Se presentan los resultados obtenidos en la validación de un método analítico por cromatografía líquida de alta resolución, para la determinación de vitamina B1, en leche UHT Enriquecida y Endulzada, el cual se diseñó para separar la tiamina, con la utilización de una columna RP-18 de 150 x 4.6 mm y un detector UV-Visible. Dicho método se empleó para el control de la calidad de este producto. El método fue validado siguiendo una metodología de trabajo elaborado previamente en un protocolo de validación, donde se analizaron diferentes parámetros como son: selectividad, linealidad, presición, exactitud. Se procede a recopilar toda la información bibliográfica necesaria para luego realizar los primeros análisis exploratorios definiendo las condiciones cromatográficas finales. Definida las condiciones se inicia los análisis para la evaluación de los parámetros de validación y se demuestra mediante el diseño experimental y los procedimientos estadísticos empleados que la técnica analítica propuesta es lineal por que se obtiene un coeficiente de determinación de r2= 0.9998; es exacta por que se obtiene un porcentaje de recuperación de 100.07%; es precisa ya que para la repetibilidad se obtiene un RSD de 0.446% y para la precisión intermedia se demuestra que no existe diferencias entre las varianzas de los analistas; finalmente es selectiva por que no se evidencian picos interferentes cumpliendo así con los parámetros de validación establecidas en las obras oficiales, por lo cual, el método validado es confiable y puede ser empleado en el análisis de rutina. / The results obtained in the validation of an analytic method by chromatography liquid of high resolution are presented, for the decision of vitamin B1, in milk UHT enriched and sweetened, which was designed to separate the thiamine, with the utilization of a column RP-18 of 150 x 4.6 mm and a detector UV- Visible. Said method was employed for the control of the quality of this product. The validation of an analytic method includes the evaluation of a series of parameters. They are: selectivity, linearity, precision, accuracy. We compilated all the bibliographic information we need to do the first exploratory analyses which define the final chromatographic conditions. Then, when the conditions were defined, we started the analyses for the evaluation of validation’s parameters. It was shown by the experimental design and the statistic procedures, that the proposed analytical technique is linear because the correlation coefficient obtained was r2= 0.9998; it is accurate, it was obtained a recuperation percentage of 100.07%; is precise since for the repeatability obtained was RSD of 0.446% and for the intermediate precision it is shown that do not exist differences among the variances of the analysts, finally is selective because there is no evidence of interferential chromatographic peaks. The proposed technique accomplished all established validation’s parameters established in the official papers. Thus, the validate method is reliable and it can be used in the routine analyses.

Se presentan los resultados obtenidos en la validación de un método analítico por cromatografía líquida de alta resolución, para la determinación de vitamina B1, en leche UHT Enriquecida y Endulzada, el cual se diseñó para separar la tiamina, con la utilización de una columna RP-18 de 150 x 4.6 mm y un detector UV-Visible. Dicho método se empleó para el control de la calidad de este producto. El método fue validado siguiendo una metodología de trabajo elaborado previamente en un protocolo de validación, donde se analizaron diferentes parámetros como son: selectividad, linealidad, presición, exactitud. Se procede a recopilar toda la información bibliográfica necesaria para luego realizar los primeros análisis exploratorios definiendo las condiciones cromatográficas finales. Definida las condiciones se inicia los análisis para la evaluación de los parámetros de validación y se demuestra mediante el diseño experimental y los procedimientos estadísticos empleados que la técnica analítica propuesta es lineal por que se obtiene un coeficiente de determinación de r2= 0.9998; es exacta por que se obtiene un porcentaje de recuperación de 100.07%; es precisa ya que para la repetibilidad se obtiene un RSD de 0.446% y para la precisión intermedia se demuestra que no existe diferencias entre las varianzas de los analistas; finalmente es selectiva por que no se evidencian picos interferentes cumpliendo así con los parámetros de validación establecidas en las obras oficiales, por lo cual, el método validado es confiable y puede ser empleado en el análisis de rutina. / The results obtained in the validation of an analytic method by chromatography liquid of high resolution are presented, for the decision of vitamin B1, in milk UHT enriched and sweetened, which was designed to separate the thiamine, with the utilization of a column RP-18 of 150 x 4.6 mm and a detector UV- Visible. Said method was employed for the control of the quality of this product. The validation of an analytic method includes the evaluation of a series of parameters. They are: selectivity, linearity, precision, accuracy. We compilated all the bibliographic information we need to do the first exploratory analyses which define the final chromatographic conditions. Then, when the conditions were defined, we started the analyses for the evaluation of validation’s parameters. It was shown by the experimental design and the statistic procedures, that the proposed analytical technique is linear because the correlation coefficient obtained was r2= 0.9998; it is accurate, it was obtained a recuperation percentage of 100.07%; is precise since for the repeatability obtained was RSD of 0.446% and for the intermediate precision it is shown that do not exist differences among the variances of the analysts, finally is selective because there is no evidence of interferential chromatographic peaks. The proposed technique accomplished all established validation’s parameters established in the official papers. Thus, the validate method is reliable and it can be used in the routine analyses.

Nesta dissertação, foi caracterizada a via de biossíntese de tiamina (Vitamina B1) nas três formas intraeritrocitárias de P. falciparum. Foram realizadas marcações metabólicas, utilizando diferentes precursores radioativos envolvidos na biossíntese de tiamina, já descritos para outros organismos. A utilização do precursor [1-14C] acetato de sódio demonstrou que a via de biossíntese de tiamina encontra-se ativa em todos os estágios intraeritrocitários de P. falciparum. Investigamos os precursores que poderiam estar envolvidos na biossíntese do intermediário tiazol, e nossos dados sugerem que a cistéina é a doadora do enxofre presente na molécula de tiamina; que o aminoácido tirosina pode ser o precursor da biossíntese de tiamina, e nicotinamida não é utilizada como precursor em P. falciparum. Também se avaliou o efeito da fosmidomicina e 3ClDHP e foi demonstrado que ambos propiciaram uma inibição no crescimento dos parasitas. Estes dados sugerem que a via de biossíntese de tiamina, pode ser explorada como alvo para drogas antimaláricas, devido ausência em humanos. / In the present work we have demonstrated the biosynthesis of thiamin (vitamin B1) in the intraerytrocytic stages of P. falciparum. We have demonstrated active biosynthesis of thiamine in the three parasite stages metabolically labeled with [1-14C] sodium acetate. We also investigated which precursors could be involved in the biosynthesis of the thiazole intermediate, by metabolic labelling with different precursors. Our data suggest that the sulphur present in the thiamine molecule is formed from cysteine white that tyrosine can be the precursor of thiamine biosynthesis. Nicotinamide is not utilized as a precursor in P.falciparum. We also investigated the effect of fosmidomycin (an inhibitor of the DOXP reductoisomerase in the MEP pathway) and 3CIDHP (an analogue of bacimethrin) in vitro cultures and both showed an inhibitory effect on parasite growth. These data suggest that the biosynthesis of thiamine can be an attractive target for the development of antimalarial drugs since this pathway is absent in humans.

Nesta dissertação, foi caracterizada a via de biossíntese de tiamina (Vitamina B1) nas três formas intraeritrocitárias de P. falciparum. Foram realizadas marcações metabólicas, utilizando diferentes precursores radioativos envolvidos na biossíntese de tiamina, já descritos para outros organismos. A utilização do precursor [1-14C] acetato de sódio demonstrou que a via de biossíntese de tiamina encontra-se ativa em todos os estágios intraeritrocitários de P. falciparum. Investigamos os precursores que poderiam estar envolvidos na biossíntese do intermediário tiazol, e nossos dados sugerem que a cistéina é a doadora do enxofre presente na molécula de tiamina; que o aminoácido tirosina pode ser o precursor da biossíntese de tiamina, e nicotinamida não é utilizada como precursor em P. falciparum. Também se avaliou o efeito da fosmidomicina e 3ClDHP e foi demonstrado que ambos propiciaram uma inibição no crescimento dos parasitas. Estes dados sugerem que a via de biossíntese de tiamina, pode ser explorada como alvo para drogas antimaláricas, devido ausência em humanos. / In the present work we have demonstrated the biosynthesis of thiamin (vitamin B1) in the intraerytrocytic stages of P. falciparum. We have demonstrated active biosynthesis of thiamine in the three parasite stages metabolically labeled with [1-14C] sodium acetate. We also investigated which precursors could be involved in the biosynthesis of the thiazole intermediate, by metabolic labelling with different precursors. Our data suggest that the sulphur present in the thiamine molecule is formed from cysteine white that tyrosine can be the precursor of thiamine biosynthesis. Nicotinamide is not utilized as a precursor in P.falciparum. We also investigated the effect of fosmidomycin (an inhibitor of the DOXP reductoisomerase in the MEP pathway) and 3CIDHP (an analogue of bacimethrin) in vitro cultures and both showed an inhibitory effect on parasite growth. These data suggest that the biosynthesis of thiamine can be an attractive target for the development of antimalarial drugs since this pathway is absent in humans.