Objetivo: A proposta deste trabalho é avaliar o tempo de fibroplasia em tela de polipropileno na correção de hérnias incisionais da parede abdominal, em ratos, por meio da quantidade de colágeno, correlacionando-o com a resposta inflamatória local. Métodos: Trinta e seis ratos machos da linhagem Wistar foram submetidos à ressecção longitudinal de um segmento músculo-aponeurótico e peritoneal (3x2 cm) da parede abdominal, seguida por reforço com tela de polipropileno, em forma de ponte sobre a aponeurose. Os animais foram distribuídos em seis grupos, de acordo com o tempo de fibroplasia a ser estudado (um, dois, três, sete, 21 e 30 dias de pósoperatório). Após os prazos estabelecidos para estudo da fibroplasia, os animais foram submetidos à eutanásia, e a área de fixação da tela de polipropileno foi avaliada histologicamente quanto à reação inflamatória e à percentagem de colágeno pela técnica videomorfométrica assistida por computador. Resultados: O colágeno total foi identificado junto à tela no 3º dia pós-implante, apresentou aumento progressivo na sua proporção em todos os dias subseqüentes até o 21º dia, quando atingiu sua proporção máxima (p<0,001). A partir do dia 3, o colágeno III sofreu um aumento progressivo até o dia 21, quando atingiu sua proporção máxima (p<0,001), e no 30º dia apresentou uma redução significativa (p<0,001). O colágeno tipo I surgiu entre o 7º e o 21º dia, apresentou sua máxima proporção no 21º dia e manteve-se inalterado até o final do período de observação. A relação colágeno tipo I/tipo III aumentou progressivamente até o 30º dia de observação (p<0,001). Os neutrófilos foram identificados no 1º dia pós-implante, mantendo-se junto à tela até o 21º dia. Os macrófagos, gigantócitos e linfócitos foram identificados no 2º dia. Trinta dias após a implantação da tela, desapareceram os neutrófilos e mantiveram-se estáveis as proporções de macrófagos, gigantócitos e linfócitos (p<0,001). Conclusões: Os resultados do presente estudo evidenciaram colágeno total no 3º dia pós-implante, aumentando progressivamente até o 21º dia. O colágeno tipo III foi observado no 3º dia, aumentou até o 21º dia, quando reduziu significativamente. O colágeno tipo I surgiu entre o 7º e o 21º dia, e sua máxima proporção ocorreu no 21º dia, atingindo um platô. A relação do colágeno tipo I/tipo III aumentou progressivamente até o 30º dia, indicando maior proporção de colágeno tipo I ao final do período. O prolongamento da resposta inflamatória da cicatrização e a persistência do processo inflamatório crônico junto à tela não interferiram no tempo da fibroplasia. / Objective: This study assessed the amount of collagen and correlated it with local inflammatory responses to evaluate the length of time required for fibroplasia when polypropylene meshes are used to repair incisional abdominal wall hernias in rats. Methods: Thirty-six male Wistar rats underwent longitudinal resection of a peritoneal and musculoaponeurotic tissue segment (3x2 cm) of the abdominal wall followed by defect reconstruction with polypropylene mesh bridging over aponeurosis. The animals were divided into six groups according to the time points for the analysis of fibroplasia: one, two, three, seven, 21 and 30 days post-implantation. Animals were sacrificed at each time point, and the site where the polypropylene mesh was implanted was evaluated histologically to assess inflammatory response and percentage of collagen using computer-assisted video morphometry. Results: Total collagen was found at the mesh site on the third post-implantation day, and increased progressively on all subsequent days up to the 21st day, when it reached its highest percentage (p<0.001). Type III collagen increased progressively from the 3rd to the 21st day, when it reached its greatest percentage (p<0.001); on the 30th day, it decreased significantly (p>0.001). Type I collagen was first found between the 7th and 21st days, reached its greatest percentage on the 21st day and then remained stable until the 30th day. The type I to type III collagen ratio increased significantly and progressively up to the 30th day (p<0.001). Neutrophils were found at the mesh site from the 1st to the 21st post-implantation day. Macrophages, giant cells and lymphocytes were seen on the 2nd day. Thirty days after mesh implantation, neutrophils disappeared, but the percentages of macrophages, giant cells and lymphocytes remained stable (p<0.001). Conclusion: This study showed that total collagen was fist seen on the 3rd day post-implantation, increased progressively up to the 21st day. Type III collagen was first seen on the 3rd day, increased up to the 21st day, and then decreased significantly. Type I collagen was first seen between the 7th and 21st days and reached its greatest percentage on the 21st day, after which it remained stable. The type I and type III collagen ratio progressively increased up to the 30th day, indicating a greater percentage of type I collagen at the last observational time point. The prolonged healing inflammatory response and the persistence of chronic inflammation surrounding to the mesh did not affect the length of time required for fibroplasia.

Este estudo tem como objetivo analisar os comportamentos hidráulico, mecânico e microestrutural de misturas compostas, por solo residual arenito Botucatu e bentonita sódica, com e sem adição de cimento, quando permeadas por água (H2O), soda cáustica (NaOH), na concentração de 5% e ácido sulfúrico (H2SO4) na mesma concentração para sua possível utilização em barreiras de contenção de contaminantes do tipo slurry wall. O arenito, solo areno-siltoso característico da região de São Leopoldo/ RS, compõe a matriz das misturas, sendo que a bentonita sódica confere a estas características impermeabilizantes, imprescindíveis às barreiras hidráulicas de contenção. O cimento, além de fazer com que a mistura adquira resistência, interfere na reatividade da barreira, mediante os contaminantes utilizados. A estimativa da eficiência destas misturas baseou-se na comparação entre os valores do coeficiente de condutividade hidráulica, resistência à compressão simples e parâmetros de compressibilidade determinados através dos ensaios de compressão confinada, apresentados nos ensaios com e sem contaminação, conjuntamente com a análise microestrutural das misturas nas mesmas situações. Foram feitas análises químicas por Difração de Raios-x, Microscopia Eletrônica de Varredura (SEM) e Análise Química Elementar (EDS) visando à explicação ordinária das causas microestruturais que levam as misturas a determinado comportamento sob percolação de contaminantes. Na busca do efeito de cada componente sobre o comportamento final de determinada mistura, houve a necessidade de realizar análises químicas e microscópicas individuais, também sob interferência ou não de substâncias agressivas. A partir deste estudo foi possível inferir que a mistura solo-cimentobentonita, é adequada à utilização como barreira vertical quando o contaminante for ácido sulfúrico, por no mínimo 20 semanas, já que a eficiência da mesma foi comprovada pela realização de ensaios no permeâmetro de parede rígida, considerado adequado para este tipo. O uso da mistura solo bentonita para barreiras verticais pode ser emergencial visto que quando o contaminante for soda cáustica a mistura resiste por 4 dias. / The objective of this study is to analyze the hydraulic, mechanical and micro-structural conduct of composite mixtures of Botucatu residual soil and sodic bentonite, with and without cement addition, when permeated by water (H2O), caustic soda (NaOH) in a concentration of 5% and sulfuric acid in the same concentration to their possible utilization in contention of contaminant barriers of the slurry walls type. The sandy soil constitutes part of the matrix of the mixtures. The sodic bentonite confers to these mixture essential waterproof characteristics of hydraulic barriers of containment. The cement interferes on the barrier reactivity moreover add resistance to the mixture by the contaminants that were utilized. The efficiency estimation of these mixtures was established by comparison between hydraulic conductive coefficient, unconfined compression strength and one dimensional compressibility presented on the tests with or without contamination, with the mixture micro-structural and chemical analysis on the same situations: X-ray diffraction, scanning electronic microscopy, Elemental Chemical Analysis (EDS), they want to explain the micro-structural causes that make the mixtures to determinate behavior by percolating of contaminants. Searching the effect of all components about the final behavior of determined mixture there was the necessity to carry out chemical and microscopically individual analysis also by aggressive or non-aggressive substances interference. After completed the study, it is possible to affirm that the soil-cement-bentonite mixture, is good for using as a vertical barrier when the contaminant is sulfuric acid, based on the results of rigid wall permeameter, adequate for this kind of mixture. The use of soilbentonite mixture as vertical barrier for caustic soda could be done just in emergency cases and for a short period of time, once that after some time the barrier reduces drastically its efficiency.

abstract: The emergence of invasive non-Typhoidal Salmonella (iNTS) infections belonging to sequence type (ST) 313 are associated with severe bacteremia and high mortality in sub-Saharan Africa. Distinct features of ST313 strains include resistance to multiple antibiotics, extensive genomic degradation, and atypical clinical diagnosis including bloodstream infections, respiratory symptoms, and fever. Herein, I report the use of dynamic bioreactor technology to profile the impact of physiological fluid shear levels on the pathogenesis-related responses of ST313 pathovar, 5579. I show that culture of 5579 under these conditions induces profoundly different pathogenesis-related phenotypes than those normally observed when cultures are grown conventionally. Surprisingly, in response to physiological fluid shear, 5579 exhibited positive swimming motility, which was unexpected, since this strain was initially thought to be non-motile. Moreover, fluid shear altered the resistance of 5579 to acid, oxidative and bile stress, as well as its ability to colonize human colonic epithelial cells. This work leverages from and advances studies over the past 16 years in the Nickerson lab, which are at the forefront of bacterial mechanosensation and further demonstrates that bacterial pathogens are “hardwired” to respond to the force of fluid shear in ways that are not observed during conventional culture, and stresses the importance of mimicking the dynamic physical force microenvironment when studying host-pathogen interactions. The results from this study lay the foundation for future work to determine the underlying mechanisms operative in 5579 that are responsible for these phenotypic observations. / Dissertation/Thesis / Masters Thesis Biology 2016

abstract: This study contributes to the literature of the Israeli-Palestinian conflict by offering rhetorical and discourse analysis of political graffiti on a wall built by Israel in Palestine. The analysis attempts to answer the urgent questions of why, who, when, how and for whom these graffiti exist. The data collected for the analysis consists of personal photos of graffiti taken randomly in 2010 and 2013 in Bethlehem, on the Palestinian side of the massive wall. Several theories in rhetoric and discourse analysis were consulted to perform the technical rhetorical and linguistic analyses of the graffiti utterances, images, and messages in selected photos of the graffiti. Social, physical, psychological and political factors that affect communication between the wall graffitists and their readers is discussed to assist in the interpretation of the messages of these graffiti from a Palestinian perspective. The findings of this qualitative study show that graffiti on such a high profile site are not typical of violent gang graffiti as commonly interpreted in the US, but rather contribute a universal interactive rhetorical mode employed by local and international graffitists to show their solidarity and demands for basic human rights for a misrepresented culture. Moreover, the wall graffiti function as evidence that graffiti has evolved into a formal performing art that can be found in respected art galleries. The wall graffiti create a dialogue between uncoordinated actors who come from different orientations to produce an array of positions not usually present in corporate media outlets. The analysis of the wall shows that these graffiti promote deep cultural and historical understanding, as well as break down boundaries and stereotypes. The collective threefold result of the analysis is the following: First, graffiti on the wall have a collective universal motive; second, the graffiti give voice to the voiceless; and third, the graffiti can prompt a sociopolitical change that can lead to a long overdue peaceful resolution to the conflict. Keywords: Political rhetoric, discourse analysis, Burke, Halliday, Banksy, political graffiti, street art, Arab graffiti, rhetorical and linguistic patterns, dramatistic, identification, universality, Palestine divisive wall, intertextuality / Dissertation/Thesis / Doctoral Dissertation English 2017

Orientador: Jefferson Sidney Camacho / Banca: Rogério de Oliveira Rodrigues / Banca: Ronaldo Bastos Duarte / Resumo: As estruturas de concreto armado vêm se tornando cada vez mais esbeltas, aliadas ao menor tempo de execução das edificações e aos menores prazos de execução da fixação da alvenaria na estrutura, cada vez com mais freqüência observa-se a formação dos estados patológicos nas alvenarias. As estruturas de concreto armado apresentam progressivamente deformações mais acentuadas, fazendo com que as paredes de vedação trabalhem, oferecendo resistência a esses deslocamentos surgindo assim patologias que se apresentam na forma de fissuras na interface pilar/alvenaria. Desse modo, surge a necessidade de estudos das ligações empregadas na interface pilar/alvenaria, que têm por objetivo "solidarizar" estrutura e alvenaria, distribuindo as deformações excessivas da estrutura que se traduzem na forma de fissuras e com isso diminuir a ocorrência de patologias nas alvenarias de vedação. Para tal, foram desenvolvidos ensaios de diferentes formas de ligação da interface pilar/alvenaria de modo a avaliar a eficiência dos dispositivos empregados no mercado da construção de edifícios de São Paulo atualmente, como a tela metálica eletrosoldada. Numa primeira etapa foram realizados ensaios de arrancamento direto à tração, de modo a se estudar o comportamento do dispositivo quando submetido ao esforço de tração. Foram ensaiados também prismas de alvenaria, com diferentes dispositivos de ligação inseridos de modo a se avaliar as resistências à tração das ancoragens inseridas na junta de argamassa, e numa terceira etapa, foram realizados ensaios em pequenas paredes, para se determinar o desempenho das ancoragens na ligação de paredes e pilares de concreto armado, na situação real. / Abstract: Structures of reinforced concrete are becoming more slender, associated to the short time of building construction and with the lesser periods of masonry fixation in the structure, each time with more frequency can be observed the formation of pathological state in masonry. The structures of reinforced concrete progressively presents more accentuated deformation, making masonry to work, offering strength to these displacements, creating pathology that appears like cracks in the interface of column/masonry. Thus, it is necessary to study the bonds used in the interface column/masonry, wich has as objective "join" the structure and the masonry, spreading the excessive deformations of the structure that comes up as cracks, and diminishing the occurrence of damages in the forbid masonry. In order to do this, different tests in the interface column/masonry were developed in order to evaluate the efficiency of device used in the civil construction in São Paulo, as tela metálica eletrosoldada. In the first step, pull-out tests were done to sutdy the behavior of the device when submitted to a tensile strength. Prisms were also tested, with different kinds of bond gadgets inserted in order to evaluate the resistance in a traction of devices in the anchorages inserted in the grouts, and in a third step, small walls were tested to analyze the behavior of anchorages in the bond of wall and column, in the real situation. / Mestre

Les fucosyltransférases sont les enzymes responsables du transfert d'un groupement fucose à partir du GDP-fucose sur des accepteurs variés (oligosaccharides, protéines,...). Chez l'homme, les rôles de ces glycosyltransférases sont importants dans un grand nombre de processus biologiques et pathologiques. De nombreuses fucosyltransférases existent chez les végétaux. Notamment FuT1, qui transfert un fucose en 1,2 sur un résidu galactose du xyloglucane : l'une des hémicelluloses majeures de la paroi des dicotylédones. Ce polysaccharide ramifié est très étudié en raison de ses applications actuelles et potentielles dans différents secteurs de l'industrie : textile, alimentation, pharmaceutique, etc. Les objectifs de ce doctorat ont été d'obtenir des informations biochimiques et structurales sur la fucosyltransférase AtFuT1 de la plante modèle Arabidopsis thaliana. Pour cela, une forme recombinante soluble de l'enzyme a été produite avec le système baculovirus /cellules d'insectes. De manière à obtenir suffisamment de protéines pour les études structurales, une méthode de culture en suspension des cellules a été mise en place au laboratoire. Un protocole de purification en deux étapes, impliquant une chromatographie par affinité puis par exclusion de taille, a permis d'obtenir à partir d'un litre de culture cellulaire entre un à deux mg de protéine pure et homogène. Ce résultat a permis de mieux comprendre le comportement de l'enzyme vis-à-vis de ses substrats (GDP-fucose et xyloglucane), d'obtenir des cristaux de la protéine et de résoudre la structure 3D d'AtFuT1 en complexe avec le GDP et un oligosaccharide dérivé du xyloglucane, à une résolution de 2,2 Å. La forme AtFut1 produite se comporte en solution et dans le cristal sous forme d'un dimère non covalent. La protéine adopte un repliement qui est un variant du type GT-B classique. Parallèlement à ces travaux, des tests d'activité glycosyltransférase ont été mis au point permettant le criblage de nombreuses conditions de réactions. L'ensemble des méthodes et techniques développées constitue une base utile, devant faciliter la caractérisation d'autres glycosyltransférases. / Fucosyltransferases are enzymes that transfer a fucose residue from GDP-fucose on varied acceptors (oligosaccharides, proteins). In Human, these glycosyltransferases are involved in many biological and pathological processes. Numerous fucosyltransferase exist in the plant kingdom. Among them, FuT1 transfers a fucose linked in 1,2 onto a galactose of xyloglucan: a major hemicellulose of dicots cell wall. This branched polysaccharide is intensively studied because of its current and potential industrial applications in textile, food, pharmaceuticals, etc. The main objective of this PhD program was to obtain biochemical and structural information on the fucosyltransferase AtFuT1 from the model plant Arabidopsis thaliana. A recombinant form of this protein has therefore been produced, using the baculovirus/insect cell system. In order to get sufficient amount of protein for structural studies, a suspension cell culture method has been set-up in the lab. A two-step purification protocol, involving affinity and size exclusion chromatography was established. The active, and highly pure recovered protein was used to determine the biochemical properties of the protein towards its substrates (GDP-fucose and xyloglucan), to get protein crystals and hence to solve its 3D structure in complex with GDP and a xyloglucan derived oligosaccharide (2.2 Å resolution). AtFuT1 behaves in solution and in crystallo as a non-covalent dimer. The protein adopts a variant of the classical GTB fold. In addition, novel glycosyltransferase assay have been designed allowing the screening of numerous reaction conditions. Methods and techniques that were developed during this study should be a useful base for the characterization of other glycosyltransferase.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-17Bitstream added on 2014-06-13T18:34:30Z : No. of bitstreams: 1 ribeiro_af_me_jabo.pdf: 572955 bytes, checksum: f64dd01902ef75161ee1881df3afa8ed (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A avaliação nutricional de alimentos para ruminantes tem sido de grande importância para adequar os bancos de dados dos sistemas de formulação de dietas em regiões de clima tropical. Devido à grande quantidade de opções de forrageiras, várias alternativas de avaliação dos alimentos foram desenvolvidas nas últimas décadas, entre elas, as técnicas in vitro. O objetivo desse trabalho foi avaliar a composição química, digestibilidade e a produção de gases in vitro de três cultivares de Brachiaria: Brachiaria brizantha cv. Marandu, Brachiaria brizantha cv. Xaraés e Brachiaria híbrida cv. Mulato, submetidas a níveis de oferta (4, 7, 10 e 13% do peso vivo animal), sob ciclos de pastejo rotativo. A cultivar Xaraés apresentou os maiores teores de FDN, FDNcp, FDA, LIG e menor produção de gases em 96 horas no componente lâmina foliar . Houve diminuição dos CNF e fração B2 e o aumento da fração C dos carboidratos nos componentes colmo e lâmina foliar entre ciclos de pastejo em todos as cultivares. A cultivar Marandu apresentou maiores valores de digestibilidade (DIVMO e DIVMS) nos dois componentes. A cultivar Marandu apresentou a melhor composição química e maiores valores de digestibilidade / Nutritional evaluation of ruminant feed has been of great importance to adapt the databases of the systems of feed formulation in tropical regions. Due to the large amount of various alternative options for forage food assessment were developed in recent decades, among them the in vitro techniques. The aim of this study was to evaluate the chemical composition, digestibility and gas production in vitro of three cultivars of Brachiaria, Brachiaria brizantha cv. Marandu, Brachiaria brizantha cv. Xaraés and Brachiaria hybrid cv. Mulato, subjected to offer levels (4, 7, 10 and 13% of live weight) under rotational grazing. Xaraés cultivar showed the highest contents of NDF, NDFcp, ADF, lignin, and lower gas production in 96 hours in the stem and leaf fractions. There was a decrease in NFC and B2 fractions and increased the fraction C of carbohydrates in the stem and leaf fractions between grazing cycles in all the cultivars. Marandu cultivar showed the highest digestibility (IVDMD and IVDOM) in both fractions. The leaf fraction had lower levels of fiber and higher protein content in relation to the stem fraction. Cultivar Marandu had the best chemistry and higher digestibility values

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:53:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T13:58:31Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Tese (Doutoramento) / IPEN/T / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Submitted by NATÁLIA GONÇALVES TAKAHASHI GONÇALVES TAKAHASHI (naty_taka@hotmail.com) on 2017-06-07T16:14:24Z No. of bitstreams: 2 Dissertação_Natália_Gonçalves_Takahashi.pdf: 2126549 bytes, checksum: 2e4e7bc6e6b87efa3e00671b6137371c (MD5) Dissertação_Natália_Gonçalves_Takahashi.docx: 17831 bytes, checksum: 978787158c35816170d4451246ee80c5 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-06-07T16:29:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 takahashi_ng_me_jabo.pdf: 2126549 bytes, checksum: 2e4e7bc6e6b87efa3e00671b6137371c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-07T16:29:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 takahashi_ng_me_jabo.pdf: 2126549 bytes, checksum: 2e4e7bc6e6b87efa3e00671b6137371c (MD5) Previous issue date: 2017-06-05 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A busca pela diversificação de fontes da matriz energética, priorizando fontes renováveis, acarreta no maior consumo de etanol de primeira geração, podendo este ser insuficiente em suprir a necessidade da frota brasileira. Dessa forma, o etanol de segunda geração (E2G) surge como uma alternativa para aumento da produção de combustíveis renováveis. Ele é produzido a partir da fermentação dos resíduos de glicose após a quebra da celulose presente na biomassa vegetal. Contudo, além da celulose, a biomassa vegetal é também composta pela lignina, composto considerado recalcitrante no processo de obtenção deste tipo de etanol. Para transpor este obstáculo, é necessário encontrar maneiras de diminuir a quantidade ou modificar a composição da lignina. Fatores de transcrição (FTs) são alvos altamente promissores para a modificação deste polímero, uma vez que estão envolvidos com a regulação de sua via de biossíntese, bem como, da formação de toda parede celular secundária (PCS). Plantas de arroz transformadas para a superexpressão de AtSHN2 de Arabdopsis, apresentaram uma diminuição na quantidade de lignina e mostraram uma modulação na via de celulose, enquanto que a superexpressão do outro gene SHN de Arabidopsis (AtSHN1) em Arabidopsis apresentou uma modificação na via de biossíntese de cera e cutina. Isto ressalta a necessidade de avaliar os FTs de maneira espécie-específica. Assim sendo, este trabalho vem com o objetivo de ajudar a elucidar os mecanismos de funcionamento do FT SHINE (SHN), considerado um potencial regulador da PCS em gramíneas. Para a caracterização do FT SbSHN em sorgo foi primeiramente realizado um alinhamento de sequências de aminoácidos, contendo as proteínas codificadas pelos dois genes SHN em sorgo (SbSHN1 – Sb04g006970 e SbSHN2 – Sb10g023600) com outras sequências SHN disponíveis na literatura. Em seguida foi gerada uma árvore filogenética contendo todos esses mesmos SHN. Após isso, foi realizada a clonagem do FT SbSHN1 em vetor comercial pENTR/D-TOPO (Invitrogen), após verificação, a sequência foi recombinada com vetores de destino. Primeiramente, com o vetor pDEST15 para a expressão heteróloga da proteína SHN em E. coli.. De maneira complementar foi produzido um peptídeo sintético para reconhecimento da proteína SbSHN (anticorpo antiSHN). Posteriormente foi produzido um vetor contendo a sequencia de SHN em fusão com GFP, que foi utilizado para agroinfiltração de folhas de N. benthamiana, a fim de observar a localização subcelular do FT SbSHN. Para determinação da expressão através de qPCR em sorgo foram utilizados a folha, dividida em base e ponta, e a inflorescência, imatura e madura. Além disso, foi realizada a imunoprecipitação de cromatina (ChIP) das inflorescências imaturas e maduras de sorgo, com posterior análise inicial por ChIPqPCR para validação de alguns alvos de SbSHN. Como resultados, através da expressão heteróloga foi produzida uma proteína com massa de aproximadamente 52kDa (massa da proteína SHN adicionada de cauda GST), que foi reconhecida pelo anticorpo antSHN produzido. Foi confirmada a presença do FT SbSHN no núcleo celular, através de observação das folhas transformadas por agroinfiltração. As inflorescências imaturas de sorgo apresentaram maior expressão tanto de SbSHN1 quanto de SbSHN2. Com a técnica de ChIPqPCR foi possível validar in vivo os alvos SbNAC91 (Sb07g001550), SbNAC115 (Sb10g000460), SbMYB87 (Sb07g024970) e SbMYB60 (Sb04g031110) do FT SbSHN em sorgo. Em uma perspectiva de longo prazo, acredita-se que o conhecimento obtido a partir destes estudos não só fornecerão informações importantes sobre a função dos reguladores SHN em todo o reino vegetal, mas também fornecer uma poderosa ferramenta para a engenharia metabólica de compostos fenólicos e lignina por meio de melhoramento convencional ou abordagens transgênicas, impactando diretamente sobre a produção de E2G. / The search for alternative sources of the energy, prioritizing renewable sources, increase the consumption of first generation ethanol, which could not be enough to supply the needs of the Brazilian flex fuel car fleet. In this scenario, second generation ethanol (E2G) appears as an alternative to increase production of renewable fuels. E2G it is produced from the fermentation of glucose residues after breaking the cellulose present in the plant biomass. However, adhered to the cellulose is lignin, a compound considered recalcitrant in the process of obtaining this type of ethanol. To overcome this obstacle, it is necessary to find ways to decrease the amount or modify the lignin composition. Transcription factors (TFs) are highly promising targets for the modification of this polymer, since they are involved in the regulation of its biosynthesis pathway, as well as the formation of the whole secondary cell wall (PCS). Rice plants transformed for the overexpression of AtSHN2 from Arabidopsis showed a decrease in the amount of lignin and a modulation of cellulose pathway whereas the overexpression of another gene of SHN (AtSHN1) in Arabidopsis showed a modification in the biosynthesis pathway of wax and cutin. This highlights the need to evaluate TFs in a species-specific manner. Basing on this, the present work has the objective of helping to elucidate the mode of action of TF SHINE (SHN), considered a potential regulator of PCS in grasses. Aiming to characterize SbSHN TF in sorghum, initially an alignment was performed using amino acid sequence of proteins encoded by the two SHN genes in sorghum (SbSHN1 - Sb04g006970 and SbSHN2 - Sb10g023600) with other SHN sequences available in the literature. Then a phylogenetic tree containing all these SHN sequences was generated. After that, the SbSHN1 FT was cloned into commercial vector pENTR / D-TOPO (Invitrogen) and later used to recombinate in different destination vectors using gateway system. First, the vector pDEST15 was used for the production of heterologous expression in E. coli. Complementary, a synthetic peptide was produced for recognition of the SbSHN protein (antiSHN antibody). In parallel, the vector pK7WGF2 was used to obtain SHN phusioned to GFP. This vector was transientilly expressed in leaves of N. benthamiana in order to observe the subcellular location of SbSHN TF. Complementary, to determine the expression through qPCR, sorghum leaves, were splitted in base and tip, and the inflorescence, in immature and mature developmental stages, were used. In addition, chromatin immunoprecipitation (ChIP) of immature and mature sorghum inflorescences was performed, with initial analysis by ChIPqPCR for validation of some SbSHN targets. As results, through heterologous expression, a protein with mass of approximately 52kDa (mass of the SHN protein added with GST tail) was obtained, which was recognized by the antiSHN antibody produced. The presence of SbSHN TF in the cell nucleus was confirmed by observation of the transformed leaves by agroleakage. The immature inflorescences of sorghum presented higher expression level of both SbSHN1 and SbSHN2 genes. With the ChIPqPCR technique it was possible to validate in vivo some SHN targets such as: SbNAC91 (Sb07g001550), SbNAC115 (Sb10g000460), SbMYB87 (Sb07g024970) and SbMYB60 (Sb04g031110) in sorghum. In a long-term perspective, we believe that the knowledge gained from these studies will not only provide important information about the function of SHN as a master regulators throughout the plant kingdom, but also provide a powerful tool for the metabolic engineering of phenolic compounds and lignin using conventional breeding or transgenic approaches, directly impacting the production of E2G.

Resumo: A avaliação nutricional de alimentos para ruminantes tem sido de grande importância para adequar os bancos de dados dos sistemas de formulação de dietas em regiões de clima tropical. Devido à grande quantidade de opções de forrageiras, várias alternativas de avaliação dos alimentos foram desenvolvidas nas últimas décadas, entre elas, as técnicas in vitro. O objetivo desse trabalho foi avaliar a composição química, digestibilidade e a produção de gases in vitro de três cultivares de Brachiaria: Brachiaria brizantha cv. Marandu, Brachiaria brizantha cv. Xaraés e Brachiaria híbrida cv. Mulato, submetidas a níveis de oferta (4, 7, 10 e 13% do peso vivo animal), sob ciclos de pastejo rotativo. A cultivar Xaraés apresentou os maiores teores de FDN, FDNcp, FDA, LIG e menor produção de gases em 96 horas no componente lâmina foliar . Houve diminuição dos CNF e fração B2 e o aumento da fração C dos carboidratos nos componentes colmo e lâmina foliar entre ciclos de pastejo em todos as cultivares. A cultivar Marandu apresentou maiores valores de digestibilidade (DIVMO e DIVMS) nos dois componentes. A cultivar Marandu apresentou a melhor composição química e maiores valores de digestibilidade / Abstract: Nutritional evaluation of ruminant feed has been of great importance to adapt the databases of the systems of feed formulation in tropical regions. Due to the large amount of various alternative options for forage food assessment were developed in recent decades, among them the in vitro techniques. The aim of this study was to evaluate the chemical composition, digestibility and gas production in vitro of three cultivars of Brachiaria, Brachiaria brizantha cv. Marandu, Brachiaria brizantha cv. Xaraés and Brachiaria hybrid cv. Mulato, subjected to offer levels (4, 7, 10 and 13% of live weight) under rotational grazing. Xaraés cultivar showed the highest contents of NDF, NDFcp, ADF, lignin, and lower gas production in 96 hours in the stem and leaf fractions. There was a decrease in NFC and B2 fractions and increased the fraction C of carbohydrates in the stem and leaf fractions between grazing cycles in all the cultivars. Marandu cultivar showed the highest digestibility (IVDMD and IVDOM) in both fractions. The leaf fraction had lower levels of fiber and higher protein content in relation to the stem fraction. Cultivar Marandu had the best chemistry and higher digestibility values / Orientador: Euclides Braga Malheiros / Coorientador: Telma Teresinha Berchielli / Banca: Ana Cláudia Ruggieri / Banca: Paulo Henrique Moura Dian / Mestre