Reproduction de : Thèse d'exercice : Médecine vétérinaire : Toulouse 3 : 2009. / Titre provenant de l'écran titre. Bibliogr. p. 71-75.

Thèse ou mémoire avec insertion d'articles / Le virus respiratoire syncytial (VRS) et le métapneumovirus humain (MPVH) sont deux pathogènes respiratoires majeurs qui représentent un fardeau important pour la santé publique dans le monde entier, affectant particulièrement les populations vulnérables telles que les nourrissons, les personnes âgées et les patients immunodéprimés. Les deux virus appartiennent à la famille des *Pneumoviridae* (pneumovirus) et sont relativement similaires dans leur structure et leur réplication. Malgré plus de 60 ans de recherche dans ce domaine, les deux premiers vaccins contemporains pour la prévention du VRS ont été approuvés cette année, mais il n'existe toujours pas de vaccin contre le MPVH. Cette thèse donne un aperçu complet de la virologie moléculaire du VRS et du MPVH, de l'épidémiologie, du fardeau de la maladie, des modèles d'infection, de la réponse immunitaire et du paysage actuel des modalités de traitement et de prophylaxie du VRS et du MPVH, en mettant l'accent sur le développement d'un vaccin. Notre équipe de recherche a déjà développé Metavac®, un candidat vaccin vivant atténué contre le MPVH qui s'est avéré sécuritaire, immunogène et protecteur contre l'infection par le MPVH chez la souris. Cette thèse présente une tentative réussie de conception, de génération et de caractérisation d'un vaccin chimérique atténué MPVH/VRS basé sur la plateforme d'expression Metavac® en vue de son utilisation comme vaccin chimérique atténué bivalent contre les deux pneumovirus. Le projet de recherche comprend trois parties principales : I) Biologie moléculaire : L'étude de la génétique des pneumovirus et la tentative de trouver une localisation appropriée dans le génome du MPVH pour l'insertion de l'antigène principal du VRS. II) *II) In vitro :* Génération d'un virus viable par génétique inverse et production d'un stock de virus concentré pour son utilisation comme vaccin chimérique atténué MPVH/VRS. Caractérisation des virus chimériques. III) *In vivo*: Vaccination de souris BALB/c avec des virus chimériques MPVH/VRS et évaluation de leur efficacité protectrice contre le défi létal MPVH et VRS. / Respiratory Syncytial Virus (RSV) and Human Metapneumovirus (HMPV) are two major respiratory pathogens that pose a significant public health burden worldwide, particularly affecting vulnerable populations such as infants, elderly individuals, and immunocompromised patients. Both viruses belong to the family *Pneumoviridae* (pneumovieus) and are relatively similar in structure and replication. Despite over 60 years of research in the field, the first two contemporary vaccines for RSV prevention have been approved this year, and yet there is still no vaccine available against HMPV. This thesis provides a comprehensive overview of RSV and HMPV molecular virology, epidemiology, disease burden, models of infection, immune response, and the current landscape of RSV and HMPV treatment and prophylactic modalities with a focus on vaccine development. Our research team has previously developed Metavac®, a live attenuated HMPV vaccine candidate that proved safe, immunogenic, and protective against HMPV infection in mice. This work presents a successful attempt to design, generate, and characterize a chimeric attenuated HMPV/RSV virus based on the Metavac® expression platform for its use as a bivalent attenuated chimeric vaccine against both pneumoviruses. The research project includes three main parts: IV) Molecular biology: The study of pneumovirus genetics and the attempt to find an appropriate localization in the genome of HMPV for the insertion of the main antigen of RSV. V) *In vitro*: A rescue of a viable virus by reverse genetics and the production of a concentrated virus stock for its use as an attenuated chimeric HMPV/RSV vaccine. Characterization of chimeric viruses. VI) *In vivo*: Vaccination of BALB/c mice with chimeric HMPV/RSV viruses and evaluation of their protective efficacy against HMPV and RSV lethal challenge.

Thèse d'exercice : Médecine. Pédiatrie : Université de Nantes : 2004. / Bibliogr. f. 28-29 [23 réf.].

Thèse numérisée par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.

Reproduction de : Thèse d'exercice : Médecine vétérinaire : Toulouse 3 : 2007. / Titre provenant de l'écran titre. Bibliogr. p. 108-125.

Les vecteurs permettant la transmission des infections nosocomiales ne sont pas toujours bien identifiés. Les risques représentés par les virus aéroportés dans les milieux de soins doivent être étudié davantage. Ce mémoire présente des méthodologies pour détecter la présence de virus aéroportés et évaluer leur résistance dans cet état. Le virus influenza, le norovirus et le virus respiratoire syncytial y sont à l’étude. Deux techniques d’échantillonnage furent utilisées soit un échantillonnage à sec (NIOSH 251) et un échantillonneur liquide (Coriolis µ®). Les ADNc viraux furent détectés par qPCR. La résistance des norovirus à l’aérosolisation a été démontrée à l’aide d’un virus-modèle, le norovirus murin. La première détection des norovirus dans l’air de milieux de soins y est décrite. La présence du virus influenza dans l’air a aussi été démontrée. Le virus respiratoire syncytial n’a pu être mis en évidence dans l’air. Les virus pathogènes peuvent être aéroportés et représenter un risque infectieux. / The route of transmission of healthcare associated infections is not always well defined. The airborne dissemination of influenza virus, norovirus and respiratory syncytial virus has to be assessed. This thesis presents methodologies to detect airborne viruses and some innovative way to assess their resistance through the airborne route. Two sampling techniques were used, more precisely a dry sampling using a NIOSH 251 impactor and a liquid sampling using a Corriolis µ®. Viral cDNA was detected by real-time PCR. To assess the resistance of norovirus through the air route we used a cultivable experimental model; the murine norovirus. This thesis presents the first detection of airborne norovirus in a healthcare setting. Influenza virus was detected in the air of an emergency department and in the room of influenza positive patient. Respiratory syncytial virus could not be detected in an airborne state. Pathogenic virus can be disseminated through the airborne route and could represent an infectious risk.

Le virus respiratoire syncytial (VRS) est le principal agent responsable desbronchopneumonies du jeune veau et des bronchiolites du nourrisson. Il n’existe pas devaccin ni d’antiviraux spécifiques pour l’homme. La réplication du génome et la transcriptiondes gènes viraux sont assurées par un ensemble de protéines virales constituant le complexeARN polymérase ARN-dépendant : la nucléoprotéine N, la phosphoprotéine P, le facteur detranscription M2-1 et la grosse sous-unité L. L’objectif principal de ma thèse était d’obtenirde nouvelles données structurales et fonctionnelles sur le complexe ARN-polymérase ARNdépendante(RdRp) du VRS, en particulier sur le couple P-L. Pour ceci j’ai tout d’aborddéveloppé un protocole de production et purification de la protéine L sous formerecombinante en cellules d’insecte. Ceci m’a permis ensuite de cartographier le sited’interaction de P avec L. J’ai ainsi mis en évidence que la protéine L interagit avec la partieC-terminale de la protéine P, au-niveau des résidus 216 à 239. Les données obtenuessuggèrent que ce domaine peut former un nouvel élément de reconnaissance moléculaire(« MoRE ») se structurant en hélice alpha lors de l’interaction avec la protéine L. De plus, lacartographie de ce domaine d’interaction m’a permis d’identifier entre les résidus 164 et 205de P une nouvelle région impliquée dans le recrutement de la protéine L aux corpsd’inclusions viraux. Ces nouvelles données ouvrent la voie à de nouvelles études structuralesde l’ARN-polymérase du VRS et nous permettent d’envisager de nouvelles stratégiesantivirales ciblant ce complexe. / Respiratory syncytial virus (RSV) is the leading cause of calves bronchopneumonia andinfants bronchiolitis. Neither vaccine nor antiviral treatments are currently available for use inhumans. Viral genome is replicated and transcribed by a set of viral proteins constituting theviral RNA-dependent RNA polymerase (RdRp) complex: the nucleoprotein (N), thephosphoprotein (P), the transcription factor (M2-1) and the large subunit (L). This workaimed to unveil new structural and functional data regarding the viral RdRp, especially the PLcouple. With this aim in view, I have first conceived a protocol to produce and purifyrecombinant L and P proteins expressed in insect cells. This tool enabled the fine mappingand characterization of the L binding domain of the RSV phosphoprotein. This highlightedthe interaction between the L protein and the C-terminal region of the P protein, especiallyresidues 216 to 239. Further data suggests that this area constitutes an alpha helix formingmolecular recognition element (« MoRE ») during P-L interaction. Furthermore, this studyunveiled a new region of the P protein encompassing residues 164 to 205, involved in therecruitment of L protein to viral inclusion bodies. These new results open the way toupcoming structural studies of RSV RdRp and allow us to define a new target for thedevelopment of antiviral drugs against RSV.

Thèse (Ph. D.)--Université Laval, 2009. / Bibliogr.: f. 107-115. Publié aussi en version électronique dans la Collection Mémoires et thèses électroniques.

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Le Virus Respiratoire Syncytial (VRS) est une des causes les plus fréquentes d'infections respiratoires chez l'enfant. Actuellement les mécanismes de transmission, notamment la part des aérosols, ne sont pas connus. Dans ce contexte, l'objectif de ce travail a porté sur l'étude de l'aérobiocontamination virale des espaces clos. Ainsi, cette recherche a concerné l'étude en laboratoire de l'infectivité du VRS sous forme d'aérosols, la caractérisation des émissions trachéobronchiques ainsi que la recherche d'aérosols de VRS dans différents environnements intérieurs. L'étude d'un aérosol de Virus Respiratoire Syncytial en laboratoire a montré une baisse notable du pouvoir infectieux dans une ambiance humide. Cependant l’approche cinétique montre que l’impact de l'humidité relative peut se révéler très différent selon l’âge de l’aérosol. L'étude des émissions trachéobronchiques, réalisée sur un panel de 81 volontaires, symptomatiques et asymptomatiques, a mis en évidence la proportion importante de particules fines et ultrafines dans ces émissions. De plus, il a été montré que les asymptomatiques ont tendance à émettre moins de particules que les symptomatiques et qu'il n'existe pas de distribution en taille spécifique d'un groupe ou l'autre. Enfin, la recherche d'aérosols de VRS dans les environnements intérieurs a été effectuée à l'aide d'un préleveur cyclonique à haut débit au sein d'un hôpital et d'établissements recevant des enfants. Au total 14 prélèvements ont été effectués et associés à des analyses PCR. Ces prélèvements n'ont pas mis en évidence la présence de virus respiratoires aéroportés dans ces environnements / Respiratory Syncytial Virus (RSV) is a leading cause of respiratory infections in infants. However, the mechanisms involved in the transmission of the disease are not well known. Therefore, the aim of the present study is to study the viral aerocontamination of indoor environments. This research is thus aimed at the study in laboratory of the survival of RSV aerosol, at the characterization of the particles size of exhaled respiratory aerosols and at the research of these RSV aerosols in various indoor environments. The laboratory study of a RSV aerosol revealed a decrease of its infectivity in a humid atmosphere. However, it appeared that the humidity's impact could be different according to the age of the aerosol. The study of exhaled respiratory aerosol made with 81 volunteers, with or without symptom, showed the important proportion of fine and ultra fine particles. Moreover, it has been shown that volunteers without symptom emit fewer particles than individuals with symptoms. Also, this work highlighted the fact that there is not a specific size distribution considering these emissions. Lastly, the research of RSV aerosols in indoor environments has been done using a high flow cyclone sampler in a hospital and various institutions. Fourteen samplings were done, associated with PCR analyses. These samplings did not permit to detect respiratory airborne viruses