais retornaram aos níveis fisiológicos após uma semana em ambos os grupos; o grupo desmamado tradicionalmente teve um ganho de peso significativamente superior (P<0,001) ao grupo desmamado precocemente; no desempenho reprodutivo não houve diferenças significativas nas taxas de prenhez e de perdas. O artigo 3 estimou a soroprevalência de anticorpos contra o BHV-1 em animais não vacinados e determinou a chance de apresentarem a infecção, em diversas categorias, de um rebanho de cria em uma propriedade de criação extensiva no Rio Grande do Sul. Amostras sorológicas de 1.516 animais, de um total de 2.600, foram coletadas. A pesquisa de anticorpos foi realizada através de soroneutralização. Os dados dos animais foram registrados e analisados com o auxílio do programa SPSS 12.0. Em todas as categorias ocorreram animais soropositivos e a soroprevalência nesta propriedade foi de 29,22%. Nos bovinos com mais de três anos chegou a 62,38%. Cabe salientar que, após o primeiro serviço, nas novilhas de dois anos, a soroprevalência para o BHV-1 aumentou dez vezes indo de 3,85% para 38,5%. A soroprevalência aumenta conforme a idade de forma significativa (P<0,001) após os dois anos, e o período reprodutivo aumenta as chances que os bovinos têm de apresentarem a infecção.No artigo 4 foram avaliadas as taxas de prenhez e de perdas, até o parto, em propriedades rurais que utilizam ou não, uma vacina que protege para doenças reprodutivas no Rio Grande do Sul. Foram selecionadas onze propriedades em seis municípios do litoral norte. Foi utilizada vacina em quatro propriedades. Acompanhou-se 27.774 vacas (13.477 vacinadas e 14.297 não vacinadas) por quatro temporadas reprodutivas (2001-2004). Na reprodução, utilizou-se inseminação artificial e repasse com touros. Os dados foram coletados nas propriedades e analisados com o auxílio do programa SPSS, versão 12.0. O índice geral de prenhez das vacas vacinadas foi de 72,7% e das vacas não vacinadas foi de 70,4%. Esta diferença considerando as 27.774 foi estatisticamente significativa (P<0,001). A taxa de perdas (abortos) das vacas vacinadas foi de 2,38% e das vacas não vacinadas, de 2,98%. Esta diferença, considerando um total de 19.865 vacas prenhas foi estatisticamente significativa (P=0,004). / Once reproductive efficiency is extremely important to a higher productivity in breedings herds, some issues related to this subjet were discussed in four articles. Variation on serum cortisol levels under stressful situations, seroprevalence and dynamics of BHV-1 in different animal categories of beef cattle, pregnancy and abortion rates in commercial herds were the topics studied in the articles. The first study evaluated levels of serum cortisol in animals of different ages, submitted to stressful conditions. Serum cortisol levels were evaluated in 80 and 180 days calves, 1 and two year old heifers, cows ranging from 3 to 8 years , and in bulls of 1, 2 and 3 years, as well as in 3 year males submitted to castration. Blood samples were collected always in the mornings, because hormones like cortisol have cicardian variation. Cortisol levels were determinated by radioimmunoassay. Calves with 80 days of age (22μg/dl±0,25μ/dl) had serum levels statistic different (p<0,001) from all the other categories, except for 180 days calves (P=0,81); 180 days calves( 0,91±0,43 ug/dl)did not differ from the one and two year heifers ( 1,97±1,40 ug/dl and 2,15±1,41 ug/dl, respectively), but had levels statistically different from all the other cows .Heifers in both ages did not differ from cows from 3 to 8 years (3,25±1,89 ug/dl; 2,62±1,27 ug/dl; 2,42±0,93 ud/dl; 3,12±0,69 ug/dl; 2,89±0,41 ug/dl; 2,12±1,22 ug/dl, respectivelly). The bulls at one ( 1,00±0,73 ug/dl), two ( 0,89±0,43 ug/d), and three years old (1,44μg/dl±0,60 ug/dl) had levels statistically different from the 80 days calves and cows. Using Pearson correlation for the females, the value for different ages was r=0,48μg/dl, indicating that serum cortisol enhances 0,48μg/dl for each year of age. In a stressful situation, serum cortisol enhanced five times, ranging from 0,66 μg/dl to 3,36 μg/dl. These results suggest that serum cortisol changes with age, and that this hormone may be useful to demonstrate an stressful situation in beef cattle. The second study aimed to determine physiologic values for serum cortisol in Aberdeen angus calves and to examine whether different weaning schedules would have any effect on such values. Two groups of calves were studied: the first group (n=24) comprised calves submitted to weaning at 90 days of age (early weaning); the second group (n=24) comprised calves submitted to weaning at 210 days of age (traditional weaning).Serum samples were colleted before weaning on day 80 (calves on early weaning) and on day 180 (calves on traditional weaning) to determine basal cortisol levels. To evaluate serum cortisol levels after weaning, blood samples were collected at 24, 48, 72 and 168 hours after weaning, always in the mornings, because of cicardian rhythm. Serum cortisol concentration was measured by radioimmunoassay method. Average daily gain at 90, 210, 365 and 730 days was measures in both groups.Pregnancy rate and losses until parturition were the parameters used to evaluate reproductive performance. Data showed that basal serum cortisol (0,22±0,25 ug/dl) in the early weaning group enhanced to 0,71±0,64 ug/dl in the first 24 hours after weaning, reducing to 0,26±0,30 ug/dl after a week. In the traditional weaning group, basal leves (0,91±0,43 ug/dl) enhanced to1,94±0,89 ug/dl in the first 24 hours, and reduced to 0,99±0,46 ug/dl in a week. This study showed that serum cortisol levels enhanced in the first 24 hours after weaning for both groups, returning to basal levels in a week The traditional weaning group had higher average daily gain (P<0,001).No significant differences were observed for pregnancy rates and losses until parturition. The third study had the objective of estimating antibody presence against BHV- 1 in non vaccinated animals, and evaluate the chance of animal developing infection in several categories in beef cattle herd in Rio Grande do Sul. Sorologic samples of 1516 animals, from a total of 2600, were collected between March 2003 and October 2005. Antibody presence was determinated by seroneutralization. Data was registered and analysed with SPSS 12.0. For comparative analysis, Fisher test was used and odds ratio was determinated with 95% confidence. Antibody presence in the herd was 29,22%, with seropositive animals in all categories. Serum prevalence was of 62,38% in three year old cows. Antibody prevalence inhanced 10 times after first service in the 2 yr heifers, turning from 3,85 % to 38,5%. Antibody presence enhances with age (P<0,001), specially after two years old, and chances of developing infection is higher after breeding season. The fourth study was conducted to evaluate pregnancy rates and losses until parturition (abortion) in farms, that either use a reproductive vaccine or not. In the vaccinated herds, a commercial vaccine was used. Eleven herds were selected, and vaccination was done in four of these herds. A total of 27774 cows were analysed, with 13477 cows routinely vaccinated and the other 14297 cows not vaccinated, for four breeding seasons (2001-2004). The cows were bred AI and exposed to a fertile bull. Data was collected in the farms, and analysed with SPSS 12.0. Total pregnancy rate was 72,7% in the group of vaccinated cows and 70,4% in the non vaccinated. This diference, considering the total 27774 cows was statiscally significant (p<0,001). Abortion rate was 2,38% in the vaccinated vs 2,98% in the non vaccinated group, and was statistically different (p=0,004). These results indicate that vaccinated herds had higher pregnancy rates and less losses by abortion.

Os herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) e tipo 5 (BoHV-5) são responsáveis por uma série de patologias em bovinos. A diferenciação entre tipos e subtipos desses vírus é importante para a compreensão da epidemiologia das infecções associadas a eles, assim como para permitir a tomada de medidas de controle adequadas. No presente estudo foram efetuadas análises antigênicas utilizando anticorpos monoclonais (AcMs) preparados contra antígenos específicos de herpesvírus bovinos. Quarenta e cinco amostras virais foram examinadas com um painel de 36 AcMs previamente preparados, em testes de imunoperoxidase em monocamada. Quatro amostras virais, sendo três BoHV-1 e uma BoHV-5, não apresentaram reatividade frente a nenhum dos AcMs avaliados. Oito dos 36 AcMs reagiram com todas as demais 41 amostras de herpesvírus bovinos. Por outro lado, oito amostras virais (três BoHV-5 e cinco BoHV-1) reagiram com todos os AcMs testados. Um AcM foi capaz de diferenciar o subtipo “c” do BoHV- 5 das demais amostras. Os demais resultados obtidos sugerem que não há uma clara correlação entre tipos e subtipos genomicamente determinados de herpesvírus bovinos e os AcMs aqui avaliados. / Bovine herpesvirus 1(BoHV-1) and 5 (BoHV-5) are associated to different clinical conditions of cattle. The differentiation between types and subtypes of these viruses maybe important for a better understanding of the epidemiology of bovine herpesvirus infections, as well as to provide support for adequate control measures. In the present study, antigenic analyses were performed with monoclonal antibodies (Mabs) prepared to bovine herpesviruses specific antigens. Fourty five virus isolates/strains were examined with a panel of 36 previously prepared Mabs, immunoperoxidase monolayer assays. Four virus isolates, of which three BoHV-1 and one BoHV-5, did not react with any of the Mabs tested. Eight of the 36 Mabs reacted with all other 41 bovine herpeviruses. On the other hand, eight viruses (three BoHV-5 and five BoHV-1) reacted with all Mabs tested. One Mab was capable of distinguishing BoHV-5 subtype “c” from the other subtypes. Additional results revealed that no clearcut correlation could be established between bovine herpesviruses types and subtypes determinated by molecular methods and the Mabs here evaluated.

Cultivos celulares podem ser utilizados para isolamento viral, caracterização de novas amostras virais e produção de imunobiológicos. Podem ser empregados cultivos celulares primários, secundários ou de linha. Estes últimos podem ser obtidos pela transformação física, química ou biológica de cultivos primários ou secundários. Para verificar a interação entre células transformadas com o Ag T do vírus símio 40 (SV40) e os Lentivírus de Pequenos Ruminantes (SRLV), amostras brasileiras de SRLV foram utilizadas para inoculação em cultivos celulares de membrana sinovial ovina transformados pelo Ag T e comparadas à amostras inoculadas em cultivos não transformados. Inicialmente, as células transformadas pelo Ag T foram caracterizadas e observou-se um aumento na cinética de crescimento e alterações no cariótipo, provavelmente induzidas pela presença do Ag T. Este foi detectado por PCR no núcleo e no citoplasma das células transformadas e sua expressão, confirmada através de RT-PCR. A fim de avaliar a permissividade e a possível seleção de populações virais em células transformadas, dois isolados, um de maedi-visna dos ovinos e um de artrite-encefalite caprina, foram inoculados em células MSO e TMSOpSV1. Através da análise de sequências dos genes gag e env e LTR obtidos por PCR, procurou-se avaliar a variabilidade viral em função do tipo de célula utilizada. Analisando-se as seqüências obtidas pelo método de Maximum Likelihood, embora tenha sido observada variabilidade viral, esta não estava associada ao tipo celular utilizado para inoculação viral.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006Bitstream added on 2014-06-13T19:51:41Z : No. of bitstreams: 1 vela_rar_me_botfm.pdf: 742153 bytes, checksum: 35038185a5e7fb854d4bfa6fc0a483a4 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Gap / Foram estudadas 112 gestantes atendidas no Ambulatório de Infecções Genitais (AIG) do Hospital das Clínicas, UNESP, Botucatu, no período de março de 2001 a julho de 2005. Todas as gestantes apresentavam lesões genitais sugestivas, pela patologia, de doença HPV induzida. Para essas lesões foi avaliado o local da coleta das mesmas e a presença do vírus HPV e da bactéria Chlamydia trachomatis. Nessas pacientes também se analisou a idade, o estado civil, o uso de anticoncepcional, infecções genitais e a paridade. Ambos os agentes causam problemas na gestação, tais como baixo peso aos nascer e parto prematuro. Casuística e Métodos: As pesquisas tanto de HPV como de Chlamydia t0rachomatis foram realizadas através de PCR utilizando-se, respectivamente, os primers GP5+ e GP6+ e PCT1 e PCT2. Os HPV's foram tipados por sequenciamento. Resultados: A positividade de HPV foi de 79,31%. Com relação aos tipos os mais encontrados foram o 6 e o 18. Para a Chlamydia a positividade foi de 15,8%. Conclusão: Os dados encontrados em nosso estudo são compatíveis com os encontrados na literatura em todo o mundo, demonstrando que, mesmo em países desenvolvidos, a taxa de mulheres contaminadas com HPV é muito alta. Com relação à Chlamydia, os dados também são compatíveis com os da literatura mostrando associação clara entre a presença dos dois agentes e problemas gestacionais. / Not available.