Las apolipoproteínas más abundantes de HDL son la apoA-I y la apoA-II. La concentración plasmática de apoA-I está inversamente relacionada con el riesgo de enfermedad coronaria y su papel en las HDL es bien conocido. La apoA-I tiene un papel estructural muy importante en HDL, interacciona con receptores de HDL provocando el eflujo de colesterol de membranas celulares y es cofactor de la LCAT. En cambio, el papel que juega la apoA-II en el metabolismo lipoproteico y en el desarrollo de la arteriosclerosis es menos conocido. La línea de ratones transgénicos con más expresión de apoA-II humana (línea 11.1) alimentada con dieta aterogénica desarrolla hiperlipemia combinada, deficiencia de HDL y aumento notable de susceptibilidad a la arteriosclerosis. Los ratones transgénicos de apoA-II humana de la línea 11.1 presentaron un gran aumento del área de tinción para epítopos derivados de oxidación en estas lesiones respecto de los controles. En el estudio de las propiedades antioxidantes de las HDL de los ratones 11.1, éstas presentaron una menor capacidad de protección frente a la oxidación de lipoproteínas con apoB, que las HDL de ratones controles y que los transgénicos 25.3 (baja expresión de apoA-II). Las HDL de los ratones transgénicos 11.1 presentaron una composición alterada con gran cantidad de apoA-II humana, y disminución de apoA-I, PON1 y PAF-AH, que probablemente explican la menor protección frente a la oxidación que proveen estas HDL. Estos cambios en las partículas de HDL no son debidos a cambios en la transcripción de los genes de apoA-I, PON1, PAF-AH, LCAT. Sin embargo, en ensayos in vitro se comprobó que la apoA-II humana es capaz de desplazar la PON1 de la partícula de HDL. La alteración en la capacidad antioxidante de las HDL de transgénicos 11.1 explica, al menos en parte, la susceptibilidad a la arteriosclerosis aumentada en estos animales en dieta aterogénica. En el estudio de la capacidad de estas HDL de realizar transporte reverso de colesterol, los resultados mostraron que, a pesar de la deficiencia parcial de HDL que presentan, los ratones transgénicos 11.1 no mostraron una alteración importante en el ritmo de transporte reverso de colesterol específico de macrófagos, respecto de los ratones controles. Así pues, la susceptibilidad a la arteriosclerosis en ratones transgénicos 11.1 alimentados con dieta aterogénica, no parece ser atribuible a una disminución del transporte reverso de colesterol específico de macrófagos. / ApoA-I and apoA-II are the most abundant apolipoprotein in HDL. ApoA-I plasma concentration is inversely related to coronary artery disease risk and its role in HDL is well known. ApoA-I has a very important structural role in HDL, it binds to HDL receptors triggering cholesterol efflux from cell membranes and is LCAT cofactor. However, the role of apoA-II in lipoprotein metabolism and atherosclerosis development is less known.The high expressor human apoA-II transgenic mice (line 11.1) challenged with atherogenic diet develops combined hiperlipidemia, HDL deficiency and high atherosclerosis susceptibility. Line 11.1 mice showed a dramatic increase in staining area for oxidation-derived epitopes in aortic lesions, compared to control mice. HDL from 11.1 line presented impaired ability to protect apoB lipoprotein against oxidation when compared to control and 25.3 mouse line (low human apoA-II expressor). HDL from 11.1 mice showed an altered composition with high quantities of human apoA-II, low apoA-I, PON1 and PAF-AH, that likely accounts for the impaired protection against oxidation found in these mice. However, these changes are not due to changes in transcription of apoA-I, PON1, PAF-AH or LCAT genes. On the other hand, human apoA-II is able to displace PON1 from the HDL particle, as shown by in vitro assays. Impairment of antioxidant ability of HDL from 11.1 transgenic mice could explain, at least in part, the enhanced atherosclerosis susceptibility found in these animals in atherogenic diet.In the study of the ability of HDL from 11.1 transgenic mice to carry out reverse cholesterol transport, the results showed that, despite their HDL deficiency, 11.1 transgenic mice did not presented an altered flux in macrophage-specific reverse cholesterol transport. Therefore, the enhanced atherosclerosis susceptibility of 11.1 transgenic mice does not seem attributable to an impaired macrophage-specific reverse cholesterol transport.

Orientador: Joyce Maria Annichino-Bizzacchi, Valder Roberval Arruda / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-12T11:25:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fabri_DanielaRamos_D.pdf: 28613634 bytes, checksum: 506450d54c214e02520051f098953569 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: As complicacoes associadas a aterosclerose sao as causas mais comum de morte na populacao ocidental. O entendimento da aterosclerose como uma doenca inflamatoria e a associacao da coagulacao com fenomenos inflamatorios e complicacoes da doenca arterial oferecem novas oportunidades de prevencao e tratamento.Estudos populacionais demonstraram que o risco de infarto agudo do miocardio esta reduzido em 80% em homens hemofilicos A (HA) se comparados com controles pareados em idade e sexo. No entanto, lesoes ateroscleroticas iniciais foram identificadas em pequenos grupos de pacientes com coagulopatias por estudo ultrassonografico de arterias carotida e femural de forma semelhante aos controles pareados.O objetivo deste estudo e determinar o papel dos fatores VIII e IX dacoagulacao no desenvolvimento da doenca aterosclerotica em dois diferentesmodelos animais de dilipidemia. Comparamos grupos de animais deficientes deFVIII (HA) ou animais deficientes de FIX (HB) deficientes apoliproteina E (APOE-/-) ou deficientes de receptores de lipoproteina de baixa densidade (LDLR-/-) comanimais hemostaticamente normais deficientes apenas de apoE (APOE-/-) ou deLDLR (LDLR-/-). Todos animais da linhagem C57Bl/6, pareados em sexo e idade.Nossos resultados sugerem que o FVIII tem um papel protetor e tempodependente no desenvolvimento da aterosclerose nos animais deficientes de apoE, independente dos seus elevados niveis de colesterol. No entanto, essaprotecao nao foi evidente nos animais LDLR-/-.A deficiencia severa do FIX (<1%) nao protegeu contra o desenvolvimento da aterosclerose. Surpreendentemente, estes animais apresentaram significantemente mais lesoes nos periodos mais tardios nos dois modelos de doenca aterosclerotica utilizados. Os animais HB/APOE-/- apresentaram altos indices de mortalidade a partir de 20 semanas do periodo de dieta. Os elevados niveis de FIX nao influenciou o desenvolvimento da doenca arterial nos modelos apoE, mas mostrou-se como fator de risco para trombose venosa.Este estudo demonstra que o FVIII e o FIX tem papeis heterogeneos na evolução da aterosclerose, sugerindo participacao em mecanismos independentes ao da coagulacao no desenvolvimento da doenca arterial, e novos estudos devem ser realizados visando novas possibilidades terapeuticas tambem para os pacientes hemofilicos de idade mais avancada com risco de doenca cardiovasculares. / Abstract: Complications of atherosclerosis are the most common causes of death in Western societies. The knowledge that atherosclerosis is an inflammatory disease and coagulation affects the disease's complications offers new opportunities for prevention and treatment. Population studies demonstrated that the risk for myocardial infarction is reduced by 80% among hemophilia A (HA) men compared to age and gender-matched controls. However, early atherosclerotic lesions were readily identified in small cohorts of adults HA and hemophilia B (HB) by ultrasonography of carotid and femoral arteries in a similar fashion to an agecontrol male group. Here we sought to determine the role of FVIII and FIX on the development of atherosclerosis in two different mouse models. We compared a group of FVIII (HA) or FIX deficient mice (HB) lacking the low-density lipoprotein receptor (LDLR- /-) or apolipoprotein E (APOE-/-) with hemostatically normal littermate controls lacking either LDLR (LDLR-/-) or apoE (APOE-/-). All mice were on C57Bl/6 background and all groups were matched for gender and age. Our results suggest that FVIII has a protective and time dependent effect on development of atherosclerosis in apoE deficient mice, independently of higher cholesterol levels. Notably, FVIII deficiency did not influence the vascular disease of LDLR-/- mice. Severe FIX deficiency (<1% of normal) did not protect against the development of atherosclerosis. Unexpectedly, the rates of lesions were higher at late time points in the APOE-/- model. In addition, high levels of FIX was did not influence the vascular disease in APOE-/- whereas venous thrombosis was documented in 3/6 mice. Moreover, in the HB/APOE-/- model, the rates of atherosclerosis were higher at week 22 and beyond this age these mice presented high rates of mortality than controls. These data demonstrate that FVIII and FIX play a rather heterogeneous role in the development of atherosclerosis which suggest that there are coagulation independent mechanisms in the development of vascular diseases. Further studies in hemophilia B subjects and carriers are warranted to define the FIX effect on the onset and progression of occlusive vascular disease which may raises concerns on the onset cardiovascular risks on an aging hemophilia population. / Doutorado / Doutor em Clínica Médica

Objetivo: Evaluación de la prótesis de Bryan como alternativa a la artrodesis en el tratamiento de la espondilosis cervical. Materiales y métodos: 54 pacientes consecutivos con radiculopatía o mielopatía fueron intervenidos quirúrgicamente de discectomía cervical con implantación de la prótesis discal cervical. Dichos implantes presentan medidas variables que van de 14 a 18 mm. El seguimiento se realizo a las seis semanas, seis meses y un ano y consistió en una evaluación del dolor (VAS), la SF-36 y el "neck dissability index" (NDI). Los resultados totales fueron combinados para obtener un resultado clínico basado en los criterios de Odom (excelente, bueno, aceptable y malo). La evaluación radiológica consistió en el análisis del movimiento así como de la estabilidad y la subsidencia de la prótesis. Este análisis se realizo a través de un radiólogo independiente. Además estudiamos la asociación de un marcador genético como la apolipoproteína "e4" como factor de riesgo en pacientes intervenidos de espondilosis cervical mielopática.Resultados: Habían 33 varones y 21 hembras. La edad media fue de 47.8 años (DE=10.9). Se observo una diferencia estadísticamente muy significativa comparando los controles preoperatorios con los postoperatorios en las tres escalas de resultados. : VAS (Z=7.1, p<0.0001), SF36MCS (Z=-5.9, p<0.0001), SF36PCS (Z=-5.8, p<0.0001) y NDI (Z=7.8, p<0.0001). Del mismo modo se observo una diferencia estadísticamente significativa entre la edad y los resultados quirúrgicos; la edad y la estancia intrahospitalaria; la presentación clínica y la duración de los síntomas y con la duración de los síntomas y los resultados quirúrgicos.Los pacientes con el genotipo de la apolipoproteina e4 debutaron a una edad mas temprana (Edad media 49 años) versus 59 años en el grupo restante (t-test p<0.05). Los pacientes con el alelo e4, obtuvieron peores resultados postoperatoriamente, según las escalas de resultados: Prueba del caminar, (_2 p<0.01), EMS (t-test p<0.009), JOA (t-test p<0.03), Nurick's class (_2 p< 0.02), Ranawat class (t-test p<0.03 CME. Además, aquellos con el gen de la Apo "e4" parecen sufrir una progresión de la enfermedad más rápidamente según las prueba del caminar (_2 p< 0.03) y Nurick's' class (_2 p< 0.05).Aquellos pacientes con el gen de la apolipoproteína "e4" tenían una compresión medular menor que aquellos sin el gen de la Apo "e4" (__, P<0.01)Conclusiones: La prótesis de Bryan ha demostrado ser fiable y seguirá en el tratamiento de los pacientes aquejados de espondilosis cervical. A pesar de ello, para obtener resultados mas objetivos que sean capaces de determinar que la artroplastia es superior a la artrodesis a corto y largo plazo, nosotros proponemos el estudio CEDRIC, que consiste en un estudio prospectivo , randomizado con randomización intraoperativa bien a artroplastia o a artrodesis mediante caja íntersomática. / Objective: Evaluation of the Bryan disc arthroplasty as an alternative to arthrodesis in the treatment of cervical spondylosis.Material and methods: 54 consecutive patients with either radiculopathy or myelopathy had a cervical discectomy with implantation of the cervical disc prosthesis. The implants have a variable measure from 14 to 18 mm of diameter. Follow-up was arranged at 6 weeks, 6 months and 1 year and included Visual Analogue Scale (VAS), the Short Form 36 (SF 36) and the Neck disability index (NDI). The results were categorized according to the modified Odom's criteria: excellent, good, fair and poor. Radiological evaluation looked at movement, stability and subsidence of the prosthesis, by an independent radiologist. We also studied the presence of a genetic marker "apolipoprotein e4" as a risk factor in the outcome of cervical spondylotic myelopathy. Results: There were 33 male and 21 female. The mean age was 47.8 years (SD=10.9). A highly significant difference was found for all 3 outcome measures comparing the preoperative with the post-operative follow-up values: VAS (Z=7.1, p<0.0001), SF36MCS (Z=-5.9, p<0.0001), SF36PCS (Z=-5.8, p<0.0001) and NDI (Z=7.8, p<0.0001). There were also found statistical significance between age and surgical outcome; age and hospital stay; clinical presentation and duration of symptoms and duration of symptoms with surgical outcome.Patients with apolipoprotein e4 genotype presented with the disease earlier (mean age 49 years) versus 59 years in the rest of the group (t-test p< 0.05). Patients with positive Apo e genotype had poorer outcome at six months of surgery as seen with: walking test (_2 p<0.01), EMS (t-test p<0.009), JOA (t-test p<0.03), Nurick's class (_2 p< 0.02), Ranawat class (t-test p<0.03). Those patients with Apo e4 allele also seemed to suffer from further progression of the disease earlier as one year outcomes were worse for walking test (_2 p< 0.03) and Nurick's' class (_2 p< 0.05)Radiological analyses revealed that those individuals with Apo E4 allele were rendered myelopathic with less compression than those without the gene. (_2 p< 0.01)Conclusion: The Bryan cervical disc replacement has shown to be reliable and safe for the treatment of patients with cervical spondylosis. However in order to find objective results which will determine if the arthroplasty is better than arthrodesis in the short and the long term, we propose the CEDRIC trial, which consists in a prospective randomized clinical trial with intraoperative randomization to either an artificial disc or a interbody cage.

El selenio es un nutriente esencial para los seres vivos. Recientemente se ha demostrado que la selenometilselenocisteína, forma orgánica de selenio, presenta efectos quimiopreventivos en cáncer de colon, pulmón, próstata y mama. Dado esto, se hace necesaria la identificación de biomarcadores capaces de indicar el estado funcional de selenio. Mediante el uso de una aproximación proteómica en un modelo animal, se han determinado dos posibles bioindicadores. Ellos son las proteínas Transtiretina (TTR) y Apolipoproteína E (ApoE). Ambos presentaron un aumento en su expresión proporcional a la ingesta de selenometilselenocisteína. El presente trabajo de título pretende determinar las propiedades fisicoquímicas, peso molecular (PM), punto isoeléctrico (pI) e hidrofobicidad superficial promedio (HSP) de estos bioindicadores y estudiar un método de purificación preeliminar para la Transtiretina. Para la determinación del PM y pI, se desarrollaron técnicas de SDS-PAGE e IEF en el equipo PhastSystem, escogido por su elevada sensibilidad de detección. Dado que esto fue infructuoso, se obtuvieron las propiedades desde geles bidimensionales realizados por la Profesora Andrea Mahn. Así, se estimó que el PM para TTR es de 13 KDa y el de ApoE 20 KDa, mientras que el pI de TTR se encuentra entre 5,6 a 6,0 y el pI de ApoE entre 5,0 y 5,6. Para estimar la hidrofobicidad superficial promedio, obtenida como la contribución de todos los aminoácidos expuestos en la superficie de la proteína, se utilizaron las estructuras disponibles en bases de datos para TTR y se construyeron modelos para ApoE. Como resultado del modelamiento por homología utilizando el programa MODELLER se obtuvieron dos modelos ligeramente diferentes para la estructura tridimensional de ApoE. Ambos presentan más del 90% de los aminoácidos en las zonas permitidas del gráfico de Ramachandran, además otros parámetros evaluados también resultaron ser positivos. Así, se concluye que los modelos presentan buenas probabilidades de asemejarse a la estructura real de la proteína. Finalmente, se obtuvo que la hidrofobicidad superficial promedio para TTR es de 0,24 ± 0,01 y de 0,33 ± 0,02. Como proceso de purificación de TTR, se postularon dos etapas. La primera corresponde a un sistema de dos fases acuosas (ATPS) formados por PEG-1000 y Fosfato, cuyo largo de línea de equilibrio fuera de 45, y la segunda etapa corresponde a la aplicación de una muestra tomada de la fase inferior del ATPS a una resina de afinidad usando como ligado tiroxina. Como resultado, se obtuvo un ATPS capaz de remover proteínas de elevado peso molecular y parcialmente albúmina (migran preferentemente hacia la fase superior) desde muestras de suero de rata, de manera reproducible. Se postula que TTR migra preferentemente hacia la fase inferior, sin embargo sería necesario realizar a futuro ensayos Western Blot o espectrometría de masa para comprobarlo. Con respecto a la cromatografía de afinidad realizada, tampoco es posible asegurar concluyentemente que TTR queda adsorbida o no en la matriz, sin embargo los resultados presentan algunos indicios positivos, cuyo análisis en profundidad permitiría determinar si los resultados obtenidos fueron positivos o no.

Introdução: A lipoproteína de baixa densidade (LDL) e suas formas oxidadas (LDLox) possuem múltiplas propriedades aterogênicas, atuando na deposição de colesterol, indução e manutenção da inflamação, disfunção endotelial, surgimento de células espumosas na parede arterial e conseqüente formação da placa de ateroma. Adicionalmente, LDLox induz apoptose de células endoteliais humanas (HMEC). A lipoproteína de alta densidade (HDL) possui inúmeras atividades antiaterogênicas, incluindo ações antioxidante, anti-inflamatória e anti-trombótica. A HDL é capaz de proteger as HMEC contra apoptose. As subfrações de HDL (sHDL) são heterogêneas em sua composição físico-química e atividades biológicas. A atividade antioxidante das sHDL aumenta com a densidade (HDL2b<HDL2a<HDL3a<HDL3b <HDL3c) e está deficiente em pacientes com SMet. Contudo, a heterogeneidade da atividade anti-apoptótica das sHDL é ainda desconhecida. Objetivos: (i) avaliar a heterogeneidade da atividade protetora das sHDL de indivíduos normolipidêmicos (n=7) e de pacientes com SMet (n=16) contra apoptose de HMEC induzida por LDLox; (ii) definir os mecanismos moleculares envolvidos nesta atividade. Métodos: Através de ultracentrifugação por gradiente de densidade, isolamos cinco diferentes sHDL. HMEC foram incubadas com LDLox (200 ?g apoB/ml) na presença ou não das sHDL (5-100 ?g proteína/ml). Os marcadores de toxicidade (MTT) e de apoptose celular (microscopia de fluorescência, marcagem com anexina V, cit c, AIF, degradação Bid, atividade caspase-3 e fragmentação do ADN) foram analisados. Resultados: Todas sHDL protegeram as HMEC contra a toxicidade e apoptose induzidas pela LDLox. Com mesma concentração de proteína, as subfrações HDL3c (60% proteção - MTT - e >100% - anexina V) e 3b (43% e 67%, respectivamente) de indivíduos normolipidêmicos apresentaram atividade anti-apoptótica mais potente do que as subfrações HDL2a (29% e 28%; p<0,01 vs. HDL3c, respectivamente) e 2b (25% e 62%; p<0,001 vs. HDL3c, respectivamente). Todas sHDL reduziram geração de espécies reativas de oxigênio (ROS) induzida pela LDLox, sendo a HDL3c (54%) mais potente do que HDL2b (21%; p<0.05 vs. HDL3c). Houve correlação positiva entre as atividades anti-apoptótica e antioxidante intracelular com conteúdo de apoA-I e esfingosina 1-fosfato (E1F) das sHDL, senda HDL3b e 3c ricas em E1F. A atividade anti-apoptótica da E1F e das sHDL parece depender da interação com as células endoteliais via apoA-I e seu receptor SR-BI. Finalmente, as HDL3c (n=5) isoladas de pacientes com SMet possuem conteúdo significativamente menor de apoA-I e reduzida atividade anti-apoptótica (60%, p<0,01), quando comparada aos controles normolipidêmicos (n=5). Houve tendência à diminuição da proteção contra a geração de ROS (SMet, n=10). Conclusão: As subfrações HDL3c protegem de forma potente as células endoteliais humanas contra toxicidade e apoptose induzidas pela LDLox, assim como contra geração de ROS. Esta atividade antiapoptótica está reduzida na SMet. / Background: Low density lipoprotein (LDL) and its oxidized forms (oxLDL) have several atherogenic properties, including cholesterol deposition, inflammation, endothelial dysfunction and foam cell formation on the arterial wall, leading to atherosclerotic plaque development. In addition, oxLDL induces human endothelial cell apoptosis (HMEC). High-density lipoprotein (HDL) has number of antiatherogenic activities, as antioxidative, anti-inflammatory and anti-thrombotic actions. HDL displays anti-apoptotic activity and is able to protect endothelial cells against oxLDL-induced apoptosis. HDL subfractions (sHDL) are highly heterogeneous in their physical and chemical composition and biological functions. Antioxidative activity of HDL subfractions increases with increment in density, HDL2b<HDL2a<HDL3a<HDL3b <HDL3c. Important, HDL subfractions from subjects with metabolic syndrome (MetS), display a significantly lower antioxidative activity as compared to healthy controls. However, the heterogeneity of their anti-apoptotic activity was not demonstrated. Objectives: (i) to evaluate the heterogeneity of antiapoptotic activity of sHDL from normolipidemic controls (n=7) and MetS patients (n=16) towards oxLDL-induced apoptosis of HMEC; (ii) to define molecular mechanisms involved in this anti-apoptotic action. Methods: Five major sHDL were fractionated by density gradient ultracentrifugation. HMEC were incubated with mildly oxLDL (200 ?g apoB/ml) in the presence or absence of each sHDL (5-100 ?g protein/ml). Markers of cellular toxicity (MTT) and apoptosis (fluorescent nucleic acid staining, annexin V binding, cytochrome c, AIF and Bid, caspase-3 activity and DNA fragmentation) were observed. Results: All HDL subfractions isolated from normolipidemic subjects protected HMEC against oxLDL-induced toxicity and apoptosis. At equal protein concentrations, HDL3c (60% protection in the MTT test; >100% in annexin V biding) and 3b subfractions (43% and 67%, respectively) were more potent against oxLDL-induced toxicity and apoptosis as compared to HDL2a (29% and 28%; p<0.01 vs. HDL3c, respectively) and 2b subfractions (25% and 62%; p<0.001 vs. HDL3c, respectively). All HDL subfractions attenuated of reactive oxygen species (ROS) generation in HMEC induced by oxLDL. Again, HDL3c (54% inhibition) were more potent as compared to HDL2b (21%; p<0.05 vs. HDL3c). The anti-apoptotic and intracellular antioxidative activities of HDL3 were positively correlated with apoA-I and sphingosine 1-phosphate (S1P) content of sHDL and, possibly, depend on their cellular interaction through apoA-I and its SR-BI receptor. The sHDL3c isolated from MetS patients (n=5) possess reduced content of apoA-I and less potent anti-apoptotic activity (-60%, p<0.01) than controls (n=5). Conclusion: Normolipidemic small dense HDL3 provide potent protection of human endothelial cells from oxLDL-induced apoptosis; this anti-apoptotic activity is reduced in the MetS.

Introdução: A lipoproteína de baixa densidade (LDL) e suas formas oxidadas (LDLox) possuem múltiplas propriedades aterogênicas, atuando na deposição de colesterol, indução e manutenção da inflamação, disfunção endotelial, surgimento de células espumosas na parede arterial e conseqüente formação da placa de ateroma. Adicionalmente, LDLox induz apoptose de células endoteliais humanas (HMEC). A lipoproteína de alta densidade (HDL) possui inúmeras atividades antiaterogênicas, incluindo ações antioxidante, anti-inflamatória e anti-trombótica. A HDL é capaz de proteger as HMEC contra apoptose. As subfrações de HDL (sHDL) são heterogêneas em sua composição físico-química e atividades biológicas. A atividade antioxidante das sHDL aumenta com a densidade (HDL2b<HDL2a<HDL3a<HDL3b <HDL3c) e está deficiente em pacientes com SMet. Contudo, a heterogeneidade da atividade anti-apoptótica das sHDL é ainda desconhecida. Objetivos: (i) avaliar a heterogeneidade da atividade protetora das sHDL de indivíduos normolipidêmicos (n=7) e de pacientes com SMet (n=16) contra apoptose de HMEC induzida por LDLox; (ii) definir os mecanismos moleculares envolvidos nesta atividade. Métodos: Através de ultracentrifugação por gradiente de densidade, isolamos cinco diferentes sHDL. HMEC foram incubadas com LDLox (200 ?g apoB/ml) na presença ou não das sHDL (5-100 ?g proteína/ml). Os marcadores de toxicidade (MTT) e de apoptose celular (microscopia de fluorescência, marcagem com anexina V, cit c, AIF, degradação Bid, atividade caspase-3 e fragmentação do ADN) foram analisados. Resultados: Todas sHDL protegeram as HMEC contra a toxicidade e apoptose induzidas pela LDLox. Com mesma concentração de proteína, as subfrações HDL3c (60% proteção - MTT - e >100% - anexina V) e 3b (43% e 67%, respectivamente) de indivíduos normolipidêmicos apresentaram atividade anti-apoptótica mais potente do que as subfrações HDL2a (29% e 28%; p<0,01 vs. HDL3c, respectivamente) e 2b (25% e 62%; p<0,001 vs. HDL3c, respectivamente). Todas sHDL reduziram geração de espécies reativas de oxigênio (ROS) induzida pela LDLox, sendo a HDL3c (54%) mais potente do que HDL2b (21%; p<0.05 vs. HDL3c). Houve correlação positiva entre as atividades anti-apoptótica e antioxidante intracelular com conteúdo de apoA-I e esfingosina 1-fosfato (E1F) das sHDL, senda HDL3b e 3c ricas em E1F. A atividade anti-apoptótica da E1F e das sHDL parece depender da interação com as células endoteliais via apoA-I e seu receptor SR-BI. Finalmente, as HDL3c (n=5) isoladas de pacientes com SMet possuem conteúdo significativamente menor de apoA-I e reduzida atividade anti-apoptótica (60%, p<0,01), quando comparada aos controles normolipidêmicos (n=5). Houve tendência à diminuição da proteção contra a geração de ROS (SMet, n=10). Conclusão: As subfrações HDL3c protegem de forma potente as células endoteliais humanas contra toxicidade e apoptose induzidas pela LDLox, assim como contra geração de ROS. Esta atividade antiapoptótica está reduzida na SMet. / Background: Low density lipoprotein (LDL) and its oxidized forms (oxLDL) have several atherogenic properties, including cholesterol deposition, inflammation, endothelial dysfunction and foam cell formation on the arterial wall, leading to atherosclerotic plaque development. In addition, oxLDL induces human endothelial cell apoptosis (HMEC). High-density lipoprotein (HDL) has number of antiatherogenic activities, as antioxidative, anti-inflammatory and anti-thrombotic actions. HDL displays anti-apoptotic activity and is able to protect endothelial cells against oxLDL-induced apoptosis. HDL subfractions (sHDL) are highly heterogeneous in their physical and chemical composition and biological functions. Antioxidative activity of HDL subfractions increases with increment in density, HDL2b<HDL2a<HDL3a<HDL3b <HDL3c. Important, HDL subfractions from subjects with metabolic syndrome (MetS), display a significantly lower antioxidative activity as compared to healthy controls. However, the heterogeneity of their anti-apoptotic activity was not demonstrated. Objectives: (i) to evaluate the heterogeneity of antiapoptotic activity of sHDL from normolipidemic controls (n=7) and MetS patients (n=16) towards oxLDL-induced apoptosis of HMEC; (ii) to define molecular mechanisms involved in this anti-apoptotic action. Methods: Five major sHDL were fractionated by density gradient ultracentrifugation. HMEC were incubated with mildly oxLDL (200 ?g apoB/ml) in the presence or absence of each sHDL (5-100 ?g protein/ml). Markers of cellular toxicity (MTT) and apoptosis (fluorescent nucleic acid staining, annexin V binding, cytochrome c, AIF and Bid, caspase-3 activity and DNA fragmentation) were observed. Results: All HDL subfractions isolated from normolipidemic subjects protected HMEC against oxLDL-induced toxicity and apoptosis. At equal protein concentrations, HDL3c (60% protection in the MTT test; >100% in annexin V biding) and 3b subfractions (43% and 67%, respectively) were more potent against oxLDL-induced toxicity and apoptosis as compared to HDL2a (29% and 28%; p<0.01 vs. HDL3c, respectively) and 2b subfractions (25% and 62%; p<0.001 vs. HDL3c, respectively). All HDL subfractions attenuated of reactive oxygen species (ROS) generation in HMEC induced by oxLDL. Again, HDL3c (54% inhibition) were more potent as compared to HDL2b (21%; p<0.05 vs. HDL3c). The anti-apoptotic and intracellular antioxidative activities of HDL3 were positively correlated with apoA-I and sphingosine 1-phosphate (S1P) content of sHDL and, possibly, depend on their cellular interaction through apoA-I and its SR-BI receptor. The sHDL3c isolated from MetS patients (n=5) possess reduced content of apoA-I and less potent anti-apoptotic activity (-60%, p<0.01) than controls (n=5). Conclusion: Normolipidemic small dense HDL3 provide potent protection of human endothelial cells from oxLDL-induced apoptosis; this anti-apoptotic activity is reduced in the MetS.