Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-09-24T15:06:55Z No. of bitstreams: 1 Dissertação de Mestrado Paola Cristina Resende Silva.pdf: 1538372 bytes, checksum: 8c68a244d3e53f424ddb574f985bcad8 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-24T15:06:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação de Mestrado Paola Cristina Resende Silva.pdf: 1538372 bytes, checksum: 8c68a244d3e53f424ddb574f985bcad8 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Globalmente, as infecções causadas pelos vírus Influenza constituem um importante desafio para a Saúde Pública. Os vírus Influenza B pertencem à família Orthomyxoviridae, seu genoma viral é constituído por um RNA de fita simples e polaridade negativa. O processo de drift antigênico favorece o contínuo aparecimento de novas variantes virais, o que demanda a reformulação anual da vacina. No início década de 80, foi observada a divergência do vírus Influenza B em duas linhagens antigênica e filogeneticamente distintas: B/Victoria/2/87-like (Vic87) e B/Yamagata/16/88-like (Yam88), que tem co-circulado em diferentes países na última década. O objetivo deste estudo consiste na identificação e caracterização molecular das linhagens de Influenza B circulantes em diferentes regiões brasileiras durante as epidemias de 2004 a 2008, com base no sequenciamento dos genes Hemaglutinina (HA) e Neuraminidase (NA). Ainda, padronizamos a metodologia de Eletroforese em Gel com Gradientes Desnaturantes (DGGE), visando à rápida tipagem dos vírus B. Diferentes substituições nos genes da HA e NA foram encontradas. Evidenciamos a co-circulação de ambas as linhagens no período estudado, contudo, não observamos a ocorrência de rearranjo gênico e nem a emergência de cepas resistentes aos inibidores de neuraminidase, com base nos genes investigados. No período 2006-2008, observamos a adequada concordância entre as cepas circulantes e as cepas vacinais preconizadas para uso no Hemisfério Sul. Entretanto, o mesmo não foi verdadeiro para o período 2004-2005. Finalmente, o protocolo de DGGE desenvolvido pode ser eficientemente utilizado para fins de rápida tipagem das linhagens de Influenza B. Os achados deste estudo contribuem para a melhor compreensão sobre a variabilidade dos vírus Influenza B e os mecanismos envolvidos na sua evolução molecular, bem como o padrão de circulação das linhagens virais no Brasil e sua correspondência com as vacinas para Influenza, anualmente administradas no Hemisfério Sul. Este conjunto de informações são de grande relevância para a contínua adequação e implementação das políticas e estratégias voltadas ao controle e prevenção de infecções por Influenza na nossa população. / Worldwide, Influenza infections are a major Public Health issue. Influenza B virus is classified into the Orthomyxoviridae family, the viral genome consists of a single strand RNA and negative polarity. Because of antigenic drift, novel viral variants are continuously rising, what demands the annual review of vaccine formulation. In the early 80´s, was observed the divergence of Influenza B into two distinct antigenic and phylogenetic lineages – B/Victoria/2/87-like (Vic87) and B/Yamagata/16/88-like (Yam88), was observed. In some countries, these strains have been co-circulating in the last 10 years. The aim of this study was to investigate the circulation patterns of Vic87 and Yam88 among different Brazilian regions during the 2004-2008 epidemics, based on haemagglutinin (HA) and neuraminidase (NA) sequencing. Moreover, a Denaturing Gradient Gel Electrophoresis (DGGE) protocol was standardized for rapid typing of Flu B typing into Yam88-like and Vic87-like strains. Different Aminoacid substitutions in the HA and NA were encountered. Along the studied period, our findings showed that both viral lineages have been co-circulating in Brazil. Moreover, no evidence of reassortant nor NA inhibitor-resistant viruses was found. From 2006 to 2008, an adequate match between vaccine and circulating strains was met. However, it was not true for 2004-2005 years. Finally, our DGGE protocol can be successfully used as a rapid Flu B strain typing test. Our findings contribute for a better figure of Flu B genetic variability and its molecular evolution mechanisms, in addition to the circulation patterns of Flu B lineages in Brazil, and their respective association with the vaccine strains used in the Southern Hemisphere. Altogether, these are pivotal information to continuously tailor and implement Public Health policies on behalf of the control and prevention of Influenza infections.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Background: Seasonal allergic rhinoconjunctivitis or hay fever is caused due to the sensitization to pollen allergens, usually from grasses. Lolium multiflorum (Lm) is one of the most important grass pollen allergens in Southern Brazil. Objectives: To evaluate three different pollen extraction methods and to analyze IgE, IgG1 and IgG4 responses to Lm pollen antigens in pollinosis patients. Methods: Three different Lm pollen extracts were prepared (LmPBS extract, Lme-PBS extract and LmNH4HCO3 extract) and analyzed in 13.5% SDS-PAGE. Serum samples from 62 patients with seasonal allergic rhinoconjunctivitis and/or asthma (Lm+ group), 30 patients with perennial allergy rhinitis (Lm- group) and 30 non-atopic subjects (NA) were tested for IgE reactivity to three Lm extracts by ELISA. Lm-specific IgG1 and IgG4 antibodies were also evaluated by using LmPBS extract only in ELISA. Results: By SDS-PAGE, the three extracts were very similar, showing bands ranging from 20 to 100 kDa. By ELISA-IgE, the results revealed higher IgE levels in pollinosis patients when LmPBS extract was used. LmPBS extract was chosen to evaluate the IgE, IgG1 and IgG4 responses and their levels were higher in the Lm+ patients when compared to Lm and NA groups. In the Lm+ group, IgE (EI = 17.6) levels were higher than IgG1 (EI = 2.6) and IgG4 (EI = 3.6) levels, while in other groups there were not any differences in the antibody levels. Conclusions: LmPBS extract was effective in detecting IgE, IgG1 and IgG4 responses to Lolium multiflorum pollen antigens. These antibody classes are in a higher level in pollinosis patients when compared to non-sensitized subjects. Lm allergen extracts for in vivo and in vitro using should be standardized. / Introdução: A rinite alérgica estacional ou doença polínica se deve à sensibilização aos alérgenos de pólens, geralmente de gramíneas. Lolium multiflorum (Lm) é uma gramínea com pólens de elevado potencial alergênico, sendo a principal gramínea causadora de polinose na região Sul do Brasil. Objetivos: Analisar três diferentes métodos de extração antigênica pela reatividade IgE de cada extrato e as respostas anticórpicas IgE, IgG1 e IgG4 específicas aos antígenos de pólen de Lm. Material e Métodos: Três extratos de pólen de Lm foram preparados (extratos LmPBS, Lme- PBS e LmNH4HCO3) e analisados por SDS-PAGE a 13,5%. Amostras de soro de 62 pacientes com rinite alérgica sazonal e/ou asma brônquica (grupo Lm+), 30 pacientes com rinite alérgica perene (grupo Lm-) e 30 indivíduos não-atópicos (grupo NA) foram testadas para a reatividade IgE frente aos três extratos por ELISA. Anticorpos IgG1 e IgG4 específicos a Lm foram avaliados empregando-se somente o extrato LmPBS, por ELISA. Resultados: O perfil protéico dos extratos foi muito semelhante por SDS-PAGE, apresentando bandas protéicas de 20 a100 kDa. Níveis de IgE foram maiores em pacientes com polinose ao se utilizar o extrato LmPBS. O extrato LmPBS foi utilizado para avaliar os níveis de IgE, IgG1 e IgG4, que foram maiores nos pacientes com polinose que em pacientes Lm- e indivíduos NA. No grupo Lm+, os níveis médios de IgE (IE = 17,6) foram maiores que os níveis de IgG1 (IE = 2,6) e IgG4 (IE = 3,6) (p < 0,001). Conclusões: O extrato LmPBS foi eficiente em detectar as respostas IgE, IgG1 e IgG4 a antígenos de pólen de Lm. Essas classes de anticorpos estão em níveis maiores em pacientes com polinose. Extratos antigênicos de Lm para uso in vivo e in vitro devem ser padronizados. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Submitted by Hellen Luz (hellencrisluz@gmail.com) on 2017-07-19T15:08:15Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_CaracterizacaoAntigenicaFisico.pdf: 2287602 bytes, checksum: 6ff5a42c9828655cb42af31bca8866f2 (MD5) / Approved for entry into archive by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2017-07-21T14:35:16Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_CaracterizacaoAntigenicaFisico.pdf: 2287602 bytes, checksum: 6ff5a42c9828655cb42af31bca8866f2 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-21T14:35:16Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_CaracterizacaoAntigenicaFisico.pdf: 2287602 bytes, checksum: 6ff5a42c9828655cb42af31bca8866f2 (MD5) Previous issue date: 2014-03-26 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O vírus BE AR 701405 foi obtido de um lote de mosquitos da espécie Psorophora (Jan.) ferox, capturados em Altamira, estado do Pará, no ano de 2006. O objetivo deste estudo foi caracterizar físico-química, biológica e antigenicamente o vírus BE AR 701405, com o objetivo de obter dados que auxiliassem sua classificação taxonômica. Camundongos recém-nascidos manifestaram alterações neurológicas, como tremores e ausência de coordenação motora, após a infecção pelo vírus BE AR 701405. O vírus praticamente não determinou efeito citopático (ECP) nas células de Aedes albopictus, clone C6/36, entretanto, causou ECP em células Vero com aproximadamente 48 horas pós- infecção. O título do vírus obtido foi de 10-4,1 DL50/ 0,02 mL e o título após a ação do DCA foi de 10−2,6 DL50/0,02 mL. O vírus BE AR 701405 reagiu antigenicamente com o soro hiperimune do Virus Pixuna. Portanto, o vírus BE AR 701405 é sensível ao DCA o que indica que é um vírus envelopado. Ele é um membro do grupo antigênico A, do gênero Alphavirus, família Togaviridae, relacionado ao Virus Pixuna. Camundongos recém-nascidos e células Vero e C6/36 são suscetíveis à infecção pelo vírus BE AR 701405. Estudos posteriores são necessários para esclarecer o relacionamento antigênico do vírus BE AR 701405 com o Virus Pixuna. / The BE AR 701405 virus was isolated from a pool of Psorophora (Jan.) ferox mosquitoes captured in the municipality of Altamira, Para state, Northern Brazil, in 2006. The objective of this study was the physicochemical, biological and antigenic characterization of the BE AR 701405 virus in order to provide data for it taxonomic classification. Newborn mice inoculated by intracerebral route showed evidences of neurological manifestations, such as chill and motor disorders after the infection with the virus BE AR 701405. Cytophatic effect (CPE) was in infected Aedes albopictus C6/36 cells was not clearly observed, however in VERO cells CPE was observed after 48 hors post infection. The virus load was determined in 10-4,1 LD50/ 0.02 mL and the titer after DCE analysis was calculated in 10−2,6 LD50/0,02 mL. The BE AR 701405 virus reacted antigenically with Pixuna virus hiperimmune serum. In conclusion, the studied vírus was sensible to the DCA solvent suggesting that it is an enveloped virus. Furthermore, by serology this virus was identified as a member of the group A, genus Alphavirus, family Togaviridae, more closely related to Pixuna virus. In addition, newborn mice, as well as C6/36 and VERO cells demonstrated to be sensible to the infection by the BE AR 701405 vírus. Further studies are needed to better understand the antigenic relationship between the BE AR 701405 virus and Pixuna virus.