Heterorhabditis é um gênero de nematoides entomopatogênicos, simbiontes de bactérias do gênero Photorhabdus. Juntos, infectam e matam artrópodes. A linhagem LPP7 de H. baujardi foi isolada na cidade de Monte Negro (RO). A vitelogênese compreende o acúmulo de reservas dentro do ovócito em crescimento. A vitelogenina é uma lipoproteína transportadora de lipídeos para o ovócito, formando o vitelo. Sequenciamos um fragmento de 800pb do gene vit-6 de LPP7, codificante do fim do polipeptídeo homólogo ao VT3 de O. tipulae ou ao YP88 de C. elegans. Seu transcrito possui 61% de identidade com VIT-6 de O. tipulae CEW1 e 46% de identidade com VIT-6 de C. elegans. As vitelogeninas purificadas de LPP7 mostram três bandas com pesos moleculares próximos às vitelogeninas de O. tipulae (VT1, VT2 e VT3). Mas, ao contrário do que foi mostrado em O. tipulae, onde a banda VT1 é apresenta um polipeptídeo, VT1 de LPP7 aparentemente contém um par de bandas com massas moleculares quase idênticas, como ocorre com a proteína YP170 de C. elegans. / Heterorhabditis is a genus of entomopathogenic nematodes that are associated with bacteria of the genus Photorhabdus. Together, they infect and kill arthropods. Heterorhabditis baujardi strain LPP7 was isolated in Monte Negro (RO). The yolk reserves are transported to the growing oocyte by a lipoprotein called vitellogenin. We have cloned and partially sequenced a fragment of 800pb of the vit-6 gene from LPP7. This fragment contains a portion of a homologous to those coding for the vitellins VT3 of O. tipulae and the YP88 C. elegans polypeptides. The polypeptide coded by the sequenced fragment showed that it has 61% identity to VIT-6 protein of O. tipulae CEW1 and 46% of identity to VIT-6 of C. elegans. The purified proteins of LPP7 show three bands with migrations close to the vitellins of O. tipulae (VT1, VT2 and VT3). However, unlike what was shown in O. tipulae where the VT1 band is comprised of a single polypeptide, LPP7 VT1 apparently contains a pair of bands with almost identical molecular masses as occurs with the homologous vitellin of C. elegans YP170.

A poluição da água doce no estado de São Paulo ocorre por diversas causas. Entre elas está a ineficiência do serviço de tratamento de esgoto sanitário. Alguns componentes do esgoto sanitário são desreguladores endócrinos, entre eles estão os hormônios naturais e sintéticos excretados pelos seres humanos. Estas substâncias causam modificações no sistema reprodutivo como, por exemplo, câncer, feminização, alterações na transcrição genética, alteração nas gônadas, indução à síntese de vitelogenina, entre outros. O objetivo desse trabalho foi testar a atividade endócrina das águas do rio Paraíba do Sul, em Pindamonhangaba, SP. Para tanto, amostras de água do rio foram utilizadas para a quantificação dos hormônios, 17-etinilestradiol, 17-estradiol e levonorgestrel por meio da técnica de cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC). Além disso, foram realizados testes crônicos com peixes (Danio rerio) no interior do rio e em laboratório, e uma posterior quantificação de vitelogenina. Os resultados não indicaram concentrações detectáveis dos hormônios pelo método empregado. Entretanto, foi detectada a indução de vitelogenina nos machos de Danio rerio. Esse fato indica a atividade estrogênica da água utilizada. São necessários outros estudos para a avaliação de quais substâncias presentes na água, estão causando as alterações endócrinas nos peixes, entre eles a utilização de índices para priorizar o local inicial dessas pesquisas. Esses estudos são importantes para a conservação da biodiversidade aquática do rio Paraíba do Sul / Freshwater pollution in São Paulo state, Brazil, occurs due a several reasons. Among them there is the inefficiency of the sewage treatment service. Some sewage components are endocrine disrupters, including natural and synthetic hormones excreted by humans. These substances cause modification on reproductive system such as cancer, feminization, gene transcription and gonad alterations, vitellogenin synthesis induction, among others. The aim of this work was to evaluate the endocrine activity of the river Paraíba do Sul, at Pindamonhangaba city, Brazil. For this, river water samples were collected for the quantification of the hormones, 17- etinylestradiol, 17-estradiol and levonorgestrel by high performance liquid chromatography (HPLC). Furthermore, chronic assays were performed with fish (Danio rerio) into the river and in the laboratory, following quantification of biomarker vitellogenin. The studied hormones were not detected by employed methods. However, induction of vitellogenin in male of Danio rerio was detected indicating estrogenic activity of water. Further studies are necessary for the assessment of which substances into the water are causing the endocrine disruption in fish. These studies are important for the preservation of aquatic biodiversity of the Paraiba do Sul River

Heterorhabditis é um gênero de nematoides entomopatogênicos, simbiontes de bactérias do gênero Photorhabdus. Juntos, infectam e matam artrópodes. A linhagem LPP7 de H. baujardi foi isolada na cidade de Monte Negro (RO). A vitelogênese compreende o acúmulo de reservas dentro do ovócito em crescimento. A vitelogenina é uma lipoproteína transportadora de lipídeos para o ovócito, formando o vitelo. Sequenciamos um fragmento de 800pb do gene vit-6 de LPP7, codificante do fim do polipeptídeo homólogo ao VT3 de O. tipulae ou ao YP88 de C. elegans. Seu transcrito possui 61% de identidade com VIT-6 de O. tipulae CEW1 e 46% de identidade com VIT-6 de C. elegans. As vitelogeninas purificadas de LPP7 mostram três bandas com pesos moleculares próximos às vitelogeninas de O. tipulae (VT1, VT2 e VT3). Mas, ao contrário do que foi mostrado em O. tipulae, onde a banda VT1 é apresenta um polipeptídeo, VT1 de LPP7 aparentemente contém um par de bandas com massas moleculares quase idênticas, como ocorre com a proteína YP170 de C. elegans. / Heterorhabditis is a genus of entomopathogenic nematodes that are associated with bacteria of the genus Photorhabdus. Together, they infect and kill arthropods. Heterorhabditis baujardi strain LPP7 was isolated in Monte Negro (RO). The yolk reserves are transported to the growing oocyte by a lipoprotein called vitellogenin. We have cloned and partially sequenced a fragment of 800pb of the vit-6 gene from LPP7. This fragment contains a portion of a homologous to those coding for the vitellins VT3 of O. tipulae and the YP88 C. elegans polypeptides. The polypeptide coded by the sequenced fragment showed that it has 61% identity to VIT-6 protein of O. tipulae CEW1 and 46% of identity to VIT-6 of C. elegans. The purified proteins of LPP7 show three bands with migrations close to the vitellins of O. tipulae (VT1, VT2 and VT3). However, unlike what was shown in O. tipulae where the VT1 band is comprised of a single polypeptide, LPP7 VT1 apparently contains a pair of bands with almost identical molecular masses as occurs with the homologous vitellin of C. elegans YP170.

Como em outros mosquitos, os trofócitos do corpo gorduroso de Cx. quinquefasciatus sintetizam vitelogenina (Vg), principal proteína armazenada pelo ovócito, formada por duas subunidades de 200 e 86 kDa. A ultraestrutura dos trofócitos revela o rápido desenvolvimento da maquinaria biossintética após a alimentação com sangue (aa) e a consecutiva degradação após as 48 h aa. Antes do repasto (AR), um conjunto de células indiferenciadas, limitado pelo epitélio folicular, conforma os folículos ovarianos. Após AR, o ovócito se destaca pelo acúmulo de lipídeos e Vg. O receptor de vitelogenina é encontrado somente nos ovários e análise por PCR em tempos mostrou aumento dos transcritos nos primeiros cinco dias após emersão e nas primeiras 48 h aa, durante a vitelogênese. O perfil transcricional de Vg mostrou um pico no terceiro dia de vida adulta e ao final do processo ovogênico / As in other mosquitoes, fat body trophocytes of Cx. quinquefasciatus synthesize vitellogenin (Vg), the major yolk protein stored by the oocyte, formed by two subunits of 200 and 86 kDa. The trophocytes ultrastructure reveals the rapid development of the biosynthetic machinery and the consecutive degradation around 48 h post blood meal (PBM). Before blood meal, a set of undifferentiated cells limited by follicular epithelium, conform the ovarian follicles. After blood meal, the oocyte is remarkable by accumulation of lipid inclusions and yolk granules. Vitellogenin receptors (rVitCx), are localized exclusively in the ovaries and real time PCR showed transcripts increase at the first five days after emergence (AE), and at the first 48 h PBM, during oogenesis. Vg transcripts profile showed a peak on the third day AE and at the end of the vitellogenic process

A poluição da água doce no estado de São Paulo ocorre por diversas causas. Entre elas está a ineficiência do serviço de tratamento de esgoto sanitário. Alguns componentes do esgoto sanitário são desreguladores endócrinos, entre eles estão os hormônios naturais e sintéticos excretados pelos seres humanos. Estas substâncias causam modificações no sistema reprodutivo como, por exemplo, câncer, feminização, alterações na transcrição genética, alteração nas gônadas, indução à síntese de vitelogenina, entre outros. O objetivo desse trabalho foi testar a atividade endócrina das águas do rio Paraíba do Sul, em Pindamonhangaba, SP. Para tanto, amostras de água do rio foram utilizadas para a quantificação dos hormônios, 17-etinilestradiol, 17-estradiol e levonorgestrel por meio da técnica de cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC). Além disso, foram realizados testes crônicos com peixes (Danio rerio) no interior do rio e em laboratório, e uma posterior quantificação de vitelogenina. Os resultados não indicaram concentrações detectáveis dos hormônios pelo método empregado. Entretanto, foi detectada a indução de vitelogenina nos machos de Danio rerio. Esse fato indica a atividade estrogênica da água utilizada. São necessários outros estudos para a avaliação de quais substâncias presentes na água, estão causando as alterações endócrinas nos peixes, entre eles a utilização de índices para priorizar o local inicial dessas pesquisas. Esses estudos são importantes para a conservação da biodiversidade aquática do rio Paraíba do Sul / Freshwater pollution in São Paulo state, Brazil, occurs due a several reasons. Among them there is the inefficiency of the sewage treatment service. Some sewage components are endocrine disrupters, including natural and synthetic hormones excreted by humans. These substances cause modification on reproductive system such as cancer, feminization, gene transcription and gonad alterations, vitellogenin synthesis induction, among others. The aim of this work was to evaluate the endocrine activity of the river Paraíba do Sul, at Pindamonhangaba city, Brazil. For this, river water samples were collected for the quantification of the hormones, 17- etinylestradiol, 17-estradiol and levonorgestrel by high performance liquid chromatography (HPLC). Furthermore, chronic assays were performed with fish (Danio rerio) into the river and in the laboratory, following quantification of biomarker vitellogenin. The studied hormones were not detected by employed methods. However, induction of vitellogenin in male of Danio rerio was detected indicating estrogenic activity of water. Further studies are necessary for the assessment of which substances into the water are causing the endocrine disruption in fish. These studies are important for the preservation of aquatic biodiversity of the Paraiba do Sul River

A região N-terminal de OTI-VIT-1 foi expressa e os polipeptídeos recombinantes foram purificados. OTI-VIT-1 pode ser homólogo da vitelina YP170B de C. elegans. Foram identificados um intron na região 5´ e dois na região 3´ do gene Oti-vit-1. Antissoro monoespecífico para PVIT1HisC confirmou que o gene Oti-vit-1 codifica VT1. O polipeptídeo recombinante P40-H, correspondente à região N-terminal da proteína OTI-VIT-6 interage com um polipeptídeo de aproximadamente 100 kDa (P100) presente em extratos proteicos totais de O. tipulae. Estudamos também o papel da Proteína Microssômica Transportadora de Triglicerídeos (MTP) na biossíntese de Vitelogenina do nematoide C. elegans. Ensaios de RNAi em C. elegans, utilizando parte da sequência do gene da MTP (Cel-dsc-4) foram realizados nas linhagens N2 e DH1033. Microscopia de fluorescência de vermes adultos da linhagem DH1033, submetidos a RNAi, mostrou acúmulo de YP170B::GFP no interior dos enterócitos. Este acúmulo sugere a participação da MTP na secreção de VTG. Análise imunológica da vitelogenina nestes mesmos vermes não detectaram alterações no processamento de CEL-VIT-6, sugerindo que o mesmo ocorra não só no pseudoceloma, mas também no interior dos enterócitos. / The N-terminal region of OTI-VIT-1 was expressed and the recombinant polypeptides were purified. OTI-VIT-1 may be homologous to the vitellin YP170B from C. elegans. We identified an intron in the 5 \'region and two in 3\' region from Oti-vit-1. Monospecific antisera to PVIT1HisC confirmed that the gene Oti-vit-1 encodes VT1. The recombinant polypeptide P40-H, corresponding to the N-terminal region of the protein OTI-VIT-6, interacts with a polypeptide of approximately 100 kDa (P100) present in total protein extracts of O. tipulae. The role of microsomal triglyceride transfer protein (MTP) in the biosynthesis of vitellogenin was studied in the nematode C. elegans. Trials of RNAi in C. elegans, using the sequence of the MTP gene (Cel-dsc-4) were performed in the strains N2 and DH1033. Fluorescence microscopy of adult worms of strain DH1033, subjected to RNAi, showed accumulation of YP170B:: GFP within the enterocytes. This accumulation suggests the involvement of MTP in the secretion of VTG. Analysis using anti-vitellogenin immune serum did not detect changes in the processing of CEL-VIT-6, suggesting that it occurs not only in pseudocoelom but also within the enterocytes.

A região N-terminal de OTI-VIT-1 foi expressa e os polipeptídeos recombinantes foram purificados. OTI-VIT-1 pode ser homólogo da vitelina YP170B de C. elegans. Foram identificados um intron na região 5´ e dois na região 3´ do gene Oti-vit-1. Antissoro monoespecífico para PVIT1HisC confirmou que o gene Oti-vit-1 codifica VT1. O polipeptídeo recombinante P40-H, correspondente à região N-terminal da proteína OTI-VIT-6 interage com um polipeptídeo de aproximadamente 100 kDa (P100) presente em extratos proteicos totais de O. tipulae. Estudamos também o papel da Proteína Microssômica Transportadora de Triglicerídeos (MTP) na biossíntese de Vitelogenina do nematoide C. elegans. Ensaios de RNAi em C. elegans, utilizando parte da sequência do gene da MTP (Cel-dsc-4) foram realizados nas linhagens N2 e DH1033. Microscopia de fluorescência de vermes adultos da linhagem DH1033, submetidos a RNAi, mostrou acúmulo de YP170B::GFP no interior dos enterócitos. Este acúmulo sugere a participação da MTP na secreção de VTG. Análise imunológica da vitelogenina nestes mesmos vermes não detectaram alterações no processamento de CEL-VIT-6, sugerindo que o mesmo ocorra não só no pseudoceloma, mas também no interior dos enterócitos. / The N-terminal region of OTI-VIT-1 was expressed and the recombinant polypeptides were purified. OTI-VIT-1 may be homologous to the vitellin YP170B from C. elegans. We identified an intron in the 5 \'region and two in 3\' region from Oti-vit-1. Monospecific antisera to PVIT1HisC confirmed that the gene Oti-vit-1 encodes VT1. The recombinant polypeptide P40-H, corresponding to the N-terminal region of the protein OTI-VIT-6, interacts with a polypeptide of approximately 100 kDa (P100) present in total protein extracts of O. tipulae. The role of microsomal triglyceride transfer protein (MTP) in the biosynthesis of vitellogenin was studied in the nematode C. elegans. Trials of RNAi in C. elegans, using the sequence of the MTP gene (Cel-dsc-4) were performed in the strains N2 and DH1033. Fluorescence microscopy of adult worms of strain DH1033, subjected to RNAi, showed accumulation of YP170B:: GFP within the enterocytes. This accumulation suggests the involvement of MTP in the secretion of VTG. Analysis using anti-vitellogenin immune serum did not detect changes in the processing of CEL-VIT-6, suggesting that it occurs not only in pseudocoelom but also within the enterocytes.