Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-04-24T13:03:47Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese - Andréa F. Grava.pdf: 2269814 bytes, checksum: 93a2229b90f5c8d077e8753c3fe82db6 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-04-24T13:04:05Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese - Andréa F. Grava.pdf: 2269814 bytes, checksum: 93a2229b90f5c8d077e8753c3fe82db6 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-04-24T13:04:25Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese - Andréa F. Grava.pdf: 2269814 bytes, checksum: 93a2229b90f5c8d077e8753c3fe82db6 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-24T13:04:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese - Andréa F. Grava.pdf: 2269814 bytes, checksum: 93a2229b90f5c8d077e8753c3fe82db6 (MD5) Previous issue date: 2014-12-11 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Malaria is a parasitic disease with the highest number of hospitalizations and deaths each year worldwide, one of the major public health problems in Africa, South America and East Asia. According to estimates by the World Health Organization, 198 million people became ill in 2014. This evidence led to the development of new strategies for the treatment of malaria in order to minimize the growing problem of parasite resistance to commonly used medicinal products. With the elucidation of metabolic pathways essential for some of the malaria parasite development, new molecular targets have been proposed for the development of new drugs, among which can be cited Hypoxanthine Guanine Phosphoribosyltransferase (HGPRT) Chorismate synthase, enoyl-ACP reductase and purine nucleoside phosphorylase (PNP). Objective: The objective of this study was the identification of compounds as potential inhibitors of beta-ketoacyl-ACP reductase enzyme - OAR Plasmodium falciparum. Results: The 28kDa enzyme was expressed in Escherichia coli and purified by affinity chromatography. Searches of new molecules through Sceenning by Virtual Docking were able to find 30 molecules of which was selected Skyrin molecule due to its higher affinity for the enzyme OAR. Analysis of enzyme activity by spectrophotometry using NADPH and acetoacetyl-CoA substrates the enzyme showed activity OAR reducing NADPH in the various substrates concentrations, and was shown to be inhibited by Skyrin. It was also possible to show by surface plasmon resonance (SPR) Skyrin that the molecule binds to the enzyme OAR but dissociates easily.In tests using cell cultures infected with P. falciparum this molecule showed antimalarial activity with IC50 8,88μg / ml, and is not toxic to HepG2 cell line. Conclusion:This new approach has significant advantages compared to traditional methods, since it establishes in advance the specific bioactive and its mechanism of action. Ideal targets for the development of antimalarial drugs against infectious agents must be essential to the survival of the pathogen and the host is absent. / A Malária é a doença parasitária com maior número de internações e mortes por ano em todo o mundo, sendo um dos maiores problemas de saúde pública na África, América do Sul e Ásia Oriental. Segundo estimativas da Organização Mundial de Saúde, 198 milhões de pessoas ficaram doentes em 2014. Essas evidências levaram ao desenvolvimento de novas estratégias para o tratamento da malária a fim de minimizar o crescente problema da resistência do parasita aos medicamentos de uso corrente. Com a elucidação de algumas Vias Metabólicas essenciais para do desenvolvimento do parasita da malária, novos alvos moleculares foram propostos para o desenvolvimento de novas drogas, entre eles pode-se citar a Hipoxantina Guanina Fosforribosiltransferase (HGPRT), Corismato sintase, Enoil –ACP redutase e a Fosforilase de nucleosídeos purínicos (PNP). Objetivo: O objetivo desse estudo foi a identificação de compostos como possíveis inibidores contra a enzima Beta-cetoacil- ACP- redutase - OAR de Plasmodium falciparum. Resultados: A enzima de 28kDa, foi expressa em Escherichia coli e purificada através de cromatografia de afinidade. Buscas de novas moléculas através de Sceenning Virtual por Docking foram capazes de encontrar 30 moléculas das quais foi selecionada a molécula Skyrin por apresentar maior afinidade pela enzima OAR. Análise da atividade enzimática por espectrofotometria utilizando os substratos NADPH e Acetoacetil-COA a enzima OAR apresentou atividade reduzindo NADPH, em concentrações dos substratos variadas, e mostrou ser inibida por Skyrin. Foi possível mostrar também por Ressonância Plasmônica de Superfície (SPR) que a Skyrin liga-se à enzima OAR porém dissocia-se facilmente. Em testes utilizando-se culturas celulares infectadas com P. falciparum essa molécula apresentou atividade antimalárica com IC50 de 8,88μg/mL, não sendo tóxica para a linhagem celular HepG2. Conclusão: Esta nova abordagem apresenta vantagens significativas quando comparada aos métodos tradicionais, uma vez que se estabelece antecipadamente a especificidade do bioativo e respectivo mecanismo de ação. Alvos ideais para o desenvolvimento de fármacos contra agentes infecciosos antimaláricos devem ser essencial para a sobrevivência do patógeno e estar ausente no hospedeiro.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-02-07T14:38:07Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação_Abraão A. Souza.pdf: 4231973 bytes, checksum: 97fb2c81095059bc1c846eceee721fdf (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-02-07T14:38:20Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação_Abraão A. Souza.pdf: 4231973 bytes, checksum: 97fb2c81095059bc1c846eceee721fdf (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-07T14:38:20Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação_Abraão A. Souza.pdf: 4231973 bytes, checksum: 97fb2c81095059bc1c846eceee721fdf (MD5) Previous issue date: 2016-04-20 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Malaria is one of the most important endemic diseases in tropical regions whose treatment is based on substances discovered from plants traditionally used in folk medicine. Thus, faced with the resistance of the parasite (Plasmodium spp.), The search for new drugs has become fundamental. Among the bioactive substances of plant species, terpenoids have a range of biological activities, among which antimalarial. Therefore, the objective of this research was the isolation of substances with antimalarial potential. The species that are indicated as antimalarial and that was used in the present study is easily found and is also cultivated in the State of Amazonas in EMBRAPA and INPA: 'sacaca' (Croton cajucara Benth). Croton cashews and leaves of Benth (Euphorbiaceae) were submitted for the preparation of bioactive extracts, with relevance in the antimalarial activity. In the in vitro bioassay of the P. falciparum K1 strain, IC50 = 6.4 ± 1.2 μg / mL, followed by the ethanolic extract of the bark, with IC 50 = 17.2 ± 6.6. The extracts were investigated by means of a traditional phytochemical approach, based on the open column chromatographic fractionation, resulting in the isolation of seven substances. Natural substance 1 was acetylated in a reaction of acetic anhydride (Ac 2 O) and pyridine (C 5 H 5 N), resulting in compound 2. These eight compounds were identified primarily by 1 H and 13 C 1 D and 2 D and CL-EMAR NMR analyzes. The results showed that only three compounds had inhibition above 50% (1, 2 and 6), but the compound (1) and (2) 6) showed better activity by inhibiting more than 80% of in vitro growth of P. falciparum strain K1: 70.5-68.0 (1); 63.9-55.6 (2); 57.6-0 (3); 41.8-37.2 (4); 18.6-23.2 (5); 92.7-75.6 (6); 34.9-23.2 (7) and 37.2-11.6 (8). 1 and 6 had their IC50 calculated, where they presented moderate in vitro activity against P. falciparum strain, with IC 50 = 23.7 and 23.0 μg / mL, respectively. Compound 1 was the only one to be tested in vivo, however it did not show activity against P. berghei, orally and subcutaneously during the seven day treatment period. / A malária é uma das doenças endêmicas mais relevantes nas regiões tropicais cujo o tratamento está baseado em substâncias descobertas a partir de plantas utilizadas tradicionalmente na medicina popular. Assim, diante da resistência do parasita (Plasmodium spp.), a busca por novas drogas se tornou fundamental. Entre as substâncias bioativas de espécies vegetais, os terpenóides apresentam-se com uma gama de atividades biológicas, dentre as quais se destacam a antimalárica. Diante disso, esta pesquisa teve por objetivo o isolamento de substâncias com potencial antimalárico. A espécie que têm indicação como antimalárica e que foi utilizada no presente estudo é facilmente encontrada e além disso é cultivada no Estado do Amazonas na EMBRAPA e INPA: ‘sacaca’ (Croton cajucara Benth). As cascas e folhas de ‘sacaca’ Croton cajucara Benth (Euphorbiaceae) foram submetidos para preparo de extratos bioativos, com relevancia na atividade antimalárica. Onde se observou boa atividade do extrato clorofórmico das folhas no bioensaio in vitro frente a cepa K1 de P. Falciparum, com CI50 = 6,4 ± 1,2 µg/mL, seguida do extrato etanólico das cascas, com CI50 = 17,2 ± 6,6. Os extratos foram investigados por meio de uma abordagem fitoquimica tradicional, baseada no fracionamento cromatografico em coluna aberta, resultando no isolamento de sete substâncias. A substancia natural 1 foi acetilado numa reação de anidrido acetico (Ac2O) e piridina (C5H5N), resultando no composto 2. Estes oito compostos foram identificados principalmente por meio de análises de RMN 1H e 13C 1D e 2D e CL-EMAR. Em seguida as oito substâncias passaram por screening para avaliar suas atividade antiplasmódica em duas concentrações (50 e 5 µg/mL): Os resultados revelam que apenas três compostos apresentaram inibição acima de 50% (1, 2 e 6), mas o composto (6) apresentou melhor atividade ao inibir mais de 80% do crescimento in vitro da cepa K1 de P. Falciparum: 70,5-68,0 (1); 63,9-55,6 (2); 57,6-0 (3); 41,8-37,2 (4); 18,6-23,2 (5); 92,7-75,6 (6); 34,9-23,2 (7) e 37,2-11,6 (8). O 1 e 6 tiveram suas CI50 calculadas, onde apresentaram atividades moderadas in vitro contra cepa de P. Falciparum, com CI50= 23,7 e 23,0 µg/mL, respectivamente. O composto 1 foi o unico a ser testado in vivo, no entanto não apresentou atividade frente ao P. berghei, por via oral e subcutânea durante o período de sete dias de tratamento

Orientador: Fabio Trindade Maranhão Costa / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-23T23:10:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Leite_JulianaAlmeida_D.pdf: 9218064 bytes, checksum: c5126692d8ce8a22660fbf8604dae7ef (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O resumo poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The complete abstract is available with the full electronic document. / Doutorado / Imunologia / Doutora em Genética e Biologia Molecular