The fundamental biological functions of spermatogonial stem cells (SSCs) is to support sperm generation and as such the propagation of genetic material to future generations. Like other stem cells, SSCs are defined by their ability to self-renew and also generate daughter cells which are committed to differentiation (J. M. Oatley & Brinster, 2008). It has been shown that retinoic acid (RA) is quintessential in spermatogenesis; its role is most clearly seen in its absence which results in infertility (Snyder, Small, & Griswold, 2010). In vivo RA acts on undifferentiated spermatogonia transitioning them into differentiating spermatogonia, consequently RA can serve as a key inducer of spermatogonial differentiation in vitro (Zhou et al., 2008). The objectives of my study were to assess the effects of RA on aggregates of undifferentiated spermatogonia in vitro (clusters), elucidate genes implicated in RA induced differentiation of SSCs and determine markers that coincide with the transition for SSC commitment to differentiation. I hypothesize that RA induces the differentiation of SSCs in vitro and further that SSCs can respond rapidly to RA. Results obtained support the hypothesis that RA rapidly induces SSC differentiation in vitro. These results included: observation of distinctive cell chain morphology in vitro post-treatment that is reflective of spermatogonia differentiation, SSC quantification confirms a decrease SSCs post-treatment and gene expression analysis reveals an increase in spermatogonial differentiation markers and a decrease of SSC specific markers following treatment. In addition to providing insight into RA directed SSC differentiation, gene expression analysis also revealed genes which were upregulated rapidly following RA treatment. These genes included LRPAP1 and Stxbp5; two genes have not been previously described in the context of SSC differentiation and may be novel markers for early SSC differentiation. These results indicate that the SSC-based, in vitro experimental paradigm that I used in this study provides an effective platform to further dissect the process of early SSC differentiation and its mechanisms. / La fonction biologique fondamentale des spermatogonies (SSCs) est de soutenir la production de sperme et la propagation du matériel génétique aux générations futures. Comme les autres cellules souches, SSCs sont définies par leur capacité de se renouveler et de générer des cellules filles ayant débuté leur différenciation (J. M. Oatley & Brinster, 2008). Il a été démontré que l'acide rétinoïque (RA) est essentiel à la spermatogenèse, car son absence cause une infertilité (Snyder et al., 2010). RA peut agir sur les spermatogonies indifférenciées pour induire leur différenciation et donc peut servir comme un inducteur clé de la différenciation des spermatogonies in vitro (Zhou et al., 2008). Les objectifs de mon étude étaient d'évaluer les effets de la RA sur les agrégats de spermatogonies indifférenciées in vitro (clusters), d'élucider les gènes impliqués dans la différenciation des SSCs induite par RA et de valider des marqueurs qui permettraient de déterminer la transition de différenciation. Mon hypothèse est que l'RA induit la différenciation des SSCs in vitro et aussi que les SSCs peuvent répondre rapidement à l'RA. Ce qui peut suggérer que les SSCs existent comme une population cellulaire hétérogène contenant une proportion de cellules déjà prédisposée pour répondre à l'induction de la différenciation. Les résultats obtenus supportent l'hypothèse que l'RA induit rapidement la différenciation in vitro des SSCs. Les résultats obtenus après le traitement incluent: une morphologie distincte des chaînes de cellules, une perte de SSCs, une augmentation des marqueurs de différenciation des spermatogonies et une diminution des marqueurs spécifiques des SSCs. En plus de confirmer que l'RA dirige la différenciation des SSCs, l'analyse globale de l'expression des gènes a également démontré que certains ont une expression accrue après le traitement avec l'RA. Ces gènes incluent LRPAP1 et Stxbp5; deux gènes qui n'ont pas été décrits précédemment dans le cadre de la différenciation des SSCs et peuvent être de nouveaux marqueurs montrant le début de la différenciation des SSCs.

Telomerase is a ribonucleoprotein complex responsible for immortalizing 85% of all human malignant tumors, making telomerase regulation a very attractive target for the development of anti-cancer therapeutics. Thus far, many proteins have been identified that regulate human telomerase biogenesis, activity, trafficking, recruitment and degradation. By comparison, there have been very few proteins identified to associate with mouse telomerase. Due to the importance of mouse models in the development of anti-cancer therapeutics, investigation of mouse telomerase-associated proteins is required to establish a detailed understanding of the species-specific differences between mouse and human telomerases and telomeres. Moreover, understanding telomerase and telomere regulation in mouse and human cells may inform us regarding the differential response to telomerase inhibition and telomere dysfunction that has been observed between human and mouse cells. In search for novel proteins associated with mouse telomerase reverse transcriptase (mTERT), the catalytic subunit of telomerase, we introduced an expression vector encoding a dually-tagged Protein G and streptavidin binding peptide (SBP)-mTERT in NIH3T3 cells and we performed SBP-mediated telomerase purification followed by mass spectrometry. We identified the Ewing's sarcoma protein (EWS) as a putative telomerase-associated candidate. We validated the interaction between EWS and human TERT (hTERT) and report that EWS indirectly binds to the active telomerase under physiological levels of hTERT and EWS, and this interaction is not dependent on human telomerase RNA (hTR), DNA, or RNA. Moreover, we present preliminary evidence suggesting that EWS may also directly bind hTR. Finally, we show that knockdown of EWS in HeLa cells does not affect cell growth, but it remains possible that EWS may be a negative regulator of telomerase and telomere length. / La télomérase est un complexe ribonucléoprotéique responsable de l'immortalisation de 85% des tumeurs malignes humaines, faisant de sa régulation une excellente cible pour le développement de traitements contre le cancer. A ce jour ont été identifiées de nombreuses protéines régulant la biogénèse, le transport, l'activité, le recrutement et la dégradation de la télomérase humaine. A titre de comparaison, peu de protéines ont été identifiées comme associées à la télomérase murine. Mais en raison de l'importance des modèles murins dans le développement de traitements du cancer, la recherche de telles protéines murines est requise pour une compréhension détaillée des différences inter-espèces des télomérases et des télomères humains et murins. De plus, le décryptage de la télomérase et de la régulation des télomères chez l'homme et la souris nous permettra de mieux apprécier les différences de réponse à l'inhibition et à la dysfonction télomèrique observées entre les cellules des deux espèces. Afin de trouver de nouvelles protéines associées à la sous-unité catalytique de la télomérase murine, la transcriptase-inverse (mTERT), nous avons introduit dans des cellules NIH3T3 un vecteur d'expression codant mTERT couplée à deux marqueurs : proteine G et peptide de liaison à la streptavidine (SBP). Nous avons ensuite réalisé une purification de la télomérase via SBP puis soumis les complexes à la spectrometrie de masse. Nous avons identifié la protéine du sarcome d'Ewing (EWS) comme candidat potentiel associé à la télomérase. L'intéraction entre EWS et TERT humain (hTERT) a été validée et nous avons montré que l'intéraction avec la télomérase active est indirecte, que cette intéraction n'est pas dépendante du composant ARN (hTR) de la télomérase humaine, de l'ADN ou de l'ARN. De plus, nous présentons des résultats préliminaires suggérant une liaison directe entre EWS et hTR. Enfin, nous montrons que l'inhibition de l'expression de EWS dans les cellules HeLa n'impacte pas la croissance cellulaire. EWS pourrait être un régulateur négatif de la télomérase et de la taille des télomères.

Severe sepsis is a systemic inflammatory response to an infection that often leads to respiratory failure which requires patients to be mechanically ventilated. Mechanical ventilation (MV) also leads to atrophy and weakness what is termed ventilatory induced diaphragm dysfunction (VIDD). Both these conditions are associated with upregulation of proteolytic pathways such as the ubiquitin proteasome pathway and the autophagy-lysosomal pathway. However, the influence of combining MV on sepsis-induced diaphragm dysfunction remains unknown. In this study, we evaluate the influence of prolonged MV on sepsis-induced diaphragm dysfunction. We studied four groups of rats. Group 1 animals were spontaneously breathing and served as controls. Group 2 (LPS) animals received intraperitoneal injection of E. coli lipopolysaccharide (LPS) and served as the sepsis group. Group 3 animals were mechanically ventilated for 12h. Group 4 animals received LPS injection first and were then mechanically ventilated for 12h. Diaphragm contractility was measured in-vitro and diaphragm fiber type atrophy was evaluated by measuring fiber cross sectional areas. Activation of the proteasome, calpains, caspase-3 and autophagy proteolytic pathways were evaluated using specific assays. Injection of LPS and MV for 12 resulted in significant attenuation of diaphragm contractility and the development of fiber atrophy. Combining MV with LPS administration resulted in additional decline in muscle contractile performance but not additional atrophy. Proteasome, calpain, caspase-3 and the autophagy proteolytic pathways were activated in the LPS and MV groups and the combination of prolonged MV with sepsis resulted in the potentiation of autophagy pathway but not proteasome, calpain and capase-3 activation. The AKT and mTORC1 pathways (inhibitors of proteolytic pathways and activators of protein synthesis) were activated in response to LPS administration but not by prolonged MV. Combining sepsis with prolonged MV resulted in attenuation of AKT and mTORC1 activation compared to sepsis alone. Interestingly, the AMPK pathway (activator of autophagy) is inhibited in response to LPS administration and prolonged MV. Combining sepsis with prolonged MV resulted in a milder degree of AMPK inhibition compared to LPS administration alone. Finally, oxidative stress develops in response to LPS administration and prolonged MV. Combining MV and sepsis resulted in worsening of oxidative stress. These results indicate that prolonged MV worsens sepsis-induced diaphragm contractile dysfunction and this worsening of function may be mediated by substantial induction of autophagy and the development of severe oxidative stress. / Le sepsis sévère est une réponse inflammatoire systémique consécutive à une infection, pouvant conduire à la détresse respiratoire nécessitant le recours à la ventilation mécanique. La ventilation mécanique (MV) est responsable de l'atrophie et de la faiblesse du diaphragme connue sous le nom de dysfonction diaphragmatique induite par la ventilation (DDIV). Ces deux mécanismes étiopathogéniques sont associés à l'activation de plusieurs voies protéolytiques comme la voie du protéasome et la voie de l'autophagie médiée par les lysosomes. Cependant, l'effet combiné de la ventilation mécanique associée au sepsis n'est pas encore connu. Dans cette étude nous avons évalué l'influence d'une ventilation mécanique prolongée sur la dysfonction diaphragmatique induite par le sepsis. Nous avons étudié quatre groupes de rats : le groupe 1 représentait le groupe contrôle (animaux en ventilation spontanée) ; le groupe 2 (LPS) représentait le groupe « sepsis » dans lequel les animaux recevaient une injection intrapéritonéale de lipopolyssaccharide (LPS) d'E. Coli ; dans le groupe 3, les animaux étaient ventilés pendant 12h et dans le groupe 4 les animaux recevaient d'abord l'injection de LPS avant d'être ventilés pendant 12h.La contractilité diaphragmatique était mesurée in vitro et l'atrophie musculaire était évaluée en mesurant la surface de section des fibres. L'activation du protéasome et des autres voies protéolytiques (calpaines, caspase 3 et autophagie) ont été étudiées par tests spécifiques. L'injection de LPS et la ventilation mécanique entraînait une diminution significative de la contractilité diaphragmatique et le développement d'une atrophie des fibres musculaires. La combinaison de la VM à l'injection de LPS montrait une altération plus importante de la contractilité diaphragmatique mais pas d'atrophie supplémentaire. Les différentes voies protéolytiques (protéasome, calpain, caspase-3 et autophagie) étaient activées dans les groupes VM et LPS alors que la combinaison des deux résultait en une potentialisation de l'autophagie mais pas de l'activation du protéasome, des calpaines et de caspase 3. Les voies AKT et MTORC1 (inhibitrice de la protéolyse et activatrice de la synthèse protéique) étaient activées en réponse à l'injection de LPS mais pas par la VM prolongée. La combinaison du sepsis et de la VM entraînait une atténuation de l'activation des deux voies AKT et MTORC1 en comparaison au sepsis seul. Par ailleurs, la voie AMPK (activatrice de l'autophagie) était inhibée en réponse à l'injection de LPS et à la VM alors que la combinaison des deux entraînait seulement une inhibition modérée de l'AMPK en comparaison à l'injection de LPS seule.Enfin l'injection de LPS et la VM entraînait un stress oxydatif d'autant plus important quand on combinait les deux facteurs. Ces résultats montrent que la VM prolongée aggrave la dysfonction diaphragmatique induite par le sepsis et que cette aggravation est due en partie à l'activation de l'autophagie et au développement d'un stress oxydatif sévère.

<p> Despite the effectiveness of antiretroviral therapies, CNS complications due to HIV infection persist in a significant number of HIV positive people. HIV enters the brain within two weeks of peripheral infection by the transmigration of infected monocytes across the blood brain barrier. Once in the brain, virions are produced, which can infect other monocytes, perivascular macrophages, microglia, and astrocytes. Inflammation resulting from viral proteins and host factors continues even in the presence of antiretroviral therapy, and this chronic low level inflammation damages neurons and leads to HIV associated neurocognitive disorders. Monocytes are a major cell type involved in this inflammation, as they are the cells that initiate this neuroinflammation and perpetuate it by their continued influx into the CNS. Drug abuse and HIV infection have long been associated, and many HIV infected drug abusers exhibit worse neurocognitive impairments. A common mechanism by which drugs assert their addictive effects is by increasing extracellular dopamine in the brain. Dopamine, a major neurotransmitter involved in reward and cognition, has been shown to exacerbate and accelerate CNS disease in SIV infected macaques, and this was characterized by increased influx of monocytes into the brain. Our laboratory found that dopamine increases transmigration of monocytes across an in vitro BBB model alone and in combination with CXCL12. We hypothesized that increased dopamine in the brains of HIV infected drug abusers increases the migration of mature CD14+CD16+ monocytes once they are within the CNS. This increased migration is mediated, in part, by the activation of dopamine receptors on CD14+CD16+ monocytes, altering their motility and adhesion. This project focused on characterizing the effects of dopamine on monocyte migration. We demonstrated that monocytes express functional dopamine receptors. We also showed that dopamine increased the migration of monocytes but that the movement is not gradient dependent. Dopamine increased the adhesion of monocytes, as compared to media only. These findings suggest that in HIV infected individuals who take illicit drugs, increased CNS dopamine may increase the accumulation of monocytes around synapses of dopaminergic neurons, damaging these neurons and increasing the severity of neurocognitive impairment in HIV infected drug abusers.</p>

LOX is a marker of poor prognosis in several malignancies and is hypothesized to promote a migratory phenotype in hypoxic breast carcinomas. This thesis aims to characterize the expression of LOX and LOXL2 in human UM and to evaluate the transcriptional control of LOX under simulated hypoxic conditions. DPA and BAPN, both LOX catalytic inhibitors, were used to evaluate the effect of inhibiting this enzyme on cellular proliferation and invasion. Eighty-one percent of FFPE samples stained positive for LOX. High LOX expression correlated with the aggressive epithelioid cell type and was associated with shorter metastasis-free survival. Simulated hypoxia resulted in a significant increase in LOX mRNA expression likely mediated by HIF-1 alpha transcriptional promotion. Inhibiting LOX's catalytic activity significant reduced cellular invasion but had no effect on cell proliferation. These findings suggest that LOX may facilitate the escape of malignant cells from the eye following the development of tissue hypoxia. / LOX est un indicateur d'un moins bon pronostic pour certaines tumeurs malignes et, hypothétiquement, il facilite le phénotype migrateur dans les carcinomes hypoxiques du sein. Les objectifs de cette thèse sont de caractériser l'expression de LOX et LOXL2 dans le mélanome de l'uvée humaine et d'évaluer le contrôle transcriptionel de LOX sous des conditions hypoxiques simulées. DPA et BAPN, deux inhibiteurs catalytiques de LOX, ont été utilisés pour bloquer cette enzyme et évaluer les effets sur la prolifération et l'invasion cellulaires. Quatre vingt et un pour cent des échantillons FFPE sont positifs pour LOX. Une corrélation étroite existe entre une forte expression de LOX et le type agressif de cellules épithélioïdes qui est associé avec une survie sans métastase de courte durée. L'hypoxie simulée a causé une grande augmentation de l'expression de LOX mRNA, probablement facilitée par l'activation de la transcription HIF-1 alpha. En bloquant l'activité catalytique de LOX, l'invasion cellulaire est considérablement réduite mais, par contre, la prolifération cellulaire n'est pas affectée. Ces résultats indiquent que LOX aide l'échappement des cellules cancéreuses de l'oeil après le développement de l'hypoxie des tissus.

B6.YTIR sex-reversed mice with bilateral ovaries develop an apparently normal female phenotype, but their eggs fail to develop after fertilization. Our previous studies have shown that the primary cause of infertility in the XY female can be attributed to the incompetence of its oocytes for postfertilization development rather than their surrounding somatic cells. The objective of this study was to examine the segregation of chromosomes during two successive meiotic divisions in the oocytes from XY females and the oocytes from XX females as a control. Oocyte-cumulus complexes were collected from gonadotropin (PMSG)-primed ovaries and matured in culture. MII-oocytes after culture for 19--21 hours were activated by 5mM SrCl2. The number and arrangement of chromosomes were observed under a light microscope with phase contrast or processed for FISH to identify the X and Y chromosomes under a fluorescence microscope. The oocytes at varying times of culture and after activation were fixed and immunocytochemically stained for observation of microtubule assembly and cell cycle progression.

The ubiquitin system is a major cytosolic and nuclear pathway of proteolysis in all eukaryotic cells. In this pathway, ubiquitin, a 76 amino acid peptide, is covalently ligated to protein substrates by a series of enzymes; E1, E2 and E3. The ubiquitin-attached proteins are commonly targeted for destruction by the 26S proteasome but the ubiquitination may also direct other cellular functions such as endocytosis, leading to proteolysis in the lysosome. Interestingly, a large family of genes encoding deubiquitinating enzymes (UBP; ubiquitin specific processing protease and UCH; ubiquitin C-terminal hydrolase) has recently been identified from different organisms. These enzymes are found to remove ubiquitin from covalent attachments to itself or other proteins in order to regenerate free ubiquitin or to counteract the effects of ubiquitinating enzymes by removing the polyubiquitin chain from the conjugated protein substrate. Dr. Wing's laboratory has recently identified USP2a and USP2b, two germ cell specific UBP isoforms that share a common core region but divergent N-termini. These termini target the USP2b and USP2a to different subcellular locations and also influence substrate specificity. / To identify substrates or interacting proteins that may serve to localize these enzymes, a bacterial two-hybrid assay was performed using a mouse testis cDNA library and the N-termini of the enzymes as baits. Kpna6, an isoform of Karyopherin alpha (also known as importin alpha) and SKD3, the suppressor of K + transport defect protein were found to be possible interacting proteins of USP2a and USP2b respectively.

Arsenic trioxide (As2O3) is an effective drug for the treatment of acute promyelocytic leukemia (APL), but is less effective against other malignancies. Although the response of APL cells to AS 2O3 has been linked to degradation of the PML/RARalpha fusion oncoprotein characteristic of this disease, we present evidence that PML/RARalpha does not confer sensitivity to As2O3-induced apoptosis. In two arsenic-resistant APL cell lines, AsR2 and AsR3, that we established to study mechanisms of action of arsenic trioxide, PML/RARalpha expression was regulated normally by As2O3. However, both arsenic-resistant clones contained high glutathione (GSH) levels, and we found that GSH depletion dramatically synergized with As2O 3 in the induction of apoptosis in these cells. This apoptosis was dependent upon the generation of reactive oxygen species (ROS) and oxidative stress, which were only detected upon cotreatment with arsenic and the GSH depletor, buthionine sulfoximine (BSO). c-Jun N-terminal kinase (JNK) is known to be induced by oxidative stress and As2O3, and its activation has been implicated in the induction of apoptosis in some cell systems. Therefore, we sought to determine whether activation of JNK could mediate the effects of As2O3 in APL. We found that AsR2 and AsR3 cells were not only resistant to arsenic-induced apoptosis, but to JNK1 activation as well. Only under conditions of GSH depletion, a condition that strongly synergized in inducing apoptosis, could As2O3-induced JNK activity be elicited in either resistant cell line. Furthermore, inhibition of JNK signaling by chemical and genetic strategies significantly increased survival of NB4 and mouse embryo fibroblast cells, respectively, in response to As 2O3, but had no effect on doxorubicin-induced apoptosis. To investigate the effects of As2O3 on events downstream of JNK, we performed transient transfection and electrophoretic mobility shift assays to examine AP-1 activation. We fo

The innate immune system uses pathogen recognition receptors (PRRs) that recognize conserved microbial structures called pathogen-associated molecular patterns (PAMPs). PRRs include the membrane-associated Toll-like receptors (TLRs) family and the intracellular cytosolic sensors: retinoic acid inducible gene I (RIG-I)-like receptors (RLRs), the IFN-inducible double-stranded RNA (dsRNA)-dependent protein kinase (PKR), DNA-dependent activator of IRFs (DAI), and nucleotide-binding oligomerization domain (Nod)-like receptors (NLRs). One of these NLR proteins, the Neuronal Apoptosis Inhibitory Protein 5 (Naip5), has been first identified as a locus controlling susceptibility to Legionella pneumophila in mice. The work described in this thesis covers three aspects of host-pathogen interaction study based on Naip5/Legionella model: 1) Morphological and biochemical characterization of Legionella-containing phagosomes in Naip5 transgenic and non transgenic murine macrophages by fluorescence and electron microscopy; 2) Identification of the transcriptional regulators Irf1 and Irf8 as essential for restriction of Legionella pneumophila replication in macrophages in addition to the Nod-Like receptors Naip5 and Nlrc4; 3) Analysis of global cellular changes induced by Legionella pneumophila infection of bone marrow-derived macrophages at the transcriptional level and the protein expression and phosphorylation level. / Le système immunitaire inné possède des récepteurs de détection des agents pathogènes qui reconnaissent des structures microbiennes communes appelées motifs moléculaires associés aux agents pathogènes. Ces récepteurs incluent les récepteurs membranaires (TLRs) et les récepteurs intracellulaires: la famille de gènes inductibles par l'acide rétinoïque (RIG-I), la protéine kinase R dépendante de l'ARN bicaténaire (PKR), l'activateur de facteurs de transcription et de régulation des interférons dépendant de l'ADN (DAI), et la famille de récepteurs possédant un domaine d'oligomérisation et de liaison aux nucléotides (NLRs). Une protéine de la famille NLR, la protéine d'inhibition de l'apoptose neuronale 5 (Naip5), a d'abord été identifiée en tant que locus contrôlant la susceptibilité à la bactérie Legionella pneumophila chez la souris. Les travaux décrits dans cette thèse portent sur trois aspects de l'étude des interactions hôte: agent pathogène fondée sur le modèle particulier Naip5/Legionella: 1) la caractérisation morphologique et biochimique du phagosome de Legionella formé dans des macrophages de souris transgéniques et non transgéniques par microscopie à fluorescence et électronique; 2) l'identification des facteurs de transcription 1 et 8 de régulation des interférons (Irf1 et Irf8) comme étant essentiels à la prévention de la réplication intracellulaire de Legionella pneumophila, en plus des récepteurs Naip5 et Nlrc4; 3) l'analyse des changements cellulaires provoqués par l'infection avec Legionella pneumophila de macrophages dérivés de la moelle osseuse, tant au niveau de l'activité transcriptionnelle qu'au niveau de l'expression et de la phosphorylation des protéines.

Mammalian target of rapamycin (mTOR) is a highly conserved serine/threonine kinase that controls cell growth. In yeast, in addition to its regulation of cell growth, TOR lowers the nuclear content of specific transcription factors and thereby controls the expression of stress response genes. In mammalian cells, we previously identified a macromolecular protein complex containing mTOR, the kinase PKCδ, and the anti-proliferative transcription factor STAT1. We hypothesized that mTOR suppresses the nuclear content of STAT1 by a mechanism similar to that observed in yeast. Here, we showed that inactivation of mTOR by rapamycin induces nuclear accumulation of STAT1 and its kinase PKCδ. We also demonstrated that the STAT1 L407 residue, an importin α5-binding site, is required for this effect. mTOR-mediated inhibition of nuclear STAT1 levels required its associated phosphatase PP2A. The karyopherin importin α5 was required for the accumulation of STAT1 in the nucleus in response to mTOR blockade. Mutation of a highly conserved serine (S111) to alanine in importin α5 inhibited the effect of rapamycin. Finally, enhanced STAT1 nuclear localization in response to rapamycin did not correlate with apoptosis or markers of cell cycle arrest, despite the ability of rapamycin to reduce cell number in vitro. These results describe a novel role for mTOR in the regulation of STAT1 nuclear levels and suggest an impact on cell death other than apoptosis. / Mammalian target of rapamycin (mTOR) est une kinase sérine/thréonine fortement conservée qui contrôle la croissance des cellules. Chez le Saccharomyces cerevisiae, en plus de son rôle comme régulateur de croissance, TOR abaisse le contenu nucléaire de facteurs de transcription spécifiques et contrôle ainsi l'expression des gènes de réponse au stress. Dans les mammifères, nous avons déjà identifié un complexe macromoléculaire contenant la protéine mTOR, son kinase PKCδ et le facteur de transcription STAT1. Notre hypothèse est que mTOR contrôle le contenu nucléaire de STAT1 par un mécanisme similaire à celui observé chez Saccharomyces. Dans l'étude courante, nous avons démontré que l'inactivation du mTOR par rapamycin cause l'accumulation nucléaire de STAT1 et son kinase PKCδ. Nous avons également démontré que le résidu de STAT1 L407, un site d'interaction avec importin α5, est réquis pour cet effet. L'accumulation nucléaire de STAT1 a été trouvé d'étre dépendante sur le phosphatase PP2A. L'importin α5 a été également trouvé d'étre nécessaire pour l'accumulation nucléaire de STAT1 en réponse de l'inhibition de mTOR. Cependant, la mutation d'une sérine hautement conservée (S111) en alanine a renversé l'effet de l'inhibition de mTOR par rapamycin. Finalement, nous avons déterminé que la localisation nucléaire de STAT1 en réponse au rapamycin n'a pas augmenté l'apoptose, ni les marqueurs de l'arrêt du cycle cellulaire. Ces résultats décrivent un nouveau rôle pour la protéine mTOR dans la régulation des niveaux nucléaires de STAT1 et suggèrent un impact sur la mort des cellules autre que l'apoptose.