Orientador: Lucia Galvão de Albuquerque / Coorientador: Annaiza Braga Bignardi / Coorientador: Fernando Sebastián Baldi Rey / Banca: Ricardo Vieira Ventura / Banca: Luciana Correia de Almeida Regitano / Banca: Roberto Carvalheiro / Banca: Henrique Nunes de Oliveira / Resumo: Objetivou-se com este estudo realizar associação genômica ampla, visando detectar regiões cromossômicas associadas a características indicadoras de precocidade sexual de bovinos da raça Nelore, bem como avaliar metodologias para a predição de valores genômicos visando à seleção destas características. Foram utilizados dados de animais da raça Nelore, pertencentes a fazendas que integram os programas de melhoramento genético da DeltaGen® e Paint® (CRV Lagoa). As características associadas à precocidade sexual utilizadas neste estudo foram a idade ao primeiro parto (IPP), a ocorrência de prenhez precoce de novilhas (P16) e o perímetro escrotal (PE). Após o controle de qualidade e consistência dos dados fenotípicos, permaneceram para as análises informações de 68.170, 72.675 e 83.911 animais com fenótipo e de 1.738, 1.770 e 1.680 animais genotipados para IPP, P16 e PE, respectivamente, e 412.993 SNPs. No Capítulo 2, as estimativas dos efeitos dos SNPs foram obtidas utilizando-se a metodologia single-step (WssGBLUP). Todos os animais foram utilizados aplicando-se modelo animal unicaracterística para predizer os valores genéticos e, posteriormente, as soluções dos efeitos dos SNPs foram obtidas a partir destes valores genéticos. Foram identificadas as 10 janelas de 150 SNPs que capturaram a maior proporção da variância explicada pelos marcadores. As 10 janelas de maior efeito obtidas para a P16 estão localizadas nos cromossomos 5, 6, 7, 14, 18, 21 e 27 e somadas explicaram 7,91% da variância genética total. Para o PE, estas janelas estão nos cromossomos 4, 8, 11, 13, 14, 19, 22 e 23, explicando 6,78% da variância total. Com as análises de GWAS foi possível identificar regiões cromossômicas associadas com P16 e PE. A identificação dessas regiões possibilita o melhor entendimento e avaliação destas características, além de indicar genes candidatos para estudos futuros de investigação de... / Abstract: The objective of this study was to perform genome-wide association to detect chromosomal regions associated with indicator traits of sexual precocity of Nellore cattle, and evaluating methodologies for prediction of genomic values to use for selection of these traits. Data from Nellore animals belonging to farms integrating animal breeding programs of DeltaGen® and Paint® (CRV Lagoa), were used. Age at first calving (AFC), the occurrence of early pregnancy of heifers (EP) and scrotal circumference (SC) were used as traits associated with sexual precocity. After quality control and consistency of phenotypic data, information of 68,170; 72,675 and 83,911 animals with phenotype, and of 1,738; 1,770 and 1,680 genotypes for AFC, EP and SC, respectively, and 412,993 SNPs, remained for analysis. In chapter 2, the estimates of the SNP effects were obtained using the single-step method (WssGBLUP). All animals were used applying single trait animal model to predict the genetic values and, subsequently, the solutions of the SNP effects were obtained from these genetic values. The 10 windows of 150 SNPs that captured the greatest proportion of variance explained by markers were identified. The 10 windows with greater effect obtained for EP are located on chromosomes 5, 6, 7, 14, 18, 21 and 27 and together explained 7.91% of the total genetic variance. For SC, these windows are on chromosomes 4, 8, 11, 13, 14, 19, 22 and 23, explaining 6.78% of the total variance. With GWAS analysis it was possible to identify chromosomal regions associated with EP and SC. Identifying these regions enables better understanding and evaluation of these traits, besides indicating candidate genes for future research studies of causal mutations. In Chapter 3, two multi-step methods were used to estimate the marker effects - GBLUP and IBLASSO; besides the single-step method (ssGBLUP). Observed phenotype was used as the dependent variable to estimate the genomic value ... / Doutor

Orientador: Fabíola Freitas de Paula Lopes / Banca: José Antônio Visintin / Banca: Marcelo Fábio Gouvia Nogueira / Resumo: As alterações no microambiente do trato reprodutivo comprometem a competência oocitária e o desenvolvimento embrionário pré-implantacional em bovinos. Vacas Bos indicus apresentam adaptações fenotípicas e genotípicas conferindo maior resistência e tolerância à temperatura elevada quando comparadas as vacas Bos taurus, que sofrem redução nos índices de prenhez durante os meses quentes do ano. Esta infertilidade causada pelo estresse térmico é um problema de ordem multifatorial, entretanto já foi demonstrado que o oócito e embrião são extremamente susceptíveis aos efeitos deletérios da temperatura elevada. Os danos celulares desencadeados pela temperatura elevada podem ser manipulados pelo fator de crescimento semelhante à insulina-I (IGF-I), que além de minimizar a morte celular espontânea, resgata células que já iniciaram apoptose induzida por diferentes agentes ou estresses. A primeira etapa deste projeto visou avaliar o efeito dose resposta do IGF-I durante a maturação in vitro (MIV) em meio quimicamente não definido (pré-experimento 1: meio MIV - 10% de soro fetal bovino) e semidefinido (pré-experimento 2: meio MIV - 6 mg/mL de albumina sérica bovina) na competência de desenvolvimento de oócitos bovinos. Para tanto, complexos cumulus-oócito (CCOs) de vacas (mestiças Bos indicus) oriundas de abatedouro foram maturados in vitro em meio MIV não definido ou semidefinido suplementado com 0 (controle veículo), 6,25; 12,5; 25; 50; 100 ou 200 ng/mL de IGF-I por 22-24 h. Em seguida os oócitos foram fecundados (FIV) e cultivados in vitro (CIV). A adição de 25 ng/mL de IGF-I no meio MIV semidefinido ou não definido aumentou a porcentagem de oócitos clivados no dia 3 e a taxa de blastocisto no dia 8 após a fecundação. Dessa forma, a dose de 25 ng/mL de IGF-I foi utilizada na segunda etapa deste projeto, cujo objetivo foi avaliar o papel do IGF-I na competência de desenvolvimento de ... / Abstract: Microenvironmental alterations on reproductive tract compromise oocyte competence and pre-implicational embryo development in bovine. This fact is well characterized in animals exposed to heat stress. Bos indicus have fenotypic and genotypic adaptations which confers a higher tolerance to high temperatures compared with Bos taurus, suffering a reduction in the pregnancy rates during the hot months. This infertility caused by heat stress is a multifactorial problem, however it has been shown that oocyte and embryo are very susceptible to deleterious effects of high temperature. The cellular damage induced by high temperature could be manipulated by insulin-like growth factor I (IGF-I), which besides minimizing the spontaneous cell death, IGF-I rescue cells which have already initiated the apoptosis induced by different agents or stresses. The first step of this project aimed to evaluate dose-response effect of IGF-I during the maturation in vitro (MIV) in a non-defined medium (pre-experiment 1: MIV - 10% of bovine fetal serum) and semi-defined (preexperiment 2: MIV - 6 mg/mL of bovine albumin serum) in competence of bovine oocytes. Therefore, cumulus-oocyte complexes (CCOs) obtained of cows (Bos indicus crossbreed) from a slaughterhouse were matured in vitro in non-defined and semidefined MIV medium supplemented with 0 (vehicle control), 6,25; 12,5; 25; 50; 100 or 200 ng/mL of IGF-I for 22-24 h. After, oocytes were fertilized (FIV) and cultured in vitro (CIV). The adition of 25 ng/ml of IGF-I on non-defined and semi-defined MIV medium increased porcentage of cleavage on day 3 and blastocysts rate in day 8 after fertilization. In this way, 25 ng/ml IGF-I was used on second step of this experiment, which objective was to evaluate the role of IGF-I on oocyte competence of oocytes collected from Bos indicus - Nelore (NEL; n= 6) and Bos taurus-Holstein (HPB; n= 6) exposed to heat stress. Therefore, cows adapted ... / Mestre

Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Coorientador: Naiara Zoccal Saraiva / Banca: César Roberto Esper / Banca: Simone Cristina Méo Niciura / Resumo: Este estudo objetivou avaliar a influência do fluido folicular (FF) e da proteína recombinante humana GDF9 adicionados ao meio de maturação sobre a qualidade de embriões bovinos produzidos in vitro. Foram realizados três experimentos utilizando o meio TCM199 como meio básico de maturação. No primeiro experimento, os oócitos foram maturados em cinco diferentes meios (0%, 25%, 50%, 75% ou 100% de FF) em quatro tempos de maturação (22, 24, 26 ou 28 h). No segundo experimento, os oócitos foram maturados nos mesmos meios utilizados no primeiro experimento e fecundados em três diferentes tempos (24, 26 ou 28 h). No terceiro experimento, foram utilizados dois meios: controle (sem FF) ou com 25% de FF e quatro níveis de suplementação (0, 25, 100 ou 200 ng/mL) com GDF9. O FF promoveu retardo da progressão meiótica, afetando a maturação nuclear e a migração de grânulos corticais para a periferia dos oócitos. O FF em altas concentrações influenciou negativamente as taxas de clivagem e de blastocisto. O GDF9, com (25%) ou sem FF, não influenciou as taxas de clivagem e de blastocisto, no entanto, interferiu positivamente sobre o percentual de embriões considerados superiores. O percentual mais elevado (82,22%) de embriões classificados como superiores foi obtido com o uso de 200 ng de GDF9 em meio de maturação acrescido de 25% de FF. Em conclusão, a adição do fluido folicular (75% e 100%) ao meio de maturação in vitro retarda a progressão meiótica, sincronizando a maturação nuclear com a citoplasmática e a suplementação do meio de maturação com proteína recombinante humana GDF9 melhora a qualidade de embriões bovinos produzidos in vitro, baseando-se na avaliação da proporção do número de células da massa celular interna (MCI) em relação ao número total de células / Abstract: This study aimed to evaluate the effects of follicular fluid (FF) and recombinant human GDF9 added to the maturation media on the quality of in vitro produced bovine embryos. Three experiments using TCM199 medium as basic maturation media were performed. In the first experiment oocytes were matured in five different media (0%, 25%, 50%, 75% or 100% of FF) during four maturation times (22, 24, 26 or 28 h). In the second experiment, the oocytes were matured in the same five media used in the first experiment and fertilized at three different times (24, 26 or 28 h). In the third experiment were used two media: control (without FF) or with 25% FF combined with four levels of supplementation (0, 25, 100 or 200ng/mL) with GDF9. The FF promoted delay of the meiotic progression, affecting nuclear maturation and cortical granules migration to the oocyte periphery. In addition FF influenced the cleavage and blastocyst rates. GDF9, without or added to FF did not affect the cleavage and blastocyst rates, however, a positive influence on the percentage of embryos considered superior was observed. The highest percentage (82.22%) of embryos considered superior was obtained with maturation media added with 25% of FF and supplemented with 200 ng of GDF9. In conclusion, addition follicular fluid (75% and 100%) to the in vitro maturation media delays meiotic progression, synchronizing nuclear to cytoplasmic maturation, and supplementation of maturation media with recombinant human GDF9 improves the quality of bovine embryos in vitro produced, based on inner cell mass cells (ICM) proportion, relative to the total cell number / Mestre

Orientador: Luís Antonio Mathias / Banca: Samir Issa Samara / Banca: Edvirges Maristela Pituco / Resumo: O presente estudo teve como objetivo avaliar a influência da brucelose, leptospirose, rinotraqueíte infecciosa bovina (IBR), diarreia viral bovina (BVD) e neosporose no indicador de reprodução mais comumente utilizado por pecuaristas brasileiros, a taxa de concepção (ou taxa de prenhez) após a estação de monta. Dois estudos epidemiológicos analíticos foram feitos: um estudo caso-controle, utilizando uma amostra das matrizes do rebanho que foram submetidas à estação de monta durante o período chuvoso, e um estudo de coortes retrospectivo, utilizando todas as novilhas submetidas à estação de monta durante a estação de "inverno". A determinação do estado gestacional foi realizada por palpação retal entre 60 e 90 dias após o término da estação de monta. A pesquisa de anticorpos foi realizada pelos seguintes métodos: antígeno acidificado tamponado (AAT) e reação de fixação de complemento (RFC) para brucelose; soroaglutinação microscópica (SAM) para leptospirose; virusneutralização (VN) para IBR e BVD; e reação de imunofluorescência indireta (RIFI) para neosporose. A significância estatística da associação entre a doença e o fracasso na concepção foi avaliada pelos métodos de qui-quadrado ou teste exato de Fisher (p < 0,05) e pelo intervalo de confiança a 95% para o risco relativo (RR) ou a odds ratio (OR). Associações com relação causal possível foram encontradas entre falha na concepção e: infecção considerando qualquer sorovariedade de Leptospira spp. (Título ≥ 400) em primíparas (OR = 7,3636, IC 95%: 1,3373-40,5479; significativo), todas as quais foram infecções causadas por L. Wollfi; e infecção por L. Autmumnalis (título de ≥ 200), considerando todos os animais da estação de monta de "verão" (OR = 8,4058; IC95%: 1,0377 - 68,0882; significativo). Brucelose, neosporose IBR, BVD... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The present study aims to evaluate the influence of brucellosis, leptospirosis, infectious bovine rhinotracheitis (IBR), bovine viral diarrhea (BVD) and neosporosis in the reproductive indicator most commonly used among Brazilian ranchers, the conception rate (or pregnancy rate) after breeding season. Two analytical epidemiological studies were made: a case control study using a sample of matrices of the herd that were submitted to the breeding season during the rainy season, and a retrospective cohort study using all heifers submitted to the breeding season during the dry season. The determination of pregnancy status was performed by rectal palpation between 60 and 90 days after the end of the breeding season. The antibody search was performed by the following methods: rose bengal test and complement fixation test for brucellosis; microscopic agglutination test for leptospirosis, virus neutralization for IBR and BVD, and indirect immunofluorescence assay for neosporosis. The statistical significance of association between the disease and failure in the conception was held by the methods of chi-square or Fisher's exact test (p < 0,05) and by the 95% confidence interval for the relative risk (RR) or odds ratio (OR). Associations with possible causal relationship were found between conception failure and: Infection considering any serovar of Leptospira spp. (titer ≥ 400) in primiparous (OR = 7.3636, 95% CI: 1.3373 to 40.5479; significant), all of which were infections caused by L. Wollfi; and infection by L. Autmumnalis (titer of ≥ 200) considering all the animals of the rainy breeding season (OR = 8.4058; IC95%: 1.0377 - 68.0882; significative). Brucellosis, IBR, BVD, neosporosis and leptospirosis caused by other serovars did not influence the rate of conception in the breeding season... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: João Carlos Pinheiro Ferreira / Abstract: Thirty Nelore cows were submitted to estrus synchronization using a single administration of lecirelina, at 25 mg dosage and seven days later, D+ Cloprostenol at, 0.15 mg being both administered intra-muscularly. The first 16 cows ovulating were selected and daily evaluation was performed by rectal palpation and ultrasound of the female reproductive tract followed by blood sampling. Endometrial samples were collected by biopsy at days 0, 5, 9, 13 and 19 of the estrous cycle to detect the presence of estrogen and progesterone receptors by immunohistochemistry. The cows were distributed in 3 groups: control (without endometrial sampling, n=8), D0 (sampling initiated at the day of ovulation, n=4) and D13 (sampling initiated at day 13 of the estrous cycle, n=4). The mean inter-estrus interval was 23.80 l 2.70. The progesterone plasma mean concentrations ranged from 0.06 ng/mL to 4.53 ng/mL, decreasing throughout the cycle and reaching the lowest value close to ovulation. The pattern was characterized by increasing values during the luteal phase. The estradiol 17-b mean concentrations ranged from 6.22 pg/mL to 14.10 pg/mL and these values did not change throughout the estrous cycle. The results obtained by the rectal palpation revealed that the uterine tone and thickness were changing throughout the estrous cycle, being elevated during the period close to ovulation, and they were decreased during the progesterone phase. The ultrasound demonstrates that the amount of fluid content on the cranial vaginal compartment and in the uterine horn lumen was modified throughout the cycle. The largest amount of fluid was observed during the closest period to estrus and small fluid accumulation was observed during the progesterone phase. However, cows that were submitted to endometrial sampling presented more fluid during the progesterone phase... / Mestre

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-29Bitstream added on 2014-08-13T18:00:52Z : No. of bitstreams: 1 000753005.pdf: 2398846 bytes, checksum: 88a9bdc09aaab4eb0166b0e572c83bb7 (MD5) / As alterações no microambiente do trato reprodutivo comprometem a competência oocitária e o desenvolvimento embrionário pré-implantacional em bovinos. Vacas Bos indicus apresentam adaptações fenotípicas e genotípicas conferindo maior resistência e tolerância à temperatura elevada quando comparadas as vacas Bos taurus, que sofrem redução nos índices de prenhez durante os meses quentes do ano. Esta infertilidade causada pelo estresse térmico é um problema de ordem multifatorial, entretanto já foi demonstrado que o oócito e embrião são extremamente susceptíveis aos efeitos deletérios da temperatura elevada. Os danos celulares desencadeados pela temperatura elevada podem ser manipulados pelo fator de crescimento semelhante à insulina-I (IGF-I), que além de minimizar a morte celular espontânea, resgata células que já iniciaram apoptose induzida por diferentes agentes ou estresses. A primeira etapa deste projeto visou avaliar o efeito dose resposta do IGF-I durante a maturação in vitro (MIV) em meio quimicamente não definido (pré-experimento 1: meio MIV - 10% de soro fetal bovino) e semidefinido (pré-experimento 2: meio MIV - 6 mg/mL de albumina sérica bovina) na competência de desenvolvimento de oócitos bovinos. Para tanto, complexos cumulus-oócito (CCOs) de vacas (mestiças Bos indicus) oriundas de abatedouro foram maturados in vitro em meio MIV não definido ou semidefinido suplementado com 0 (controle veículo), 6,25; 12,5; 25; 50; 100 ou 200 ng/mL de IGF-I por 22-24 h. Em seguida os oócitos foram fecundados (FIV) e cultivados in vitro (CIV). A adição de 25 ng/mL de IGF-I no meio MIV semidefinido ou não definido aumentou a porcentagem de oócitos clivados no dia 3 e a taxa de blastocisto no dia 8 após a fecundação. Dessa forma, a dose de 25 ng/mL de IGF-I foi utilizada na segunda etapa deste projeto, cujo objetivo foi avaliar o papel do IGF-I na competência de desenvolvimento de ... / Microenvironmental alterations on reproductive tract compromise oocyte competence and pre-implicational embryo development in bovine. This fact is well characterized in animals exposed to heat stress. Bos indicus have fenotypic and genotypic adaptations which confers a higher tolerance to high temperatures compared with Bos taurus, suffering a reduction in the pregnancy rates during the hot months. This infertility caused by heat stress is a multifactorial problem, however it has been shown that oocyte and embryo are very susceptible to deleterious effects of high temperature. The cellular damage induced by high temperature could be manipulated by insulin-like growth factor I (IGF-I), which besides minimizing the spontaneous cell death, IGF-I rescue cells which have already initiated the apoptosis induced by different agents or stresses. The first step of this project aimed to evaluate dose-response effect of IGF-I during the maturation in vitro (MIV) in a non-defined medium (pre-experiment 1: MIV - 10% of bovine fetal serum) and semi-defined (preexperiment 2: MIV - 6 mg/mL of bovine albumin serum) in competence of bovine oocytes. Therefore, cumulus-oocyte complexes (CCOs) obtained of cows (Bos indicus crossbreed) from a slaughterhouse were matured in vitro in non-defined and semidefined MIV medium supplemented with 0 (vehicle control), 6,25; 12,5; 25; 50; 100 or 200 ng/mL of IGF-I for 22-24 h. After, oocytes were fertilized (FIV) and cultured in vitro (CIV). The adition of 25 ng/ml of IGF-I on non-defined and semi-defined MIV medium increased porcentage of cleavage on day 3 and blastocysts rate in day 8 after fertilization. In this way, 25 ng/ml IGF-I was used on second step of this experiment, which objective was to evaluate the role of IGF-I on oocyte competence of oocytes collected from Bos indicus – Nelore (NEL; n= 6) and Bos taurus-Holstein (HPB; n= 6) exposed to heat stress. Therefore, cows adapted ...

Made available in DSpace on 2015-03-03T11:52:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-26Bitstream added on 2015-03-03T12:06:08Z : No. of bitstreams: 1 000809964.pdf: 1108463 bytes, checksum: 43fa89dc624ca99b382ecaa200b42518 (MD5) / A utilização da transgenia com a proteína fluorescente verde (GFP) como marcador de células de origem fetal nas placentas de clones bovinos servirá de modelo inédito para estudo morfofisiológico e imunológico da interação materno-fetal, visto que possibilitará o seu mapeamento, diferenciando as células fetais das maternas. Tal modelo terá aplicação direta, principalmente porque estes são animais que apresentam problemas em relação ao seu desenvolvimento. Com o auxílio deste modelo, pretende- se verificar o transporte de substâncias entre a mãe e o feto via endocitose, pela imunolocalização das proteínas chamadas de caveolinas. Para tanto foram utilizados 06 bovinos clonados e 30 bovinos de inseminação artificial (IA) com idade até 90 dias de gestação, os quais tiveram seu desenvolvimento interrompido mediante abate humanitário das receptoras e ovariosalpingohisterectomia, com posterior recuperação do útero gestante. Foram coletados os placentônios e o cório. Uma parte das amostras foi recortada e fixada, por imersão, em solução de parafolmaldeído a 4% ou formoldeído a 10% em tampão fosfato de sódio (PBS) a 0,1M pH 7.4, solução de Zamboni (4% de paraformoldeído, 15% de ácido pícrico, em tampão fosfato de sódio a 0,1M pH 7.4), metacarn (60% de metanol, 30% de clorofórmio, e 10% de ácido acético glacial), para verificação da morfologia e realização de imuno-histoquímica para as proteínas caveolinas -1 e -2 (CAV -1 e CAV-2). As caveolinas -1 foram localizadas nos vilos fetais e maternos, mas sua marcação mais forte foi observada no estroma endometrial. As caveolinas -2 tiveram marcação positiva no trofoblasto e membrana corioalantoide, e, especificamente em célula trofoblástica gigante binucleada. Sendo assim, os resultados mostram que a proteína CAV-1 teve uma maior expressão em relação a proteína CAV-2 e que as proteínas CAV-1 e -2 são parte da composição das cavéolas, sendo . / The transgenic application of green fluorecent protein (GFP) as fetal cell marker on cattle cloned placenta could provide an exclusive model for studying the morphologic and immunologic maternal-fetal interactions, providing information about its mapping, distinguishing the fetal from maternal cells. This model will have direct application, mainly because these are animals that present problems during its development. With this model's support, we intend to verify the substances transport between mother and fetus during endocytocis, through the immunolocalization of protein named caveolae. For these, we used 06 cloned bovine and 30 cattle samples of artificial insemination (AI) with 90 days of pregnancy, which had been their development interrupted by humanitarian slaughter of the recipient and recovery of the pregnant uterus. We collected the placentome and the chorion. A part of the samples will be cutted and fixed, by immersion, on a solution containing 4% of parafomaldehyde or 10% of formaldehyde on a sodium phosphate buffer (PBS) at 0,1M pH 7.4, Zamboni solution (4% of paraformaldehyde, 15% of picric acid, on sodium phosphate buffer 0,1M pH 7.4), metacarn (60% of metanol, 30% of chloroform, and 10% glacial acetic acid), for morphologic and immunohistochemistry verification for caveolinas proteins -1 and -2 ( -1 CAV and CAV- 2). The caveolinas -1 were found in fetal and maternal villi , but its strongest staining was observed in the endometrial stroma . The caveolinas -2 had positive staining in trophoblast and chorioallantoic membrane , and specifically in giant trophoblastic binucleated cell . therefore the results were compared between cloned cattle and from AI or natural mating, for assisting on detection of the reason of many placental alterations, embryonic losses, spontaneous abortion, post-natal mortality and large offspring syndrome on laboratory-manipulated animals. The result suggests that the proteins caveolins -1 and ...

Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Coorientador: Naiara Saraiva Zoccal / Banca: Fábio Morato Monteiro / Banca: José Octavio Jacomini / Banca: Maria Emilia Franco Oliveira / Banca: Gilson Hélio Toniollo / Resumo: A progesterona e seus análogos têm sido utilizados para diversas finalidades na reprodução animal. O objetivo deste estudo foi avaliar a influencia da progesterona injetável no número de oócitos recuperados, na qualidade oocitária e produção embrionária de novilhas Nelore pré-púberes. Foram utilizadas 31 fêmeas com idade entre 18 a 20 meses, não gestantes e não cíclicas. As doadoras de oócitos foram divididas em 3 grupos experimentais em delineamento crossover da seguinte maneira: Grupo P0 (n=11), os animais deste grupo receberam duas aplicações de solução placebo (1 mL), com intervalo de 7 dias iniciando 14 dias (D-14) antes da primeira aspiração (D-0); Grupo P7 (n=10): os animais receberam uma aplicação de solução placebo (1 mL) 14 dias (D-14) e uma de progesterona (P4) injetável (150mg) 7 dias (D-7) antes da aspiração; Grupo P14 (n=10), neste grupo os animais receberam duas aplicações de P4 injetável (150mg) com intervalo de 7 dias, a primeira 14 dias (D-14) e a segunda 7 (D-7) dias antes da aspiração. Realizaram-se um total de três aspirações foliculares em intervalos de 28 dias. Os animais que apresentaram CL durante o experimento foram alocados em um grupo separado para serem analisados e comparados com o grupo sem CL. Os oócitos recuperados foram selecionados e submetidos aos procedimentos da PIVE. Após a confirmação da homocedasticidade (BoxCox) e normalidade (teste de Cramér-von Mises) dos dados, realizou-se a análise de variância (ANOVA). O teste de Tukey foi utilizado para as comparações das médias das variáveis, para as correlações dos dados foi utilizado o teste de correlação de Pearson, e significantes quando p≤ 0,05. Não foram verificadas diferenças significativas (p>0,05) quanto ao número de oócitos recuperados (oócitos totais), oócitos viáveis (G I, II, III), entre os animais tratados (grupos P7 e P14) em relação aos animais que não receberam P4 (grupo P0). As... / Abstract: Progesterone has been used for various purposes in the animal reproduction. The objective of this study was to evaluate the influence of exogenous progesterone injection in the number of recovered oocyte, oocyte quality and embryo production of prepubertal Nelore heifers. We used 31 females (18 to 20 months) non pregnant and without corpus luteum (CL). Cows were divided in 3 groups in a cross-over design: Group I P0 (n=11), animals received two placebo solution applications (1 mL), 7-day interval and starting 14 days (D-14) before the first aspiration (D-0); Group II P7 (n=10) treated group, the animals received a placebo solution application (1 mL) 14 days (D-14) and injecting progesterone (P4; 150 mg) 7 days (D-7) before aspiration; Group III P14 (n = 10), animals received two injections of P4 (150mμg) with an interval of 7 days, the first 14 days (D-14) and the second 7 days (D-7) before aspiration. We conducted 3 aspiration with 28-day intervals. The animals with CL during the experiment were placed in a separate group to be analyzed and compared with the group without CL. The recovered oocytes were selected and submitted to the procedures of the in vitro embryo production (IVEP). After confirming the homocedasticity (BoxCox) and normality (Cramér-von Mises test) of the data, carried out the analysis of variance (ANOVA). Tukey's test was used to compare the means of the variables and the pearson correlation test was used for correlations of the data, considered significant when p ≤ 0.05. There were no significant differences (p> 0.05) in the number of oocytes retrieved (total oocytes), viable oocytes (GI, II, III), between the animals treated (P7 and P14 groups) and animals that did not receive P4 (P0 group). The animals showed an average of 14.98 ± 10.82 oocytes collected by aspiration session. The mean and standard deviation of rates (%) of viable oocytes and embryos produced did not differ (p> 0.05) between groups. The ... / Doutor

Orientador: Marcelo Fábio Gouveia Nogueira / Co-orientadora: Mariana Fernandes Machado / Banca: Marcelo Marcondes Seneda / Banca: Claudia Lima Verde Leal / Resumo: Em camundongo, estudos recentes demonstraram que o precursor do peptídeo natriurético tipo C (NPPC) e o seu receptor do tipo 2 (NPR2) são essenciais para a manutenção do bloqueio da meiose I no oócito. Além disso, fatores parácrinos secretados pelo oócito, como a proteína morfogenética óssea (BMP15), podem modular esse bloqueio pelo estímulo da expressão do gene NPR2 nas células do cumulus de camundongos. Em recente estudo na espécie bovina, o fluido folicular bovino (FFb), quando adicionado ao meio de maturação, interferiu na maturação nuclear do oócito e, como resultado, melhorou a produção in vitro de embriões. Contudo, não são conhecidos quais os fatores, presentes no FFb, que são responsáveis por esse efeito podendo inclusive haver participação das microvesículas presentes neste. Além de ser um componente do FFb, foi demonstrado que o estradiol pode participar diretamente da estimulação do NPR2. Portanto, os objetivos gerais do presente trabalho envolvem a elucidação do sistema NPPC-NPR2 no ovário bovino e a investigação da influência do NPPC exógeno, do estradiol e das vesículas extracelulares sobre a expressão do gene da PDE3 no oócito bovino e sobre a concentração de nucleotídeos cíclicos nos complexos cumulus-oócito. Foram realizado s quatro experimentos: 1) Ensaio imunoenzimático (ELISA) para investigar a presença e a concentração do NPPC no fluido folicular, no lisado de células da granulosa mural e nas vesículas extracelulares, de acordo com a classe de diâmetro folicular (3 a 6 mm; 6 a 8 mm e >8 mm); 2) Imunolocalização do receptor NPR2 no folículo antral bovino; 3) Expressão do gene da PDE3 no oócito bovino, mediante RT - PCR em tempo real, em CCOs im aturos e maturados in vitro por 6 horas com NPPC exógeno, estradiol e vesículas extracelulares; 4) Mensuração da concentração de AMPc e GMPc, em oócitos e células... / Abstract: In mice, recent studies have demonstrated that the natriuretic peptide precursor C (NPPC) and its type - 2 - receptor (NPR2) are essential for the maintenance of meiosis I arrest in the oocyte. Moreover, paracrine factors secreted by the oocyte such as bone mo rphogenetic protein 15 (BMP15) can modulate this arrest through the expression of the NPR2 gene in cumulus cells of mice. In a recent study in cattle, the bovine follicular fluid (bFF) added to the maturation medium was able to interfere with the oocyte nu clear maturation resulting in higher embryo yield in vitro . However, it is not known what factors present in bFF might be responsible for this effect and one candidate could be the presence of microvesicles in the bFF. Additionally, the estradiol hormone i s component of the bFF and was demonstrated to directly stimulate NPR2 expression. Therefore, the objectives of this work includes the investigation of the NPPC - NPR2 system in the bovine ovary and the assessment of the effects of exogenous NPPC, estradiol and extracellular vesicles on the expression of the PDE3 gene in bovine oocytes and the concentrations of cyclic - nucleotides in cumulus - oocyte complexes. We designed four experiments: 1) enzyme - linked immunosorbent assay (ELISA) for the presence and concen tration of the NPPC in follicular fluid, in the lysate of mural granulosa cells and in the extracellular vesicles, according to follicular diameter (3 to 6 mm, 6 to 8 mm, >8 mm); 2) Immunolocalization of NPR2 receptor in bovine antral follicles; 3) PDE3 ge ne expression in bovine oocyte by RT - PCR in real time, in immature COCs and in COCs in vitro matured for 6 h with exogenous NPPC, estradiol and extracellular vesicles; 4) Measurement of the concentration of cAMP and cGMP in oocytes and cumulus cells, respectively, either immature or matured in vitro for 6 h with exogenous NPPC or extracellular vesicles through specific... / Mestre

Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Coorientador: Flávia Lombardi Lopes / Banca: Gisele Zoccal Mingoti / Banca: Simone Cristina Méo Niciura / Resumo: A produção in vitro de embriões (PIVE) bovinos é uma biotecnologia de grande impacto econômico por maximizar o potencial reprodutivo de animais geneticamente superiores resultando em maior eficiência reprodutiva. Apesar dos avanços da PIVE, a porcentagem de embriões que se desenvolvem ainda são inferiores aos produzidos in vivo. Epigenética é a regulação da expressão gênica sem alteração na sequência do DNA. Mecanismos epigenéticos, como o remodelamento das histonas, controlam expressão gênica e são fundamentais para o correto desenvolvimento embrionário. Dessa forma, modificações específicas nas histonas podem reprimir ou estimular a transcrição gênica. Os mecanismos epigenéticos são vulneráveis aos fatores ambientais, assim, os sistemas de cultivo in vitro podem ter um impacto no perfil de expressão de importantes genes relacionados ao desenvolvimento embrionário pré-implantacional. Dada a importância e a aplicabilidade da PIVE como biotecnologia reprodutiva, o papel vital dos mecanismos epigenéticos durante o desenvolvimento embrionário, e a importante correlação entre as condições de cultivo embrionário e o perfil epigenético, o presente estudo investigou a influência de diferentes condições de cultivo durante o desenvolvimento embrionário por meio da utilização de diferentes concentrações de soro fetal bovino (SFB) (0% ou 2,5%) e diferentes tensões de oxigênio (O2) (5% ou 20%) durante o cultivo embrionário in vitro (CIV) na regulação epigenética, especificamente no remodelamento das histonas H3K9me2 (repressiva) e H3K4me2 (permissiva) de embriões bovinos produzido in vitro. Para este fim, foram delineados quatro tratamentos durante o cultivo embrionário. T1: embriões foram cultivados em meio de cultivo "Synthetic Oviduct Fluid" (SOF) com 0% SFB sob tensão de 5% de O2; T2: embriões foram cultivados em meio SOF com 2,5% SFB sob ... / Abstract: In vitro production (IVP) of bovine embryos is a biotechnology of great economic impact, as it maximizes the reproductive potential of genetically superior animals, resulting in greater reproductive efficiency. Despite advances in technology in IVP, the percentage of embryos that develop to the transfer stage is still inferior to those seen in vivo. Epigenetics is the regulation of gene expression without altering DNA sequence. Epigenetic processes, such as histone remodeling, control gene expression and are essential for proper embryo development. Specific histone modifications can repress or stimulate gene transcription. Epigenetic mechanisms are under intense environmental control, therefore in vitro culturing systems can impact the expression patterns of genes that support pre-implantation embryo development. Given the importance of IVP as a reproductive biotechnology, the role of epigenetic processes during embryo development, as well the important correlation between culture conditions and epigenetic patterns, the present study was designed to investigate the influence of different culture conditions on embryo development, through the use of different concentrations of fetal bovine serum (FBS) (0% and 2,5%) and different oxygen tensions (O2) (5% and 20%) during in vitro culture, in epigenetic regulation, specifically in the histone remodeling H3K9me2 (repressive) and H3K4me2 (permissive) marks, in bovine embryos produced in vitro. Four treatments were designed and utilized during embryo culture: T1: embryos were cultured in Synthetic Oviduct Fluid (SOF) media with 0% FBS, under 5% O2 tension; T2: embryos were cultured in SOF media with 2.5% FBS, under 5% O2 tension; T3: embryos were cultured in SOF media with 0% FBS, under 20% O2 tension and T4: embryos were cultured in SOF media with 2.5% FBS, under 20% O2 tension. Cleavage and expanded blastocyst development rates were evaluated, as ... / Mestre