O Hibiscus rosa-sinensis L. e o Hibiscus syriacus L., da família Malvaceae são utilizados na área ornamental, mas nos últimos anos vem ganhando espaço na área alimentícia como flores comestíveis. Alguns estudos demonstram o potencial antibacteriano destas variedades frente a diversos microrganismos e sobre sua composição nutricional e fitoquímica há poucas pesquisas. Este trabalho teve por objetivo analisar a intensidade de atividade de inibição (IINIB) e a inativação bacteriana (IINAB) in vitro dos dois extratos alcoólicos das flores dos hibiscos e a relação com os polifenóis e antocianinas, e quantificar os compostos nutricionais e bioativos comparados com a atividade antioxidante. Avaliou-se a ação antibacteriana frente às bactérias de interesse alimentar, Staphylococcus aureus e Salmonella Enteretidis resultando em diferenças significativas entre as médias dos valores arbitrários (IINIB/IINAB). Observou-se a resistência da primeira bactéria com a segunda respectivamente em ambos os extratos vegetais. O doseamento dos compostos fitoquímicos presentes constatou que as plantas possuem correlação com a atividade antibacteriana e as propriedades químicas demonstraram valores significativos do ponto de vista nutricional e detectou-se efeito relevante com a atividade antioxidante. / The Hibiscus rosa-sinensis L. and Hibiscus syriacus L., Malvaceae the family are used in the ornamental area, but in recent years has been gaining ground in the food area as edible flowers. Some studies have demonstrated the antibacterial potential of these varieties against various microorganisms and on their nutritional composition and phytochemical little research. This study aimed to analyze the intensity of activity inhibition (IINIB) and bacterial inactivation (IINAB) in vitro of both alcoholic extracts of petals of flowers of hibiscus and relationship with polyphenols and anthocyanins, and quantify the nutritional and bioactive compounds compared with antioxidant activity. We evaluated the antibacterial action on the bacteria of food interest, Staphylococcus aureus and Salmonella Enteretidis resulting in significant differences between the means of arbitrary values (IINIB/IINAB), where there was resistance from the first to the second bacterium in both extracts vegetables. The determination of phytochemical compounds found that plants have a correlation with the antibacterial activity and chemical properties showed significant amounts of nutritional standpoint and significant effect was detected with antioxidant activity.

As bactérias do gênero Salmonella são, atualmente, uma grande preocupação pela alta incidência de casos registrados, e um sério problema de saúde pública, pela severidade do processo infeccioso. Em função disto os protocolos de controle e legislações em vigilância em saúde obrigam a ausência total de Salmonella em alimento. Para garantir a segurança do alimento, uma crescente demanda de produtos naturais vem sendo estudas para controlar os patógenos alimentares. As plantas condimentares historicamente vêm sendo usadas para conferir sensorialidade aos alimentos, porém muitos desses recursos naturais possuem propriedades antimicrobianas. No entanto, pouco se sabe sobre a interação que essas especiarias influem sobre esses patógenos. Este estudo foi dividido em duas partes. Na primeira, através de testes de diluição em sistemas de tubos múltiplos, determinou-se a Intensidade de Atividade e Inibição Bacteriana (IINIB) e a Intensidade de Atividade e Inativação Bacteriana (IINAB) de diferentes extratos de Artemisia dracunculus L. (“estragão”) e Origanum vulgare L. (“orégano”) frente a oito isolados de Salmonella spp. de sete surtos toxinfectivos alimentares ocorridos no Rio Grande do Sul além de Salmonella Enteritidis ATCC (13076). Foram testados também diferentes formas de extração e suas concentrações, bem como o tempo de contato das bactérias ao extrato. A quantidade de polifenois totais foram, relacionadas à forma de extração (etanólica e hidroetanólico) e ao tipo de extrato da planta. Os resultados foram apresentados como variáveis arbitrárias sendo 9 a atividade máxima e 1 a não atividade bacteriana. Entre as Salmonella spp. houve diferença significativa (p >0,05) em IINIB 7,99 mais resistente a 8,28 mais sensível e os resultado em IINAB 6,77 mais resistente 7,22 mais sensível. As bactérias foram significativamente mais sensíveis aos extratos de estragão do que o de orégano da mesma forma a concentração de 25 % foi mais efetiva que as outras assim como o tempo de contato dos extratos com a bactéria resultou em maior atividade no tempo de 144h. Quanto ao tipo de extração a forma etanólica recebeu maiores notas que a extração Hidroetanólica e quando relacionada a quantidade de fenóis totais foram mais elevadas na etanólica e a planta com maior quantidade de polifenois foi o estragão. Com esses dados pode se dizer que as duas plantas mostraram ação bactericida e bacteriostática frente às salmonelas. Na segunda parte do trabalho contaminou-se carne bovina moída com inóculo padrão final em 104 UFC/mL de salmonela em contato com extratos de Artemisia dracunculus à concentração de 40 % e 45%, o extrato etanólico de Origanum vulgare L. Foi testada a sensibilidade do teste diagnostico de identificação de salmonelas criando uma modificação à técnica padrão oficial do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) acrescentando desestressores que serviram de comparação (teste ouro). Para extrato de estragão observou-se uma sensibilidade do teste em 8 horas de 73,3% e em 24horas de 40% em quanto para orégano a sensibilidade do teste em 8 horas foi de 93,3% e em 24 horas de 6,6 %. Dessa forma o objetivo desse estudo foi trazer à discussão a necessidade de avaliar os processos de ativação das salmonelas originadas de alimentos contaminados, possibilitando uma qualificação dos resultados preditivos do teste oficial. / The Salmonella genus bacteria are currently a major concern because of the high incidence of reported cases, and a serious public health problem, due to the severity of the infectious process. Because of that, the control protocols and laws on health surveillance require a total absence of Salmonella in food. To ensure food security, there is a growing demand for natural products able to control food pathogens. The condiment plants have been historically used to flavor food, but many of these natural resources have antimicrobial properties. However, little is known about the action of the spices on those pathogens. This study was divided in two parts: The first, through dilution tests in a multiple tube testing system, we determined the Intensity of Activity and Bacterial Inhibition (IINIB) and Intensity of Activity and Bacterial Inactivation (IINAB) of different extracts of Artemisia dracunculus L. ("tarragon") and Origanum vulgare L. ("oregano"), compared to eight isolated types of Salmonella spp. from seven alimentary toxinfection outbreaks in Rio Grande do Sul, as well as Salmonella Enteritidis ATCC (13076). Different forms of extraction and their concentrations, as well as the contact time of the bacteria to the extracts were tested. The amount of total polyphenols were related to the form of extraction (ethanolic and hydroethanolic) and the type of the plant extract. The results were presented as arbitrary variables, showing 9 to the maximum activity and 1 to non-bacterial activity. Among Salmonella spp., there was significant difference (p> 0.05) in IINIB, 7.99 the most resistant to 8.28 the most sensitive, and results in IINAB 6.77the most resistant and 7.22 the most sensitive. The bacteria were remarkably more sensitive to tarragon extracts than oregano extracts. Similarly, the 25% concentration was more effective than the others, as well as the contact time of the extracts with the bacteria resulted in a higher activity within 144 h time. Regarding to the type of extraction, the ethanolic form showed higher scores than the hydroethanolic, and when related to the total amount phenols, these were higher in ethanolic extraction, and the highest amount of polyphenols was found in tarragon. With these data we can say that the two plants showed bactericidal and bacteriostatic action on the Salmonella. These data show that the two studied plants showed bactericidal and bacteriostatic action on the Salmonella. The second part of the study consisted in contacting contaminated ground meat with final standard inoculum 104 CFU / ml of Salmonella with extracts of Artemisia dracunculus in 40% and 45% concentration, and ethanol extract of Origanum vulgare. The responsiveness of the diagnosing test for identification of Salmonella was tested, creating a technical amendment to the official standard of the Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA), adding de-stressors used as a comparison (gold standard). The tarragon extract showed responsiveness to the test within 8 hours at 73.3% and 24 hours at 40%, while for oregano the test responsiveness was within 8 hours at 93.3% and 24 hours at 6.6%. Therefore, the aim of this study was to discuss the need of evaluating the activation processes of the Salmonella originated from contaminated food, enabling a predictive qualification of the official test results.

O Staphylococcus aureus é bactéria espécie não específica que, além de potencial patogenicidade, evoluiu em mecanismos de resistência a antimicrobianos. O S. aureus meticilina resistente (MRSA) antes restrito a infecções nosocomiais, dispersou-se na comunidade e nos animais de companhia e para produção de alimento. Na conduta para o controle da transmissão, além do uso de antibióticos, a ação sobre os agentes causais nas fontes de contaminação exige atenção, sendo decisiva e crítica a escolha de desinfetantes e antisépticos. A busca por recursos frente a agentes patogênicos resistentes a antimicrobianos convencionais e a demanda por insumos sanitários aplicáveis em modelos sustentáveis de produção agropecuária, motivam a investigação de extrações vegetais que apresentem atividade antibacteriana. O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade bactericida de desinfetantes convencionais sobre isolados MRSA, testar a hipótese da possibilidade de resistência cruzada entre grupos químicos antibióticos (beta-lactâmicos) e desinfetantes e também avaliar a atividade bactericida de extrações das inflorescências de Achyrocline satureioides (Lam.) DC. (Asteraceae) (“macela”), planta medicinal, de uso popular e tradicional, nativa na região sul do Brasil, sobre os mesmos inóculos. A técnica de referência foi o “Teste de Suspensão na Avaliação Quantitativa da Atividade Bactericida de Desinfetantes e Antissépticos Químicos”. Nos testes com os desinfetantes hipoclorito de sódio (HS), iodofór (I) e quaternário de amônio (QAC - cloreto de cetil trimetilamônio), quatro concentrações de cada grupo químico foram confrontadas com 21 MRSA, em tempos de contato de cinco, 15 e 30 minutos e densidade populacional inicial dos inóculos de 107UFC/mL. Observou-se que os grupos químicos nas menores concentrações HS 25 ppm, I 12,5 ppm e QAC 125 ppm, apresentaram atividade bactericida frente a todos os isolados no menor tempo de contato. A proporção usada da A. satureioides foi de 5 g:100 mL de solvente e as densidades iniciais dos inóculos confrontados foram 107, 106 e 105 UFC/mL. A atividade da forma decocto foi verificada frente a 51 isolados MRSA, em tempos de contato de uma, oito e 24 h. Vinte e um deles também foram submetidos ao extrato hidroetanólico hidratado (EH), obtido de maceração hidroetanólica 70º GL, desalcoolizada e hidratada ao volume inicial, nos tempos de contato de cinco e 30 minutos e de uma até quatro horas. Por Cromatografia Liquida de Alta Eficiência (CLAE) foi confirmada, no acesso da planta, a presença dos marcadores fitoquímicos quercetina, luteolina e 3-Ometilquercetina. As extrações da A. satureioides apresentaram atividade antibacteriana frente a todos os isolados MRSA. O EH mostrou atividade de inativação em menor tempo. Tomando como exemplo a 1 h de contato, na maior densidade do inóculo, 19% dos isolados estavam inativados, enquanto que no decocto não foi observada inativação. Em 4 horas de contato com o EH 85,7% dos isolados, na maior densidade desafio, estavam inativados e 100% dos isolados sofreram redução da densidade populacional. O decocto demonstrou maior atividade bactericida entre 8h e 24 horas, inativando 100% dos isolados até as 24 h. Concluiu-se que, controlados os conhecidos fatores limitantes da atividade bactericida, o hipoclorito de sódio o iodofor e o quaternário de amônio são adequados para controlar os MRSA nas fontes de contaminação em ambientes de saúde humana ou nos de saúde e de produção animal. Para os isolados resistentes aos antibióticos beta-lactâmicos confrontados não foi observada relação de resistência com os desinfetantes. A atividade bactericida das soluções de Achyrocline satureioides frente aos isolados MRSA e ao microrganismo de referência Staphylococcus aureus ATCC 6538 sugere seu potencial uso, diretamente nas formas avaliadas ou em formulações, em procedimentos de higiene, tanto nas fontes de infecção de ambientes de saúde humana quanto nos de saúde e de produção animal. / The bacterium Staphylococcus aureus is a speciea not specific and potential pathogenicity, which has evolved mechanisms for antimicrobial resistance. S. aureus methicillin resistant (MRSA) once restricted to nosocomial infections, dispersed in the community and in companion animals and production. In order to control the transmission, besides the use of antibiotics, the action on the causative agents in the sources of contamination requires attention, being decisive and critical the choice of disinfectants and antiseptics. The search for resources against pathogens resistant to conventional antibiotics and the demand for health inputs applicable in sustainable agriculture production motivated the investigation of plant extractions that have antibacterial activity. The aim of this study was to evaluate the bactericidal activity of conventional disinfectants on MRSA isolates, testing the hypothesis of the possibility of cross-resistance between chemical groups antibiotics (beta-lactams) and disinfectants and also assess the bactericidal activity of extractions of inflorescences Achyrocline satureioides (Lam.) Dc. (Asteraceae) ("macela"), a medicinal plant with a popular and traditional use, native from southern Brazil on the same isolates. The reference technique was the "Suspension Test in Quantitative Evaluation of Bactericidal Activity of Chemical Disinfectants and Antiseptics." In tests with disinfectant sodium hypochlorite (HS), iodophor (I) and quaternary ammonium (QAC-cetyl trimethylammonium chloride), four concentrations of each chemical group were confronted with 21 MRSA on contact time of five, 15 and 30 minutes. The population density of the initial inoculum was 107UFC/mL. It was observed that the chemical groups at lower concentrations HS 25 ppm, and 12.5 ppm I 125 ppm QAC showed bactericidal activity against all isolates in less contact time. The proportion used of A. satureioides was 5 g: 100 mL of solvent and the initial densities of the inocula confronted were 107, 106 and 105 CFU / mL. The activity of decoction form was checked against 51 MRSA isolates, in times of a contact, eight and 24 h. Twenty-one of them also underwent hydroethanolic extract hydrate (EH) obtained by maceration hydroethanol 70 º GL, dealcoholised hydrated and the initial volume, the contact time of five and 30 minutes and one to four hours. By High performance liquid chromatography (HPLC) was confirmed in the access plan, the presence of markers phytochemicals quercetin, luteolin and 3-O-methylquercetin. The extractions of A. satureioides showed antibacterial activity against all MRSA isolates. The EH showed activity inactivation in less time. Taking as an example the 1 hr of contact, the greater density of the inoculum, 19% of the isolates were inactive, whereas the decoction did not show inactivation. In 4 hours of contact with the EH 85.7% of isolates in higher density challenge were inactivated and 100% of isolates reduced population density. The decoction showed greater bactericidal activity between 8 and 24 hours, inactivating 100% of isolates until 24 h. It was concluded that, controlling for known factors affecting the bactericidal activity, the sodium hypochlorite and quaternary ammonium iodophor are suitable for controlling MRSA in the sources of contamination in healthcare environments or in human health and animal production. For the isolates resistant to beta-lactam antibiotics confronted no relationship was observed resistance to disinfectants. The bactericidal activity of solutions Achyrocline satureioides against of MRSA isolates and reference microorganism Staphylococcus aureus ATCC 6538 suggests its potential use, directly into forms or formulations evaluated in hygiene procedures, both in the sources of infection in healthcare environments as in human health and animal production.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Dentre as espécies florestais nativas da Amazônia utilizadas por populações tradicionais na terapêutica de diversos problemas de saúde estão a Geissospermum argenteum Woodson, uma Apocynaceae, e a Minquartia guianensis Aubl., da família Olacaceae. Entre os problemas de saúde está a malária, que no Brasil e no mundo ainda é um grave problema de saúde pública. Outro agravo à saúde de importância são infecções microbianas, pois os micro-organismos têm desenvolvido resistência aos agentes antimicrobianos. Neste trabalho, foram coletadas amostras de cascas, folhas e galhos de G. argenteum e M. guianensis, em área de floresta, na Vila Apiaú, município de Mucajaí RR. As amostras foram submetidas à extração metanólica a quente e extração aquosa, Amostra de extrato metanólico de cascas de G. argenteum foi submetida a particionamento líquido-líquido, resultando nas frações hexânica, clorofórmica, acetato de etila e metanol/água. A fração clorofórmica foi selecionada para cromatografia em coluna com sistema gradiente de solventes, obtendo-se 38 frações, as quais foram analisadas através de CCD e destas a fração Cr10 foi selecionada para cromatografia preparativa, a partir da qual foi obtida a fração F6, que analisada em CCD mostrou-se positiva para alcalóides. Os extratos metanólicos e aquosos de ambas as espécies, e frações primárias provenientes de extratos G. argenteum foram testados em ensaios in vitro para atividade antimalárica frente à cepa cloroquino-resistente, K1, de Plasmodium falciparum, nas concentrações de 50 e 5 μg/mL. Posteriormente, amostras ativas foram avaliadas em 7 diluições para estabelecer a relação dose-resposta e valores de concentração inibitória mediana (CI50). Amostras provenientes das duas espécies também foram testadas contra as cepas bacterianas, Staphylococcus aureus, Streptococcus mutans e Escherichia coli, e contra a levedura Candida albicans. A atividade antimicrobiana foi avaliada através de difusão em ágar e a concentração inibitória mínima (CIM) por microdiluição em placas. Para as frações acetato de etila, clorofórmica, hexânica e hidroalcoólica obtida de cascas de G. argenteum e a fração Cr10 foi realizada a bioautografia para S. aureus. Na atividade antimalárica o extrato metanólico de casca foi ativo, com CI50 de 4,6 μg/mL e a fração clorofórmica obtida de casca de G. argenteum também foi ativa com CI50 de 2,0 μg/mL. Os extratos de M. guianensis foram considerados inativos para a atividade antimalárica. Na atividade antimicrobiana, através de difusão em ágar, extratos de G. argenteum foram parcialmente ativos contra S. aureus, S. mutans e inativos contra E. coli e C. albicans. A CIM para S. aureus foi de 0,63 mg/mL para a fração metanol/água, para S. mutans, CIM de 0,63 mg/mL e C. albicans com CIM de 0,63 mg/mL. Para cepa de E. coli os extratos foram inativos. Extratos de M. guianensis mostraram-se ativos frente à S. aureus e C. albicans através de difusão em ágar e apresentaram a CIM superior a 1mg/ml para S. aureus, S. mutans e C. albicans. Os extratos de M. guianensis foram inativos contra E. coli. Na autobiografia para S. aureus as frações testadas apresentaram atividade. / Among the natives species from the Amazon Forest used by traditional populations in the treatment of various health problems, including, malaria, wich in Brazil and in the world remains a serious public health problem, are Geissospermum argenteum Woodson, an Apocynaceae, and Minquartia guianensis Aubl, Olacaceae family. Another important health problem is the microbial infections, because the microorganisms have developed resistence to antimicrobial agents. In this work, samples were collected from bark, leaves and twigs of G.argenteum and M. guianensis in a forestall area in Apiaú village, city of Mucajaí RR. The samples were extracted by hot methanol and water extraction, resulting in methanol and aqueous extracts. Sample of methanol extract of bark of G.argenteum was submitted to liquid-liquid partitioning, resulting in fractions hexane, chloroform, ethyl acetate and methanol/water. The chloroform fraction was selected for fractionation using chromatography colunn and solvent gradient system, resulting in 38 fractions, which were analyzed by TLC and the fraction Cr10 was selected for preparative chromatography, from which the fraction F6 was obtained, analyzed in CCD was positive for alkaloids. The methanol and aqueous extracts of both species and fractions of extracts from primary G.argenteum were tested in vitro assays for antimalarial activity against the chlroquine-resistant K1 Plasmodium falciparum at concentrations of 50 and 5 mg/mL. Subsequently, active samples were evaluated in 7 diluitions to establish the dose-response and median inhibitory concentration values (IC50). Samples from two species were also tested against bacterial strains, Staphylococcus aureus, Streptococcus mutans and Escherichia coli, and against the yeast Candida albicans. Antimicrobial activity was evaluated by agar diffusion and minimum inhibitory concentration (MIC) by microdilution plates. For fractions of ethyl acetate, chloroform, hexane and water-alcohol obtained from barks of G.argenteum, fraction Cr10 and bioautography was performed fo S. aureus. Antimalarial activity in the methanol extract of bark was active, with IC50 of 4,6 mg/mL and chloroform fraction obtained from bark of G.argenteum was also active with IC50 of 2,0 mg/mL. The extracts of M. guianensis were considered inactive for antimalarial activity. In antimicrobial activity by agar diffusion, extracts of G.argenteum were partially active against S. aureus, S. mutans and inactive against E. coli and C. albicans. The MIC for S. aureus was 0,63 mg/mL per fraction methanol/water, S. mutans, MIC of 0,63 mg/mL and C. albicans with an MIC of 0,63 mg/mL. For the strain of E.coli there was no activity. Extracts of M. guianensis were active against the S. aureus and C. albicans by agar diffusion and presented more than 1 mg/mL MIC for S aureus, S.mutans and C. albicans. The extracts of M. guianensis were inactive against E. coli.

Made available in DSpace on 2016-08-19T12:56:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 WALERIA_ FERREIRA_ RABELO.pdf: 1414450 bytes, checksum: a5589c3f85166730ef18134e4d347fde (MD5) Previous issue date: 2010-09-24 / The vegetable specie Syzygium aromaticum, known as clove is a 12 to 15 meters high tree that belongs the Mirtaceae family. In Brazil, the plants are found in warm regions, especially at the lower southern region of the state of Bahia. Their floral bud contains an essential oil of high economical value in the international market, due to the high content of eugenol (its main compound) which is widely used in the chemical and pharmaceutical industries. In this work the extraction of essential oil from dried flower buds of cloves by the hydrodistillation method, using a Clevenger s system. Was observed that the maximum volume of oil is extracted in a time of 4 hours with a 3,54 % m/m yield. Besides the physical-chemical parameters as density, refraction rate, solubility, color and appearance, was possible- the techniques of gas chromatography and mass spectrometry identify with security the eugenol as majority constituent of the essential oil of Syzygium aromaticum. The method of normalization was possible to identify and quantify the components: eugenol (52.53 %), caryophyllene (37.25 %), humulene (4.11 %), eugenol acetate (4.05 %) and copaene (2.05 %). With the application of the essential oil of clove and eugenol in the standard bioassay of toxicity observed a high toxic potential against the larvae of Artemia salina. It was also still evaluated the essential oil s antibacterial activity of the essential oil and eugenol standard over the bacteria Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa and Salmonella ssp, isolated from food and water. The study microbiological showed that the essential oil of cloves presented a good antibacterial activity against the strains tested, being eugenol the main responsible for this efficiency. / A espécie vegetal do Syzygium aromaticum, conhecida popularmente como Cravo da Índia, é uma árvore de 12 a 15 m de altura, que pertence à família das Mirtaceae. No Brasil, a planta é encontrada em regiões quentes, principalmente na região do baixo sul da Bahia. Seus botões florais contêm um óleo essencial de grande valor econômico no mercado internacional, devido ao elevado teor de eugenol (seu composto majoritário) o qual é largamente usado nas indústrias químicas e farmacêuticas. Neste trabalho, realizou-se a extração do óleo essencial dos botões florais secos do cravo da índia pelo método da hidrodestilação, utilizando um sistema de Clevenger. Observou-se que o volume máximo de óleo é extraído em um tempo de 4 horas com um rendimento de 3,54 % m/m. Além dos parâmetros físico-químicos como a densidade, índice de refração, solubilidade, cor e aparência; foi possível pela técnica da cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas identificar com segurança o eugenol como constituinte majoritário do óleo essencial do Syzygium aromaticum. Pelo método da normalização foi possível identificar e quantificar os componentes: eugenol (52,53 %), cariofileno (37,25 %), humuleno (4,11 %), acetato de eugenila (4,05 %) e copaeno (2,05 %). Com a aplicação do óleo essencial do cravo e do padrão de eugenol no bioensaio com a toxicidade observou-se um grande potencial tóxico frente às larvas da Artemia salina. Avaliou-se ainda a atividade antibacteriana do óleo essencial e do padrão de eugenol sobre as bactérias Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella ssp, isoladas de alimentos e água. O estudo microbiológico revelou que o óleo essencial do cravo da índia apresentou uma boa atividade antibacteriana contra as cepas testadas, sendo que o eugenol é o principal responsável por essa eficácia.

O presente estudo visou determinar a prevalência de bactérias Gram-negativas produtoras de produzem b-lactamases de amplo espectro (ESBL) e resistência adquirida a quinolonas mediada por plasmídeos (PMQR) em animais de estimação, investigando o potencial papel destes hospedeiros como portadores assintomáticos. Em 2012, foram coletadas 216 amostras (fezes e saliva) de 108 animais de companhia (29 gatos e 79 cães) abrigados em casas de família, um centro de acolhimento de animais abandonados, e no Centro de Controle de Zoonoses da Cidade de São Paulo. Do total de cepas estudadas, 85% apresentaram fenótipo sugestivo de PMQR; enquanto que 62% dos isolados exibiram um fenótipo característico e sugestivo para produção de ESBL, sendo na sua maioria identificadas como E. coli. Dentre os isolados, 14 carregaram variantes do gene blaCTX-M, 9 foram positivos para o gene blaTEM, e 6 foram positivos para blaSHV. Em relação às cepas resistentes às Q/FQ, 56% (n= 43) foram positivas para a presença do gene qnr, o qual foi identificado em 11 espécies diferentes. Os resultados apresentados demostram que animais de companhia podem ser portadores assintomáticos de cepas produtoras de ESBL e PMQR. / The present study aimed to determine the prevalence of Gram-negative bacteria producing b-lactamases producing broad-spectrum (ESBL) and acquired resistance to quinolones mediated by plasmids (PMQR) in pets, investigating the potential role of these hosts as asymptomatic carriers. In 2012, 216 samples (feces and saliva) of 108 companion animals (29 cats and 79 dogs) housed in shelters or a Zoonosis Control Center were collected from São Paulo city. Of the total strains studied, 85% had a phenotype suggestive for PMQR; while 62 % of the isolates exhibited a characteristic phenotype and suggestive for ESBL-producing genes, with the most identified as E. coli. Among the isolates, 14 carried variants blaCTX -M gene 9 were positive for blaTEM gene, and 6 were positive for blaSHV. Regarding resistant Q/FQ isolates, 56% (n = 43) were positive for the presence of qnr gene, which was identified on 11 different species. The results presented demonstrate that pets can be asymptomatic carriers of ESBL producing strains and PMQR.

A emergência de resistência microbiana é um desafio para microbiologistas, médicos, órgãos de saúde pública e para a indústria farmacêutica. Passado três décadas, patógenos gram-positivos, principalmente Staphylococcus aureus, têm desenvolvido cada vez mais resistência a vários antibióticos devido ao uso extensivo nos hospitais e na comunidade. Este desenvolvimento aconteceu em um período em que poucas novas classes de antibióticos tenham sido identificadas, ressaltando a necessidade urgente de novos agentes antimicrobianos. A modificação molecular tem se mostrado como estratégia bastante promissora no planejamento e desenvolvimento de análogos com melhor biodisponibilidade, maior atividade intrínseca e menor toxicidade. Desta forma, foi planejada, neste trabalho, a síntese de série de derivados 5-metilsulfonil-2-tiofilidênicos e derivados 5(6)-benzofuroxânicos, análogos à nifuroxazida, buscando atividade bacteriostática e/ou bactericida frente a cepas resistentes de Staphylococcus aureus. A seleção dos grupos substituintes foi fundamentada na influência de suas propriedades físicoquímicas, como hidrofobicidade e efeito eletrônico. Para avaliação da atividade antibacteriana, este trabalho usou o método de determinação da concentração inibitória mínima, CIM, frente à Staphylococcus aureus, cepas ATCC25923, 3SP/R33 e VISA3. Os derivados 5-metilsulfonil-2-tiofilidênicos não apresentaram atividade antimicrobiana, enquanto que todos os derivados 5(6)-benzofuroxânicos foram ativos frente a cepa padrão ATCC25923. O composto mais ativo foi a 5(6)-benzofuroxano-4-nitrobenzidrazida (CIM= 16,80 µg/mL) e o menos ativo foi a 5(6)-benzofuroxano benzidrazida (CIM = 36,00 µg/mL). Ficou evidenciado que a atividade antimicrobiana destes compostos sofre forte influência da hidrofobicidade e do efeito eletrônico dos grupos substituintes. Os compostos 5(6)-benzofuroxano-4-nitrobenzidrazida e 5(6)-benzofuroxano-4-clorobenzidrazida foram testados frente às cepas com caráter de multi-resistência, 3SP/R33 e VISA3, e ambos mostraram atividade antimicrobiana similar quando comparados com a cepa padrão. Ressalta-se que foram sintetizados e identificados neste trabalho onze compostos que apresentam estruturas químicas inéditas. / Emergent antimicrobial resistance is a challenge for microbiologists, physicians, public health organizations, and pharmaceutical industry. Over the past three decades Gram-positive pathogens, most notably Staphylococcus aureus, have become increasingly resistant to multiple antibiotics due to their extensive hospital and community use. This has come at time when very few new antibiotic classes have been identified, and emphasizes the urge for new antibacterial agents. Molecular modification has been used as a quite promising strategy in the design and development of drug analogs with better bioavailability, higher intrinsic activity, and lesser toxicity. Thus, for this work a series of 5-methylsulfonyl-2-thiophylidene and 5(6)-benzofuroxans derivatives were synthetized and tested for antibacterial activity against resistant Staphylococcus aureus strains. The selection of the substituent groups was based on the influence of physical-chemical properties, such as hydrophobicity and eletronic effects. Antibacterial activity was evaluated through the determination of the minimum inhibitory concentration, MIC, against Staphylococcus aureus strains ATCC25923, 3SP/R33 and VISA3. 5-methylsulfonyl-2-thiophylidene derivatives did not show antibacterial activity, while all 5(6)-benzofuroxans derivatives were active against the standard strain ATCC25923. 4-nitro-benzoic acid[((5(6)benzo[c][1,2,5]oxadiazole N1-oxide)-2- yl)-methylene]-hydrazyde (MIC=16,80 µg/mL) was the most active compound, and the least active was benzoic acid[((5(6)benzo[c][1,2,5]oxadiazole N1-oxide)- 2-yl)-methylene]-hydrazyde (MIC = 36,00 µg/mL). It was evidenced that the antimicrobial activity of these compounds is influenced by the hydrofobicity and electronic effects of substituent groups. Compounds 4-nitro-benzoic acid[((5(6)benzo[c][1,2,5]oxadiazole N1-oxide)-2-yl)-methylene]-hydrazyde and 4-Chloro-benzoic acid[((5(6)benzo[c][1,2,5]oxadiazole N1-oxide)-2-yl)-methyl- ene]-hydrazyde were evaluated against the resistant strains 3SP/R33 and VISA3, and both showed similar antimicrobial activity when compared to the standard strain. It must be pointed out that eleven previously unknown compounds were synthetized and tested in this work.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-06-17T13:26:30Z No. of bitstreams: 1 lucasapolinariochibli.pdf: 4452333 bytes, checksum: 37e0f0b3c3682a67c7f4efa2b05bd2bd (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-06-17T13:28:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 lucasapolinariochibli.pdf: 4452333 bytes, checksum: 37e0f0b3c3682a67c7f4efa2b05bd2bd (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-17T13:29:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 lucasapolinariochibli.pdf: 4452333 bytes, checksum: 37e0f0b3c3682a67c7f4efa2b05bd2bd (MD5) Previous issue date: 2013-07-25 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Bryophyllum pinnatum (Lam.) Oken (Crassulaceae), conhecida como “folha-da-fortuna”, tem sido largamente utilizada na medicina tradicional, principalmente para o tratamento de inflamações, infecções, feridas, ulcerações e gastrite. O objetivo do presente estudo foi identificar e quantificar constituintes bioativos, bem como avaliar as atividades antioxidante, antibacteriana e anti-inflamatória tópica das folhas de B. pinnatum. O material vegetal seco e pulverizado foi submetido à maceração com etanol seguida de obtenção, por partição, das frações hexânica, diclorometânica, em acetato de etila e butanólica. Constituintes do extrato etanólico e das frações foram identificados por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a detector de ultravioleta e cromatografia com fase gasosa acoplada à espectrometria de massas. Os teores de fenóis e flavonoides totais foram determinados por espectrofotometria e a atividade antioxidante avaliada pelos ensaios com radical DPPH, de poder de redução, sistema de cooxidação β-caroteno/ácido linoleico e bioautografia. A atividade antibacteriana foi investigada pelos métodos de difusão e microdiluição. A atividade anti-inflamatória tópica foi avaliada usando modelos de edema de orelha induzidos por óleo de cróton, ácido araquidônico, fenol, capsaicina, etil-fenil-propiolato e por análise histológica. Os resultados foram demonstrados como média ± erro padrão. Análise de variância seguida do teste de Tukey ou Student-Newman-Keuls foi usada para medir o grau de significância para p < 0,05. Quercetina, rutina, canferol, apigenina 7-O-β-D-glicosídeo e luteolina 7-O-β-D-glicosídeo foram identificados por CLAE-UV, enquanto -amirina por CG-EM. Os teores de fenóis totais variaram de 3,45 a 25,34 g/100 g, enquanto os flavonoides foram de 0,66 a 23,31 g/100 g. Utilizando o método do DPPH, os valores de CE50 variaram entre 9,44 ± 0,01 a 57,29 ± 0,11 μg/mL e o método do poder de redução produziu CE50 de 234,22 ± 0,61 e 1235,17 ± 1,39. Os valores de inibição da peroxidação lipídica foram entre 39,4 e 58,3% e o método de biautografia detectou substâncias com atividade antioxidante. O extrato etanólico e as frações inibiram o crescimento das bactérias testadas, produzindo atividades bactericida e bacteriostática. Concentrações de 0,5 e 1,0 mg/orelha do extrato etanólico reduziram o edema de orelha induzido pelo óleo de cróton em 54,85 e 57,11%, enquanto o edema de orelha induzido pelo ácido araquidônico foi de 41,67, 53,82 e 67,01% nas concentrações de 0,1, 0,5 e 1,0 mg/orelha, respectivamente. O edema induzido pelo fenol foi inibido em 79,73, 33,14 e 33,71% nas concentrações de 0,1, 0,5 e 1,0 mg/orelha, respectivamente. Após tratamento, 0,1 (43,22%), 0,5 (72,53%) e 1,0 mg/orelha (35,16%) do extrato etanólico reduziu o edema de orelha induzido por capsaicina. O edema induzido pelo etil-fenil-propriolato, nas concentrações de 0,1 (75,00%), 0,5 (69,77%) e 1,0 mg/orelha (43,60%) foi inibido. Os resultados do teste crônico de edema de orelha e a análise histológica confirmaram o efeito do extrato etanólico na inibição do processo inflamatório induzido pelo óleo de cróton. Os resultados indicaram que B. pinnatum possui efeitos antioxidante, antibacteriano e anti-inflamatório tópico, justificando o uso popular e destacando a espécie como potencial alvo para a descoberta de novos agentes terapêuticos. / Bryophyllum pinnatum (Lam.) Oken (Crassulaceae), known as "folha-da-fortuna" (leaves-of-fortune), has been widely used in traditional medicine, mainly for the treatment of inflammation, infection, wound, ulcer and gastritis. The aim of the present study was to identify and quantify bioactive constituents, as well as evaluating the antioxidant, antibacterial and topical anti-inflammatory activities of B. pinnatum leaves. Dried and pulverized plant material was subjected to maceration with ethanol followed by partition to obtain the hexanic, dichloromethanic, in ethyl acetate and butanolic fractions. Constituents of the ethanol extract and fractions were identified by high performance liquid chromatography coupled to ultraviolet detector and gas chromatography coupled to mass spectrometry. The total phenols and flavonoids contents were determined by spectrophotometry and the antioxidant activity was evaluated using DPPH, reducing power, β-carotene/linoleic acid co-oxidation system and bioautography assays. The antibacterial activity was investigated by diffusion and microdilution methods. The topical anti-inflammatory activity was evaluated through ear oedema models induced by croton oil, arachidonic acid, phenol, capsaicin, ethyl phenyl propiolate and histological analysis. The results were demonstrated as mean ± standard error. Analysis of variance followed by Tukey or Student-Newman-Keuls test was used to measure the degree of significance of p < 0.05. Quercetin, rutin, kaempferol, apigenin 7-O-β-D-glucoside and luteolin 7-O-β-D-glucoside were identified by HPLC-UV DAD, while -amyrin by GC-MS. The total phenolic content ranged from 3.45 to 25.34 g/100 g, while flavonoids were 0.66 to 23.31 g/100 g. Using the DPPH assay, the values of EC50 ranged from 9.44 ± 0.01 to 57.29 ± 0.11 g/mL and the reducing power assay produced EC50 of 234,22 ± 0,61 and ± 1235.17 ± 1.39. The values of inhibition of lipid peroxidation were between 39,4 and 58,3% and the bioautography assay detected substances with antioxidant activity. The ethanol extract and fractions inhibited the growing of bacteria tested producing bactericidal and bacteriostatic activities. Concentrations of 0.5 and 1.0 mg/ear of the ethanol extract reduced the ear oedema induced by croton oil in 54.85 and 57.11%, while the ear oedema induced by arachidonic acid was inhibited by 41.67, 53.82 and 67.01% at concentrations of 0.1, 0.5 and 1.0 mg/ear, respectively. The phenol-induced oedema was inhibited by 79.73, 33.14 and 33.71% in 0.1, 0.5 and 1.0 mg/ear, respectively. After treatment, 0.1 (43.22%), 0.5 (72.53%) and 1.0 mg/ear (35.16%) of the ethanol extract reduced the ear oedema induced by capsaicin. The phenyl-ethyl propriolato-induced oedema at concentrations of 0.1 (75.00%) 0.5 (69.77%) and 1.0 mg/ear (43.60%) was inhibited. Results from chronic ear oedema test and histological analysis confirmed the effect of the ethanol extract on inhibition of oedema induced by croton oil. The results indicated that B. pinnatum possesses antioxidant, antibacterial and topical anti-inflammatory effects justifying the popular use and highlighting the species as a potential target for the discovery of new therapeutic agents.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-05-09T14:17:11Z No. of bitstreams: 1 romuloaugustodeabreufranchini.pdf: 12314039 bytes, checksum: fcf7a0798691ae32d15114b47607205e (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-05-17T14:14:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 romuloaugustodeabreufranchini.pdf: 12314039 bytes, checksum: fcf7a0798691ae32d15114b47607205e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-17T14:14:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 romuloaugustodeabreufranchini.pdf: 12314039 bytes, checksum: fcf7a0798691ae32d15114b47607205e (MD5) Previous issue date: 2010-08-04 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / O mel é uma mistura complexa constituída de carboidratos, enzimas, aminoácidos, minerais, ácidos orgânicos e flavonóides. Inúmeros trabalhos evidenciam o potencial terapêutico do mel, o qual suas principais propriedades são a atividade antimicrobiana e ação cicatrizante, sendo estas atribuídas a fatores como acidez, osmolaridade, peróxido de hidrogênio (H2O2), catalase e flavonóides. A primeira pesquisa deste trabalho consistiu na determinação da origem floral das amostras de mel, realizada através da análise microscópica do pólen (melissopalinologia). Os espectros demonstraram a variabilidade polínica das amostras escolhidas. Em outro estudo, dois métodos versáteis, envolvendo a espectrofotometria e amperometria, foi aplicado na determinação dos teores de H2O2 em 17 amostras de mel. O H2O2 foi determinado por análise de injeção em fluxo (FIA) e reatores tubulares contendo a enzima peroxidase imobilizada na resina Amberlite IRA-743. A determinação espectrofotométrica baseouse na oxidação do H2O2 pela enzima na presença de fenol e 4-aminoantipirina e o complexo anti-pirilquinonimina gerado, foi proporcional a concentração de H2O2. Na determinação amperométrica, um eletrodo de ouro eletrodepositado com platina, eletrodo de Ag/AgCl(sat) (+ 0,60V) e uma agulha de aço inoxidável foram utilizados como eletrodos de trabalho, referência e auxiliar, respectivamente. O método baseou-se em três medidas no sistema FIA e a diferença entre os sinais revelou a corrente proporcional de H2O2 no mel. Ambos os métodos apresentaram ampla faixa de linearidade (0,5 a 100 µmol L−1) e baixos limites de quantificação e detecção. As concentrações encontradas ficaram entre 4 e 214 µg g-1. A determinação de H2O2 provou a rapidez, exatidão e sensibilidade dos métodos quando associados aos sistemas FIA. Em outro trabalho, um sensor amperométrico para a determinação da catalase (CAT), acoplado ao sistema FIA e reatores tubulares foi desenvolvido. A quantificação fundamentou-se em 2 etapas de injeção: (1) padrão de H2O2 e (2) padrão de H2O2 tratado com a CAT imobilizada na Amberlite IRA-743. A diferença da corrente entre (1) e (2) mostrou o consumo de H2O2 por unidade de enzima imobilizada O mesmo procedimento foi aplicado para as amostras de mel e a linearidade da curva para a determinação da CAT ficou entre 100 e 5000 UI mL-1. Os níveis de CAT variaram de 9 a 99 UI mg-1. Os resultados demonstraram uma boa relação inversa entre os teores de CAT e H2O2. O último estudo avaliou, in vitro, a atividade antibacteriana contra 18 linhagens de bactérias Gram positivas e negativas. O screening antimicrobiano foi determinado aplicando testes de difusão em ágar e diluição em caldo, exibindo as concentrações inibitórias mínimas, conforme recomendações da CLSI. Concentrações de mel variando entre 1 e 30% (v/v) foram estudadas e 5 amostras apresentaram atividade bacteriostática, especialmente contra S. aureus, S. epidermidis e E. coli. Os resultados reforçaram a idéia da utilização do mel como agente antimicrobiano e enfatizaram que o H2O2 não é o único inibidor de crescimento bacteriano, mas sim um dos constituintes com atividade bacteriostática e bactericida. / Honey is a complex mixture of carbohydrates, amino acids, minerals, organic acids and flavonoids. The therapeutic potential of honey is gradually growing and its scientific evidences of effectiveness. Honey has been reported as antimicrobial agent, to promote healing wound and burns and the antibacterial activity is attributed to factors such as acidity, osmolarity, hydrogen peroxide (H2O2), catalase and flavonoids. The first research of this work involved the determination of the floral origin of honey which was achieved by microscopic analysis of the pollen (melissopalynology). The pollen spectrum showed the pollinic variety corresponding to different taxonomic levels. In the other study, two versatile methods involving spectrophotometry and amperometry were applied for the determination of H2O2 in 17 commercial honey samples. H2O2 was determined by flow-injection analysis (FIA) with a tubular reactor containing peroxidase enzyme immobilized on Amberlite IRA-743 resin. The spectrophotometric determination was based on the oxidation of H2O2 by the enzyme in presence of phenol and 4aminoantipirine. The rate of color generation, due to the formation of the antipyrilquinonimine species was proportional to the concentration of H2O2. In the amperometric determination, a gold electrode modified by electrochemical deposition of platinum, an Ag/AgCl(sat) electrode (+ 0.60V) and a stainless steel tube were employed as working, reference and auxiliary electrodes, respectively. This method was based on three measurements in the FIA system and the difference between peaks showed the proportional current of H2O2 in the honey samples. Both methods showed wide linear dynamic range for H2O2 (0.5 to 100 µmol L−1) and low quantification/detection limits. The concentrations found in the analyzed honeys samples were in the range of 4-214 µg g-1 of H2O2. The determination of H2O2 showed the rapidness, accuracy and sensitivity provided by the two methods, while combined with the FIA system. An amperometric sensor for catalase (CAT) detection in association with FIA system and a tubular reactor containing Amberlite IRA-743 was developed. Catalase quantification was based on two injections: (1) H2O2 standard solution and (2) H2O2 standard solution treated with CAT immobilized on Amberlite IRA-743. The difference between the current obtained from (1) and (2) showed the consumption of H2O2 per unit of enzyme immobilized. The same procedure was used to immobilize CAT in honey samples. The linear dynamic range for CAT extends from 100 to 5000 UI mL-1. The levels of CAT vary from 9 to 99 UI mg-1. Taking into account these results, an inverse correlation was obtained between CAT and H2O2 levels. Finally the antibacterial evaluation of honeys samples against 18 bacterial strains including Gram-negative/positive species was studied. The screening of antimicrobial potential was determined using the drop-test agar diffusion and the broth diluiton methods according to the CLSI recommendations. Increasing honey concentrations, varying from 1 to 30% (v/v) were studied and five samples demonstrated bacteriostatic activity against ATCC® S. aureus, S. epidermidis and E. coli bacterial strains. The results of this preliminary study tend to reinforce the use of honey as antimicrobial agent and emphasize that H2O2 is not the only inhibine present in honey, but it is one of the whole group with bacteriostatic and bactericidal activity.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:30:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_giane_silva_linhares.pdf: 488926 bytes, checksum: 2a1b87dca9f0a74faf913e8c6e40713e (MD5) Previous issue date: 2012-12-05 / The incorporation of light-curable resins has been proposed for Mineral Trioxide Aggregate (MTA) to improve its properties and reduce its setting time. The aim of the present study was to assess the pH, calcium-ion release and antibacterial activity of an experimental dual-cure Bis-EMA/MTA-based root-end filling material (E-MTA) in comparison with white-MTA (W-MTA); and to evaluate the influence of the addition of CaCl2 on these properties. Polyethylene tubes filled with the materials were immersed in deionized water for the measurement of pH (digital pH meter) and calcium release (atomic absorption spectrophotometry). The evaluations were performed at 3 and 24 hours and 7, 15 and 30 days. The direct contact test was used for evaluation of antibacterial activity of the materials against E. faecalis 30 min and 24 h after manipulation. All materials presented a variation from an alkaline to nearly neutral pH, and were capable of releasing calcium ions along the 30 days of the study. E-MTA showed a significant lower calcium ion release capacity when compared to W-MTA (P<0.05). The calcium release of E-MTA + 5% CaCl2 was similar to W-MTA (P> 0.05). All materials were 100% effective against E. faecalis at 30 min after manipulation. Reduction in the antibacterial activity was observed for E-MTA with or without the addition of CaCl2 after 24h. The monomer Bis-EMA added to MTA formed a material with lower capacity of calcium release and lower antibacterial activity than W-MTA, in spite of maintaining a similar pH. However, the addition of CaCl2 improved the calcium release of this material / A incorporação de resinas fotopolimerizadas ao agregado de trióxido mineral (MTA) tem sido proposta com o intuito de melhorar as suas propriedades e reduzir o tempo de presa. O objetivo do presente estudo foi avaliar o pH, a liberação de íons cálcio e a atividade antibacteriana de um material retrobturador experimental de polimerização dual a base de Bis-EMA/MTA (MTA-E) em comparação com o MTA-branco (MTA-B); e avaliar a influência da adição de CaCl2 sobre estas propriedades. Tubos de polietileno com os materiais foram imersos em água deionizada. Para medir o pH da água foi utilizado um peagâmetro digital. O cálcio liberado foi determinado pela técnica de espectrometria de absorção atômica. O Teste do Contato Direto foi utilizado para avaliar a atividade antibacteriana dos materiais contra E. faecalis 30 min e 24 h após a manipulação. Todos os materiais apresentaram uma variação de pH de alcalino para quase neutro e foram capazes de liberar íons cálcio durante os 30 dias do estudo. MTA-E mostrou uma capacidade de liberação de íons cálcio significativamente menor que o MTA-B (P<0,05). A liberação de cálcio do MTA-E + CaCl2 5% foi semelhante ao MTA-B (P>0,05). Todos os materiais foram 100% efetivos contra E. faecalis nos 30 minutos após a manipulação. Após 24h uma redução na atividade antibacteriana foi observada para o MTA-E, com ou sem a adição de CaCl2. O monómero Bis-EMA adicionado ao MTA formou um material com baixa capacidade de liberação de cálcio e menor atividade antibacteriana do que MTA-B, apesar de manter um pH semelhante. No entanto, a adição de CaCl2 melhorou a liberação de cálcio deste material