Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-05-05Bitstream added on 2014-06-13T19:05:29Z : No. of bitstreams: 1 leal_ls_dr_botfmvz.pdf: 1424462 bytes, checksum: bbd9bf26b7adb5dc3b7bb266434ac12a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Pesquisadores do mundo inteiro têm investigado a função de fatores e eventos biológicos envolvidos na foliculogênese e no processo de maturação ovocitária in vitro em várias espécies, com o intuito de aprimorar tecnologias de produção e manipulação de embriões. O objetivo do presente estudo foi avaliar: a morfometria ovariana; os aspectos morfométricos e ultra-estruturais dos folículos ovarianos; os fatores que influenciam a recuperação, qualidade ovocitária e taxas de maturação nuclear in vitro; as concentrações de progesterona e insulina plasmáticas e os níveis de hormônios esteróides (estradiol e progesterona) e IGF-I no líquido folicular, em búfalas e vacas. Amostras de sangue e os ovários de 86 búfalas (33 gestantes e 53 não gestantes) e de 95 vacas (36 gestantes e 59 não gestantes) foram colhidos em abatedouros. Os ovários foram transportados ao laboratório em solução salina acrescida de penicilina e estreptomicina a 36ºC. As dimensões ovarianas foram mensuradas com o auxílio de paquímetro e balança digitais. Para a maturação ovocitária in vitro, os complexos cumulus oophorus (CCOs) foram recuperados por aspiração folicular, selecionados e cultivados em meio TCM-199 suplementado com 10% de soro fetal bovino, piruvato de sódio, FSH, LH, estradiol, cisteamina e gentamicina, por 22 a 24 horas, a uma temperatura de 38,5ºC, em atmosfera úmida com 5% de CO2 em ar. Para as técnicas de histologia clássica e microscopia eletrônica de transmissão foram processados 10 e 5 ovários de cada espécie, respectivamente. As concentrações de progesterona, insulina, estradiol e IGF-I nas amostras de sangue e fluido folicular foram determinadas por procedimento de radioimunoensaio, utilizando-se kits comerciais. Na análise histológica, verificou-se... / Researchers around the world have investigated the function of biological factors and events during folliculogenisis and in the process of in vitro maturation of oocytes in several species in order to improve technologies of embryo production and manipulation. The aim of the present study was to evaluate: ovarian morphometry; morphological and ultrastructural aspects of ovarian follicles; factors affecting the recovery and competence of oocytes and in vitro nuclear maturation; plasma progesterone and insulin concentrations; progesterone, estradiol and IGF-I in follicular fluid, in bubaline and bovine species. Blood samples and ovaries of 86 buffaloes (33 pregnant and 53 non pregnant) and 95 cows (36 pregnant and 59 non pregnant) were collected at slaughterhouses. The ovaries were transported to the laboratory in saline solution enriched with penicillin and streptomycin at 36ºC. The ovarian dimensions were measured using digital paquimeter and balance. For in vitro maturation process, cumulus-oocyte complexes (COCs) were recovered by follicular aspiration, selected and matured in TCM 199 supplemented with 10% fetal calf serum, sodium pyruvate, LH, FSH, estradiol, gentamicin and cysteamin. In vitro maturation was carried out at 38.5ºC under a controlled gas atmosphere of 5% CO2 in humidified air for 22-24 hours. For classical histology and transmission electron microscopy, 10 and 5 ovaries of each species respectively were processed. Progesterone, insulin, estradiol and IGF-I concentrations of blood and follicular fluid were determined by use of radioimmunoassay and commercial kits. In histological evaluation, the diameters of follicles and oocytes increased according to follicular development. Ultrastructural characterization of bubaline and bovine ovarian follicles showed a differentiated cell apparatus for substrate metabolization, ...(Complete abstract click electronic access below)

O presente estudo objetivou promover incremento no desenvolvimento do concepto e aumentar a taxa de prenhez de búfalas lactantes por meio da administração de P4 injetável (P4i) três ou seis dias após a IATF. Para tanto, foram conduzidos três experimentos. No Experimento 1, foi aferido o padrão de liberação de P4 por meio da administração de P4i em 8 búfalas ovariectomizadas (delineamento crossover) nas doses 300 ou 600 mg (grupo P300 ou P600, respectivamente). Foram realizadas colheitas de sangue, para posteriores dosagens de P4, nos seguintes períodos: -24, 0, 6, 12, 24, 48, 72, 96, 120, 144, 168, 192, 216 e 240 h da administração da P4i. No Experimento 2, 24 búfalas receberam a aplicação de 10 µg im de GnRH em dia aleatório do ciclo estral (D0). No D7, os animais receberam 0,53 mg im de PGF2α. Após 48 h (D9), foram administrados 10 µg im de GnRH e, 16 h mais tarde, todas as búfalas foram submetidas à IATF (D10). No D13, os animais foram avaliados por ultrassonografia e as fêmeas com ovulação positiva foram distribuídas em 3 grupos: Controle (C; n=8); P4D13 (n=8), que receberam 300mg de P4i no D13 e P4D16 (n=8), que receberam 300 mg de P4i no D16. No D26, as búfalas foram abatidas e os genitais removidos para a realização das seguintes avaliações: diâmetro (DCLa) e peso (PCL) do CL, presença de conceptos íntegros (pCI), íntegros e fragmentados (pCT) e comprimento do concepto (CC). Os CLs e endométrios foram seccionados, fixados e corados para aferir o percentual de células luteínicas pequenas e grandes (SLC e LLC) e o número (GEn), a área (AGEn) e o perímetro (PGEn) das glândulas do endométrio. No Experimento 3, 337 búfalas foram submetidas ao protocolo Ovsynch e, assim como no Experimento 2, as fêmeas ovuladas foram distribuídas em 3 grupos (C, n=81; P4D13, n=84 e P4D16, n=85). Foram avaliadas a funcionalidade (fluxo sanguíneo central FSC; e periférico FSP; escore de 0 a 4, em que 0 corresponde à ausência de fluxo e 4 o máximo fluxo) e o diâmetro do CL (DCL) nos D17, D21 e D25 por meio de ultrassonografia em modo color Doppler. Além disso, foram avaliadas por ultrassonografia as taxas de concepção aos 30 (DG30) e 60 (DG60) dias após a IATF e as perdas gestacionais (PG). Os dados foram analisados utilizando o procedimento GLIMMIX do SAS 9.3. Diferenças com P≤0,05 foram consideradas significativas e aquelas com 0,05<P≤0,10 foram consideradas tendência. As concentrações de P4 foram maiores no P600 em relação ao P300 em todos os pontos das colheitas de sangue (Ptrat<0,01, Ptempo=0,04, Ptrat*tempo=0,18). Verificou-se que as concentrações de P4 permaneceram acima de 1 ng/mL por aproximadamente 3 dias (entre as horas 6 e 72) no grupo P300, o que foi utilizado como critério para a dose de P4i utilizada nos Experimentos 2 e 3. Não houve diferenças entre os grupos para as variáveis avaliadas no Experimento 2: DCLa (P=0,39), PCL (P=0,13), pCI (P=0,85), pCT (P=0,41), CC (P=0,19), SLC (P=0,31), LLC (P=0,31), GEn (P=0,28), AGEn (P=0,72) e PGEn (P=0,91). No Experimento 3, houve interação tratamento*tempo (Ptrat*tempo) para as variáveis FSC (P<0,01), FSP (P<0,01) e DCL (P=0,07). Verificou-se redução do fluxo sanguíneo central e periférico e do diâmetro do CL no P4D13 em relação aos grupos C e P4D16 conforme os momentos de avaliação. Não houve diferença entre os grupos C, P4D13 e P4D16 para o DG30 (56,8 vs. 46,4 vs. 61,2 %; P=0,13) e para a PG (0,0 vs. 10,3 vs. 5,8 %; P=0,73). No entanto, houve menor taxa de concepção no DG60 para o P4D13 em comparação aos C e P4D16 (41,7b vs. 56,8a vs. 57,7a %; P=0,07). Conclui-se que o tratamento com 300 mg de P4i administrados três ou seis dias após a IATF não foi eficiente para aumentar o comprimento do concepto e a taxa de prenhez de búfalas lactantes submetidas à IATF. Ainda, o tratamento com P4i três dias após a IATF reduziu o fluxo sanguíneo central e periférico do CL, o diâmetro do CL e a taxa de prenhez. / The present study aimed to promote improvements on the conceptus development and to increase the pregnancy rate in lactating buffaloes through the administration of injectable P4 (P4i) three or six days after TAI. For this, three experiments were performed. In Experiment 1, was measured the pattern of P4 release by the P4i administration in 8 ovariectomized buffaloes (crossover design) at doses 300 or 600 mg (P300 or P600 group, respectively). Blood samples were collected for subsequent P4 dosages in the following periods: -24, 0, 6, 12, 24, 48, 72, 96, 120, 144, 168, 192, 216 and 240 h of P4i administration. In Experiment 2, 24 buffaloes received the application of 10 µg im GnRH at random day of the estrous cycle (D0). On D7, the animals received 0.53 mg im PGF2α. After 48 h (D9), were administered 10 µg im GnRH and, 16 h later, all buffaloes underwent TAI (D10). In D13, the animals were evaluated by ultrasonography and females with positive ovulation were allocated to one of three groups: Control (C, n=8); P4D13 (n=8) that received 300 mg P4i on D13 and P4D16 (n=8), that received 300 mg P4i on D16. On D26, buffaloes were slaughtered and genitals removed to perform the following assessments: CL diameter (CLDs) and CL weight (CLW), presence of integrate conceptus (pIC), integrate and fragmented (pCT) and the conceptus length (CLe). The CLs and endometrium were sectioned, fixed and stained to assess the percentage of small and large lutein cells (SLC and LLC) and the number (GEn), the area (AGEn) and the perimeter (PGEn) of endometrial glands. In Experiment 3, 337 buffaloes were submitted to the Ovsynch protocol and, as well as in Experiment 2, the ovulated females were divided to one of three groups (C, n=81; P4D13, n=84 and P4D16, n=85). The functionality (central blood flow - CBF, and peripheral blood flow - PBF; score from 0 to 4, where 0 corresponds to absence of flow and 4 the maximum flow) and the CL diameter (CLD) were evaluated on D17, D21 and D25 by ultrasonography in color Doppler mode. Furthermore, the conception rates at 30 (CR30) and 60 (CR60) days after TAI, and pregnancy loss (PL) were evaluated by ultrasonography. Data were analyzed using the GLIMMIX procedure of SAS 9.3. Differences were considered significant with P≤0.05 and those with 0.05<P≤0.10 were considered tendencies. The P4 concentrations were higher in the P600 compared to P300 in all points of blood sampling (Ptreat<0.01, Ptime=0.04, Ptreat*time=0.18). It was found that the P4 concentrations remained above 1.0 ng/ml for approximately 3 days (between hours 6 and 72) in the P300 group, which was used as standard for P4i dose used in Experiments 2 and 3. There were no differences between the groups for the variables evaluated in Experiment 2: CLDs (P=0.39), CLW (P=0.13), pCI (P=0.85), pCT (P=0.41), CoLe (P=0.19), SLC (P=0.31), LLC (P=0.31), GEn (P=0.28), AGEn (P=0.72) and PGEn (P=0.91). In Experiment 3, there was interaction treatment*time (Ptreat*time) for the CBF (P<0.01), PBF (P<0.01) and CLD (P=0.07). There was a reduction of the central blood flow, peripheral blood flow and CL diameter for P4D13 compared to C and P4D16 groups according to the evaluation moments. There was no difference between C, P4D13 and P4D16 groups for the CR30 (56.8 vs. 46.4 vs. 61.2 %; P=0.13) and for the PL (0.0 vs. 10.3 vs. 5.8 %; P=0.73). However, there was lower conception rate in CR60 for P4D13 compared to C and P4D16 (41.7b vs. 56.8a vs. 57.7a %; P=0.07). It was concluded that treatment with 300 mg P4i administered three or six days after TAI was not efficient to increase the conceptus length and the pregnancy rate in lactating buffaloes submitted to TAI. Furthermore, the treatment with P4i three days after TAI reduced the central and the peripheral CL blood flow, the CL diameter and the pregnancy rate.

O presente estudo objetivou promover incremento no desenvolvimento do concepto e aumentar a taxa de prenhez de búfalas lactantes por meio da administração de P4 injetável (P4i) três ou seis dias após a IATF. Para tanto, foram conduzidos três experimentos. No Experimento 1, foi aferido o padrão de liberação de P4 por meio da administração de P4i em 8 búfalas ovariectomizadas (delineamento crossover) nas doses 300 ou 600 mg (grupo P300 ou P600, respectivamente). Foram realizadas colheitas de sangue, para posteriores dosagens de P4, nos seguintes períodos: -24, 0, 6, 12, 24, 48, 72, 96, 120, 144, 168, 192, 216 e 240 h da administração da P4i. No Experimento 2, 24 búfalas receberam a aplicação de 10 µg im de GnRH em dia aleatório do ciclo estral (D0). No D7, os animais receberam 0,53 mg im de PGF2α. Após 48 h (D9), foram administrados 10 µg im de GnRH e, 16 h mais tarde, todas as búfalas foram submetidas à IATF (D10). No D13, os animais foram avaliados por ultrassonografia e as fêmeas com ovulação positiva foram distribuídas em 3 grupos: Controle (C; n=8); P4D13 (n=8), que receberam 300mg de P4i no D13 e P4D16 (n=8), que receberam 300 mg de P4i no D16. No D26, as búfalas foram abatidas e os genitais removidos para a realização das seguintes avaliações: diâmetro (DCLa) e peso (PCL) do CL, presença de conceptos íntegros (pCI), íntegros e fragmentados (pCT) e comprimento do concepto (CC). Os CLs e endométrios foram seccionados, fixados e corados para aferir o percentual de células luteínicas pequenas e grandes (SLC e LLC) e o número (GEn), a área (AGEn) e o perímetro (PGEn) das glândulas do endométrio. No Experimento 3, 337 búfalas foram submetidas ao protocolo Ovsynch e, assim como no Experimento 2, as fêmeas ovuladas foram distribuídas em 3 grupos (C, n=81; P4D13, n=84 e P4D16, n=85). Foram avaliadas a funcionalidade (fluxo sanguíneo central FSC; e periférico FSP; escore de 0 a 4, em que 0 corresponde à ausência de fluxo e 4 o máximo fluxo) e o diâmetro do CL (DCL) nos D17, D21 e D25 por meio de ultrassonografia em modo color Doppler. Além disso, foram avaliadas por ultrassonografia as taxas de concepção aos 30 (DG30) e 60 (DG60) dias após a IATF e as perdas gestacionais (PG). Os dados foram analisados utilizando o procedimento GLIMMIX do SAS 9.3. Diferenças com P≤0,05 foram consideradas significativas e aquelas com 0,05<P≤0,10 foram consideradas tendência. As concentrações de P4 foram maiores no P600 em relação ao P300 em todos os pontos das colheitas de sangue (Ptrat<0,01, Ptempo=0,04, Ptrat*tempo=0,18). Verificou-se que as concentrações de P4 permaneceram acima de 1 ng/mL por aproximadamente 3 dias (entre as horas 6 e 72) no grupo P300, o que foi utilizado como critério para a dose de P4i utilizada nos Experimentos 2 e 3. Não houve diferenças entre os grupos para as variáveis avaliadas no Experimento 2: DCLa (P=0,39), PCL (P=0,13), pCI (P=0,85), pCT (P=0,41), CC (P=0,19), SLC (P=0,31), LLC (P=0,31), GEn (P=0,28), AGEn (P=0,72) e PGEn (P=0,91). No Experimento 3, houve interação tratamento*tempo (Ptrat*tempo) para as variáveis FSC (P<0,01), FSP (P<0,01) e DCL (P=0,07). Verificou-se redução do fluxo sanguíneo central e periférico e do diâmetro do CL no P4D13 em relação aos grupos C e P4D16 conforme os momentos de avaliação. Não houve diferença entre os grupos C, P4D13 e P4D16 para o DG30 (56,8 vs. 46,4 vs. 61,2 %; P=0,13) e para a PG (0,0 vs. 10,3 vs. 5,8 %; P=0,73). No entanto, houve menor taxa de concepção no DG60 para o P4D13 em comparação aos C e P4D16 (41,7b vs. 56,8a vs. 57,7a %; P=0,07). Conclui-se que o tratamento com 300 mg de P4i administrados três ou seis dias após a IATF não foi eficiente para aumentar o comprimento do concepto e a taxa de prenhez de búfalas lactantes submetidas à IATF. Ainda, o tratamento com P4i três dias após a IATF reduziu o fluxo sanguíneo central e periférico do CL, o diâmetro do CL e a taxa de prenhez. / The present study aimed to promote improvements on the conceptus development and to increase the pregnancy rate in lactating buffaloes through the administration of injectable P4 (P4i) three or six days after TAI. For this, three experiments were performed. In Experiment 1, was measured the pattern of P4 release by the P4i administration in 8 ovariectomized buffaloes (crossover design) at doses 300 or 600 mg (P300 or P600 group, respectively). Blood samples were collected for subsequent P4 dosages in the following periods: -24, 0, 6, 12, 24, 48, 72, 96, 120, 144, 168, 192, 216 and 240 h of P4i administration. In Experiment 2, 24 buffaloes received the application of 10 µg im GnRH at random day of the estrous cycle (D0). On D7, the animals received 0.53 mg im PGF2α. After 48 h (D9), were administered 10 µg im GnRH and, 16 h later, all buffaloes underwent TAI (D10). In D13, the animals were evaluated by ultrasonography and females with positive ovulation were allocated to one of three groups: Control (C, n=8); P4D13 (n=8) that received 300 mg P4i on D13 and P4D16 (n=8), that received 300 mg P4i on D16. On D26, buffaloes were slaughtered and genitals removed to perform the following assessments: CL diameter (CLDs) and CL weight (CLW), presence of integrate conceptus (pIC), integrate and fragmented (pCT) and the conceptus length (CLe). The CLs and endometrium were sectioned, fixed and stained to assess the percentage of small and large lutein cells (SLC and LLC) and the number (GEn), the area (AGEn) and the perimeter (PGEn) of endometrial glands. In Experiment 3, 337 buffaloes were submitted to the Ovsynch protocol and, as well as in Experiment 2, the ovulated females were divided to one of three groups (C, n=81; P4D13, n=84 and P4D16, n=85). The functionality (central blood flow - CBF, and peripheral blood flow - PBF; score from 0 to 4, where 0 corresponds to absence of flow and 4 the maximum flow) and the CL diameter (CLD) were evaluated on D17, D21 and D25 by ultrasonography in color Doppler mode. Furthermore, the conception rates at 30 (CR30) and 60 (CR60) days after TAI, and pregnancy loss (PL) were evaluated by ultrasonography. Data were analyzed using the GLIMMIX procedure of SAS 9.3. Differences were considered significant with P≤0.05 and those with 0.05<P≤0.10 were considered tendencies. The P4 concentrations were higher in the P600 compared to P300 in all points of blood sampling (Ptreat<0.01, Ptime=0.04, Ptreat*time=0.18). It was found that the P4 concentrations remained above 1.0 ng/ml for approximately 3 days (between hours 6 and 72) in the P300 group, which was used as standard for P4i dose used in Experiments 2 and 3. There were no differences between the groups for the variables evaluated in Experiment 2: CLDs (P=0.39), CLW (P=0.13), pCI (P=0.85), pCT (P=0.41), CoLe (P=0.19), SLC (P=0.31), LLC (P=0.31), GEn (P=0.28), AGEn (P=0.72) and PGEn (P=0.91). In Experiment 3, there was interaction treatment*time (Ptreat*time) for the CBF (P<0.01), PBF (P<0.01) and CLD (P=0.07). There was a reduction of the central blood flow, peripheral blood flow and CL diameter for P4D13 compared to C and P4D16 groups according to the evaluation moments. There was no difference between C, P4D13 and P4D16 groups for the CR30 (56.8 vs. 46.4 vs. 61.2 %; P=0.13) and for the PL (0.0 vs. 10.3 vs. 5.8 %; P=0.73). However, there was lower conception rate in CR60 for P4D13 compared to C and P4D16 (41.7b vs. 56.8a vs. 57.7a %; P=0.07). It was concluded that treatment with 300 mg P4i administered three or six days after TAI was not efficient to increase the conceptus length and the pregnancy rate in lactating buffaloes submitted to TAI. Furthermore, the treatment with P4i three days after TAI reduced the central and the peripheral CL blood flow, the CL diameter and the pregnancy rate.

Para aferir as prováveis causas da baixa taxa de recuperação de estruturas embrionárias em búfalas superovuladas, foram realizados 4 experimentos. No Exp.1, foram utilizados sistemas genitais de búfalas e de vacas tratadas para a indução de ovulações única ou múltipla (fatorial 2x2). Os sistemas genitais foram submetidos à morfometria, os ovidutos foram lavados para a recuperação dos oócitos e, posteriormente, foram encaminhados à histologia. A taxa de recuperação de oócitos e o volume dos ovários foram maiores para as vacas que para as búfalas (P<0,05). A área das fímbrias foi maior para as búfalas que para as vacas (P<0,05). As camadas musculares do infundíbulo e do istmo foram mais espessas para as búfalas que para as vacas (P<0,05) e, na ampola, não foi verificado diferença nesta medida entre as espécies (P>0,05). No Exp.2 foram utilizados ovidutos de búfalas e de vacas, tratadas para a indução de ovulação única. Os ovidutos foram abertos, colocados em meio de cultura com ou sem E2 (fatorial 2x2) e incubados por 30 minutos. Após o período de incubação, foram colocadas microesferas na superfície dos ovidutos para a aferição do movimento ciliar. As microesferas no infundíbulo direcionaram-se para o útero (P>0,05). Na ampola, direcionaram-se para o útero e para o ovário (P>0,05). No istmo das vacas, direcionaram-se para o ovário e no das búfalas, para o útero (P<0,05). A presença de E2 no meio de cultura não interferiu na direção do deslocamento das microesferas em nenhuma porção dos ovidutos de búfalas e de vacas. No Exp.3 foram utilizados ovidutos de búfalas e de vacas tratadas para a indução de ovulação única. Os ovidutos foram colocados em meio de cultura com ou sem E2 e receberam oócitos de búfalas ou de vacas (fatorial 2x2x2). Posteriormente, foram incubados por 24 horas e, após isso, foram lavados para a recuperação e contagem dos oócitos. O número e a taxa de recuperação de oócitos foi maior para as vacas que para as búfalas (P<0,05) e, estas variáveis não foram influenciadas pelo tratamento (P>0,05). Não foi verificada diferença no número de oócitos de búfalas ou de vacas recuperados (P>0,05). Os dados são indicativos de que o transporte de oócitos pelo oviduto de búfalas e de vacas independe da espécie do oócito e não é influenciado pelo E2. No Exp.4, búfalas e vacas foram tratadas para a indução de ovulações única ou múltipla. As fêmeas foram inseminadas e submetidas à laparotomia para a inserção no interior do oviduto de oócitos de búfalas ou de vacas (fatorial 2x2x2). Os sistemas genitais foram lavados 5 (oócitos de búfala) e 6 dias (oócitos de vaca) após a laparotomia para a recuperação das estruturas embrionárias. O número de estruturas embrionárias recuperadas foi maior para as vacas que para as búfalas (P<0,05) e, o número e a taxa de recuperação de estruturas embrionárias não foram influenciados pelo tratamento ou pela espécie dos oócitos (P>0,05). A espécie dos oócitos e o tratamento parecem não influenciar no transporte dos oócitos pelos ovidutos de búfalas e de vacas / In order to study the probable causes of the low embryo recovery rates in superovulated buffaloes, 4 experiments were performed. The experiment 1, consisted of treating buffaloes and cows in order to induce single or multiple ovulation (2x2 factorial). Genital systems were morphometrycally evaluated; oviducts were flushed in order to recover the oocytes, and subsequently submitted to histological examination. The oocyte recovery rate and the ovarian volume were higher for cows when compared to buffaloes (P<0.05). In contrast, fimbria area was higher for buffaloes than cows (P<0.05). Likewise, infundibulum and isthmus muscle layers were thicker in buffalo than cows (P<0.05). In addition, histological measurements were similar in cows and buffaloes (P>0.05). In the experiment 2, oviducts of buffaloes and cows treated to show a single ovulation, were dissected and placed in two media (with or without estradiol [E2] in a 2x2 factorial) and incubated for 30 minutes. After this period, microesferes were used to assess of the cilia movements. When placed in the infundibulum, microesferes moved toward the uterus (P>0.05). The microesferes in the ampulla moved towards the uterus and ovary in a similar fashion in both genetic groups (P>0.05). The microesferes in the isthmus, moved towards the ovary in cows; whereas, they moved towards the uterus in buffalo (P<0.05). There was no effect of media in the cilia movements at any portion of the oviduct neither in buffaloes or cows. In the experiment 3, oviducts of buffaloes and cows in the same conditions as in the previous experiment (single ovulation in with or without E2), received oocytes originated from buffaloes or cows (2x2x2 factorial). These oviducts were incubated for 24h and then flushed for oocyte recovery. The total number and the recovery rate of oocytes were higher for cows than for buffaloes (P<0.05). Interestingly, there was no effect of treatment in these same variables (P>0.05). The number of oocytes from buffaloes and cows that were recovered was similar (P>0.05). These results indicate that oocytes transport through the oviduct of buffaloes or cows does not depend on the oocyte specie and is not influenced by the E2. In the experiment 4, buffaloes and cows were treated in order to induce single or multiple ovulation. Females were inseminated and submitted to laparotomy in order to insert, inside the oviduct, oocytes of buffaloes or cows (2x2x2 factorial). Genital tracts were flushed on day 5 (oocytes from buffaloes) and on day 6 (oocytes from cows) after laparotomy for recovery of embryonic structures. The number of embryonic structures recovered was higher for cows when compared to the buffaloes (P<0.05). No effect of treatment or oocyte origin were found for the number or the rate of embryonic structures recovery (P>0.05). In conclusion, it is likely that type of oocyte and treatment do not affect transport of oocytes in the oviducts of buffaloes and cows

Para aferir as prováveis causas da baixa taxa de recuperação de estruturas embrionárias em búfalas superovuladas, foram realizados 4 experimentos. No Exp.1, foram utilizados sistemas genitais de búfalas e de vacas tratadas para a indução de ovulações única ou múltipla (fatorial 2x2). Os sistemas genitais foram submetidos à morfometria, os ovidutos foram lavados para a recuperação dos oócitos e, posteriormente, foram encaminhados à histologia. A taxa de recuperação de oócitos e o volume dos ovários foram maiores para as vacas que para as búfalas (P<0,05). A área das fímbrias foi maior para as búfalas que para as vacas (P<0,05). As camadas musculares do infundíbulo e do istmo foram mais espessas para as búfalas que para as vacas (P<0,05) e, na ampola, não foi verificado diferença nesta medida entre as espécies (P>0,05). No Exp.2 foram utilizados ovidutos de búfalas e de vacas, tratadas para a indução de ovulação única. Os ovidutos foram abertos, colocados em meio de cultura com ou sem E2 (fatorial 2x2) e incubados por 30 minutos. Após o período de incubação, foram colocadas microesferas na superfície dos ovidutos para a aferição do movimento ciliar. As microesferas no infundíbulo direcionaram-se para o útero (P>0,05). Na ampola, direcionaram-se para o útero e para o ovário (P>0,05). No istmo das vacas, direcionaram-se para o ovário e no das búfalas, para o útero (P<0,05). A presença de E2 no meio de cultura não interferiu na direção do deslocamento das microesferas em nenhuma porção dos ovidutos de búfalas e de vacas. No Exp.3 foram utilizados ovidutos de búfalas e de vacas tratadas para a indução de ovulação única. Os ovidutos foram colocados em meio de cultura com ou sem E2 e receberam oócitos de búfalas ou de vacas (fatorial 2x2x2). Posteriormente, foram incubados por 24 horas e, após isso, foram lavados para a recuperação e contagem dos oócitos. O número e a taxa de recuperação de oócitos foi maior para as vacas que para as búfalas (P<0,05) e, estas variáveis não foram influenciadas pelo tratamento (P>0,05). Não foi verificada diferença no número de oócitos de búfalas ou de vacas recuperados (P>0,05). Os dados são indicativos de que o transporte de oócitos pelo oviduto de búfalas e de vacas independe da espécie do oócito e não é influenciado pelo E2. No Exp.4, búfalas e vacas foram tratadas para a indução de ovulações única ou múltipla. As fêmeas foram inseminadas e submetidas à laparotomia para a inserção no interior do oviduto de oócitos de búfalas ou de vacas (fatorial 2x2x2). Os sistemas genitais foram lavados 5 (oócitos de búfala) e 6 dias (oócitos de vaca) após a laparotomia para a recuperação das estruturas embrionárias. O número de estruturas embrionárias recuperadas foi maior para as vacas que para as búfalas (P<0,05) e, o número e a taxa de recuperação de estruturas embrionárias não foram influenciados pelo tratamento ou pela espécie dos oócitos (P>0,05). A espécie dos oócitos e o tratamento parecem não influenciar no transporte dos oócitos pelos ovidutos de búfalas e de vacas / In order to study the probable causes of the low embryo recovery rates in superovulated buffaloes, 4 experiments were performed. The experiment 1, consisted of treating buffaloes and cows in order to induce single or multiple ovulation (2x2 factorial). Genital systems were morphometrycally evaluated; oviducts were flushed in order to recover the oocytes, and subsequently submitted to histological examination. The oocyte recovery rate and the ovarian volume were higher for cows when compared to buffaloes (P<0.05). In contrast, fimbria area was higher for buffaloes than cows (P<0.05). Likewise, infundibulum and isthmus muscle layers were thicker in buffalo than cows (P<0.05). In addition, histological measurements were similar in cows and buffaloes (P>0.05). In the experiment 2, oviducts of buffaloes and cows treated to show a single ovulation, were dissected and placed in two media (with or without estradiol [E2] in a 2x2 factorial) and incubated for 30 minutes. After this period, microesferes were used to assess of the cilia movements. When placed in the infundibulum, microesferes moved toward the uterus (P>0.05). The microesferes in the ampulla moved towards the uterus and ovary in a similar fashion in both genetic groups (P>0.05). The microesferes in the isthmus, moved towards the ovary in cows; whereas, they moved towards the uterus in buffalo (P<0.05). There was no effect of media in the cilia movements at any portion of the oviduct neither in buffaloes or cows. In the experiment 3, oviducts of buffaloes and cows in the same conditions as in the previous experiment (single ovulation in with or without E2), received oocytes originated from buffaloes or cows (2x2x2 factorial). These oviducts were incubated for 24h and then flushed for oocyte recovery. The total number and the recovery rate of oocytes were higher for cows than for buffaloes (P<0.05). Interestingly, there was no effect of treatment in these same variables (P>0.05). The number of oocytes from buffaloes and cows that were recovered was similar (P>0.05). These results indicate that oocytes transport through the oviduct of buffaloes or cows does not depend on the oocyte specie and is not influenced by the E2. In the experiment 4, buffaloes and cows were treated in order to induce single or multiple ovulation. Females were inseminated and submitted to laparotomy in order to insert, inside the oviduct, oocytes of buffaloes or cows (2x2x2 factorial). Genital tracts were flushed on day 5 (oocytes from buffaloes) and on day 6 (oocytes from cows) after laparotomy for recovery of embryonic structures. The number of embryonic structures recovered was higher for cows when compared to the buffaloes (P<0.05). No effect of treatment or oocyte origin were found for the number or the rate of embryonic structures recovery (P>0.05). In conclusion, it is likely that type of oocyte and treatment do not affect transport of oocytes in the oviducts of buffaloes and cows

Submitted by Rosivalda Pereira (mrs.pereira@ufma.br) on 2017-06-21T18:46:32Z No. of bitstreams: 1 DaniloBezerra.pdf: 938125 bytes, checksum: 6bc8503664eaed22778aa78f0b61a010 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-21T18:46:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DaniloBezerra.pdf: 938125 bytes, checksum: 6bc8503664eaed22778aa78f0b61a010 (MD5) Previous issue date: 2016-06-28 / The aim of the study was to evaluate different synchronization protocols for timed artificial insemination (TAI) in buffalo during the breeding and nonbreeding seasons, in the equatorial Amazon. The experiment was conducted in Baixada Maranhense, Maranhão, Brazil. A total of 200 lactating Murrah buffalo (Bubalus bubalis) cows, raised extensively on native pasture, water and minerals ad libitum were used. Based on retrospective historical distribution of births in the region, the reproductive seasonality was characterized in two seasons, Breeding (July) and Nonbreeding (January). Then four protocols for ovulation synchronization were performed: "GnRH/hCG" (control protocol for Breeding season); "GnRH/BE" (proposed protocol for Breeding season; "P4/hCG" (control protocol for Nonbreeding season); "P4/BE" (proposed protocol for Nonbreeding season). The females were ultrasonographically examinated for monitoring the follicular dynamics and ovulation. Then were timed artificially inseminated to evaluate the conception rates. All treatments were effective to induce follicular growth from emergence until follicular deviation. There was effect of the ovulation inducer on diameter of dominant and ovulatory follicles (P<0.05). The ovulation rate was higher in hCG-treated (65%) animals than in BE-treated (30%), regardless of breeding season. The ovulation rates were similar between seasons, regardless of synchronization protocol. In general, ovulations occurred in 55% of synchronized females in Breeding season and only in 40% during Nonbreeding (P = 0.31), despite the use of progesterone devices. The hCG-induced ovulations were 21.4 hours earlier than in BE-induced in Breeding season and 24.0 hours earlier in the Nonbreeding season. The average conception rate was 29% (29/100) in Breeding season and only 3% (3/100) in Nonbreeding season (P<0.01), but no difference between protocols in the same season. We conclude that the hCG was more efficient to induce ovulation than estradiol benzoate and it was not possible to obtain satisfactory pregnancy rates in Nonbreeding season in buffalo raised extensively on native, poor and periodically flooded grasslands of the Equatorial Amazon. / O objetivo do estudo foi avaliar diferentes protocolos de sincronização da ovulação para inseminação artificial em tempo fixo (IATF) em fêmeas bubalinas, durante as estações reprodutivas favorável e desfavorável, na Amazônia equatorial. O experimento foi realizado na região da Baixada Maranhense, Maranhão – Brasil. Foram utilizadas 200 fêmeas bubalinas (Bubalus bubalis) da raça Murrah, lactantes, criadas extensivamente em pastagem nativa, com água e sal mineral ad libitum. Com base na distribuição histórica retrospectiva dos nascimentos de bubalinos na região, caracterizou-se a estacionalidade reprodutiva em duas estações, a Favorável (mês de julho) e a Desfavorável (mês de janeiro). Foram aplicados quatro tratamentos/protocolos para sincronização de ovulações: “GnRH/hCG” (protocolo controle para estação favorável); “GnRH/BE” (protocolo proposto para estação favorável; “P4/hCG” (protocolo controle para estação desfavorável); “P4/BE” (protocolo proposto para estação desfavorável). As fêmeas foram submetidas a avaliações ultrassonográficas para acompanhamento da dinâmica folicular e taxa de ovulação e inseminadas artificialmente em tempo fixo para avaliação da taxa de concepção por tratamento. Todas as fêmeas responderam aos tratamentos e houve crescimento folicular similar desde a emergência até o desvio folicular. Houve efeito do indutor de ovulação no diâmetro do folículo dominate e ovulatório (P<0,05). A taxa de ovulação foi maior nos animais submetidos a indução de ovulação com hCG (65%) do que nos tratados com BE (30%), independentemente de estação reprodutiva. Não houve diferença significativa entre as taxas de ovulação na mesma estação, independente de protocolo utilizado. No geral, as ovulações ocorreram em 55% das fêmeas sincronizadas na estação favorável e em apenas 40% na desfavorável (P=0,31), apesar do uso de dispositivos de progesterona. O hCG induziu a ovulação em média 21,4 horas mais cedo que o BE na estação favorável e 24 horas mais cedo na desfavorável. A taxa de concepção média foi de 29% (29/100) na estação favorável e de apenas 3% (3/100) na desfavorável (P<0,01), mas não houve diferença entre protocolos na mesma estação. Conclui-se que o hCG foi mais eficiente na indução de ovulação sincronizada que o benzoato de estradiol e que não foi possível obter taxas de prenhez satisfatórias na estação reprodutiva desfavorável em fêmeas bubalinas criadas extensivamente em campos nativos, pobres e periodicamente alagados da Amazônia Equatorial.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-12-19Bitstream added on 2014-06-13T20:45:17Z : No. of bitstreams: 1 seno_lo_dr_jabo.pdf: 566971 bytes, checksum: 0c5e0aebf798c4c7055349396b4889f3 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O presente estudo teve como objetivo avaliar a viabilidade genéticaeconômica de execução de diferentes estratégias de seleção, em uma população simulada de bubalinos leiteiros, no sentido, de selecionar dentre as opções a melhor estratégia. No processo de tomada de decisão, avaliou-se o impacto das estratégias no valor genético médio, coeficiente de endogamia, variância genética, além de examinar a relação custo-benefício, por meio dos indicadores determinísticos, valor presente líquido (VPL) e razão benefício-custo (B/C). Os efeitos dos aumentos no número de rebanhos que participam de um programa de controle leiteiro (CL) e na porcentagem de inseminação artificial (IA), também foram avaliados. As estratégias analisadas envolveram seleção baseada em: 1) valores aleatórios, sem a adoção de IA (SA); 2) valores aleatórios, com a adoção de IA (SAIA); 3) valores fenotípicos (SF); e 4) teste de progênie (TP). O aumento na porcentagem de rebanhos participantes de programas de CL pode promover a obtenção de maiores ganhos genéticos nas estratégias de TP e SF. A introdução de TP na bubalinocultura poderia proporcionar ganhos genéticos relevantes na população. A receita obtida com a venda de leite foi incrementada em função do aumento no número de rebanhos nas estratégias de TP e SF. A utilização de IA aumenta a conexão entre os rebanhos, promovendo a melhor difusão do material genético superior na população e consequentemente, aumento na receita obtida com a venda de leite. A aplicação das estratégias de seleção SF e TP em uma população de bubalinos leiteiros na Região Sudeste do Brasil mostraram-se viáveis de acordo com os critérios do VPL e da razão B/C. / The aim of this study was to evaluate the genetic-economic feasibility of the execution of different selection strategies, in a simulated population of dairy buffaloes, in order to choose the best strategy. In the decision process it was evaluated the impact of the strategies using the change in the true breeding value, inbreeding coefficient, variance of true breeding values, as well as to examine the relation cost-benefit from a deterministic approach, net present value (VPL) and benefit-cost ratio (B/C). The effect of the increase in the number of herds that participate on a program of milk recording and in the percentage of artificial insemination (IA) was also evaluated. The strategies analysis involved: 1) selection based on random values, without AI (SA); 2) selection based on random values, with AI (SAIA); 3) phenotypic selection (SF); and 4) progeny test (TP). The increase in the percentage of participant herds in program of milk recording can promote high genetic profits in the strategies TP and SF. The introduction of TP in dairy buffaloes could provide genetic improvement to the population. The profit obtained with the milk sales has increased because of in the number of herds under strategies SF and TP. The use of IA increases the connection between herds, promoting the best diffusion of the superior genetic material in the population and, consequently, increase profit obtained with milk sales. The application of the strategies SF and TP in a dairy buffaloes population in the Southeastern Region of Brazil showed feasibility according to the criteria of the VPL and B/C ratio.

Orientador: Eunice Oba / Resumo: O objetivo do presente trabalho foi delinear parâmetros hemodinâmicos e avaliar sua relação com os principais hormônios envolvidos na mamogênese de búfalas mestiças Murrah em diferentes estágios fisiológicos. Utilizou-se 24 animais separados de acordo com a categoria (n= 6): bezerras, novilhas, gestantes e lactantes, com idades iniciais de zero, 12, 24 e 48 meses, respectivamente, criadas extensivamente. Realizou-se a cada 28 dias, ultrassonografia Doppler, colheita de sangue e pesagem, durante um ano (bezerras e novilhas) e 10 meses (gestantes e lactantes). Foram determinados os índices de resistividade (IR) e pulsatilidade (IP) e o diâmetro interno (DI) das artérias mamárias pela ultrassonografia. Foram mensuradas as concentrações plasmáticas de progesterona (P4), fator semelhante a insulina tipo I (IGF-I), insulina (IN), hormônio do crescimento (GH) e estradiol (17β-E2). Utilizou-se ANOVA com medidas repetidas, correlação de Spearman e regressão não linear múltipla, considerando nível de significância de 0,05. Nas bezerras e novilhas, houve redução de IR e IP e aumento do DI (P<0,0001) do primeiro ao último mês de avaliação, contudo, não houve diferença estatística para os índices hemodinâmicos entre as artérias mamárias cranial e caudal. Nas bezerras, detectou-se correlação do IR com o IP (r= 0,94; P<0,0001) e com o DI (r= -0,98; P<0,0001) e também, do IP com o DI (r= -0,98; P<0,0001). Nas novilhas o IR também correlacionou-se com o IP (r= 0,99; P<0,000... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of this study was to delineate hemodynamic parameters and toevaluate its relationship with key hormones involved in mammogenesis ofcrossbred Murrah buffaloes in different physiological stages. We used 24 animalsdivided according to the category (n= 6): calves, heifers, pregnant and lactatingfemales with early ages of zero, 12, 24 and 48 months, respectively, raisedextensively. Every 28 days, Doppler ultrasound examinations, blood analysis andweighing were held over one year (for calves and heifers) and over 10 months(for pregnant and lactating females). There were determined resistivity index (RI)and pulsatility index (PI) and internal vessel diameter (ID) of the mammaryarteries by ultrasound. Plasma concentrations of progesterone (P4), insulin-likegrowth factor 1 (IGF-I), insulin (IN), growth hormone (GH) and estradiol (17β-E2)were measured. We used repeated measures ANOVA, Spearman correlationand non-linear multiple regression considering 0.05 significance level. In calvesand heifers, a reduction of RI and PI and increased ID (P<0.0001) from first tolast month's assessment, however, there was no statistical difference inhemodynamic indices between the cranial and caudal mammary arteries. Allheifers, RI correlation was detected with PI (r= 0.94; P<0.0001), and ID (r= -0.98;P<0.0001) and also PI with ID (r= -0.98; P<0.0001). In heifers RI also correlatedwith PI (r= 0.99; P<0.0001) and DI (r= -0.95; P<0.0001) and PI with the ID... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor