Orientador: Clélia Akiko Hiruma-Lima / Banca: Ana Beatriz Albino de Almeida / Banca: Anne Lígia Dokkedal Bosqueiro / Resumo: Este trabalho se propos a avaliar farmacologicamente as partes aéreas de Vochysia tucanorum (Vochysiaceae), uma espécie típica do Cerrado, com potencial fitoterápico de ação gastroprotetora. A seleção desta espécie baseou-se nos estudos quimiotaxonomicos, pois esta não apresenta, até o presente, indicação popular no combate a úlceras gástricas. Os extratos orgânicos polares e apolares foram avaliados experimentalmente em modelo in vivo de indução de lesões gástricas por drogas antiinflamatórias não-esteroidais (DAINEs) e etanol acidificado. Devido a melhor solubilidade e desempenho do extrato metanólico, este extrato foi avaliado quanto a sua ação gastroprotetora frente a um indutor de lesões gástricas mais severas como o etanol absoluto em ratos. Após comprovação da atividade gastroprotetora do extrato metanólico, foram realizados modelos experimentais que comprovassem a participação do NO (óxido nítrico) e do grupamento sulfidrila no mecanismo de proteção do extrato. O extrato exerce sua ação gastroprotetora por ação sistêmica, exerce um efeito antisecretor sobre o suco gástrico, e atua sobre as modulações do NO endógeno. A partir do extrato metanólico foi obtida a fração enriquecida (fração butanólica), a qual foi avaliada para confirmação da atividade gastroprotetora. Com a realização do experimento de lesão gástrica induzida por etanol absoluto, foi comprovada a atividade gastroprotetora da fração butanólica e experimentos subseqüentes demonstraram que o mecanismo de proteção, dessa fração enriquecida, envolveu a participação expressiva do NO endógeno na ação gastroprotetora. A presença de terpenos na fração (uma classe de substâncias com conhecidas propriedades gastroprotetoras) e o isolamento dos compostos: ácido betulínico e uvaol, indicam o forte envolvimento destes constituintes na ação gastroprotetora de Vochysia tucanorum. / Abstract: The present work aims to evaluate pharmacologically the aerial parts of Vochysia tucanorum (Vochysiaceae), a typical species of "Cerrado", with phytotherapeutic potential of gastroprotective action. The selection of this species is based on chemotaxonomic studies, since, to date, this has not presented a popular indication to combat gastric ulcers. Polar and apolar organic extracts were evaluated experimentally in an in vivo model of induction of gastric lesions by non-steroidal antiinflammatory-drugs (NSAIDs) and acidified ethanol. Due to better solubility and performance of methanolic extract, its gastroprotective action was evaluated by its response to the induction of more severe gastric lesions, specifically by absolute ethanol in rats. After demonstrating the gastroprotective action of metanolic extract, experimental models were realized that may corroborate the participation of NO (nitric oxide) and the sulfhydryl group in the protection mechanism of the extract. The extract exercises its gastroprotective action systemically, it exerts an antisecretory effect on gastric juice, and acts on modulations of endogenous NO. An enriched fraction (butanolic fraction) was obtained from methanolic extract, which was evaluated for confirmation of gastroprotective activity. Experimental induction of gastric lesion by absolute ethanol corroborated the gastroprotective activity of the butanolic fraction; and subsequent experiments demonstrate that the protection mechanism of this enriched fraction involved the expressive participation of endogenous NO in gastroprotective action. The presence of terpenes in the fraction (one class of substances with known gastroprotective properties) and the isolation of two compounds, betulinic acid and uvaol, indicate strong involvement of these constituents in gastroprotective action of Vochysia tucanorum. / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-04-11Bitstream added on 2014-06-13T18:53:25Z : No. of bitstreams: 1 gomes_rc_me_botib.pdf: 533455 bytes, checksum: eb300e92e9e567d067e514597c336c54 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Este trabalho se propos a avaliar farmacologicamente as partes aéreas de Vochysia tucanorum (Vochysiaceae), uma espécie típica do Cerrado, com potencial fitoterápico de ação gastroprotetora. A seleção desta espécie baseou-se nos estudos quimiotaxonomicos, pois esta não apresenta, até o presente, indicação popular no combate a úlceras gástricas. Os extratos orgânicos polares e apolares foram avaliados experimentalmente em modelo in vivo de indução de lesões gástricas por drogas antiinflamatórias não-esteroidais (DAINEs) e etanol acidificado. Devido a melhor solubilidade e desempenho do extrato metanólico, este extrato foi avaliado quanto a sua ação gastroprotetora frente a um indutor de lesões gástricas mais severas como o etanol absoluto em ratos. Após comprovação da atividade gastroprotetora do extrato metanólico, foram realizados modelos experimentais que comprovassem a participação do NO (óxido nítrico) e do grupamento sulfidrila no mecanismo de proteção do extrato. O extrato exerce sua ação gastroprotetora por ação sistêmica, exerce um efeito antisecretor sobre o suco gástrico, e atua sobre as modulações do NO endógeno. A partir do extrato metanólico foi obtida a fração enriquecida (fração butanólica), a qual foi avaliada para confirmação da atividade gastroprotetora. Com a realização do experimento de lesão gástrica induzida por etanol absoluto, foi comprovada a atividade gastroprotetora da fração butanólica e experimentos subseqüentes demonstraram que o mecanismo de proteção, dessa fração enriquecida, envolveu a participação expressiva do NO endógeno na ação gastroprotetora. A presença de terpenos na fração (uma classe de substâncias com conhecidas propriedades gastroprotetoras) e o isolamento dos compostos: ácido betulínico e uvaol, indicam o forte envolvimento destes constituintes na ação gastroprotetora de Vochysia tucanorum. / The present work aims to evaluate pharmacologically the aerial parts of Vochysia tucanorum (Vochysiaceae), a typical species of Cerrado, with phytotherapeutic potential of gastroprotective action. The selection of this species is based on chemotaxonomic studies, since, to date, this has not presented a popular indication to combat gastric ulcers. Polar and apolar organic extracts were evaluated experimentally in an in vivo model of induction of gastric lesions by non-steroidal antiinflammatory-drugs (NSAIDs) and acidified ethanol. Due to better solubility and performance of methanolic extract, its gastroprotective action was evaluated by its response to the induction of more severe gastric lesions, specifically by absolute ethanol in rats. After demonstrating the gastroprotective action of metanolic extract, experimental models were realized that may corroborate the participation of NO (nitric oxide) and the sulfhydryl group in the protection mechanism of the extract. The extract exercises its gastroprotective action systemically, it exerts an antisecretory effect on gastric juice, and acts on modulations of endogenous NO. An enriched fraction (butanolic fraction) was obtained from methanolic extract, which was evaluated for confirmation of gastroprotective activity. Experimental induction of gastric lesion by absolute ethanol corroborated the gastroprotective activity of the butanolic fraction; and subsequent experiments demonstrate that the protection mechanism of this enriched fraction involved the expressive participation of endogenous NO in gastroprotective action. The presence of terpenes in the fraction (one class of substances with known gastroprotective properties) and the isolation of two compounds, betulinic acid and uvaol, indicate strong involvement of these constituents in gastroprotective action of Vochysia tucanorum.

Vochysiaceae compreende uma família com duas tribos, oito gêneros e aproximadamente 250 espécies distribuídas predominantemente na América Tropical. Vochysia pyramidalis e V. tucanorum são espécies arbóreas, a primeira distribuída nas regiões nordeste e central do Brasil e a última apresentando distribuição semelhante, mas alcançando latitudes meridionais até o sul do Paraná. Estas e outras espécies de Vochysiaceae apresentam teores relativamente altos de lipídeos de sementes. Os lipídeos de sementes de V. pyramidalis assemelham-se aos da manteiga de cacau, com altos teores de ácido esteárico e ácido oleico, e os de V. tucanorum são ricos em ácidos graxos de cadeia longa, como os ácidos erúcico e docosanóico, assemelhando-se ao óleo original de colza. Os lipídeos de ambas as espécies têm, portanto, potencial valor econômico. Foi verificado que as proporções dos ácidos graxos das duas espécies podem variar entre populações de diferentes localidades. A proposta do presente trabalho foi detectar variações na distribuição química das duas espécies, a fim de apontar populações com lipídeos dotados de perfis de ácidos graxos mais convenientes para potencial uso medicinal e/ou industrial, e verificar possível conexão entre perfis químicos e genéticos. O último foi estabelecido com base em marcadores AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism). Foram coletadas sementes e fragmentos de folhas de 3-9 indivíduos de V. pyramidalis de populações de Alto Paraíso de Goiás (GO), Andaraí (BA), Palmeiras (BA) e UnB-Brasília (DF), e 5-10 indivíduos de V. tucanorum de populações de Bauru (SP), Botucatu (SP), Santana do Riacho (MG), Perdões (MG), IBGE-Brasília (DF), Ibicoara (BA) e Sengés (PR). Os lipídeos das sementes foram extraídos com hexano. Foram seguidos métodos padronizados para a obtenção dos correspondentes ésteres metílicos dos ácidos graxos. Estes foram analisados por CG/FID e a identificação das substâncias foram baseadas na comparação dos tempos de retenção com aqueles de amostras autênticas de ésteres metílicos de ácidos graxos. A distribuição dos ácidos graxos das duas espécies foi analisada pelo coeficiente de Distância Euclidiana Simples e pelo método de agrupamento UPGMA e Análise de Componente Principal (PCA), usando o programa de computador Fitopac 1.6.4. Dois agrupamentos principais foram obtidos, cada um correspondendo a uma das espécies de Vochysiaceae. Entretanto, foi notada uma alta semelhança entre amostras da mesma espécie. Em cada espécie, não foi obtido nenhum agrupamento coerente relacionado à populações e localidades. A única exceção correspondeu aos indivíduos da população de V. pyramidalis de Alto Paraíso de Goiás, que se agrupou isoladamente de outras amostras da mesma espécie. Análises de AFLP foram realizadas com DNA extraído de fragmentos de folhas preservados em silicagel, seguidos de procedimentos padronizados de digestão, ligação, amplificações pré-seletiva e seletiva, e análise em seqüenciador automático. Três e quatro combinações de iniciadores foram usadas para V. pyramidalis e V. tucanorum, respectivamente. Os fragmentos obtidos foram utilizados como caracteres e analisados pelo método de evolução mínima Neighbor-Joining, usando distância de Nei & Li por meio do programa de computador PAUP v. 4.0, e Análise de Coordenada Principal (PCO) usando o programa de computador Fitopac 1.6.4. Assim como ocorreu com os caracteres químicos, pequenas distâncias foram obtidas ao se comparar amostras de cada uma das duas espécies de Vochysia. Em análises individuais de cada espécie, não foi obtido nenhum agrupamento coerente com as respectivas populações. Os resultados do presente trabalho sugerem que a dispersão de indivíduos de V. pyramidalis e V. tucanorum nas presentes áreas de distribuição é um evento recente, não tendo decorrido tempo suficiente para alcançar diferenças químicas e genéticas detectáveis. Essa observação é coerente com estudos da dispersão de sementes e de pólen, que mostrou uma alta capacidade de dispersão de espécies de Vochysia. / The Vochysiaceae comprise a family with two tribes, eight genera and approximately 250 species distributed predominantly in tropical America. Vochysia pyramidalis and V. tucanorum are tree species, the former distributed in Central, Northeastern and Southeasten Brazil and the latter having similar distribution, but reaching meridional latitudes as far as the south of Paraná. These two species and other Vochysiaceae have been shown to have relatively high levels of seeds lipids. The seed lipids of V. pyramidalis resemble cocoa butter, with high levels of stearic and oleic acids, while V. tucanorum seeds are rich in long chain fatty acids, such as erucic and docosanoic, resembling the original rapeseed oil. Hence, lipids of both species of Vochysiaceae have potential economic value. It has been reported that proportions of seed fatty acids of the two species may vary among populations of different localities. The aim of the present work was to detect variations in chemical profiles of the two species, in order to point out populations with lipids endowed with fatty acid profiles more convenient for potential medical and/or industrial uses, and verify possible connection between chemical and genetic profiles. The latter was established on basis of AFLP (amplified fragment length polymorphism) markers. Seeds and leaf fragments were collected of 3-9 individuals of V. pyramidalis from populations of Alto Paraíso de Goiás (GO), Andaraí (BA), Palmeiras (BA) and UnB-Brasília (DF) and 5-10 of V. tucanorum from populations of Bauru (SP), Botucatu (SP), Santana do Riacho (MG), Perdões (MG), IBGE-Brasília (DF), Ibicoara (BA) and Sengés(PR). Seed lipids were extracted with hexane. Standardized methods were followed to obtain the corresponding fatty acids methyl esters. These were analyzed by GC/FID and identification of the substances were based on comparison of retention times with those of authentic samples of fatty acid methyl esters. The distribution of fatty acids of the samples of the two species was analyzed by Simple Euclidean Distance coefficients, clusthering method UPGMA and Principal Component Analysis (PCA) using Fitopac 1.6.4 as computer program. Two main clusters were obtained, each corresponding to one of the Vochysiaceae species. However, a high similarity was noted among samples of the same species. Within each species, no clusters were obtained coherent with populations and localities. The only exception corresponded to individuals of a population of V. pyramidalis of Alto Paraíso de Goiás, which grouped apart from other samples of the same species. AFLP analyses were carried out with DNA extracted from leaf fragments preserved in silicagel, following the standardized procedures of digestion, ligation, pre and selective amplifications and analysis in automatic sequencer. Three and four primer combinations were used regarding V. pyramidalis and V. tucanorum, respectively. Fragments obtained were scored as characters and analyzed by the Neighbor-Joining method, using Nei & Li distances in a computer program implemented in PAUP v. 4.0 and Principal Coordinate Analysis (PCO) using Fitopac 1.6.4 as computer program. As with chemical characters, small distances were obtained comparing samples of each the two Vochysia species. In the analyses of individuals of each species, no clusters were obtained coherently with the respective population. The results of the present work suggest that the dispersion of individuals of V. pyramidalis and V. tucanorum into the present areas of distribution is a recent event, no enough time having been elapsed to reach detectable chemical and genetic differences. This observation is coherent with studies of seed and polen dispersal, which have shown a high disperal capacity of Vochysia species.

Vochysiaceae compreende uma família com duas tribos, oito gêneros e aproximadamente 250 espécies distribuídas predominantemente na América Tropical. Vochysia pyramidalis e V. tucanorum são espécies arbóreas, a primeira distribuída nas regiões nordeste e central do Brasil e a última apresentando distribuição semelhante, mas alcançando latitudes meridionais até o sul do Paraná. Estas e outras espécies de Vochysiaceae apresentam teores relativamente altos de lipídeos de sementes. Os lipídeos de sementes de V. pyramidalis assemelham-se aos da manteiga de cacau, com altos teores de ácido esteárico e ácido oleico, e os de V. tucanorum são ricos em ácidos graxos de cadeia longa, como os ácidos erúcico e docosanóico, assemelhando-se ao óleo original de colza. Os lipídeos de ambas as espécies têm, portanto, potencial valor econômico. Foi verificado que as proporções dos ácidos graxos das duas espécies podem variar entre populações de diferentes localidades. A proposta do presente trabalho foi detectar variações na distribuição química das duas espécies, a fim de apontar populações com lipídeos dotados de perfis de ácidos graxos mais convenientes para potencial uso medicinal e/ou industrial, e verificar possível conexão entre perfis químicos e genéticos. O último foi estabelecido com base em marcadores AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism). Foram coletadas sementes e fragmentos de folhas de 3-9 indivíduos de V. pyramidalis de populações de Alto Paraíso de Goiás (GO), Andaraí (BA), Palmeiras (BA) e UnB-Brasília (DF), e 5-10 indivíduos de V. tucanorum de populações de Bauru (SP), Botucatu (SP), Santana do Riacho (MG), Perdões (MG), IBGE-Brasília (DF), Ibicoara (BA) e Sengés (PR). Os lipídeos das sementes foram extraídos com hexano. Foram seguidos métodos padronizados para a obtenção dos correspondentes ésteres metílicos dos ácidos graxos. Estes foram analisados por CG/FID e a identificação das substâncias foram baseadas na comparação dos tempos de retenção com aqueles de amostras autênticas de ésteres metílicos de ácidos graxos. A distribuição dos ácidos graxos das duas espécies foi analisada pelo coeficiente de Distância Euclidiana Simples e pelo método de agrupamento UPGMA e Análise de Componente Principal (PCA), usando o programa de computador Fitopac 1.6.4. Dois agrupamentos principais foram obtidos, cada um correspondendo a uma das espécies de Vochysiaceae. Entretanto, foi notada uma alta semelhança entre amostras da mesma espécie. Em cada espécie, não foi obtido nenhum agrupamento coerente relacionado à populações e localidades. A única exceção correspondeu aos indivíduos da população de V. pyramidalis de Alto Paraíso de Goiás, que se agrupou isoladamente de outras amostras da mesma espécie. Análises de AFLP foram realizadas com DNA extraído de fragmentos de folhas preservados em silicagel, seguidos de procedimentos padronizados de digestão, ligação, amplificações pré-seletiva e seletiva, e análise em seqüenciador automático. Três e quatro combinações de iniciadores foram usadas para V. pyramidalis e V. tucanorum, respectivamente. Os fragmentos obtidos foram utilizados como caracteres e analisados pelo método de evolução mínima Neighbor-Joining, usando distância de Nei & Li por meio do programa de computador PAUP v. 4.0, e Análise de Coordenada Principal (PCO) usando o programa de computador Fitopac 1.6.4. Assim como ocorreu com os caracteres químicos, pequenas distâncias foram obtidas ao se comparar amostras de cada uma das duas espécies de Vochysia. Em análises individuais de cada espécie, não foi obtido nenhum agrupamento coerente com as respectivas populações. Os resultados do presente trabalho sugerem que a dispersão de indivíduos de V. pyramidalis e V. tucanorum nas presentes áreas de distribuição é um evento recente, não tendo decorrido tempo suficiente para alcançar diferenças químicas e genéticas detectáveis. Essa observação é coerente com estudos da dispersão de sementes e de pólen, que mostrou uma alta capacidade de dispersão de espécies de Vochysia. / The Vochysiaceae comprise a family with two tribes, eight genera and approximately 250 species distributed predominantly in tropical America. Vochysia pyramidalis and V. tucanorum are tree species, the former distributed in Central, Northeastern and Southeasten Brazil and the latter having similar distribution, but reaching meridional latitudes as far as the south of Paraná. These two species and other Vochysiaceae have been shown to have relatively high levels of seeds lipids. The seed lipids of V. pyramidalis resemble cocoa butter, with high levels of stearic and oleic acids, while V. tucanorum seeds are rich in long chain fatty acids, such as erucic and docosanoic, resembling the original rapeseed oil. Hence, lipids of both species of Vochysiaceae have potential economic value. It has been reported that proportions of seed fatty acids of the two species may vary among populations of different localities. The aim of the present work was to detect variations in chemical profiles of the two species, in order to point out populations with lipids endowed with fatty acid profiles more convenient for potential medical and/or industrial uses, and verify possible connection between chemical and genetic profiles. The latter was established on basis of AFLP (amplified fragment length polymorphism) markers. Seeds and leaf fragments were collected of 3-9 individuals of V. pyramidalis from populations of Alto Paraíso de Goiás (GO), Andaraí (BA), Palmeiras (BA) and UnB-Brasília (DF) and 5-10 of V. tucanorum from populations of Bauru (SP), Botucatu (SP), Santana do Riacho (MG), Perdões (MG), IBGE-Brasília (DF), Ibicoara (BA) and Sengés(PR). Seed lipids were extracted with hexane. Standardized methods were followed to obtain the corresponding fatty acids methyl esters. These were analyzed by GC/FID and identification of the substances were based on comparison of retention times with those of authentic samples of fatty acid methyl esters. The distribution of fatty acids of the samples of the two species was analyzed by Simple Euclidean Distance coefficients, clusthering method UPGMA and Principal Component Analysis (PCA) using Fitopac 1.6.4 as computer program. Two main clusters were obtained, each corresponding to one of the Vochysiaceae species. However, a high similarity was noted among samples of the same species. Within each species, no clusters were obtained coherent with populations and localities. The only exception corresponded to individuals of a population of V. pyramidalis of Alto Paraíso de Goiás, which grouped apart from other samples of the same species. AFLP analyses were carried out with DNA extracted from leaf fragments preserved in silicagel, following the standardized procedures of digestion, ligation, pre and selective amplifications and analysis in automatic sequencer. Three and four primer combinations were used regarding V. pyramidalis and V. tucanorum, respectively. Fragments obtained were scored as characters and analyzed by the Neighbor-Joining method, using Nei & Li distances in a computer program implemented in PAUP v. 4.0 and Principal Coordinate Analysis (PCO) using Fitopac 1.6.4 as computer program. As with chemical characters, small distances were obtained comparing samples of each the two Vochysia species. In the analyses of individuals of each species, no clusters were obtained coherently with the respective population. The results of the present work suggest that the dispersion of individuals of V. pyramidalis and V. tucanorum into the present areas of distribution is a recent event, no enough time having been elapsed to reach detectable chemical and genetic differences. This observation is coherent with studies of seed and polen dispersal, which have shown a high disperal capacity of Vochysia species.