Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 422656.pdf: 178694 bytes, checksum: 08cc79754d1c2a415b01732d55433825 (MD5) Previous issue date: 2010-03-10 / O receptor do pept?deo liberador de gastrina tem sido considerado como um novo alvo molecular em desordens do desenvolvimento neurol?gico. Estudos pr?vios realizados em nosso laborat?rio demonstraram que o bloqueio farmacol?gico do GRPR durante o per?odo neonatal em ratos produz caracter?sticas comportamentais que tem sido associadas com dist?rbios autistas, tais como d?ficits de comportamento social. Altera??es no comportamento de estabelecimento de v?nculos podem desempenhar um papel importante na disfun??o de comportamento social apresentada por crian?as autistas. Ratos filhotes machos receberam duas inje??es intraperitoneais di?rias do antagonista do GRPR (RC-3095) do 1? ao 10? dia de vida p?s-natal. No 11? dia de vida os filhotes foram submetidos ? tarefa de prefer?ncia pelo odor materno e ao completarem 15 dias, ? tarefa de condicionamento aversivo ao odor. Os resultados do presente trabalho demonstram que o bloqueio do GRPR no per?odo neonatal pela administra??o sist?mica do antagonista RC-3095 induz uma redu??o na prefer?ncia pelo odor materno, uma tarefa que envolve o comportamento de apego, em ratos lactentes. Provavelmente, este efeito prejudicial possa representar uma disfun??o espec?fica no comportamento de apego mais do que um preju?zo no aprendizado do odor, pois animais que receberam RC-3095 mostraram uma resposta normal ao condicionamento aversivo ao odor. Estes resultados fornecem a primeira evid?ncia de que o GRPR regula o comportamento de prefer?ncia materna e s?o consistentes com a vis?o de que o GRPR est? envolvido com mecanismos comportamentais associados a perturba??es do desenvolvimento neurol?gico.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 434382.pdf: 1595815 bytes, checksum: e9f7e7d4a7dcd6de22b69890074a8785 (MD5) Previous issue date: 2011-07-29 / Neutr?filos s?o os principais personagens do processo inflamat?rio, tanto na imunidade inata como adaptativa. Sua migra??o para os s?tios inflamat?rios ? crucial para o in?cio da inflama??o, assim como para o controle de infec??es, apresentando envolvimento na perpetua??o de diferentes doen?as inflamat?rias cr?nicas. O pept?deo liberador de gastrina (GRP: Gastrin-releasing peptide) ? um neuropept?deo que atua via receptores ligados a prote?na G e que est? envolvido em diferentes fun??es fisiol?gicas, atuando da motilidade gastrointestinal ? modula??o da mem?ria. Seu receptor preferencial, GRPR (Gastrin-releasing peptide receptor), ? expresso em v?rios tipos celulares, incluindo os sistemas g?strico, respirat?rio e nervoso, tendo sua express?o aumentada em c?lulas tumorais. RC-3095 ? um dos antagonistas seletivos de GRPR, desenvolvido para o tratamento de c?ncer. Mais recentemente, o RC-3095 mostrou-se com propriedades anti-inflamat?rias no tratamento de artrite e sepse.Os mecanismos pelos quais o GRP e o RC-3095 afetam o crescimento tumoral e o sistema imune ainda n?o foram totalmente determinados. Neste estudo, n?s propomos caracterizar os efeitos pr?-inflamat?rios do GRP na indu??o de migra??o de leuc?citos in vitro e in vivo, demonstrando que o GRPR atua como um receptor quimiot?tico para neutr?filos. Inje??es intraperitoneais de GRP recrutaram neutr?filos em quatro horas, um fen?meno antagonizado pelo RC-3095, deple??o de macr?fagos ou neutraliza??o do TNF-α. Al?m disso, o GRP apresentou um efeito direto in vitro, atuando como quimiocina na indu??o de migra??o atrav?s da sinaliza??o por GRPR, um mecanismo que ? dependente de PI3K, ERK, p38 e independente de prote?na Gαi, demonstrando que o GRPR ? um receptor quimiot?tico alternativo. Interessantemente, a migra??o de neutr?filos in vitro em dire??o ao l?quido sinovial de pacientes com artrite foi abolida com o pr?-tratamento com RC-3095, em uma magnitude comparada ao bloqueio do CXCR2. Discutimos aqui as implica??es dessas descobertas para os tratamentos baseados no antagonista de GRPR em doen?as inflamat?rias e propomos que o GRPR ? um novo receptor quimiot?tico alternativo que est? envolvido nessa patog?nese destes dist?rbios.

Meduloblastoma é o tumor intracranial mais comum em crianças, provavelmente derivado de células precursoras da camada granular externa do cerebelo durante seu desenvolvimento. O tratamento padrão consiste em cirurgia, radioterapia e quimioterapia, que produzem graves sequelas nos pacientes e garantem uma sobrevida baixa, o que demonstra a necessidade de novas alternativas terapêuticas para a doença. Evidências demonstram que o receptor do peptídeo liberador de gastrina (GRPR) está superexpresso em diversos tumores humanos, assim como seu agonista (GRP) pode atuar como um fator de crescimento autócrino em tumores cerebrais. No presente estudo, avaliamos a expressão de GRPR e o efeito de seus agonistas, bombesina (BB) e GRP, além do antagonista RC-3095, sobre a viabilidade celular de linhagens de meduloblastoma humano DAOY, D283 e ONS76. Mostramos que meduloblastomas, apesar de expressarem GRPR, não têm sua viabilidade celular afetada por agonistas e antagonista desse receptor. Uma vez que há evidências de que BDNF (fator neurotrófico derivado de cérebro) esteja relacionado à diferenciação celular em meduloblastomas, também avaliamos o efeito de BDNF sobre a viabilidade celular das linhagens de meduloblastoma humano. As linhagens DAOY e D283 tiveram sua viabilidade celular reduzida pela presença de BDNF. Uma vez que a via da PKA tem sido implicada na iniciação e progressão de vários tumores, também avaliamos o efeito de rolipram, um inibidor de fosfodiesterase tipo IV, sobre a viabilidade celular das linhagens de meduloblastoma humano, sendo que rolipram reduziu a viabilidade celular de todas as linhagens estudadas. Os receptores de BDNF e a via da PKA podem, portanto, ser alvos moleculares promissores para o desenvolvimento de novas terapias para meduloblastomas. / Medulloblastoma is the most common intracranial tumor in children and is believed to arise from the precursor cells of the external granule layer of the developing cerebellum. The standard treatment, consisting of surgery, craniospinal radiotherapy and chemotherapy, produces severe sequelae in patients and provides a poor overall survival, indicating the need for new therapeutic alternatives for treating this disease. Evidences show that the gastrin releasing peptide receptor (GRPR) is overexpressed in various human tumors and its agonist (GRP) can act as an autocrine growth factor in brain tumors. In the present study, we evaluated GRPR expression, as well as the effect of its agonists, bombesin (BB) and GRP, and its antagonist RC-3095, over cell viability of the human medulloblastoma cell lines DAOY, D283 and ONS76. We found that medulloblastomas, in spite of expressing GRPR, do not have its viability affected by the presence of agonists and antagonist of this receptor. Since there are evidences that BDNF (brain-derived neurotrophic factor) is related to cell differentiation in medulloblastomas, we also evaluated the effect of BDNF over the viability of medulloblastoma cell lines. The viability of the cell lines DAOY and D283 was reduced by the presence of BDNF. Since the PKA pathway has been implicated in the initiation and progression of various tumors, we also evaluated the effect of rolipram, a phosphodiesterase IV inhibitor, over the viability of the same medulloblastoma cell lines and we found that rolipram inhibited the viability of all the cell lines studied. BDNF receptors, as well as the PKA pathway, may be therefore promising molecular targets for the development of new therapies for treating medulloblastomas.

O peptídeo liberador da gastrina (GRP) é o homologo mamífero da bombesina (BN). Ambos GRP e seus receptores têm sido encontrados na sinóvia de pacientes com artríte reumatoide. O receptor do peptídeo liberador da gastrina (GRPR) pode ser considerado como um alvo terapêutico para doenças inflamatórias. RC-3095 é um antagonista do receptor de GRP. Este estudo avaliou os efeitos anti-inflamatórios do RC-3095, um antagonista específico do receptor do peptídeo liberador da gastrina, em dois modelos experimentais de artrite: induzida por colágeno do tipo II e induzida por adjuvante (CIA e AIA, respectivamente) e os mecanismos envolvidos. O RC-3095 foi administrado aos camundongos com CIA ou com AIA provocado por albumina bovina metilada (mBSA), diariamente. A incidência e severidade da doença foram avalidos por escore clínico e achados histológicos. A imunohistoquímica para o receptor do peptídeo liberador da gastrina (GRPR) na CIA. Migração de neutrófilos, determinação de glicosaminoglicanos (GAGs) e ensaio de linfoproliferação usando MTT em AIA. As citocinas: IL-17, IL-1 e TNF sobre os joelhos em AIA e CIA foram avaliados usando o ensaio imunoenzimático (ELISA). Analise da população de células T regulatórias por citometria de fluxo em AIA. Os resultados demonstraram que o RC-3095 reduziu a migração de neutrófilos, a hipernocicepção mecânica e a perda de proteoglicanos nos camundongos com AIA. Estes resultados estão associados com a inibição das citocinas pró-inflamatórias (IL-17, IL-1 e TNF-) e os níveis de proliferação de linfócitos e aumento do número de células T reguladoras (Treg). No modelo da CIA, o RC-3095 apresentou uma redução significativa nos escores da artrite e gravidade da doença, determinada histologicamente. A Inflamação sinovial, hiperplasia sinovial, formação de pannus e alterações erosivas foram drasticamente reduzidas nos camundongos artríticos tratados com RC-3095. Além disso, o RC-3095 demonstrou redução significativa no conteúdo das citocinas próinflamatórias, como IL-17, IL-1 e TNF-, e reduziu a expressão de receptores GRP nos animais doentes. Estes achados sugerem que via GRP tem um papel significativo na artrite crônica, e sua inibição pode ser explorado como uma estratégia terapêutica. / Background: The gastrin-releasing peptide (GRP) is the mammalian homolog of bombesin (BN). Both GRP and their receptors have been found in synovium of patients with rheumatoid arthritis. GRPR may be considered as a therapeutic target for inflammatory diseases. RC-3095 is a GRP receptor antagonist. Objective: To evaluate the anti-inflammatory effects of RC-3095 in two experimental models of arthritis, collagen and antigen-induced arthritis (CIA and AIA, respectively) and the mechanism involved. Methods: RC-3095 was administered daily to mice with CIA or with AIA provoked by methylated bovine serum albumin (mBSA). Disease incidence and severity were assessed by a clinical index and histologic features. Immunohistochemistry for GRPR in CIA. Migration of neutrophils, determination of glycosaminoglycans (GAG's) and Lymphoproliferation assay using MTT in AIA. The cytokines: IL-17, IL-1β, TNF on his knees in AIA and CIA were evaluated using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Analysis of regulatory T cells by flow cytometry in AIA. Results: The RC-3095 reduced neutrophil migration, mechanical hypernociception and the proteoglycan loss in mice with AIA. These findings are associated with the inhibition of proinflammatory cytokines (IL-17, IL-1β and TNF-α) levels and lymphocyte proliferation and increase of T regulatory cell number. In the CIA model, RC-3095 exhibited significant reduction in arthritic scores and the severity of disease determined histologically. Synovial inflammation, synovial hyperplasia, pannus formation and extensive erosive changes were all dramatically reduced in the arthritic mice treated with RC-3095. Furthermore, the mice treated with RC-3095 showed significant reduction in contents of proinflammatory cytokines, such as IL-17, IL-1β and TNF-α. Conclusion: Moreover RC-3095 diminished the GRP receptor expression in arthritic mice. These findings suggest that GRP pathway has a significant role in chronic arthritis, and its inhibition can be explored as a therapeutic strategy.

Meduloblastoma é o tumor intracranial mais comum em crianças, provavelmente derivado de células precursoras da camada granular externa do cerebelo durante seu desenvolvimento. O tratamento padrão consiste em cirurgia, radioterapia e quimioterapia, que produzem graves sequelas nos pacientes e garantem uma sobrevida baixa, o que demonstra a necessidade de novas alternativas terapêuticas para a doença. Evidências demonstram que o receptor do peptídeo liberador de gastrina (GRPR) está superexpresso em diversos tumores humanos, assim como seu agonista (GRP) pode atuar como um fator de crescimento autócrino em tumores cerebrais. No presente estudo, avaliamos a expressão de GRPR e o efeito de seus agonistas, bombesina (BB) e GRP, além do antagonista RC-3095, sobre a viabilidade celular de linhagens de meduloblastoma humano DAOY, D283 e ONS76. Mostramos que meduloblastomas, apesar de expressarem GRPR, não têm sua viabilidade celular afetada por agonistas e antagonista desse receptor. Uma vez que há evidências de que BDNF (fator neurotrófico derivado de cérebro) esteja relacionado à diferenciação celular em meduloblastomas, também avaliamos o efeito de BDNF sobre a viabilidade celular das linhagens de meduloblastoma humano. As linhagens DAOY e D283 tiveram sua viabilidade celular reduzida pela presença de BDNF. Uma vez que a via da PKA tem sido implicada na iniciação e progressão de vários tumores, também avaliamos o efeito de rolipram, um inibidor de fosfodiesterase tipo IV, sobre a viabilidade celular das linhagens de meduloblastoma humano, sendo que rolipram reduziu a viabilidade celular de todas as linhagens estudadas. Os receptores de BDNF e a via da PKA podem, portanto, ser alvos moleculares promissores para o desenvolvimento de novas terapias para meduloblastomas. / Medulloblastoma is the most common intracranial tumor in children and is believed to arise from the precursor cells of the external granule layer of the developing cerebellum. The standard treatment, consisting of surgery, craniospinal radiotherapy and chemotherapy, produces severe sequelae in patients and provides a poor overall survival, indicating the need for new therapeutic alternatives for treating this disease. Evidences show that the gastrin releasing peptide receptor (GRPR) is overexpressed in various human tumors and its agonist (GRP) can act as an autocrine growth factor in brain tumors. In the present study, we evaluated GRPR expression, as well as the effect of its agonists, bombesin (BB) and GRP, and its antagonist RC-3095, over cell viability of the human medulloblastoma cell lines DAOY, D283 and ONS76. We found that medulloblastomas, in spite of expressing GRPR, do not have its viability affected by the presence of agonists and antagonist of this receptor. Since there are evidences that BDNF (brain-derived neurotrophic factor) is related to cell differentiation in medulloblastomas, we also evaluated the effect of BDNF over the viability of medulloblastoma cell lines. The viability of the cell lines DAOY and D283 was reduced by the presence of BDNF. Since the PKA pathway has been implicated in the initiation and progression of various tumors, we also evaluated the effect of rolipram, a phosphodiesterase IV inhibitor, over the viability of the same medulloblastoma cell lines and we found that rolipram inhibited the viability of all the cell lines studied. BDNF receptors, as well as the PKA pathway, may be therefore promising molecular targets for the development of new therapies for treating medulloblastomas.

Introdução e objetivo: Gastrin-releasing peptide (GRP) está envolvido em diversas funções cerebrais e gastrointestinais, incluindo secreção pancreática, liberação de hormônios peptídeos gastrointestinais e redução da ingestão alimentar. O objetivo deste estudo é testar os efeitos da injeção intraperitoneal do antagonista do receptor GRP sobre o peso, ingestão alimentar, parâmetros metabólicos e bioquímicos e composição corporal. Métodos: Foram utilizados 35 ratos Wistar adultos jovens, submetidos a uma perda ponderal mínima de 7%, divididos em quatro grupos: Grupo Controle (G0) que recebeu injeção de solução salina; Grupo 1 (G1) que recebeu 0,1 mg/kg de RC-3095; Grupo 2 (G2) que recebeu 0,3 mg/kg de RC-3095 e Grupo 3 (G3) que recebeu 1,0 mg/kg de RC-3095 durante 14 dias. Resultados: A variação da média diária de ingestão alimentar foi estatisticamente diferente entre os grupos (F: 3,139; df: 3; P = 0,039) e o G2, que recebeu a dose intermediária de 0,3 mg/kg de RC-3095, mostrou uma ingestão alimentar maior do que o G0 (P = 0,041). Houve um aumento similar do peso, de aproximadamente 22% (F: 0,572; df: 3; P = 0,638), assim como uma média de peso similar dos animais (F: 1,145; df: 9,685; P = 0,338) entre os grupos durante o período do estudo. Porém, a média de peso do G2 foi mais alta do que a média de peso dos animais do G0 (P = 0,042). Ao final do estudo, nenhuma diferença foi observada entre os grupos no total de massa magra ou de massa gorda da carcaça, fígado e pele dos animais. Comparando os níveis séricos de albumina, amilase, glicose, colesterol total, HDL-colesterol e interleucina-6 do Dia 1 (D1) para o Dia 14 (D14), não houve diferença estatisticamente relevante entre os grupos. Entretanto, o nível médio de triglicerídeos no G2 mostrou um aumento maior quando comparado ao G0 (P = 0,038). Conclusões: Neste estudo, a injeção da dose intermediária do antagonista do receptor GRP, o RC-3095 (0,3 mg/kg/dia), em ratos Wistar adultos jovens saudáveis submetidos a perda ponderal, interferiu na ingestão alimentar e no peso médio. Nenhum efeito sobre o ganho de peso, composição corporal ou parâmetros metabólicos e bioquímicos foi observado, exceto um aumento maior do nível sérico de triglicerídeos. Estes resultados demonstram alguns dos efeitos fisiológicos do GRP sobre a ingestão alimentar e peso, ampliando possibilidades de futuros estudos sobre fome, saciedade e metabolismo de macronutrientes ou em animais submetidos a uma condição de estresse maior, como o câncer. / Introduction and Objective: Gastrin-releasing peptide (GRP) is involved in several brain and gastrointestinal functions, including pancreatic secretion, gastrointestinal peptide hormone release, and reduction of food intake. We tested the effects of an intraperitoneal injection of the GRP receptor (GRPR) antagonist RC-3095 on weight, food intake, biochemical metabolic parameters, and body composition. Methods: Thirty-five young adult male Wistar rats, submitted to a minimal weight loss of 7%, were divided into four groups: the control group (G0) received saline; Group 1 (G1) received 0.1 mg/kg RC-3095; Group 2 (G2) received 0.3 mg/kg RC-3095; and Group 3 (G3) received 1.0 mg/kg RC-3095 for 14 days. Results: The mean daily variation of food intake was statistically different between the groups (F: 3.139; df: 3; P = 0.039); and G2, which received the intermediate dose of 0.3 mg/kg RC-3095, showed a greater food intake than G0 (P = 0.041). There was a similar increase in weight, approximately 22% (F: 0.572; df: 3; P = 0.638), as well as a similar mean animal weight (F: 1.145; df: 9.685; P = 0.338) between the groups during the study period. However, the mean weight of G2 animals was more than the mean weight of G0 animals (P = 0.042). At the end of the study, no difference was observed between the groups in terms of the total lean mass or fat mass from the rat carcass, liver, and skin. Comparing the serum levels of albumin, amylase, glucose, total cholesterol, high-density lipoprotein (HDL) cholesterol, and interleukin (IL)-6 from day 1 (D1) to D14, there were no statistically relevant differences between the groups. However, the mean triglyceride level in G2 compared to G0 showed a greater increase (P = 0.038). Conclusion: In this study, the injection of an intermediate dose of GRPR antagonist RC- 3095 (0.3 mg/kg/day) into healthy young adult Wistar rats submitted to weight loss affected food intake and the mean weight. No effects on weight gain, body composition, or biochemical metabolic parameters were observed, except for a great increase in the serum triglyceride levels. These results demonstrate some physiological effects of GRP on food intake and weight, expanding the possibilities of future studies on hunger/satiety and macronutrient metabolism as well as highly stressful conditions like cancer.

Meduloblastoma é o tumor intracranial mais comum em crianças, provavelmente derivado de células precursoras da camada granular externa do cerebelo durante seu desenvolvimento. O tratamento padrão consiste em cirurgia, radioterapia e quimioterapia, que produzem graves sequelas nos pacientes e garantem uma sobrevida baixa, o que demonstra a necessidade de novas alternativas terapêuticas para a doença. Evidências demonstram que o receptor do peptídeo liberador de gastrina (GRPR) está superexpresso em diversos tumores humanos, assim como seu agonista (GRP) pode atuar como um fator de crescimento autócrino em tumores cerebrais. No presente estudo, avaliamos a expressão de GRPR e o efeito de seus agonistas, bombesina (BB) e GRP, além do antagonista RC-3095, sobre a viabilidade celular de linhagens de meduloblastoma humano DAOY, D283 e ONS76. Mostramos que meduloblastomas, apesar de expressarem GRPR, não têm sua viabilidade celular afetada por agonistas e antagonista desse receptor. Uma vez que há evidências de que BDNF (fator neurotrófico derivado de cérebro) esteja relacionado à diferenciação celular em meduloblastomas, também avaliamos o efeito de BDNF sobre a viabilidade celular das linhagens de meduloblastoma humano. As linhagens DAOY e D283 tiveram sua viabilidade celular reduzida pela presença de BDNF. Uma vez que a via da PKA tem sido implicada na iniciação e progressão de vários tumores, também avaliamos o efeito de rolipram, um inibidor de fosfodiesterase tipo IV, sobre a viabilidade celular das linhagens de meduloblastoma humano, sendo que rolipram reduziu a viabilidade celular de todas as linhagens estudadas. Os receptores de BDNF e a via da PKA podem, portanto, ser alvos moleculares promissores para o desenvolvimento de novas terapias para meduloblastomas. / Medulloblastoma is the most common intracranial tumor in children and is believed to arise from the precursor cells of the external granule layer of the developing cerebellum. The standard treatment, consisting of surgery, craniospinal radiotherapy and chemotherapy, produces severe sequelae in patients and provides a poor overall survival, indicating the need for new therapeutic alternatives for treating this disease. Evidences show that the gastrin releasing peptide receptor (GRPR) is overexpressed in various human tumors and its agonist (GRP) can act as an autocrine growth factor in brain tumors. In the present study, we evaluated GRPR expression, as well as the effect of its agonists, bombesin (BB) and GRP, and its antagonist RC-3095, over cell viability of the human medulloblastoma cell lines DAOY, D283 and ONS76. We found that medulloblastomas, in spite of expressing GRPR, do not have its viability affected by the presence of agonists and antagonist of this receptor. Since there are evidences that BDNF (brain-derived neurotrophic factor) is related to cell differentiation in medulloblastomas, we also evaluated the effect of BDNF over the viability of medulloblastoma cell lines. The viability of the cell lines DAOY and D283 was reduced by the presence of BDNF. Since the PKA pathway has been implicated in the initiation and progression of various tumors, we also evaluated the effect of rolipram, a phosphodiesterase IV inhibitor, over the viability of the same medulloblastoma cell lines and we found that rolipram inhibited the viability of all the cell lines studied. BDNF receptors, as well as the PKA pathway, may be therefore promising molecular targets for the development of new therapies for treating medulloblastomas.

Introdução e objetivo: Gastrin-releasing peptide (GRP) está envolvido em diversas funções cerebrais e gastrointestinais, incluindo secreção pancreática, liberação de hormônios peptídeos gastrointestinais e redução da ingestão alimentar. O objetivo deste estudo é testar os efeitos da injeção intraperitoneal do antagonista do receptor GRP sobre o peso, ingestão alimentar, parâmetros metabólicos e bioquímicos e composição corporal. Métodos: Foram utilizados 35 ratos Wistar adultos jovens, submetidos a uma perda ponderal mínima de 7%, divididos em quatro grupos: Grupo Controle (G0) que recebeu injeção de solução salina; Grupo 1 (G1) que recebeu 0,1 mg/kg de RC-3095; Grupo 2 (G2) que recebeu 0,3 mg/kg de RC-3095 e Grupo 3 (G3) que recebeu 1,0 mg/kg de RC-3095 durante 14 dias. Resultados: A variação da média diária de ingestão alimentar foi estatisticamente diferente entre os grupos (F: 3,139; df: 3; P = 0,039) e o G2, que recebeu a dose intermediária de 0,3 mg/kg de RC-3095, mostrou uma ingestão alimentar maior do que o G0 (P = 0,041). Houve um aumento similar do peso, de aproximadamente 22% (F: 0,572; df: 3; P = 0,638), assim como uma média de peso similar dos animais (F: 1,145; df: 9,685; P = 0,338) entre os grupos durante o período do estudo. Porém, a média de peso do G2 foi mais alta do que a média de peso dos animais do G0 (P = 0,042). Ao final do estudo, nenhuma diferença foi observada entre os grupos no total de massa magra ou de massa gorda da carcaça, fígado e pele dos animais. Comparando os níveis séricos de albumina, amilase, glicose, colesterol total, HDL-colesterol e interleucina-6 do Dia 1 (D1) para o Dia 14 (D14), não houve diferença estatisticamente relevante entre os grupos. Entretanto, o nível médio de triglicerídeos no G2 mostrou um aumento maior quando comparado ao G0 (P = 0,038). Conclusões: Neste estudo, a injeção da dose intermediária do antagonista do receptor GRP, o RC-3095 (0,3 mg/kg/dia), em ratos Wistar adultos jovens saudáveis submetidos a perda ponderal, interferiu na ingestão alimentar e no peso médio. Nenhum efeito sobre o ganho de peso, composição corporal ou parâmetros metabólicos e bioquímicos foi observado, exceto um aumento maior do nível sérico de triglicerídeos. Estes resultados demonstram alguns dos efeitos fisiológicos do GRP sobre a ingestão alimentar e peso, ampliando possibilidades de futuros estudos sobre fome, saciedade e metabolismo de macronutrientes ou em animais submetidos a uma condição de estresse maior, como o câncer. / Introduction and Objective: Gastrin-releasing peptide (GRP) is involved in several brain and gastrointestinal functions, including pancreatic secretion, gastrointestinal peptide hormone release, and reduction of food intake. We tested the effects of an intraperitoneal injection of the GRP receptor (GRPR) antagonist RC-3095 on weight, food intake, biochemical metabolic parameters, and body composition. Methods: Thirty-five young adult male Wistar rats, submitted to a minimal weight loss of 7%, were divided into four groups: the control group (G0) received saline; Group 1 (G1) received 0.1 mg/kg RC-3095; Group 2 (G2) received 0.3 mg/kg RC-3095; and Group 3 (G3) received 1.0 mg/kg RC-3095 for 14 days. Results: The mean daily variation of food intake was statistically different between the groups (F: 3.139; df: 3; P = 0.039); and G2, which received the intermediate dose of 0.3 mg/kg RC-3095, showed a greater food intake than G0 (P = 0.041). There was a similar increase in weight, approximately 22% (F: 0.572; df: 3; P = 0.638), as well as a similar mean animal weight (F: 1.145; df: 9.685; P = 0.338) between the groups during the study period. However, the mean weight of G2 animals was more than the mean weight of G0 animals (P = 0.042). At the end of the study, no difference was observed between the groups in terms of the total lean mass or fat mass from the rat carcass, liver, and skin. Comparing the serum levels of albumin, amylase, glucose, total cholesterol, high-density lipoprotein (HDL) cholesterol, and interleukin (IL)-6 from day 1 (D1) to D14, there were no statistically relevant differences between the groups. However, the mean triglyceride level in G2 compared to G0 showed a greater increase (P = 0.038). Conclusion: In this study, the injection of an intermediate dose of GRPR antagonist RC- 3095 (0.3 mg/kg/day) into healthy young adult Wistar rats submitted to weight loss affected food intake and the mean weight. No effects on weight gain, body composition, or biochemical metabolic parameters were observed, except for a great increase in the serum triglyceride levels. These results demonstrate some physiological effects of GRP on food intake and weight, expanding the possibilities of future studies on hunger/satiety and macronutrient metabolism as well as highly stressful conditions like cancer.

O peptídeo liberador da gastrina (GRP) é o homologo mamífero da bombesina (BN). Ambos GRP e seus receptores têm sido encontrados na sinóvia de pacientes com artríte reumatoide. O receptor do peptídeo liberador da gastrina (GRPR) pode ser considerado como um alvo terapêutico para doenças inflamatórias. RC-3095 é um antagonista do receptor de GRP. Este estudo avaliou os efeitos anti-inflamatórios do RC-3095, um antagonista específico do receptor do peptídeo liberador da gastrina, em dois modelos experimentais de artrite: induzida por colágeno do tipo II e induzida por adjuvante (CIA e AIA, respectivamente) e os mecanismos envolvidos. O RC-3095 foi administrado aos camundongos com CIA ou com AIA provocado por albumina bovina metilada (mBSA), diariamente. A incidência e severidade da doença foram avalidos por escore clínico e achados histológicos. A imunohistoquímica para o receptor do peptídeo liberador da gastrina (GRPR) na CIA. Migração de neutrófilos, determinação de glicosaminoglicanos (GAGs) e ensaio de linfoproliferação usando MTT em AIA. As citocinas: IL-17, IL-1 e TNF sobre os joelhos em AIA e CIA foram avaliados usando o ensaio imunoenzimático (ELISA). Analise da população de células T regulatórias por citometria de fluxo em AIA. Os resultados demonstraram que o RC-3095 reduziu a migração de neutrófilos, a hipernocicepção mecânica e a perda de proteoglicanos nos camundongos com AIA. Estes resultados estão associados com a inibição das citocinas pró-inflamatórias (IL-17, IL-1 e TNF-) e os níveis de proliferação de linfócitos e aumento do número de células T reguladoras (Treg). No modelo da CIA, o RC-3095 apresentou uma redução significativa nos escores da artrite e gravidade da doença, determinada histologicamente. A Inflamação sinovial, hiperplasia sinovial, formação de pannus e alterações erosivas foram drasticamente reduzidas nos camundongos artríticos tratados com RC-3095. Além disso, o RC-3095 demonstrou redução significativa no conteúdo das citocinas próinflamatórias, como IL-17, IL-1 e TNF-, e reduziu a expressão de receptores GRP nos animais doentes. Estes achados sugerem que via GRP tem um papel significativo na artrite crônica, e sua inibição pode ser explorado como uma estratégia terapêutica. / Background: The gastrin-releasing peptide (GRP) is the mammalian homolog of bombesin (BN). Both GRP and their receptors have been found in synovium of patients with rheumatoid arthritis. GRPR may be considered as a therapeutic target for inflammatory diseases. RC-3095 is a GRP receptor antagonist. Objective: To evaluate the anti-inflammatory effects of RC-3095 in two experimental models of arthritis, collagen and antigen-induced arthritis (CIA and AIA, respectively) and the mechanism involved. Methods: RC-3095 was administered daily to mice with CIA or with AIA provoked by methylated bovine serum albumin (mBSA). Disease incidence and severity were assessed by a clinical index and histologic features. Immunohistochemistry for GRPR in CIA. Migration of neutrophils, determination of glycosaminoglycans (GAG's) and Lymphoproliferation assay using MTT in AIA. The cytokines: IL-17, IL-1β, TNF on his knees in AIA and CIA were evaluated using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Analysis of regulatory T cells by flow cytometry in AIA. Results: The RC-3095 reduced neutrophil migration, mechanical hypernociception and the proteoglycan loss in mice with AIA. These findings are associated with the inhibition of proinflammatory cytokines (IL-17, IL-1β and TNF-α) levels and lymphocyte proliferation and increase of T regulatory cell number. In the CIA model, RC-3095 exhibited significant reduction in arthritic scores and the severity of disease determined histologically. Synovial inflammation, synovial hyperplasia, pannus formation and extensive erosive changes were all dramatically reduced in the arthritic mice treated with RC-3095. Furthermore, the mice treated with RC-3095 showed significant reduction in contents of proinflammatory cytokines, such as IL-17, IL-1β and TNF-α. Conclusion: Moreover RC-3095 diminished the GRP receptor expression in arthritic mice. These findings suggest that GRP pathway has a significant role in chronic arthritis, and its inhibition can be explored as a therapeutic strategy.

O peptídeo liberador da gastrina (GRP) é o homologo mamífero da bombesina (BN). Ambos GRP e seus receptores têm sido encontrados na sinóvia de pacientes com artríte reumatoide. O receptor do peptídeo liberador da gastrina (GRPR) pode ser considerado como um alvo terapêutico para doenças inflamatórias. RC-3095 é um antagonista do receptor de GRP. Este estudo avaliou os efeitos anti-inflamatórios do RC-3095, um antagonista específico do receptor do peptídeo liberador da gastrina, em dois modelos experimentais de artrite: induzida por colágeno do tipo II e induzida por adjuvante (CIA e AIA, respectivamente) e os mecanismos envolvidos. O RC-3095 foi administrado aos camundongos com CIA ou com AIA provocado por albumina bovina metilada (mBSA), diariamente. A incidência e severidade da doença foram avalidos por escore clínico e achados histológicos. A imunohistoquímica para o receptor do peptídeo liberador da gastrina (GRPR) na CIA. Migração de neutrófilos, determinação de glicosaminoglicanos (GAGs) e ensaio de linfoproliferação usando MTT em AIA. As citocinas: IL-17, IL-1 e TNF sobre os joelhos em AIA e CIA foram avaliados usando o ensaio imunoenzimático (ELISA). Analise da população de células T regulatórias por citometria de fluxo em AIA. Os resultados demonstraram que o RC-3095 reduziu a migração de neutrófilos, a hipernocicepção mecânica e a perda de proteoglicanos nos camundongos com AIA. Estes resultados estão associados com a inibição das citocinas pró-inflamatórias (IL-17, IL-1 e TNF-) e os níveis de proliferação de linfócitos e aumento do número de células T reguladoras (Treg). No modelo da CIA, o RC-3095 apresentou uma redução significativa nos escores da artrite e gravidade da doença, determinada histologicamente. A Inflamação sinovial, hiperplasia sinovial, formação de pannus e alterações erosivas foram drasticamente reduzidas nos camundongos artríticos tratados com RC-3095. Além disso, o RC-3095 demonstrou redução significativa no conteúdo das citocinas próinflamatórias, como IL-17, IL-1 e TNF-, e reduziu a expressão de receptores GRP nos animais doentes. Estes achados sugerem que via GRP tem um papel significativo na artrite crônica, e sua inibição pode ser explorado como uma estratégia terapêutica. / Background: The gastrin-releasing peptide (GRP) is the mammalian homolog of bombesin (BN). Both GRP and their receptors have been found in synovium of patients with rheumatoid arthritis. GRPR may be considered as a therapeutic target for inflammatory diseases. RC-3095 is a GRP receptor antagonist. Objective: To evaluate the anti-inflammatory effects of RC-3095 in two experimental models of arthritis, collagen and antigen-induced arthritis (CIA and AIA, respectively) and the mechanism involved. Methods: RC-3095 was administered daily to mice with CIA or with AIA provoked by methylated bovine serum albumin (mBSA). Disease incidence and severity were assessed by a clinical index and histologic features. Immunohistochemistry for GRPR in CIA. Migration of neutrophils, determination of glycosaminoglycans (GAG's) and Lymphoproliferation assay using MTT in AIA. The cytokines: IL-17, IL-1β, TNF on his knees in AIA and CIA were evaluated using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Analysis of regulatory T cells by flow cytometry in AIA. Results: The RC-3095 reduced neutrophil migration, mechanical hypernociception and the proteoglycan loss in mice with AIA. These findings are associated with the inhibition of proinflammatory cytokines (IL-17, IL-1β and TNF-α) levels and lymphocyte proliferation and increase of T regulatory cell number. In the CIA model, RC-3095 exhibited significant reduction in arthritic scores and the severity of disease determined histologically. Synovial inflammation, synovial hyperplasia, pannus formation and extensive erosive changes were all dramatically reduced in the arthritic mice treated with RC-3095. Furthermore, the mice treated with RC-3095 showed significant reduction in contents of proinflammatory cytokines, such as IL-17, IL-1β and TNF-α. Conclusion: Moreover RC-3095 diminished the GRP receptor expression in arthritic mice. These findings suggest that GRP pathway has a significant role in chronic arthritis, and its inhibition can be explored as a therapeutic strategy.